硫酸脑苷酯负载的CD1d四聚体检测小鼠Ⅱ型NKT细胞

目的:建立一种检测小鼠Ⅱ型NKT细胞的方法。方法:将硫酸脑苷酯(sulfatide)与生物素连接的CD1d单体按摩尔比3∶1混合室温静置过夜,之后加入PE标记的链酶亲和素,室温孵育4 h制成sulfatide/CD1d四聚体。然后应用流式细胞术(FCM)检测正常小鼠脾脏及肺脏单个核细胞中Ⅱ型NKT细胞的百分比(TCR-β+sulfatide/CDld四聚体+),以及小鼠脾细胞经sulfatide刺激后单个核细胞中的Ⅱ型NKT细胞的百分比。结果:正常小鼠脾脏及肺脏单个核细胞中Ⅱ型NKT细胞的比例分别为(0.875±0.096)%和(1.175±0.263)%;小鼠脾细胞经sulfatide刺激后的Ⅱ型NKT细胞的比例为(2.75±0.603)%,与正常相比明显增加(P<0.01)。结论:硫酸脑苷酯负载的CDld四聚体是检测小鼠Ⅱ型NKT细胞的有效方法。

Ⅰ型和Ⅱ型NKT细胞与肿瘤免疫

NKT细胞是一类特殊的T细胞,根据T细胞受体(TCR)的恒定性,将NKT细胞分为Ⅰ型和Ⅱ型。近年来研究表明,NKT细胞在肿瘤免疫中具有重要作用,其中Ⅰ型NKT细胞主要发挥抗肿瘤作用,Ⅱ型NKT细胞可以促进肿瘤的发展。本文将从Ⅰ型和Ⅱ型NKT细胞在肿瘤免疫中的作用、机制以及相互调节等方面作一综述。

硫酸脑苷脂活化Ⅱ型NKT细胞对小鼠肺Ⅰ型NKT细胞分泌白细胞介素-10水平的影响

目的:观察硫酸脑苷脂(sulfatide)活化Ⅱ型自然杀伤(NK)T细胞对小鼠肺Ⅰ型NKT细胞分泌白细胞介素(IL)-10水平的影响。方法:10只野生型BALB/c小鼠随机分为野生型sulfatide治疗组和野生型正常对照组,每组5只;10只CD1d^(-/-)BALB/c小鼠随机分为CD1d^(-/-)sulfatide治疗组和CD1d^(-/-)正常对照组,每组5只。野生型和CD1d^(-/-)sulfatide治疗组小鼠单次腹腔注射sulfatide 20μg,野生型和CD1d^(-/-)正常对照组以等量PBS代替。应用荧光定量聚合酶链反应法检测各组小鼠肺组织IL-10 mRNA表达水平;酶联免疫吸附法检测各组小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-10水平;流式细胞术检测各组小鼠肺Ⅰ型和Ⅱ型NKT细胞数量及IL-10+Ⅰ型和IL-10+Ⅱ型NKT细胞数量。结果:野生型sulfatide治疗组小鼠肺组织IL-10 mRNA表达水平和BALF中IL-10水平明显高于野生型正常对照组和CD1d^(-/-)sulfatide治疗组(P<0.01,P<0.001或P<0.05),但CD1d^(-/-)sulfatide治疗组小鼠肺组织IL-10 mRNA表达水平和BALF中IL-10水平与CD1d^(-/-)正常对照组比较差异无统计学意义(均P>0.05)。野生型sulfatide治疗组小鼠肺Ⅱ型NKT细胞数量明显高于野生型正常对照组(P<0.001),但两组小鼠肺Ⅰ型NKT细胞数量比较差异无统计学意义(P>0.05)。野生型sulfatide治疗组小鼠肺IL-10+Ⅰ型NKT细胞数量明显高于野生型正常对照组(P<0.001),但两组小鼠肺IL-10+Ⅱ型NKT细胞数量比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:硫酸脑苷脂活化Ⅱ型NKT细胞可以诱导小鼠肺Ⅰ型NKT细胞分泌IL-10。

硫酸脑苷酯活化Ⅱ型NKT细胞对支气管哮喘小鼠Ⅰ型NKT细胞活性的影响

目的观察硫酸脑苷酯活化Ⅱ型自然杀伤（naturalkiller，NK）T细胞对支气管哮喘（简称哮喘）小鼠Ⅰ型NKT细胞数量及活性的影响。方法将24只BALB／c小鼠随机分为对照组、哮喘组和硫酸脑苷酯组，每组8只。流式细胞术检测肺Ⅱ型及I型NKT细胞的数量及分泌细胞因子水平；酶联免疫斑点吸附法检测脾Ⅱ型及Ⅰ型NKT细胞分泌细胞因子水平；CCK8试剂盒检测脾Ⅰ型NKT细胞的增殖能力。结果硫酸脑苷酯组小鼠肺Ⅱ型NKT细胞分泌IL-4和7干扰素（IFN-7）水平明显高于哮喘组（P〈0．01），但肺及脾Ⅰ型NKT细胞分泌IL-4和IFN-7水平和脾Ⅰ型NKT细胞对α半乳糖神经酰胺的增殖反应明显低于哮喘组（P值均〈0．01）。结论硫酸脑苷酯活化Ⅱ型NKT细胞可以抑制哮喘小鼠Ⅰ型NKT细胞的活性。