载脂蛋白E和Ⅱ型髓系细胞受体在脂多糖诱导的小胶质细胞炎症反应中的作用

目的探讨载脂蛋白E(ApoE)、Ⅱ型髓系细胞受体(TREM2)在脂多糖(LPS)诱导的小胶质细胞炎症反应中的作用。方法原代培养野生型小鼠及基因敲除(ApoE-/-、TREM2-/-、ApoE-/-TREM2-/-)小鼠的小胶质细胞。用0 ng/ml、100 ng/ml、500 ng/ml LPS刺激野生型小鼠小胶质细胞,用0 ng/ml、500 ng/ml LPS刺激ApoE-/-小鼠、TREM2-/-小鼠、ApoE-/-TREM2-/-小鼠小胶质细胞。采用RT-PCR及Western blotting法检测ApoE、TREM2 mRNA和蛋白水平;应用RT-PCR检测TNF-α、IL-1βmRNA水平。结果与0 ng/ml LPS组比较,100 ng/ml LPS组及500 ng/ml LPS组野生型小鼠小胶质细胞ApoE、TREM2 mRNA及蛋白水平均明显降低(均P<0.05)。与100 ng/ml LPS组比较,500 ng/ml LPS组野生型小鼠小胶质细胞ApoE、TREM2 mRNA及蛋白水平均明显降低(均P<0.05)。用500 ng/ml LPS刺激后,野生型、ApoE-/-、TREM2-/-、ApoE-/-TREM2-/-小鼠小胶质细胞的TNF-α、IL-1βmRNA水平明显升高(均P<0.05)。ApoE-/-、TREM2-/-、ApoE-/-TREM2-/-小鼠小胶质细胞的TNF-α、IL-1βmRNA水平显著高于野生型小鼠(均P<0.05)。结论 ApoE和TREM2能够协同抑制LPS诱导小胶质细胞的炎症反应,在调节CNS炎症中起着重要作用。这些基因可能与AD的发生密切相关。

丁苯酞联合美多芭对帕金森病伴抑郁模型小鼠黑质纹状体Ⅱ型髓系细胞触发受体及小胶质细胞炎症标志物表达的影响

目的:探讨丁苯酞联合美多芭对帕金森病伴抑郁模型小鼠黑质纹状体Ⅱ型髓系细胞触发受体(TREM2)及小胶质细胞M1型炎症标志物[白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]及M2型炎症标志物[IL-10和精氨酸酶-1(Arg-1)]表达的影响。方法:随机将40只C57BL/6成年雄性小鼠分正常对照组(对照组)、帕金森病伴抑郁模型组(模型组)、美多芭治疗组和丁苯酞联合美多芭治疗组,每组10只。腹腔注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP,30 mg/kg×7 d)制备帕金森病小鼠模型。建立帕金森病模型后,以慢性不可预知温和应激诱导产生帕金森病伴抑郁小鼠模型。美多芭治疗组给予美多芭6.25 mg/kg灌胃治疗,1次/d,持续7 d。丁苯酞联合美多芭治疗组给予丁苯酞120 mg/kg和美多芭6.25 mg/kg灌胃治疗,1次/d,持续7 d。采用免疫组化定性分析黑质纹状体内α-突触核蛋白的阳性表达情况。采用酶联免疫吸附(ELISA)法测定5-羟色胺(5-HT)含量。采用蛋白免疫印迹法检测TREM2蛋白表达水平。采用蛋白免疫印迹和PCR检测小胶质细胞炎症标志物IL-1β、TNF-α、IL-10、Arg-1蛋白及mRNA表达水平。结果:模型组小鼠黑质纹状体部位可见大量α-突触核蛋白异常积聚;美多芭治疗组及丁苯酞联合美多芭治疗组α-突触核蛋白阳性表达明显减少,染色变浅,以丁苯酞联合美多芭治疗组减少更明显。与对照组比较,模型组5-HT含量明显减低(P<0.05);与模型组比较,美多芭治疗组及丁苯酞联合美多芭治疗组5-HT含量明显增加,以丁苯酞联合美多芭治疗组增加更明显(均P<0.05)。与对照组比较,模型组TREM2明显减低(P<0.05);与模型组比较,美多芭治疗组及丁苯酞联合美多芭治疗组TREM2明显增加,以丁苯酞联合美多芭治疗组增加更明显(均P<0.05)。与对照组比较,模型组小胶质细胞M1型炎症标志物IL-1β和TNF-α明显升高,M2型标炎症标志物IL-10和Arg-1明显下降(均P<0.05);与模型组比较,美多芭治疗组及丁苯酞联合美多芭治疗组IL-1β和TNF-α下降,IL-10和Arg-1增加,以丁苯酞联合美多芭治疗组更明显(均P<0.05)。结论:丁苯酞联合美多芭能促进帕金森病伴抑郁模型小鼠黑质纹状体TREM2表达增加,抑制炎症反应,对神经元具有保护作用。