多重荧光PCR检测Ⅱ型猪链球菌方法的建立及应用

建立了一种快速检测Ⅱ型猪链球菌(Streptococcus suis)的多重荧光PCR(multiplex real-time polymerase chain reaction)方法。首先,从GenBank中获得Ⅱ型猪链球菌荚膜抗原编码基因簇中的cps2I和溶菌素释放蛋白基因mrp,用Primer Express2.0设计引物和Taqman荧光探针,在ABI7500荧光PCR仪上进行荧光PCR检测。荧光曲线表明该多重荧光PCR可以特异性地检测型猪链球菌,而参考猪链球菌、大肠杆菌等细菌和空白对照均为阴性;检测方法灵敏度达10个细菌的最小检测量,整个过程仅需60min;稳定性试验表明,2次检测所得的Ct值之间无统计学差异(P>0.05)。本试验建立的多重荧光PCR检测Ⅱ型猪链球菌的方法快速、特异性强,灵敏度高,稳定性好,适合于大批量样品的检验,可广泛用于出入境检疫和动物防疫监督部门的疫情监测。

Ⅱ型猪链球菌的致病因子研究进展

Ⅱ型猪链球菌的致病因子研究进展杜文金孙融冰黄引贤①（农业部动物检疫所青岛２６６０３２）Ｆｉｅｌｄ（１９５４）在英国从暴发败血症、脑膜炎和多发性关节炎的乳猪中分离出一株α－溶血猪链球菌，可是却不能归属于现今所认识的１９个Ｌａｎｃｅ－ｆｉｅｌｄ群，ＤｅＭ...

Ⅱ型猪链球菌毒力因子分子生物学研究进展

近年来,国内外许多学者对Ⅱ型猪链球菌做了大量的研究工作,结果表明:已发现的Ⅱ型猪链球菌的致病因子包括荚膜多糖、溶菌酶释放蛋白、细胞外因子、蛋白质片段和IgG结合蛋白、溶血素等。随着现代分子生物学技术的发展,上述致病因子的致病机理及其基因的结构特点在分子水平上得到进一步阐释,现对这些成果做一综述。

Ⅱ型猪链球菌体内诱导基因表达文库的构建

为构建用于筛选Ⅱ型猪链球菌体内诱导基因的融合基因表达文库。采用自杀载体pGP704为骨架，将无启动子的cat基因作为报告基因克隆到自杀载体pGP704上，构建报告质粒pGPT04-cat将Ⅱ型猪链球菌基因组DNA的500～1000bp酶切片段克隆到报告质粒pGP704-cat中cat基因的上游，转化受体菌获得融合基因文库；将文库质粒电转化Ⅱ型猪链球菌，得到融合基因表达文库。结果表明：构建的融合基因表达文库以氯霉素作为选择标记，经体外培养，获得2％的菌株具有氯霉素抗性，融合基因表达文库存在可以启动cat基因表达的启动子序列，cat基因在体外可以表达。构建的融合基因表达文库可以用于Ⅱ型猪链球菌体内诱导基因的筛选。

华南理工大学Ⅱ型猪链球菌致病分子机理研究取得新突破

由华南理工大学生物科学与工程学院王小宁等协调、参与的Ⅱ型猪链球菌致病分子机理的研究论文《SalK／SalR，a two-component signal transduction system，is essential for full virulence of highly invasive Streptococcus suis serotype2》发表在高水平学术杂志《公共科学图书馆·综合））（PLoS ONE）上，并被《自然·中国》（Nature China）作为研究亮点（Research highlights）刊登，标志着该学院在微生物理学研究上又上了新的台阶。

Ⅱ型猪链球菌病研究进展

Ⅱ型猪链球菌分布广泛,常存在于健康的哺乳动物和人体内,在机体抵抗力降低和外部环境变化诱导下,会引起动物和人发病。本文就Ⅱ型猪链球菌病的病原学、流行病学、致病机理、检测技术、免疫预防等方面作一综述。

我国Ⅱ型猪链球菌研究取得新突破

记者从华南理工大学获悉，该校生物科学与工程学院王小宁等协调、参与的Ⅱ型猪链球菌致病分子机理的研究又取得突破，论文作为研究亮点入选《自然中国》（Nature China），标志着该学院在微生物理学研究上又上了新的台阶。

银翘天甘对猪链球菌Ⅱ型病理模型的防治试验

为观察银翘天甘中药制剂体内抗猪链球菌病的效果。用猪链球菌Ⅱ型对18～22g昆明鼠攻毒并开展预防和治疗实验。预防试验是用猪链球菌Ⅱ型对18～22g昆明鼠攻毒同时口服银翘天甘中药制剂0.5、1.0、2.0g/mL,1次/d,连用3天,观察7天后的动物发病率、死亡率和保护率;治疗试验是先用猪链球菌Ⅱ型攻毒并建立昆明鼠疾病模型后口服上述药物,2次/d,连用3天,观察7天后的动物死亡率、治愈率和有效率。预防试验结果表明:银翘天甘中药制剂组实验动物死亡率均极显著低于感染对照组(P<0.01);给药组实验动物发病率均极显著低于感染对照组(P<0.01);治疗试验结果表明:银翘天甘中药制剂组昆明鼠死亡率极显著低于阴性对照组(P<0.01);低剂量组治愈率极显著高于中、高剂量组(P<0.01),低剂量组有效率显著高于中、高剂量组(P<0.05),与阳性对照组之间无显著性差异(P>0.05)。由此表明,口服低剂量银翘天甘中药制剂能够在昆明鼠猪链球菌病理模型上发挥预防和治疗作用。

猪链球菌Ⅱ型四川分离株对抗菌药的敏感性分析

对四川省不同地区链球菌病病死猪体内分离的7株链球菌Ⅱ型进行抗菌药敏感性试验,用链球菌兰氏D群C55914作为对照,比对菌为肺炎链球菌质控菌株ATCC49619。在32种抗菌药中,选择29种药物进行纸片法药敏试验。试验结果表明:7株链球菌耐药谱非常相似,对青霉素、氨苄西林、阿莫西林、奥格门丁、卡那霉素、红霉素、壮观霉素、氯霉素、氟苯尼考、头孢氨苄、头孢拉定、头孢他定、头孢呋辛、头孢曲松、环丙沙星、氧氟沙星、二氟沙星、沙拉沙星、达氟沙星、恩诺沙星、复方新诺明、万古霉素、亚安培南均敏感;对阿米卡星、新霉素、庆大霉素3株敏感,4株中敏;对四环素和多西环素2株中敏,5株耐药;对链霉素1株中敏,6株耐药。用21种药物进行最小抑菌浓度(M IC)测定,结果7株均对青霉素、氨苄西林、卡那霉素、红霉素、头孢他定、头孢呋辛、头孢曲松、头孢噻呋、环丙沙星、达氟沙星、氧氟沙星、二氟沙星、沙拉沙星、恩诺沙星、磺胺六甲氧嘧啶敏感,1株对新霉素和阿米卡星中敏,2株耐药;所有菌株对四环素、土霉素、多西环素、链霉素均耐药。两种方法总体结果一致。

四川猪链球菌Ⅱ型分离株生物学特性的初步研究

猪链球菌Ⅱ型是导致许多国家猪链球菌病的主要病原,自90年代晚期江苏发生猪链球菌Ⅱ型感染 以来已成为我国引起人畜共患病的一种重要的新病原菌。最近在四川省部分地区发生了不明原因的猪源人畜 共患病,且具有较高的死亡率。我们从病死猪的病料中成功分离到三株猪链球菌分离株,经革兰氏染色、生化试 验、血清凝集试验和PCR鉴定,最终证实为猪链球菌Ⅱ型。通过对其毒力因子进行鉴定,结果发现MRP和EF 均为阳性。进一步的药敏试验证实:分离菌株对氨苄青霉素、先锋霉素Ⅵ、羧苄青霉素、复方新诺明、头孢肤肟 等抗菌药高度敏感。

甘草等五味中药对猪链球菌Ⅱ型的抗菌活性试验

为验证清热解毒类中药对猪链球菌的抗菌活性。采用不同的提取方法验证甘草、黄连、秦皮、黄柏、金银花的水提物和乙醇提取物对猪链球菌Ⅱ型的抗菌活性。结果表明,甘草醇提物的效果最理想,最小抑菌浓度(MIC)为4.13 mg/mL,而水提物对猪链球菌Ⅱ型的MIC为40.63 mg/mL,表明甘草的醇提物对猪链球菌Ⅱ型的体外抑菌效果比其水提物显著。黄连醇提物对猪链球菌Ⅱ型的MIC为28.13 mg/mL,显著低于水提物对猪链球菌Ⅱ型的MIC为87.50 mg/mL。秦皮水提物为68.75 mg/mL,秦皮醇提物为175.0 mg/mL,表明秦皮的水提物比其醇提物对猪链球菌Ⅱ型效果显著。而黄柏、金银花的不同提取物对猪链球菌Ⅱ型的抑制作用差异性不显著(P>0.05)。

猪链球菌Ⅱ型流行菌株同源性分析

目的 :检测不同来源的猪链球菌 型菌株间的同源性。方法 :利用抗生素敏感性试验 (K- B法 )和基因指纹图 (genom ic fingerprinting)对分离到的 4株猪链球菌 型 (Streptococcus suis )进行同源性比较。结果 :4株菌株的耐药谱基本相同 ,基因指纹图分析的结果 ,在 12 .4kb、10 .9kb、8.4kb、6 .8kb、6 .4kb、5 .5 kb、4.9kb、4.5 kb、4.1kb、3.8kb、3.6 kb和 3.4kb等处分别出现完全一致、清晰明显的条带。结论 :这 4株猪链球菌 型菌株具有较高的同源性 ,其中 3株分离自病猪 ,1株分离自患者血液 ,提示可能来自同一个感染源。由该菌先在猪群中造成流行 ,再感染有密切接触史的人 。

浙江省某猪场暴发II型猪链球菌感染及病原诊断和药敏试验

报告 2 0 0 3年秋季浙江省某猪场II型猪链球菌感染猪群的微生物学检查和药物敏感试验结果 ,以及采取的控制疫情措施及其效果。从 112头病、死猪中分离出 71株猪链球菌疑似菌株 ,经革兰染色镜检、生化反应和特异性诊断血清的玻片凝集 ,均鉴定为II型猪链球菌。上述II型猪链球菌分离株对阿莫西林等 5种抗生素敏感 ,但对庆大霉素等 7种抗生素耐药。采取饲养环境和饲料消毒、发病猪隔离、阿莫西林和环丙沙星治疗、未发病猪疫苗接种等措施 ,有效地控制了疫情 ,未发生人的感染。

猪链球菌Ⅱ型流行菌株毒性研究

目的 对不同来源且具有同源性的猪链球菌Ⅱ型流行菌株进行毒性分析。方法 将菌株进行肉汤培养后,接种不同年龄小鼠,观察小鼠生长情况;同时将细菌培养液用滤膜过滤后,注入含有Hela细胞生长的无菌培养瓶中,观察Hela细胞生长情况。结果 幼龄鼠注射茵液后均引起死亡,而成龄鼠未发生一例死亡;Hela细菌在注入细菌滤液后未发生细胞病变效应。结论 引起爆发流行的猪链球菌Ⅱ型流行菌株毒性较弱,主要是通过菌株本身侵袭力感染动物和人。

人感染猪链球菌Ⅱ型致中毒性休克综合征1例的护理

总结1例人感染猪链球菌Ⅱ型致链球菌中毒性休克综合征的护理经验。护理重点为做好抗感染治疗的护理,维持循环及内环境稳定,做好皮肤护理、口腔护理、营养支持护理,重视早期康复护理等。经治疗与护理,患者病情好转,入ICU 18 d后转入感染科病房继续治疗。

血培养检出猪链球菌Ⅱ型1例

猪链球菌是一种能够感染猪和人的病原体，引起人畜共患急性传染病，通常存在于健康猪的鼻腔和扁桃体内，人感染了猪链球菌可引发脑膜炎、心内膜炎、败血症和永久性耳聋等疾病、严重者可导致中毒性休克综合征并引起死亡。我国江苏、四川、广西等地有过疫情爆发，但作者尚未见天津地区有关人感染猪链球菌的报道。本文报告从一寒战高热患者血中检出猪链球菌Ⅱ型一例。