龙胆苦苷对骨性关节炎软骨细胞外基质的影响

目的:观察龙胆苦苷对骨性关节炎软骨细胞外基质保护作用的机制。方法:从关节软骨中提取软骨细胞,体外培养传至原代。随机分为空白对照组、模型组和观察组。空白对照组采用常规培养基,模型组在培养基中添加白细胞介素-1β(IL-1β)诱导构建细胞水平关节炎模型,观察组在模型组的基础上添加龙胆苦苷进行干预,在体外共培养72 h后提取RNA。采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)等方法在基因水平检测关节软细胞外基质特异性基因Ⅱ型胶原A1、蛋白聚糖和降解酶基质金属蛋白酶-13(MMP-13)、血管性血友病因子裂解蛋白酶-5(ADAMTS-5)基因表达变化。结果:与空白对照组比较,模型组软骨细胞Ⅱ胶原蛋白A1、蛋白聚糖的表达降低,差异均有统计学意义(均P<0.01),MMP-13、ADAMTS-5表达明显增加,差异均有统计学意义(均P<0.01)。与模型组比较,观察组中软骨细胞Ⅱ胶原蛋白A1、蛋白聚糖的表达均出现增加的趋势,其中Ⅱ胶原蛋白A1差异有统计学意义(P<0.05),MMP-13和ADAMTS-5表达减少,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论:龙胆苦苷可上调软骨细胞外基质中Ⅱ胶原蛋白A1、蛋白聚糖的mRNA表达,对骨关节炎的软骨细胞具有保护作用,其作用机制主要是抑制MMP-13的生成。

髁突软骨诱导外源性骨髓间充质干细胞成软骨分化的实验研究

目的:研究正常和骨关节炎髁突软骨诱导外源性骨髓间充质干细胞(BMSCs)成软骨分化能力的差别及调节机制。方法:采用单侧前牙反[牙合](UAC)诱导的颞下颌关节骨关节炎动物模型。BMSCs分别与正常髁突软骨(对照组)和UAC髁突软骨(实验组)在transwell系统中共培养48 h,用realtime-PCR检测BMSCs中Col2a1基因表达情况,用甲苯胺蓝染色及免疫荧光染色观察BMSCs软骨基质表达情况和c-myc和ERK1/2表达情况。结果:BMSCs与对照组和UAC组细胞培养后,甲苯胺蓝染色均为阳性,Col2a1的mRNA表达水平均升高,UAC组BMSCs比对照组共培养的BMSCs表达低。共培养的BMSCs的c-myc和ERK1/2均为阳性,但与UAC组共培养的BMSCs的c-myc和ERK1/2表达水平较对照组共培养的低。结论:骨关节炎软骨较正常软骨诱导BMSCs成软骨分化能力弱,c-myc和ERK1/2可能参与了髁突软骨诱导的BMSCs成软骨分化。