Cartiex^(TM)Ⅱ型胶原蛋白对大鼠骨关节炎治疗效果研究

为探讨Cartiex^(TM)Ⅱ型胶原蛋白对碘乙酸钠诱导的大鼠骨关节炎(OA)的治疗作用,大鼠膝关节腔内单次注射碘乙酸钠溶液,建立大鼠骨关节炎模型;造模后分别以Ⅱ型胶原蛋白及牛骨胶原蛋白灌胃;试验期间每周测量大鼠饮食、饮水、体重、足底机械痛;试验结束后心脏采血测量血清中前列腺素E2(PGE-2)、转化生长因子β(TGF-β)、金属基质降解酶13(MMP-13)、白介素-1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;取膝关节甲醛固定、脱钙后进行病理检查。结果表明:造模大鼠膝关节在试验期间出现明显肿胀,各给药组与OA模型组相比均有不同程度缓解。Ⅱ型胶原蛋白高、低剂量组能显著升高大鼠机械痛值,并显著降低血清中MMP-13、IL-1β、IL-6、TNF-α含量,显著升高PGE-2、TGF-β含量。Ⅱ型胶原蛋白干预后,大鼠关节炎症状明显改善,软骨组织增生,炎症细胞浸润明显减少,Mankin’s评分显著降低。综上,Ⅱ型胶原蛋白可调节骨关节炎大鼠血液中相关炎症因子表达,降低关节痛,减少炎症细胞浸润,改善滑膜组织炎症,并促进软骨增生,进而缓解骨关节炎症状;相对于阳性对照品,Cartiex^(TM)Ⅱ型胶原蛋白具有用量少、效果好、起效快的优点。

高效液相色谱法测定非变性Ⅱ型胶原蛋白含量的研究

研究非变性Ⅱ型胶原蛋白含量的测定方法,对样品中的目标成分进行测定和方法学验证分析。通过高效液相色谱法(HPLC)测定非变性Ⅱ型胶原蛋白的含量,考察线性、精密度、准确度、耐用性。实验结果表明,非变性Ⅱ型胶原蛋白(以L-羟脯氨酸计),在0~398.48μg/mL范围内线性关系较好;精密度较好;平均回收率为99.2%,RSD为0.87%;耐用性较好。经过全面的方法学验证,该实验方法稳定可靠,适用于高效液相色谱法测定非变性Ⅱ型胶原蛋白的含量,并可应用于相关产品的质量控制工作。

体外阻断基质细胞衍生因子1/CXC趋化因子受体4信号通路后人关节软骨组织Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖的表达

背景:基质细胞衍生因子1/CXC趋化因子受体4信号通路在骨关节炎的发病中起关键作用。目的:探讨AMD3100体外阻断基质细胞衍生因子1/CXC趋化因子受体4信号通路后对培养的关节软骨组织Ⅱ型胶原、聚集蛋白聚糖mRNA表达及Ⅱ型胶原蛋白表达的影响。方法:将骨关节炎软骨和创伤性截肢患者正常软骨分别分为3个小组即实验组,实验对照组,空白对照组。将其置于含基质细胞衍生因子1和AMD3100,含基质细胞衍生因子1和MAB310,只含基质细胞衍生因子1的培养液培养。结果与结论:实验组软骨组织内的Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖mRNA表达量、Ⅱ型胶原蛋白含量高于实验对照组和空白对照组(P<0.05)。可见基质细胞衍生因子1通过基质细胞衍生因子1/CXC趋化因子受体4信号通路诱导人关节软骨中Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖的降解;AMD3100可阻断该信号通路及减少软骨中Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖的降解,延缓关节软骨组织的退变;AMD3100不能使已退变的骨关节炎软骨内的Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖含量恢复到正常水平。

胰岛素样生长因子1通过PI3K/Akt信号通路促进髓核细胞聚集蛋白聚糖及Ⅱ型胶原的表达

背景:采用生长因子等生物学方法修复退变椎间盘是目前椎间盘退变治疗的研究热点,胰岛素样生长因子1能促进髓核细胞增殖、促进功能性细胞外基质的合成,但其机制仍未阐明。目的:观察胰岛素样生长因子1对髓核细胞聚集蛋白聚糖及Ⅱ型胶原表达的促进作用,并探讨其信号转导机制。方法:分离培养人髓核细胞,取第3代细胞给予不同质量浓度的胰岛素样生长因子1(0,20,50,100,200μg/L)进行刺激,采用RT-PCR、Western-blot检测聚集蛋白聚糖及Ⅱ型胶原的表达。100μg/L的胰岛素样生长因子1作用于髓核细胞,采用Western-blot检测胰岛素样生长因子1对PI3K/Akt信号通路的激活作用,并通过LY294002的应用检测PI3K/Akt通路的抑制对聚集蛋白聚糖及Ⅱ型胶原表达的影响。结果与结论:(1)随胰岛素样生长因子1质量浓度增高,聚集蛋白聚糖及Ⅱ型胶原的表达水平逐渐升高,该作用呈剂量依赖性。胰岛素样生长因子1(100μg/L)能显著促进p-PI3K和p-Akt的表达(P<0.01),而LY294002能抑制胰岛素样生长因子1的促进作用(P<0.01);(2)胰岛素样生长因子1(100μg/L)能促进髓核细胞聚集蛋白聚糖及Ⅱ型胶原的表达(P<0.01),而LY294002能抑制胰岛素样生长因子1对聚集蛋白聚糖及Ⅱ型胶原表达的促进作用(P<0.01);(3)因此认为胰岛素样生长因子1可通过PI3K/Akt通路促进髓核细胞聚集蛋白聚糖及Ⅱ型胶原的表达。

T140靶向阻断SDF-1/CXCR4信号通路对豚鼠关节软骨Ⅱ型胶原蛋白及聚集蛋白聚糖的影响

目的:明确T140体内靶向阻断SDF-1/CXCR4信号通路对豚鼠关节软骨Ⅱ型胶原蛋白及聚集蛋白聚糖的影响,探讨T140减缓软骨退变的作用。方法:健康9月龄雄性Hartley豚鼠36只,随机分成A、B、C三组,A组为实验组,B组为实验对照组,C组为空白对照组,每组12只。于12周时,获取膝关节软骨,采用RT-PCR法检测Ⅱ型胶原蛋白(ColⅡ)及聚集蛋白聚糖m RNA的表达;Western blot检测ColⅡ含量。结果:RT-PCR检测结果显示A组Ⅱ型胶原蛋白及聚集蛋白聚糖的m RNA表达量高于B、C组,差异有统计学意义(P<0.05);Western blot检测结果发现A组ColⅡ含量高于B、C组(P<0.05)。结论:T140于体内靶向阻断SDF-1/CXCR4信号通路,减少关节软骨Ⅱ型胶原蛋白及聚集蛋白聚糖的降解,进而减缓关节软骨的退变。

张应力刺激大鼠髁突软骨细胞Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖的表达(英文)

背景:研究表明软骨细胞外基质合成的变化反映了外力对于颞下颌关节的影响和机体对于外力的适应性。目的:观察周期性张应力对髁突软骨细胞主要细胞外基质合成的影响。方法:采用FX-5000T应力加载系统对第3代大鼠髁突软骨细胞分别施加0,1,6,12和24h的周期性张应力,应力刺激强度为10%1Hz。加力完成后收集加力细胞,提取总RNA反转录成cDNA,应用RT-PCR技术检测软骨细胞主要细胞外基质Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖的表达变化情况。结果与结论:与对照组(0h组)相比,加力6h时Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖表达均显著增加(P<0.05);加力12h时Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖表达均开始下降;当加力至24h时二者表达量均显著降低(P<0.05)。结果表明:周期性张应力可以影响髁突软骨细胞主要细胞外基质的合成,随加力时间的延长基质合成逐渐增强;进一步延长加力时间,基质的合成受到明显抑制。

C-末端Ⅱ型胶原和骨桥蛋白与绝经后女性退变性膝骨关节炎疼痛的相关性

目的 探究C-末端Ⅱ型胶原(CTX-Ⅱ)和骨桥蛋白(OPN)与绝经后女性退变性膝骨关节炎疼痛的相关性。方法 以2019年2月-2021年7月北京市朝阳区中医医院骨伤科收治的96例绝经后女性退变性膝骨关节炎患者为研究对象根据Kellgren-Lawrence分级将患者分为轻度组、中度组与重度组。收集3组患者血清,采用酶联免疫吸附法试剂盒检测血清CTX-Ⅱ、OPN水平。采用视觉模拟评分法(Visual analogue scale, VAS)与西部安大略和麦克马斯特大学骨关节炎指数评分(Western Ontario and McMaster University Osteoarthritis Index, WOMAC)评估3组患者疼痛程度。采用单因素方差分析法分析3组患者临床指标差异,采用Pearson法分析CTX-Ⅱ、OPN水平与其他临床指标的相关性,多元逐步回归模型分析影响VAS、WOMAC评分的临床因素。结果 3组患者随着患者症状加重,血清CTX-Ⅱ、OPN水平与VAS、WOMAC评分均升高,差异有统计学意义(P<0.05),病程、年龄、绝经年龄、BMI差异无统计学意义(P>0.05)。血清CTX-Ⅱ、OPN水平与VAS评分、WOMAC评分均呈显著正相关(P<0.05),CTX-Ⅱ、OPN水平是影响VAS与WOMAC评分的临床指标。结论 CTX-Ⅱ、OPN水平升高与绝经后女性退变性膝骨关节炎患者疼痛呈显著正相关。

性别差异对牛Ⅱ型胶原诱导的类风湿关节炎模型的影响

目的构建雌性及雄性牛Ⅱ胶原诱导的关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)模型,比较性别差异对CIA模型关节及关节外表现的影响。方法选用雌性及雄性SD大鼠并注射牛Ⅱ型胶原和弗氏完全佐剂诱导CIA模型,评估各组大鼠的一般情况、关节炎指数、足肿胀度、血清炎症因子及纤溶酶原激活物抑制剂水平、脾指数、膝关节及踝关节病理、右后足爪骨破坏情况、肺间质病变情况。结果雌性CIA大鼠的关节炎指数在初次免疫后第21天较雄性CIA大鼠显著升高(P<0.05),但两组足肿胀度在观察的任一时间点均无显著差异(P>0.05);雌性CIA大鼠血清肿瘤坏死因子α、白介素1β和脾指数均较雄性CIA大鼠显著升高(P<0.05,P<0.001),纤溶酶原激活物抑制剂水平无显著差异(P>0.05);雌性CIA大鼠膝关节和踝关节病理的炎症细胞浸润及滑膜增生评分较雄性CIA大鼠显著升高(P<0.05),雌性CIA大鼠膝关节软骨损伤及右后足爪骨破坏程度均较雄性显著升高(P<0.05);雌性和雄性CIA大鼠均出现了肺间质炎症细胞浸润及轻度纤维化,但雌性比雄性的肺间质病变更重。结论使用SD大鼠构建的雌性及雄性CIA模型均能兼具关节炎及肺间质病变,但雌性CIA大鼠的病变程度更重,在使用CIA模型进行RA相关研究时应关注性别差异带来的影响。

鹿茸Ⅰ型胶原对骨髓间充质干细胞增殖的影响及其与Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖表达的关系

目的:观察鹿茸Ⅰ型胶原(VACTⅠ)对骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖及细胞周期的影响,探讨其与Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖表达的关系。方法:选取健康雄性4周龄SD大鼠,差时贴壁法提取BMSCs并传代培养。实验分为空白对照组、转化生长因子β3(TGF-β3)(10μg·L^-1)组和不同浓度(1.25、2.50、5.00、10.00和20.00 g·L^-1)VACTⅠ组,CCK-8法检测各组BMSCs增殖率,ELISA法检测各组细胞上清液中骨形态生成蛋白4(BMP-4)和转录因子Sox9水平,流式细胞术检测各组不同细胞周期BMSCs百分率,RT-PCR法和Western blotting法分别检测各组细胞中Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖mRNA和蛋白表达水平。结果:与空白对照组比较,2.50~20.00 g·L^-1 VACTⅠ组大鼠BMSCs增殖率明显降低(P<0.05或P<0.01);ELISA法,与空白对照组比较,TGF-β3组和不同浓度VACTⅠ组细胞上清液中BMP-4和Sox9水平明显升高(P<0.05或P<0.01);流式细胞术,与空白对照组比较,TGF-β3组和不同浓度VACTⅠ组不同细胞周期BMSCs百分率差异无统计学意义(P>0.05);RT-PCR法,与空白对照组比较,TGF-β3组和不同浓度VACTⅠ组细胞中Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖mRNA表达水平明显升高(P<0.05);Western blotting法,与空白对照组比较,TGF-β3组和不同浓度VACTⅠ组细胞Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖蛋白表达水平明显升高(P<0.05或P<0.01)。结论:VACTⅠ可促进BMSCs释放BMP-4和Sox9,提高Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖表达水平,抑制BMSCs增殖,是一种潜在的成软骨分化诱导剂。

T-2毒素对软骨Ⅱ型胶原蛋白和蛋白聚糖合成的影响以及硒的保护作用

目的探讨T-2毒素对软骨细胞主要间质成分Ⅱ型胶原蛋白和蛋白聚糖合成的影响和硒的保护作用。方法采用 MTT法检测T-2毒素对软骨细胞存活率的影响;用TB染色法检测人软骨细胞蛋白聚糖表达;免疫组织化学检测人软骨细胞胶原蛋白Ⅱ表达;RT-PCR检测人软骨细胞Ⅱ型胶原蛋白和蛋白聚糖mRNA表达。结果 T-2毒素在浓度为 0．001-2 mg／L的范围内,对软骨细胞的作用呈较典型的浓度依赖关系和时间依赖关系,而且随着作用时间的延长,浓度依赖关系更加明显。T-2毒素(10～20μg／L)可以抑制软骨细胞Ⅱ型胶原蛋白和蛋白聚糖的合成及其mRNA表达。而加硒能较明显刺激软骨细胞蛋白聚糖mRNA表达,部分减弱T-2毒素的这种抑制,有一定的保护作用,但不显示对T-2 毒素引起的Ⅱ型胶原蛋白及其mRNA表达的保护作用。结论 T-2毒素对软骨细胞Ⅱ型胶原蛋白和蛋白聚糖合成有明显的抑制作用,微量元素硒对T-2毒素引起的软骨细胞蛋白聚糖改变有一定保护作用。

转染hIGF-1基因增强软骨细胞聚集蛋白多糖、Ⅱ型胶原的表达

目的探讨人胰岛素样生长因子(human insulin-like growth factor,hIGF-1)基因对软骨细胞分泌聚集蛋白多糖(aggrecan)、Ⅱ型胶原的影响.方法构建并鉴定携带hIGF-1基因的重组腺病毒(Ad/CMV-hIGF-1),采用1、10、100及500感染复数单位(multiplicity of infection,MOI)的Ad/CMV-hIGF-1转染软骨细胞,PBS为阴性对照,100μg/L hIGF-1生长因子为阳性对照,转染后4 d进行aggrecan、Ⅱ型胶原免疫组化,参照文献分析免疫组化阳性单位.结果在1～100MOI范围内,随着Ad/CMV-hIGF-1滴度增加,aggercan、Ⅱ型胶原表达递增,500 MOI Ad/CMV-hIGF-1转染后,aggrecan表达骤减;Ⅱ型胶原表达下降不明显.结论 hIGF-1基因对软骨细胞aggrecan、Ⅱ型胶原的表达有影响;100 MOI Ad/CMV-hIGF-1优于100 μg/L hIGF-1生长因子的作用.

五福饮对大鼠退变椎间盘聚蛋白聚糖与Ⅱ型胶原表达的影响

目的观察五福饮对大鼠退变椎间盘聚蛋白聚糖与Ⅱ型胶原表达的影响。方法将48只SD大鼠分成空白对照组、模型组及五福饮组各16只,模型组及五福饮组大鼠应用细针纤维环穿刺结合肿瘤坏死因子-α椎间盘内注射进行造模,造模成功后3组大鼠分别给予生理盐水、生理盐水及五福饮灌胃治疗8周。采用Micro-CT检测脊柱退变情况,HE染色观察椎间盘退变特征,RT-PCR检测椎间盘聚蛋白聚糖与Ⅱ型胶原mRNA的表达。结果造模后,大鼠椎间盘出现明显退变特征,表明造模成功。灌服五福饮8周后,大鼠造模椎间隙相对高度及组织学退变均有改善。五福饮组大鼠与模型组大鼠相比较,椎间盘聚蛋白聚糖与Ⅱ型胶原mRNA表达均有明显提高(P<0.05)。结论五福饮可防治椎间盘退变,提高聚蛋白聚糖与Ⅱ型胶原表达可能是其作用机制。

牛膝多糖对软骨细胞Ⅱ型胶原及蛋白聚糖表达的影响

目的:探讨牛膝多糖(ABPS)对大鼠膝关节软骨细胞Ⅱ型胶原及蛋白聚糖表达的影响。方法:取4周龄健康SD大鼠10只,分离膝关节,刮下双侧膝关节表面软骨组织,采用机械-Ⅱ型胶原酶消化法获取膝关节软骨细胞。建立软骨细胞体外培养体系,倒置相差显微镜观察细胞形态,采用Ⅱ型胶原免疫组化法鉴定软骨细胞。体外培养到第2代软骨细胞,分别用0,50,100,200μg·m L^(-1)的ABPS对软骨细胞进行干预。干预后,Western blot检测各组Ⅱ型胶原、蛋白聚糖的表达变化,免疫荧光观察空白组与加药组Ⅱ型胶原的表达变化。结果:第2代软骨细胞的形态学表明软骨细胞的典型特征:软骨细胞含有丰富的Ⅱ型胶原。Western blot检测结果显示,ABPS促进软骨细胞Ⅱ型胶原表达,并且在100μg·m L^(-1)时表达最高,差异有统计学意义(P<0.05)。同时100μg·m L^(-1)的ABPS干预软骨细胞后,软骨细胞中的蛋白聚糖表达增加,但差异无统计学意义(P>0.05)。与空白组的Ⅱ型胶原荧光表达相比,ABPS干预后软骨细胞的Ⅱ型胶原荧光表达更强。结论:ABPS促进了软骨细胞Ⅱ型胶原及蛋白聚糖的表达。

鲨鱼软骨胶原蛋白的酶法制备及其稳定性研究

以鲨鱼软骨为原料,通过单因素实验和响应面试验优化酶法制备胶原蛋白的最佳工艺,并分析对胶原蛋白的结构和稳定性。结果表明,胶原蛋白提取的最佳条件为:胃蛋白酶添加量9150 U/g、提取时间39.85 h、pH 1.67及料液比1∶15(g/mL),此条件下胶原蛋白的提取率为(85.09±0.17)%,所制备的胶原蛋白保留了较为完整的三螺旋结构,符合Ⅱ型胶原蛋白的特征。稳定性研究表明其变性温度为39.9℃,黏度随温度和盐浓度的升高显著下降,而随pH值的不同呈先增后减再增加的趋势,以pH 7时黏度最小(4.26 mPa·s)。圆二色谱分析表明,随盐浓度和温度的增加,胶原蛋白的三螺旋结构发生改变,当温度超过变性温度时(39.9℃),三螺旋结构逐渐解旋且变性。本研究为鲨鱼资源的高值化利用提供了理论依据。

补肾活血方对膝骨关节炎蛋白聚糖和Ⅱ型胶原表达的影响

目的:观察补肾活血方对膝骨关节炎(OA)蛋白聚糖和Ⅱ型胶原表达的影响。方法:将60例患者随机分2组各30例,治疗组予补肾活血方治疗,对照组予西乐葆治疗,观察2组治疗后血清蛋白聚糖与Ⅱ型胶原表达情况。结果:治疗后2组膝关节功能评分较治疗前均有明显提高(P<0.01);治疗后2组间比较,差异无显著性意义(P>0.05)。治疗后3月,治疗组蛋白聚糖、Ⅱ型胶原表达明显下降,与本组治疗前及对照组同时段比较,差异均有非常显著性意义(P<0.01);治疗后6月,2组蛋白聚糖、Ⅱ型胶原表达均明显下降,与治疗前比较,差异均有非常显著性意义(P<0.01)。结论:补肾活血中药能促进OA患者软骨蛋白聚糖和Ⅱ型胶原的表达,对膝OA关节软骨有保护作用。

基于瞬时受体电位香草素亚家族4信号通路探讨牛蒡子苷元对体外培养软骨细胞增殖及Ⅱ型胶原蛋白和软骨蛋白聚糖表达的影响

目的:基于瞬时受体电位香草素亚家族4(transient receptor potential vanilloid 4,TRPV4)信号通路探讨牛蒡子苷元对体外培养软骨细胞增殖及Ⅱ型胶原蛋白和软骨蛋白聚糖表达的影响。方法:自新生SD大鼠膝关节软骨组织提取软骨细胞,进行体外培养,取第1代软骨细胞分别加入不同培养液进行干预。空白组仅加入常规培养液,牛蒡子苷元组加入含10μmol牛蒡子苷元的培养液,牛蒡子苷元联合阻断剂组加入含10μmol牛蒡子苷元和10μmol GSK205的培养液,激动剂组加入含1μmol 4α-PPD的培养液,阻断剂联合激动剂组加入含10μmol GSK205和1μmol 4α-PPD的培养液,阻断剂组加入含10μmol GSK205的培养液。分别于干预24 h和72 h后以CCK-8法检测软骨细胞增殖情况,48 h后以Western blot法检测软骨蛋白聚糖和Ⅱ型胶原蛋白水平。结果:(1)软骨细胞增殖测定结果。干预24 h后,6组的吸光度比较,差异有统计学意义(1.03±0.72,1.32±0.11,1.01±0.05,1.33±0.34,1.04±0.50,1.10±0.06;F=18.309,P=0.000)。牛蒡子苷元组、激动剂组的吸光度均高于空白组(P=0.000,P=0.000);牛蒡子苷元联合阻断剂组、阻断剂联合激动剂组、阻断剂组的吸光度与空白组比较,组间差异均无统计学意义(P=0.632,P=0.840,P=0.164);牛蒡子苷元组的吸光度高于牛蒡子苷元联合阻断剂组、阻断剂联合激动剂组(P=0.000,P=0.000);牛蒡子苷元组与激动剂组比较,差异无统计学意义(P=0.834);牛蒡子苷元联合阻断剂组的吸光度低于激动剂组(P=0.000),与阻断剂联合激动剂组比较,差异无统计学意义(P=0.498);激动剂组的吸光度高于阻断剂联合激动剂组(P=0.000)。干预72 h后,6组的吸光度比较,差异有统计学意义(1.66±0.02,2.21±0.05,1.84±0.04,1.92±0.07,1.71±0.10,1.74±0.08;F=37.629,P=0.000)。牛蒡子苷元组、牛蒡子苷元联合阻断剂组、激动剂组的吸光度均高于空白组(P=0.000,P=0.001,P=0.000);阻断剂联合激动剂组、阻断剂组与空白组比较,组间差异均无统计学意义(P=0.326,P=0.104);牛蒡子苷元组的吸光度高于牛蒡子苷元联合阻断剂组、激动剂组及阻断剂联合激动剂组(P=0.000,P=0.000,P=0.000);牛蒡子苷元联合阻断剂组的吸光度低于激动剂组(P=0.010),与阻断剂联合激动剂组比较,差异无统计学意义(P=0.098);激动剂组的吸光度高于阻断剂联合激动剂组(P=0.000)。(2)软骨蛋白聚糖和Ⅱ型胶原蛋白水平测定结果。5组软骨细胞中软骨蛋白聚糖水平比较,差异有统计学意义(1.00±0.00,20.74±5.01,4.20±0.66,22.87±1.82,2.09±0.63;F=194.544,P=0.000)。牛蒡子苷元组、激动剂组的软骨蛋白聚糖水平均高于空白组(P=0.000,P=0.000);牛蒡子苷元联合阻断剂组、阻断剂联合激动剂组与空白组比较,组间差异均无统计学意义(P=0.136,P=0.593);牛蒡子苷元组的软骨蛋白聚糖水平高于牛蒡子苷元联合阻断剂组、阻断剂联合激动剂组(P=0.000,P=0.000);牛蒡子苷元组与激动剂组比较,差异无统计学意义(P=0.305);牛蒡子苷元联合阻断剂组的软骨蛋白聚糖水平低于激动剂组(P=0.000),与阻断剂联合激动剂组比较,差异无统计学意义(P=0.310);激动剂组的软骨蛋白聚糖水平高于阻断剂联合激动剂组(P=0.000)。5组软骨细胞中Ⅱ型胶原蛋白水平比较,差异有统计学意义(1.00±0.00,2.94±0.11,1.92±0.17,2.04±0.12,0.78±0.09;F=58.701,P=0.000)。牛蒡子苷元组、牛蒡子苷元联合阻断剂组、激动剂组的Ⅱ型胶原蛋白水平均高于空白组(P=0.000,P=0.000,P=0.000);阻断剂联合激动剂组的Ⅱ型胶原蛋白水平低于空白组(P=0.032);牛蒡子苷元组的Ⅱ型胶原蛋白水平高于牛蒡子苷元联合阻断剂组、激动剂组、阻断剂联合激动剂组(P=0.000,P=0.000,P=0.000);牛蒡子苷元联合阻断剂组的Ⅱ型胶原蛋白水平高于阻断剂联合激动剂组(P=0.000),与激动剂组比较,差异无统计学意义(P=0.193);激动剂组的Ⅱ型胶原蛋白水平高于阻断剂联合激动剂组(P=0.000)。结论:牛蒡子苷元可通过TRPV4信号通路促进体外培养软骨细胞的增殖及软骨细胞中Ⅱ型胶原蛋白和软骨蛋白聚糖的表达。

胶原蛋白肽功能及其作用机制研究进展

胶原蛋白是哺乳动物体内含量最多、分布最广的功能性大分子蛋白质,主要存在于动物的结缔组织中,参与细胞外基质结构的组成,人体很难直接消化吸收。胶原蛋白肽(CP)是胶原蛋白经过酶水解得到的是一种介于氨基酸和蛋白质之间的混合物,因其具有良好的抗氧化活性、生物相容性、低分子量且易被消化吸收等优点,在医疗和食品等领域得到广泛应用。文章主要从CP来源、CP防治骨质疏松症、修复皮肤老化、预防Ⅱ型糖尿病的功能及其作用机制方面进行综述,可以为从事CP研究和开发的专业人员提供新思路。

可溶性猪软骨Ⅱ型胶原蛋白的提取与鉴定

目的从猪膝关节软骨中提取纯化Ⅱ型胶原蛋白,并对其进行鉴定。方法选择猪膝关节软骨为提取原料,用盐酸胍去除蛋白多糖、胃蛋白酶两步消化、氯化钠盐析、超纯水透析、离心浓缩等方法提取纯化Ⅱ型胶原蛋白;采用SDS-PAGE、氨基酸成分分析对提取的Ⅱ型胶原蛋白进行鉴定;利用冻干的方法计算提取的浓度。结果 SDS-PAGE电泳结果显示提取的Ⅱ型胶原蛋白分子量约120 kD;氨基酸成分分析显示甘氨酸、脯氨酸和丙氨酸含量最高,并且可以检出羟脯氨酸、羟赖氨酸,符合Ⅱ型胶原特征;该法提取的Ⅱ型胶原蛋白浓度为66 mg/mL。结论从猪关节软骨提取的Ⅱ型胶原蛋白纯度高,方法简便,提取的胶原蛋白浓度更高。

Ⅱ型胶原病诊治进展

Ⅱ型胶原病是由于COL2A1基因变异导致的一大类骨骼-软骨发育异常的疾病。COL2A1基因位于常染色体12q13.11-q13.2上,主要编码合成Ⅱ型胶原蛋白。COL2A1突变导致各种骨骼异常、口面部特殊体征和眼部、听觉损害,各类型疾病表现形式广泛,基因-表型相关性尚不明确。本文综述COL2A1突变导致骨骼-软骨发育异常的疾病临床表型和相关变异,同时对目前的诊治进展进行阐述。

口服Ⅱ型胶原蛋白诱导免疫耐受治疗佐剂关节炎的研究

目的： 观察口服Ⅱ型胶原蛋白（ｔｙｐｅＩＩｃｏｌｌａｇｅｎ， ＣＩＩ） 对大鼠佐剂关节炎（ａｄｊｕｖａｎｔａｒｔｈｒｉｔｉｓ， ＡＡ） 的治疗作用。方法： 采用酶消化法， 提取牛软骨ＣＩＩ， 经口插管灌注将ＣＩＩ给予佐剂关节炎ＳＤ大鼠。结果： 口服ＣＩＩ可推迟ＡＡ的发病， 降低发病率， 明显减轻病变关节的炎症反应和使病程缩短。结论： 口服ＣＩＩ可诱导抗原特异性免疫耐受并对淋巴细胞的增殖反应有抑制作用， 而且此种免疫耐受作用可以剂量依赖的方式通过淋巴细胞转移。