急性弛缓性麻痹病例中Ⅱ型脊髓灰质炎疫苗病毒变异株基因特征分析

研究Ⅱ型脊髓灰质炎（脊灰）疫苗变异株的基因特征，为我国使用口服脊灰减毒活疫苗／脊灰灭活疫苗使用策略，维持无脊灰状态和全球最终消灭脊灰提供科学依据。根据型内鉴定的检测结果，从2000-2001年AFP病例分离到的Ⅱ型脊灰疫苗变异株中选取有聚集性的5株病毒进行全基因组序列测定（贵州省3株、山东省2株），并进行核苷酸、氨基酸同源性分析。贵州省3株病毒全基因组序列完全一致，但与SabinⅢ型病毒发生重组，重组区域在3A区（nt5343-5353）；与疫苗株相比，Ⅱ型区域变异10个碱基，其中VP1区变异4个，与SabinⅡ型株核苷酸同源性为99．56％，氨基酸同源性99．34％；Ⅲ型区域变异9个碱基。山东省2株病毒全基因序列共享16个突变位点，没有发生重组，与SabinⅡ型株相比，VP1区分别变异7个和4个碱基，核苷酸同源性分别为99．22％和99．56％，氨基酸同源性分别为99．0％和99．67％。上述5株病毒在重要的减毒位点nt481、nt2909均发生突变。此研究中5株病毒分属于两个不同的传播链，但是共享nt481、nt2909、nt2992三个突变位点，这3个突变位点不在重组区域内，他们的共同作用可能是影响病毒传播力的重要因素，但目前尚无证据证明脊灰疫苗病毒型间重组会增加病毒的毒力及传播力。

广东省1997～1999年AFP病例中脊髓灰质炎病毒Ⅱ型疫苗衍生株分子生物学特征及致病性分析

目的 了解广东省 1997～ 1999年急性弛缓性麻痹 (AFP)病例中脊髓灰质炎 (脊灰 )Ⅱ型疫苗衍生株病毒的分子生物学特征及致病性。方法 从脊灰病毒感染的细胞悬液中提取总RNA ,将RT PCR扩增的产物进行RFLP分析及采用Sanger末端双脱氧终止法进行序列测定 ,并结合病例流行病学资料进行分析。结果 1997～ 1999年共从AFP病例中分离到 2 5例脊灰Ⅱ型疫苗株病毒 ,占分离到脊灰病毒病例总数的 37.9% ,其中S2×S3型重组病毒 18例 ,占 72 % ,S2×S1型 1例 ,非重组病毒 6例。S2×S3型重组病毒致残留麻痹 8例 ,占 4 4 .4 %。未服苗儿童感染S2×S3重组病毒致残留麻痹率(6 0 0 % )高于非重组病毒的残留麻痹率 (33 3% )。结论 Ⅱ型疫苗株脊灰病毒普遍存在基因重组现象 ,以S2×S3重组病毒多见 。

中国急性弛缓性麻痹(AFP)病例中脊髓灰质炎病毒疫苗株VP1区基因变异的研究

为研究中国急性弛缓性麻痹 (AFP)病例中脊髓灰质炎 (简称脊灰 )病毒分离株的分子特征 ,为中国继续维持“无脊灰野毒状态”提供理论依据 ,对 2 0 0 2年所有省级疾病预防控制中心送检的脊灰分离株 ,用PCR RFLP法及ELISA法进行型内鉴定。用PCR RFLP法筛查出与疫苗株相比有异常酶切图谱的毒株共 2 4株 ,其中Ⅰ型毒株 1株 ,Ⅱ型毒株 2 1株 ,Ⅲ型毒株 2株 ;用ELISA法筛查出与疫苗株相比有不同的抗原抗体反应的毒株共 2 2株 ,其中Ⅰ型毒株 7株 ,Ⅱ型毒株 4株 ,Ⅲ型毒株 1 1株 ,在 7株Ⅰ型毒株中有 3株为非疫苗类似株 (NSL) ,其余为双反应毒株 (DRV)。随后对这 4 6株毒株进行了全VP1区的基因序列分析。结果表明 :2 0 0 2年脊灰分离株都是疫苗株或疫苗衍生株 ,没有发现野毒株 ,中国继续保持着“无脊灰野毒状态” ;口服减毒活疫苗 (OPV)株与其它野毒株在稳定性性质方面是类似的 ,即通常是不稳定的 ,在人体肠道内有很强的选择性 ;在人体肠道内 ,病毒复制产生的基因变异导致毒力升高 ,是引起疫苗相关麻痹病例 (VAPP)的重要原因 ,但宿主本身的因素也有很大的作用 ;在局部地区有疫苗株的循环或脊灰疫苗衍生株 (VDPV)的存在 ;最终消除疫苗株引起的AFP病例可能还需要脊灰灭活疫苗(IPV)的介入。

一株基因Ⅲ型禽呼肠孤病毒变异株的分离及其灭活疫苗免疫原性初步评价

为了解禽呼肠孤病毒(Avian reovirus,ARV)变异株在我国的流行情况及其生物学特性和致病特点,试验采集黑龙江省某企业送检的病鸡关节组织进行病毒分离,通过RT-PCR、序列分析及常见禽类外源病毒检测鉴定,进一步通过对体外复制能力、致病性、血清交叉中和能力及灭活疫苗免疫抗体水平检测,分析其致病性、抗原性和免疫原性。结果显示:成功从病鸡关节组织中分离到1株ARV,命名为ARV-HLJ21-1690401,该分离株位于基因Ⅲ型分支,与基因Ⅲ型参考株ISR5233和42563-4-2005遗传距离较近,氨基酸序列相似性为83.4%和81.7%,而与其他基因型分离株遗传距离较远;该分离株在LMH细胞上增殖良好,对鸡胚和SPF鸡均具有明显的致病性,可引起接种鸡胚90%死亡,接种6周龄SPF鸡可引起100%发病;该分离株具有良好的免疫原性,其制备的灭活疫苗免疫SPF鸡可诱导产生较好的抗体水平。综上所述,研究成功分离到一株具有致病性和良好免疫原性的基因Ⅲ型ARV变异株,为了解我国ARV变异株的流行及遗传进化特征提供了重要理论依据。

一例疫苗相关麻痹型脊髓灰质炎病例的流行病学调查与分析

随着口服脊髓灰质炎（脊灰）减毒活疫苗的广泛使用，脊灰野病毒的传播和流行已得到有效控制，野病毒病例明显减少。浙江省慈溪市自1991年至今未发生由脊髓灰质炎病毒野毒株引起的急性弛缓性麻痹（AFP）病例，于2000年10月通过卫生部无脊髓灰质炎状态的证实报告。然而，2005年5月慈溪市出现一例贵州籍AFP病例，

抗脊髓灰质炎病毒Ⅱ型Sabin株D抗原单克隆抗体的研制

目的应用杂交瘤技术制备抗脊髓灰质炎病毒Ⅱ型Sabin株D抗原的单克隆抗体。方法用脊髓灰质炎病毒Ⅱ型Sabin株D抗原免疫雌性Balbc小鼠,取其致敏脾脏淋巴细胞与SP20小鼠骨髓瘤细胞融合。间接ELISA法筛选阳性克隆,制备腹水。检测McAb效价、抗体亚类和杂交瘤细胞核型。结果获得4株阳性杂瘤细胞株,选择一株制备腹水,ELISA效价为1∶2.4×106,中和试验效价1∶1.3×104,蛋白浓度为27.2mgmL。McAb与Ⅱ型Sabin株C抗原(ⅡC)、Ⅰ型Sabin株及Ⅲ型Phizer株D抗原(ⅠD、ⅢD)不发生交叉反应,具有高度特异性。结论成功的制备了针对脊髓灰质炎病毒Ⅱ型Sabin株D抗原的McAb,为进一步研究IPV效力检测奠定了基础。

Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗与不同剂型Ⅰ型+Ⅲ型脊髓灰质炎减毒活疫苗序贯接种的免疫原性和安全性观察

[目的]研究Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(sIPV)与不同剂型Ⅰ型+Ⅲ型脊髓灰质炎减毒活疫苗(bOPV)序贯接种的免疫原性和安全性。[方法]选择2016年3月—2018年3月某院≥2月龄的婴儿作为观察对象,通过随机抽签法将其均分成糖丸剂型组与液体剂型组。两组均接受sIPV与bOPV序贯接种,其中液体剂型组使用液体剂型bOPV,糖丸剂型组则使用糖丸剂型bOPV。均严格根据0 d、28 d、56 d的免疫程序,前后共进行3剂接种。分别比较两组在免疫原性和安全性方面的差异。[结果]两组完成全程脊髓灰质炎疫苗接种者在脊髓灰质炎病毒Ⅰ型、脊髓灰质炎病毒Ⅲ型免疫后阳转人数占比方面比较差异无统计学意义(P>0.05);糖丸剂型组与液体剂型组完成全程脊髓灰质炎疫苗接种者在脊髓灰质炎病毒Ⅱ型免疫后阳转人数占比方面比较,前者较低(P<0.05)。糖丸剂型组与液体剂型组在脊髓灰质炎病毒Ⅰ型、脊髓灰质炎病毒Ⅲ型完成全程脊髓灰质炎疫苗接种者免疫后抗体GMT水平方面比较,前者较低(P<0.05);糖丸剂型组与液体剂型组在脊髓灰质炎病毒Ⅱ型完成全程脊髓灰质炎疫苗接种者免疫后抗体GMT水平方面比较,前者较高(P<0.05)。糖丸剂型组与液体剂型组完成全程免疫者接种后30 min、接种后14 d内、接种后28 d内、接种28 d后的不良事件发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。[结论]sIPV与不同剂型bOPV序贯接种均有较好的免疫原性以及安全性。

湛江市1994～2003年检出脊髓灰质炎疫苗株病毒的急性弛缓性麻痹病例流行病学分析

目的 了解湛江市检出脊髓灰质炎 (脊灰 )疫苗株病毒的急性弛缓性麻痹 (AFP)病例的流行病学特征及疫苗相关麻痹型脊灰 (VAPP)病例的发生情况。方法 对 1994～ 2 0 0 3年检出脊灰疫苗株病毒的AFP病例进行分析。结果 1994～ 2 0 0 3年共报告AFP 199例 ,其中检出脊灰疫苗株病毒16例 ,平均检出率为 8 0 4 %。对检出脊灰疫苗株的AFP病例分析结果显示 :病例以≤ 1岁儿童为主(14例 ) ,男性多于女性 ;地区分布无明显聚集性 ,发病季节高峰在每年 12～ 2月 ;检出的疫苗株以Ⅱ型病毒为主 (9例 ) ,残留麻痹率较高 ;VAPP发生率为 0 37/ 10 0万 ,服苗VAPP发生率为 0 2 2 / 10 0万 ,首次服苗发生率为 1 87/ 10 0万 ,接触者VAPP发生率为 0 15 / 10 0万。结论 脊灰疫苗株病毒可能在湛江市外环境发生循环 ,今后必须提高脊灰疫苗免疫覆盖率 ,以阻止脊灰疫苗株病毒的循环。

1例脊髓灰质炎疫苗变异株病毒病例监测、诊断、处理分析

讨论脊髓灰质炎疫苗低变异株病毒病例的监测、诊断、处理方法与预防脊髓灰质炎疫苗低变异株病毒病例发生的策略。根据此病例的个案调查、预防接种相关信息、临床诊断、治疗与脊髓灰质炎实验室病毒检测等方面的资料进行分析。脊髓灰质炎疫苗低变异株病毒病例监测、诊断、处理仍需改进,须严格把握Ⅰ+Ⅲ型脊髓灰质炎减毒活疫苗接种禁忌证,进一步改进消灭脊髓灰质炎免疫策略,预防脊髓灰质炎疫苗低变异株病毒病例的发生。

52株脊髓灰质炎I型病毒的鉴别分析

脊髓灰质炎(简称脊灰)是由脊灰病毒引起的以肢体麻痹为主要临床特征的急性肠道传染病。实践证明,脊灰疫苗可有效地预防脊灰的发病,从而使该病成为继消灭天花之后有可能被消灭的第二种传染病。然而,随着脊灰发病的控制,与服用青灰减毒活疫苗(OPV)有关的麻痹型脊灰病例(VAPP)将变得愈加突出。

脊髓灰质炎病毒抗原变异的研究进展

脊髓灰质炎(脊灰)病毒为正链单股RNA病毒,属小RNA病毒科,肠道病毒属成员,有三个血清型(Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型)。近年来由于单克隆抗体(McAb)和分子生物学等新技术的应用,对该病毒的抗原结构,抗原部位的氨基酸序列,以及易发生突变的区域等均有进一步的阐明,为亚单位疫苗、重组疫苗或合成肽疫苗的开发奠定了基础。本文简要介绍脊灰病毒结构蛋白的免疫原性及抗原变异的研究进展。

卫生部办公厅关于印发《疫苗相关麻痹型脊髓灰质炎病例诊断依据及治疗参考意见》的通知

卫办医发[2008]17号各省、自治区、直辖市卫生厅局,新疆生产建设兵团卫生局:为指导各地科学有效地开展疫苗相关麻痹型脊髓灰质炎病例的诊疗、康复工作,我部委托中华医学会组织专家制定了《疫苗相关麻痹型脊髓灰质炎病例诊断依据及治疗参考意见》。现印发你们,供相关医疗机构参考应用。

福建省脊髓灰质炎病毒分子流行病学研究

目的对福建省急性弛缓性麻痹（AFP）病例中分离的脊髓灰质炎病毒进行分子流行病学研究。方法用RT-PCR法扩增目的基因片段，通过核酸序列分析仪进行测序，将基因序列提交到美国国家生物技术信息中心（NCBI）GenBank上进行比对．并构建基因树。结果福建省1999～2002年分离到脊灰病毒5株，为Ⅱ型与Ⅲ型的疫苗重组。序列分析表明．福建省AFP病例中分离到的5株脊髓灰质炎病毒株VPI区与标准疫苗株的同源性高达99％以上．变异程度不大，与攀伎花市造成流行的脊灰病毒株差异也不大。同时发现，Fj-4，Fj-52株病毒为同一毒株。结论福建省在1999～2000年曾经出现过疫苗重组株，其中有一种毒株已在人群中循环，并引发2例病例。目前我国已进入无脊灰状态．仍采用减毒活疫苗进行免疫要注意脊髓灰质炎疫苗衍生株（VDPV）的流行。运用分子流行病学方法可以为适时调整免疫策略提供支持。

世界卫生组织宣称对消除2型脊髓灰质炎取得重大胜利

2015年10月23日，卫生领域专家向世界卫生组织提议，应停止给儿童接种2型脊髓灰质炎疫苗。目前口服疫苗是预防脊髓灰质炎的主要措施，该类病毒株主要有l型、2型和3型。但自1999年以来，世界范围内未再检出2型脊髓灰质炎病毒株。另外，口服疫苗接种者排出的病毒也可能感染未接受疫苗的人群。近期在疫苗低覆盖地区如老挝、乌克兰、马达加斯加及几内亚等地已出现多起与使用疫苗相关感染。

AsiaⅠ型口蹄疫病毒灭活疫苗毒株不同宿主系传代中VP1基因的遗传变异研究

口蹄疫病毒结构蛋白VP1参与构成病毒粒子的主要中和抗原位点,是4种结构蛋白中最易发生变异的。在病毒传代过程中,对VP1基因进行遗传变异分析是口蹄疫疫苗研制中不可或缺的环节。为此,作者扩增了经不同宿主系（乳鼠、BHK21细胞）连传不同代次的AsiaⅠ型毒株的VP1基因,并对其进行遗传变异分析,毒株间核苷酸同源性为99.4%-99.8%,推导氨基酸序列同源性为98.6%-100%;制苗毒株经过不同宿主系有限传代后,与传代前的原毒（MF1）相比,VP1基因未发生大的变异,主要抗原位点较稳定,说明以此种方式获得的制苗毒株制备的灭活疫苗是稳定的,适用于该毒株流行区域内相关家畜的免疫预防。

浙江省1例AFP病例检出脊髓灰质炎疫苗高变异株病毒的流行病学调查

2021年6月,浙江省1例6月龄急性弛缓性麻痹(AFP)监测病例检出Ⅲ型脊髓灰质炎(脊灰)疫苗高变异株病毒(VHPV),分离培养的病毒与Sabin疫苗株相比在VP1区有6个核苷酸变异。病例有3剂次脊灰疫苗免疫史,发病时左上肢肌力Ⅱ级,临床诊断为肩蜂窝织炎(左侧),经治疗后恢复正常,神经系统检查无异常,痊愈出院。病例后续采集的标本中未再分离到VHPV,密切接触者中未检出VHPV,病例所在县区医疗机构主动搜索及社区人群搜索未发现类似病例。由于病例未出现VHPV所致脊灰的类似临床症状,经专家组讨论排除脊灰。本例VHPV发现及时,并采取有效措施,未造成病毒进一步传播,提示需继续保持AFP病例监测系统的敏感性,提高适龄儿童脊灰疫苗接种率,遏制脊灰病毒传播和流行。

福建省2000-2015年Ⅱ型脊髓灰质炎疫苗相关株病毒变异特征分析

目的了解福建省II型脊髓灰质炎(脊灰)疫苗相关株病毒(VAPV2)变异特征,为证实阻断VAPV2传播提供依据。方法采用RT-PCR扩增VAPV的VP1全长和部分3D区基因序列,统计分析病毒核苷酸(nt)和氨基酸(aa)变异情况。结果 2000-2015年福建省从5 497份粪便标本中分离到219株脊灰病毒,1株为疫苗衍生脊灰病毒(VDPV),218株为VAPV,其中VAPV2占37.16%。与Sabin2株相比,47株VAPV2中VP1变异位点>5个2株(4.26%),≤2个36株(76.60%);共涉及45个位点,其中nt2909为突变热点,导致VP1的aa143位点从非极性疏水性转换成极性亲水性。13株VAPV在3D区出现重组。结论福建省大部分VAPV2变异少,VP1的aa143位点为突变热点。

福建省脊髓灰质炎Ⅱ型疫苗重组株病毒特性与分析

对福建省脊髓灰质炎 (脊灰 )Ⅱ型病毒基因的VP1区和 3D区进行PCR -RFLP分析 ,结果有 5株为脊灰Ⅱ型疫苗重组株病毒 ,均表现为VP1区为Ⅱ型疫苗株 ,3D区为Ⅲ型疫苗株 ,有 4株在VP1区出现不同于标准脊灰Ⅱ型疫苗株病毒的变异。流行病学资料揭示 ,分离出脊灰Ⅱ型重组株病毒的急性弛缓性麻痹 (AFP)病例大多具有脊灰的症状 ,且发病表现出明显的季节性 ;而从“零”剂次免疫儿童或近 6个月从未服过脊灰疫苗儿童的粪便标本中 ,只分离到此病毒。这表明福建省自然环境中存在脊灰Ⅱ型疫苗重组株病毒循环 ,此病毒可能是这类AFP病例的致病因子。在我国保持无脊灰状态下如何控制脊灰Ⅱ型重组株病毒的致病 ,适时采取相应对策对今后的工作提出了新的挑战。