目的:探讨Ⅱ型cGMP依赖性蛋白激酶(tpyeⅡcGMP dependent protein kinase,PKGⅡ)在原发性胃癌组织中的表达及其在胃癌发生发展中的意义。方法:选择50例原发性胃癌组织、50例正常胃黏膜组织,应用免疫组化SP法和逆转录PCR法分别检测PKGⅡ...目的:探讨Ⅱ型cGMP依赖性蛋白激酶(tpyeⅡcGMP dependent protein kinase,PKGⅡ)在原发性胃癌组织中的表达及其在胃癌发生发展中的意义。方法:选择50例原发性胃癌组织、50例正常胃黏膜组织,应用免疫组化SP法和逆转录PCR法分别检测PKGⅡ蛋白和mRNA表达水平。结果:PKGⅡ在正常胃黏膜组织中表达较高,在胃癌组织中表达明显降低(P<0.05),相关性分析结果显示PKGⅡ的表达与胃癌细胞的分化程度相关。结论:PKGⅡ在胃癌组织中表达明显降低,可能与胃癌的发生发展有关。展开更多
目的:研究cGMP依赖性蛋白激酶Ⅱ(cGMP dependent protein kinaseⅡ,PKGⅡ)对胃癌细胞株BGC-823迁移活动的影响,并对其作用机制进行初步探讨。方法:以携带PKGⅡ基因的腺病毒结构Ad-PKGⅡ感染胃癌BGC-823细胞,用蛋白质印迹法及免疫荧光检...目的:研究cGMP依赖性蛋白激酶Ⅱ(cGMP dependent protein kinaseⅡ,PKGⅡ)对胃癌细胞株BGC-823迁移活动的影响,并对其作用机制进行初步探讨。方法:以携带PKGⅡ基因的腺病毒结构Ad-PKGⅡ感染胃癌BGC-823细胞,用蛋白质印迹法及免疫荧光检测感染病毒后PKGⅡ的表达。用特异性PKGⅡ激活剂8-pCPT-cGMP作用感染病毒的细胞,通过Boyden槽迁移率、刮除迁移分析法分析PKGⅡ高表达和活性增高对Ras同源性蛋白A(Ras homologA,RhoA)激动剂溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid,LPA)诱导的胃癌细胞迁移的影响。结果:胃癌细胞株BGC-823在感染Ad-PKGⅡ后高表达PKGⅡ,经cGMP类似物8-pCPT-cGMP激活后,使RhoA活化诱导的细胞迁移活动受到明显抑制,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:PKGⅡ能明显抑制胃癌细胞株BGC-823的迁移。展开更多
钙/钙调素依赖性蛋白激酶家族(Ca2 +/calmodulindependent protein kinase,CaMK)包括CaMK Ⅰ,CaMKⅡ,CaMKⅢ,CaMKⅣ.其中CaMKⅡ在体内广泛分布,在心肌细胞中高表达.钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)是多功能的丝氨酸/苏氨酸蛋白...钙/钙调素依赖性蛋白激酶家族(Ca2 +/calmodulindependent protein kinase,CaMK)包括CaMK Ⅰ,CaMKⅡ,CaMKⅢ,CaMKⅣ.其中CaMKⅡ在体内广泛分布,在心肌细胞中高表达.钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)是多功能的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,作为Ca2+信号转导的关键因子,调控细胞的多种生物学功能,包括氨基酸和脂质代谢,离子通道/受体及神经递质的合成与释放,维持细胞内钙稳态,调控兴奋收缩耦联作用.展开更多
目的:探讨1,4,5-三磷酸肌醇1型受体(inositol 1,4,5-trisphosphate receptor type 1,IP3R1)调控钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(calcium/calmodulin-dependent protein kinaseⅡ,CaMKⅡ)和电压依赖性阴离子通道1(voltage-dependent anion ...目的:探讨1,4,5-三磷酸肌醇1型受体(inositol 1,4,5-trisphosphate receptor type 1,IP3R1)调控钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(calcium/calmodulin-dependent protein kinaseⅡ,CaMKⅡ)和电压依赖性阴离子通道1(voltage-dependent anion channel 1,VDAC1)在海洛因(heroin,HE)致心肌细胞节律异常中的作用。方法:联合蛋白组学和GEO(Gene Expression Omnibus)数据库分析心律失常芯片数据,寻找关键调控因子。构建IP3R1基因敲减慢病毒并感染原代乳大鼠心肌细胞(neonatal rat cardiomyocytes,NRCMs),实验分为对照(control)组、HE组和HE+shIP3R1组。结晶紫染色观察心肌细胞形态;ELISA法检测乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)和天冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)水平;透射电镜观察线粒体形态学变化;Fluo-4/AM探针法检测细胞内Ca^(2+)浓度;DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量;JC-1染色法检测线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)水平;ATP检测试剂盒检测细胞内ATP水平;免疫共沉淀(co-immunopre-cipitation,Co-IP)分析IP3R1与CaMKⅡδ和VDAC1蛋白之间的相互作用;Western blot检测IP3R1、CaMKⅡδ、p-CaM-KⅡδ(T287)和VDAC1的蛋白水平。结果:结合蛋白质组学和基因表达谱数据集GSE89410分析,筛选得到80个差异共表达分子,基于基因本体论(Gene Ontology,GO)功能注释和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)富集分析结果,最终筛选出关键因子IP3R1,且通过STRING数据库获得IP3R1结合蛋白:CaMKⅡδ和VDAC1。Co-IP结果验证IP3R1与CaMKⅡδ和VDAC1存在相互作用,且HE干预后NRCMs中IP3R1与CaMKⅡδ和VDAC1之间的相互作用增强。体外细胞实验显示,与control组相比,HE组NRCMs数量急剧减少,细胞膜变窄,伪足减少,细胞核结构模糊;LDH和AST水平均显著上升(P<0.05);线粒体超微结构损伤严重,证实HE对NRCMs具有毒性作用并导致线粒体损伤。与control组相比,HE组心肌细胞内Ca^(2+)浓度、ROS水平、MMP以及IP3R1、p-CaMKⅡδ(T287)和VDAC1蛋白水平均显著升高(P<0.05),而HE+shIP3R1组这些指标均显著减低(P<0.05);ATP水平则相反。这证实沉默IP3R1表达可减轻HE干预后NRCMs的钙超载及线粒体损伤。结论:IP3R1通过调控CaMKⅡ和VDAC1引起心肌细胞钙超载和ROS生成增多,参与HE诱导的心肌细胞节律异常。展开更多
目的:运用免疫组化研究尿道狭窄瘢痕中钙调素依赖的蛋白激酶Ⅱ(calmodulin-dependent protein kinaseⅡ,CaMKⅡ)、Smad2、Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)表达的差异。方法:本研究样本采集自2014年12月~2015年12月期间,中南大学湘雅医院泌尿...目的:运用免疫组化研究尿道狭窄瘢痕中钙调素依赖的蛋白激酶Ⅱ(calmodulin-dependent protein kinaseⅡ,CaMKⅡ)、Smad2、Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)表达的差异。方法:本研究样本采集自2014年12月~2015年12月期间,中南大学湘雅医院泌尿外科收治的11例初发性尿道狭窄、10例复发性尿道狭窄患者标本和10例正常尿道组织(取自前尿道狭窄患者的少量正常组织标本)。开展针对正常尿道组织、初发性尿道狭窄瘢痕和复发性尿道狭窄瘢痕的免疫组化研究。结果:(1)通过分析正常尿道组织和尿道狭窄瘢痕组织的苏木精-伊红(HE)染色、VG染色结果发现,尿道狭窄瘢痕组织的HE染色、VG染色切片中成纤维细胞数量较正常尿道组织明显增加,排列较为紊乱。(2)在对比正常尿道组织组和尿道狭窄瘢痕组之间的免疫组化结果后发现尿道狭窄瘢痕组的钙离子/钙调素依赖的蛋白激酶Ⅱ(Ca2+/CaMKⅡ)、Smad2、CollagenⅠ的表达情况以及胶原蛋白表达量均显著高于尿道正常组(P<0.01)。(3)比较同为尿道狭窄瘢痕组别之间的免疫组化结果发现,复发性尿道狭窄瘢痕组的CaMKⅡ、Smad2的表达量显著高于首发性尿道狭窄瘢痕组(P<0.01)。复发性尿道狭窄瘢痕组的CollagenⅠ表达情况显著高于初发性尿道狭窄瘢痕组(P<0.05)。结论:尿道狭窄瘢痕的发生与CaMKⅡ、Smad2、CollagenⅠ在尿道组织中的表达密切相关。展开更多
文摘目的:探讨Ⅱ型cGMP依赖性蛋白激酶(tpyeⅡcGMP dependent protein kinase,PKGⅡ)在原发性胃癌组织中的表达及其在胃癌发生发展中的意义。方法:选择50例原发性胃癌组织、50例正常胃黏膜组织,应用免疫组化SP法和逆转录PCR法分别检测PKGⅡ蛋白和mRNA表达水平。结果:PKGⅡ在正常胃黏膜组织中表达较高,在胃癌组织中表达明显降低(P<0.05),相关性分析结果显示PKGⅡ的表达与胃癌细胞的分化程度相关。结论:PKGⅡ在胃癌组织中表达明显降低,可能与胃癌的发生发展有关。
文摘钙/钙调素依赖性蛋白激酶家族(Ca2 +/calmodulindependent protein kinase,CaMK)包括CaMK Ⅰ,CaMKⅡ,CaMKⅢ,CaMKⅣ.其中CaMKⅡ在体内广泛分布,在心肌细胞中高表达.钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)是多功能的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,作为Ca2+信号转导的关键因子,调控细胞的多种生物学功能,包括氨基酸和脂质代谢,离子通道/受体及神经递质的合成与释放,维持细胞内钙稳态,调控兴奋收缩耦联作用.
文摘目的:运用免疫组化研究尿道狭窄瘢痕中钙调素依赖的蛋白激酶Ⅱ(calmodulin-dependent protein kinaseⅡ,CaMKⅡ)、Smad2、Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)表达的差异。方法:本研究样本采集自2014年12月~2015年12月期间,中南大学湘雅医院泌尿外科收治的11例初发性尿道狭窄、10例复发性尿道狭窄患者标本和10例正常尿道组织(取自前尿道狭窄患者的少量正常组织标本)。开展针对正常尿道组织、初发性尿道狭窄瘢痕和复发性尿道狭窄瘢痕的免疫组化研究。结果:(1)通过分析正常尿道组织和尿道狭窄瘢痕组织的苏木精-伊红(HE)染色、VG染色结果发现,尿道狭窄瘢痕组织的HE染色、VG染色切片中成纤维细胞数量较正常尿道组织明显增加,排列较为紊乱。(2)在对比正常尿道组织组和尿道狭窄瘢痕组之间的免疫组化结果后发现尿道狭窄瘢痕组的钙离子/钙调素依赖的蛋白激酶Ⅱ(Ca2+/CaMKⅡ)、Smad2、CollagenⅠ的表达情况以及胶原蛋白表达量均显著高于尿道正常组(P<0.01)。(3)比较同为尿道狭窄瘢痕组别之间的免疫组化结果发现,复发性尿道狭窄瘢痕组的CaMKⅡ、Smad2的表达量显著高于首发性尿道狭窄瘢痕组(P<0.01)。复发性尿道狭窄瘢痕组的CollagenⅠ表达情况显著高于初发性尿道狭窄瘢痕组(P<0.05)。结论:尿道狭窄瘢痕的发生与CaMKⅡ、Smad2、CollagenⅠ在尿道组织中的表达密切相关。