铜绿假单胞菌环丙沙星耐药株Ⅱ类拓扑异构酶基因突变的研究

用PCR方法 ,扩增 2 6株临床分离铜绿假单胞菌环丙沙星耐药株、4株环丙沙星敏感菌株和PA0 1菌株的Ⅱ类拓扑异构酶 gyrA、gyrB、parC和 parE基因的喹诺酮类药物耐药决定区 (QRDR)基因片断 ;并对铜绿假单胞菌II类拓扑异构酶基因突变与耐药性关系进行研究。结果表明 90 %以上的铜绿假单胞菌耐药株表现出Ⅱ类拓扑异构酶基因突变 (2 6株中有 2 4株 )。突变主要发生在 gyrA基因 (2 2株 )和 parC基因 (14株 )上 ,其中 gyrA基因的第 83位氨基酸密码子表现出高频突变 (2 2株中有 2 1株 ,ACC→ATC ,占 90 % ) ,parC基因第 80位氨基酸密码子也表现出较高的突变率 (14株中有 12株 ,TCG→TTG ,占 60 % ) ,4株耐药株的 gyrB和 3株耐药株的 parE基因发生单点突变 ,2株耐药株II类拓扑异构酶基因未检测到突变。用二倍稀释法 ,测定部分喹诺酮和 β 内酰胺类药物对耐药突变株的体外抗菌活性。表明铜绿假单胞菌Ⅱ类拓扑异构酶基因突变株对诺氟沙星、左氧氟沙星、哌拉西林、头孢他啶和亚胺培南表现出不同的敏感性。试验所用 2 4株突变株对诺氟沙星呈现 10 0 %的耐药 ;对左氧氟沙星 65 %的耐药 ;40 %的菌株对哌拉西林表现出耐药 ;3 0 %的菌株对头孢他啶耐药 ;75

粪肠球菌Ⅱ型拓扑异构酶基因突变与耐氟喹诺酮类药物关系的研究

目的检测粪肠球菌对氟喹诺酮类药物的敏感性，探讨Ⅱ型拓扑异构酶基因突变与耐氟喹诺酮类药物的关系。方法用二倍琼脂稀释法检测6种氟喹诺酮类药物对60株粪肠球菌临床分离株的体外抗菌活性，随机筛选出11株对环丙沙星不同程度耐药菌，PCR扩增gyrA，gyrB，parC，parE基因的喹诺酮耐药决定区（QRDR），产物测序后分析。结果6种药物的相对抗粪肠球菌活性（MIC50，MIC90）从强到弱为：妥舒沙星〉加替沙星，司帕沙星〉左氧氟沙星〉氧氟沙星，环丙沙星；以妥舒沙星抗菌活性最强，氧氟沙星和环丙沙星抗菌活性最差；序列比较发现，有9株耐药株Ⅱ型拓扑异构酶基因发生突变，突变发生在gyrA基因（6株）和parC基因（9株），其中编码gyrA的Ser83→Ile，Arg和编码parC的Ser80→Ile，Arg的密码子表现出高频突变，gyrB和pare编码的氨基酸序列没有改变；未发现gyrA突变单独存在，同时具gyrA和parC突变的MIC值是仅具parC突变菌株MIC值的4倍以上。结论氟喹诺酮类抗菌药新品种妥舒沙星、加替沙星和司帕沙星的抗粪肠球菌活性较老一代药物更强；粪肠球菌对老一代氟喹诺酮类药物存在不同程度的耐药；gyrA基因83，87位突变及parC基因80，84住突变都可引起粪肠球菌对氟喹诺酮类药物产生耐药，但以parC基因80住突变为主；低耐药株往往是parC基因单位点突变，高耐药株同时合并有gyrA基因双位点突变。

慢性化脓性中耳炎中的肺炎克雷伯菌对氟喹诺酮类药物的耐药机制

目的研究慢性化脓性中耳炎病例中分离肺炎克雷伯菌Ⅱ型拓扑异构酶基因突变与耐氟喹诺酮类药物的关系。方法用二倍琼脂稀释法检测6种氟喹诺酮类药物对40株肺炎克雷伯菌临床分离株的最低抑菌浓度,PCR扩增gyrA、parC基因的喹诺酮耐药决定区(QRDR),产物测序后分析。结果有26株Ⅱ型拓扑异构酶基因发生突变,突变发生在gyrA基因(26株)和parC基因(13株),其中编码GyrA的Ser83→Tyr、Phe、Ile和编码ParC的Ser80→Ile密码子表现出高频突变,gyrA突变单独存在,同时具gyrA和parC突变的M IC值是仅具gyrA突变菌株M IC值的4倍以上。结论 gyrA基因83、87位突变及parC基因80、84位突变都可引起肺炎克雷伯菌对氟喹诺酮类药物产生耐药,但以gyrA基因83位突变为主;低耐株往往是gyrA基因单位点突变,高耐株同时合并有parC基因双位点突变。

大肠癌组织中P-gp和GST-π及TopoⅡ的表达及其临床意义的研究

目的:探讨多药耐药P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)、谷胱甘肽转移酶(glutathione-S-trannsferaseπ,GST-π)和拓扑异构酶(DNA topoisomeraseⅡ,TopoⅡ)在大肠癌组织中的表达及临床意义。方法:应用免疫组化SP法联合检测P-gp、GST-π和TopoⅡ在84例大肠癌组织和20例正常大肠黏膜组织中的表达,并结合临床病理参数进行分析。结果:P-gp、GST-π在大肠癌组织中的表达率分别为71.4%(60/84)和75.0%(63/84),高于正常大肠黏膜组织(8/20和11/20),χ2值分别为6.91和3.14,P均<0.05;P-gp表达强度与临床分期相关,高分期P-gp表达(86.7%、39/45)较低分期(65.5%、19/29)高,χ2=5.28,P<0.05;TopoⅡ在大肠癌组织中的阳性率为45.3%(38/84),低于正常大肠黏膜组织65%(13/20),χ2=0.382,P>0.05;高、中和低分化腺癌P-gp(87.5%、80.7%和54.5%)和GST-π(87.5%、82.5%和54.5%)的表达率由高到低;TopoⅡ的表达率由低到高(37.5%、45.6%和63.6%)。淋巴结转移组P-gp和GST-π的表达显著高于无淋巴结转移组,P<0.05。结论:P-gp、GST-π和TopoⅡ均在大肠癌原发性多药耐药中起重要作用。联合检测P-gp、GST-π和TopoⅡ对于大肠癌化疗方案选择具有一定的指导意义。

肺癌组织P-gp、GST-Ⅱ和TOPO-Ⅱ表达及与Ki-67相关性

目的探讨多药耐药(MDR)基因产物P-糖蛋白(P-gp)、谷胱甘肽-S-转移酶Ⅱ(GST-Ⅱ)、DNA拓扑异构酶(TOPO-Ⅱ)在肺癌组织中的表达及其与细胞核增殖抗原(Ki-67)相关性。方法采用免疫组织化学方法检测63例肺癌组织中P-gp、GST-Ⅱ、TOPO-Ⅱ和Ki-67的表达情况。结果 P-gp、GST-Ⅱ、TOPO-Ⅱ和Ki-67在肺癌组织中的阳性表达率分别为61.9%、63.5%、77.8%和39.7%。P-gp、GST-Ⅱ、Ki-67的表达与肺癌病理组织学分型、分化程度有关(χ2=6.733～22.532,P<0.01)。TOPO-Ⅱ在鳞癌和小细胞癌中的阳性表达率明显高于腺癌(χ2=8.259、4.189,P<0.01、0.05)。两个或两个以上MDR基因产物共表达率合计为90.5%,明显高于单独基因产物P-gp和TOPO-Ⅱ的表达率(χ2=59.660,P<0.01)。P-gp、GST-Ⅱ的表达与Ki-67之间无显著相关性(P>0.05),TOPO-Ⅱ的表达与Ki-67呈明显正相关(r=0.380,P<0.01)。结论 P-gp、GST-Ⅱ、TOPO-Ⅱ在不同肺癌类型中均有不同水平表达,且呈共同表达,它们的表达对肺癌的耐药起重要作用,因此联合检测有助于判断化疗疗效及预后。

乳腺癌P-gp、GST-π和TopoⅡ的表达及其意义

目的探讨P-糖蛋白(P-gp),谷胱甘肽S转移酶π(GST-π),DNA拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)在乳腺癌组织中的表达及其意义。方法采用免疫组化SP法对78例术前未行化疗患者的乳腺癌组织切片中P-gp、GST-π、TopoⅡ的表达进行分析。结果P-gp、GST-π、TopoⅡ的阳性表达率分别为38.5%、46.2%、73.1%,与年龄、肿瘤大小、ER/PR和HER2状况无关。腋淋巴结阳性组P-gp和GST-π的阳性表达率与阴性组比较,差异有统计学意义(2χ=5.175,2χ=4.614,P<0.05);肿瘤不同分期的P-gp的阳性表达率差异有统计学意义(2χ=5.848,P<0.05)而且随分期增高而增高。结论乳腺癌组织的原发多药耐药与P-gp、GST-π、TopoⅡ的表达有关,化疗前对它们进行检测可为化疗药物的选择及预后判断提供参考依据。

不同分子分型乳腺癌新辅助化疗对TopⅡα蛋白表达的影响

目的探讨不同分子分型乳腺癌新辅助化疗(neoadjuvant chemotherapy,NAC)对TOPⅡα蛋白表达的影响。方法选取114例经NAC前后的乳腺癌患者病理标本,采用免疫组织化学方法检测其TOPⅡα蛋白表达的变化,并观察疗效。结果 141例浸润性乳腺癌标本中,在病理学Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级间TopⅡα阳性率差异有统计学意义(P<0.05),但Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级间两两比较差异无统计学意义(P>0.05)。化疗反应有效者TopⅡα阳性率高于无效者,差异有统计学意义(P<0.05)。而不同年龄、是否有家族史、是否绝经、肿瘤大小、是否淋巴结转移患者TopⅡα表达阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。141例乳腺癌患者分为Luminal A型、Luminal B1型、Luminal B2型、HER-2表达型、三阴性5型,NAC前三阴性TopⅡα表达阳性率高于Luminal A型(P<0.05),NAC后各型之间差异无统计学意义(P>0.05)。NAC后Luminal B2型和HER-2表达型TopⅡα表达阳性率低于NAC前,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 TopⅡα能客观反映乳腺癌的增殖活性,可作为判断乳癌患者预后及指导化疗的有效指标。

Her2阳性乳癌组织TopⅡα的表达及临床意义

目的探讨人表皮因子受体基因2(Her2)阳性乳房浸润性导管癌DNA拓扑异构酶Ⅱα(TopⅡα)蛋白表达和基因变异的相关性,以及两者与乳癌临床病理特征关系。方法选取我院乳腺病诊疗中心组织标本库中2013年1—6月Her2阳性乳房浸润性导管癌标本76例。应用荧光原位杂交(FISH)、免疫组织化学(IHC)技术分别对76例乳癌组织的TopⅡα基因、蛋白进行检测和分析。结果 TopⅡα基因变异与TopⅡα蛋白表达无显著相关性(P>0.05);TopⅡα蛋白表达和基因变异与病人年龄、绝经情况、组织学分级及AJCC分期均无显著相关性(P>0.05),而与有无腋窝淋巴结转移显著相关(χ2=8.546、7.285,P<0.05)。结论 TopⅡα蛋白表达与基因变异无相关性,且二者均只与乳房浸润性导管癌腋窝淋巴结转移显著相关,临床上TopⅡα蛋白的检测更适用于对蒽环类化疗药物的疗效评价。

拓扑异构酶Ⅱ在化疗后患者骨肉瘤组织中的表达及其意义

目的 探讨DNA拓扑异构酶Ⅱ（TopoⅡ）在化疗后患者骨肉瘤组织中的表达.方法 对30例骨肉瘤患者术前进行2个疗程化疗,手术切除肿瘤组织,通过免疫组织化学法检测骨肉瘤组织中TopoⅡ的表达,分析其与临床病理因素的关系.结果 30例骨肉瘤组织中TopoⅡ阳性表达8例（26.7％）.TopoⅡ蛋白表达与患者的年龄、性别、肿瘤的恶性程度、发生部位、有无转移及Enneking分期均无关（P＞0.05）,21例生存患者中,TopoⅡ蛋白阴性18例,9例死亡患者中,TopoⅡ蛋白阴性4例,二者阴性表达率差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 TopoⅡ低表达的骨肉瘤患者可能预后较差.

拓扑异构酶Ⅱ、谷胱甘肽S-转移酶π在胃癌组织中的表达及其意义

目的 探讨拓扑异构酶Ⅱ（Topo-Ⅱ）、谷胱甘肽S-转移酶π（GST-π）在胃癌组织和正常胃黏膜组织中的表达情况,揭示其与临床病理特征的关系及其意义.方法 应用免疫组织化学法检测100例胃癌组织及20例正常胃黏膜中Topo-Ⅱ、GST-π的表达,结合临床病理资料进行综合分析.结果 Topo-Ⅱ在正常组织与胃癌高、中、低不同分化程度组织中阳性表达率分别为5.0％（1/20）、100 ％（30/30）、96.7％（29/30）、87.5％（35/40）,GST-π阳性表达率分别为60.0％（12/20）、83.3 ％（24/30）、96.7％（29/30）、100.0％（40/40）,Topo-Ⅱ、GST-π在正常组织与胃癌高、中、低不同分化程度组织中表达差异有统计学意义（均P＜ 0.05）.Topo-Ⅱ、GST-π在胃癌组织中的表达与患者的性别、年龄、肿瘤部位、浸润深度均无关（均P＞ 0.05）;Topo-Ⅱ与肿瘤的分化程度及淋巴结转移有关,随肿瘤分化程度的降低、淋巴结转移的增多,Topo-Ⅱ表达降低;GST-π与肿瘤直径、分化程度、淋巴结转移相关（均P＜ 0.05）,分化程度越低、淋巴结转移越多、肿瘤直径越大,GST-π表达越高.GST-π与Topo-Ⅱ负相关（P＜0.01）.结论 胃癌组织中,Topo-Ⅱ的表达与肿瘤的分化程度及淋巴结转移有关,GST-π与肿瘤直径、分化程度、淋巴结转移相关,二者呈负相关.

谷胱甘肽S-转移酶π、DNA拓扑异构酶Ⅱ及P-糖蛋白在难治性癫癎患者脑内的表达

目的探讨谷胱甘肽S-转移酶π(GST-π)、DNA拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)及P-糖蛋白(P-gp)在难治性癫癎(RE)患者脑内的表达及意义。方法32例RE患者手术切除标本,采用免疫组化方法检测GST-π、TopoⅡ及P-gp表达。8例脑血管畸形患者作为对照。结果对照组正常脑组织内星形胶质细胞及血管内皮细胞中有少量GST-π表达(2·2),癫癎组GST-π表达明显增强(10·9,P<0·05)。TopoⅡ在对照组中无表达,癫癎组2例标本有少量表达(0·4,P>0·05)。对照组中P-gp只在脑内血管内皮细胞中少量表达,癫癎组P-gp则在星形胶质细胞及血管内皮细胞中大量表达(12·9,P<0·01)。结论GST-π、P-gp在RE患者脑内表达可能与患者对抗癫癎药耐药有关。

原发性腹膜恶性肿瘤的免疫组化研究及其预后的相关分析

目的探讨原发性腹膜恶性肿瘤p53、Top2α、Ki-67和Her-2/neu的表达及其预测预后的价值。方法对1995年5月至2005年5月在北京大学人民医院治疗的21例原发性腹膜恶性肿瘤患者的石蜡组织标本,用免疫组化技术检测p53、Top2α、Ki-67和Her-2/neu的表达,分析其与化疗疗效和生存时间的关系。结果21例患者Top2α、Ki-67、p53阳性表达率均为52.4%(11/21),8例存在Top2α和Ki-67共表达;Her-2/neu全部呈阴性表达。Top2α与Ki-67表达呈显著的正相关,且均与肿瘤细胞分化等级呈显著正相关。铂类敏感组(10例)和耐药组(8例)p53阳性表达有统计学差异(3例vs7例,P=0.03)。p53阳性表达和阴性表达者的中位无进展生存时间分别为15个月和47个月,两者比较有统计学差异;p53阳性表达对总生存时间以及Top2α、Ki-67阳性表达对中位无进展生存时间和总生存时间均无显著影响。结论原发性腹膜恶性肿瘤组织中存在Top2α、Ki-67与p53的阳性表达,Top2α、Ki-67的表达与肿瘤细胞分化等级呈显著正相关,但对预后可能缺乏显著影响。p53阳性表达者中位无进展生存时间缩短,提示可能对铂类化疗耐药,预后可能较差。

多药耐药基因在原发性卵巢癌中的表达及意义

目的研究多个耐药基因P-糖蛋白(P-gp)、谷胱甘肽S转移酶(GST-π)、DNA拓扑异构酶-Ⅱ(Topo-Ⅱ)和肺耐药相关蛋白(LRP)在原发性卵巢癌中的表达,探讨其与卵巢癌患者耐药的关系。方法应用免疫组化SP法对80例卵巢癌、16例良性卵巢肿瘤及12例正常卵巢组织中P-gp、GST-π、Topo-Ⅱ和LRP表达情况进行测定。结果在卵巢癌中,P-gp、GST-π、Topo-Ⅱ、LRP阳性表达率分别为57.5%、58.8%、76.3%和73.8%,与正常卵巢组织和良性卵巢肿瘤组织中各自相应的基因蛋白阳性率比较差异均具有统计学意义(P<0.05)。在良性卵巢肿瘤与正常卵巢组织中P-gp、GST-π、Topo-Ⅱ、LRP阳性表达率比较,差异也具有统计学意义(P<0.05)。4种耐药相关蛋白存在共同表达现象,且具有不同的化疗反应性。P-gp、GST-π、LRP在卵巢癌中的表达与临床分期有关(P<0.05),Topo-Ⅱ则无关(P>0.05);P-gp、LRP与组织学分级无关(P>0.05),GST-π、Topo-Ⅱ则有关(P<0.05);P-gp、GST-π、Topo-Ⅱ、LRP与患者年龄、组织学类型、肿瘤大小、术后残余病灶大小均无关(P>0.05)。结论卵巢癌存在原发性耐药并涉及多个耐药基因的共同表达。联合检测对预测化疗药物敏感性和判断化疗疗效具有指导意义。

FGFR1在乳腺癌分子亚型中的表达及意义

目的探讨成纤维细胞生长因子受体1(fibroblast growth factor receptor 1,FGFR1)在乳腺癌组织及正常组织中的表达及与雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、人表皮生长因子受体2(HER2)、谷胱甘肽-S转移酶-π(GST-π)、拓扑异构酶Ⅱα(TOPOⅡα)间的关系。方法采用免疫组织化学S-P法检测88例乳腺浸润性导管癌和30例正常乳腺组织中FGFR1的表达情况。结果 FGFR1在浸润性导管癌及正常乳腺组织中的表达率分别为37.5%、10.0%,两者间差异有统计学意义(P<0.05);FGFR1在GST-π阳性及阴性乳腺浸润性癌患者中表达率分别为60.4%、10.0%,差异有统计学意义(P<0.05)。FGFR1在TOPOⅡα阳性及阴性乳腺癌患者中表达率分别为47.2%、22.9%,差异有统计学意义(P<0.05)。FGFR1在Luminal A型、Luminal B型、HER2过表达型、Basal-like型中表达率分别为25.0%、35.3%、56.3%、63.6%,FGFR1表达率在Luminal A和HER2过表达型、Luminal A和Basal-like型间差异有统计学意义(P<0.05)外,其他各组表达率间差异均无统计学意义(P>0.05)。FGFR1与ER、PR、HER2状态无相关性(P>0.05),但FGFR1与内分泌治疗耐药呈正相关(P<0.05)。结论 FGFR1在浸润性导管癌的不同分子分型中表达有差异,可能成为预测乳腺癌预后的重要指标之一。

微血管密度、细胞增殖指数与子宫肉瘤生存分析探讨

目的:通过检测原始造血细胞抗原(CD34)和DNA拓扑异构酶IIα(TopoⅡα)的表达水平,反映子宫肉瘤生长、转移、复发的临床特点,探讨两种标记物用于监测子宫肉瘤病情及判断预后的意义。方法:应用免疫组织化学(IHC)法检测子宫肉瘤中CD34、TopoⅡα的表达水平。结果:除病理类型及分期外,CD34和TopoⅡα表达与患病年龄、初潮年龄、孕产次、月经周期及经期、是否绝经无关。低微血管密度(MVD)组和低细胞增殖指数(LI)组患者经不同范围的手术治疗,生存期有差别。手术治疗+辅助治疗组的两种标记物低值组与高值组对生存期的影响无统计学意义。高值组总体生存率低于低值组,Log-Rank检验,P分别为0.0035和0.0039。Cox模型多因素回归分析示:子宫肉瘤预后与病理类型、分期、是否切除双侧卵巢、TopoⅡα、CD34表达有关,与其它临床病理特征无关。结论:CD34-MVD可能是反映子宫肉瘤侵袭转移的特异性指标。TopoⅡα有望作为子宫肉瘤细胞增殖的特异性标记物。

宫颈鳞状细胞癌ATP-TCA法体外药敏试验与耐药相关蛋白表达的关系

目的:探讨代表不同耐药机制的P糖蛋白(P-gp)、谷胱甘肽S-转移酶(GST-π)、DNA拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)、胸苷酸合成酶(TS)在原发宫颈鳞癌组织中的表达及其与临床病理参数的关系;分析三磷酸腺苷生物荧光法体外药敏试验(ATP-TCA)结果与耐药蛋白表达的关系。方法:收集32例宫颈鳞癌患者的新鲜癌组织制成单细胞悬液,采用ATP-TCA法成功检测上述细胞对11种化疗药物(共16种组合)的体外敏感性;采用EnVision二步法免疫组化检测32例宫颈鳞癌组织中P-gp、GST-π、TopoⅡ、TS蛋白的表达,并分析其与临床分期、肿瘤分化程度的关系。结果:耐药蛋白P-gp、GST-π、TopoⅡ、TS在宫颈鳞癌组织中的表达与临床分期、肿瘤分化程度无相关性;耐药蛋白P-gp表达与体外PTX+CBP耐药正相关(P=0.040);耐药蛋白TS表达与体外5-FU、5-FU+MMC、5-FU+DDP耐药正相关(P=0.015,0.012,0.006);TopoⅡ,GST-π蛋白表达与宫颈鳞癌体外耐药均无相关性。结论:体外药敏试验联合免疫组化检测,有可能用于宫颈鳞癌化疗前药敏预测。

拓扑异构酶、增殖细胞核抗原及p53在结直肠癌中的表达及其临床病理意义

目的探讨拓扑异构酶(TopoⅡ)、增殖细胞核抗原(PCNA)及p53在结直肠癌中的表达及其与临床病理因素的关系。方法用免疫组织化学法检测71例结直肠癌标本中TopoⅡ、PCNA及p53的表达情况,分析不同临床病理特征与其表达的关系。结果结直肠癌中TopoⅡ、PCNA和p53的阳性表达率分别是66.2%、84.5%和43.7%。TopoⅡ的表达与患者年龄、浸润肠腔周径及浸润肠壁深度有关(P均<0.05);PCNA的表达与淋巴结转移、肿瘤部位、远处脏器转移、Duks分期有关(P均<0.05);p53的表达与组织学分级、浸润肠壁深度有关(P均<0.05)。结论联合检测结直肠癌组织中TopoⅡ、PCNA及p53的表达对于判断结直肠癌预后和指导治疗具有临床参考价值。

RNA干扰技术抑制卵巢上皮性癌耐药细胞TopoⅡα基因表达并逆转耐药的体外研究

目的探讨RNA干扰技术抑制卵巢上皮性癌（卵巢癌）耐药细胞TopoⅡα基因的表达是否能逆转耐药。方法（1）设计并筛选针对TopoⅡα基因的、沉默效果最佳的小分子干扰RNA（siRNA），将其克隆到psilencer4．1-CMV-neo载体上；将psilencer4．1-CMV—neo—TopoⅡα重组质粒转染至受试细胞，建立稳定转染重组质粒的细胞TopoⅡα siRNA（＋）SKOV3／DDP。（2）采用RT—PCR技术和蛋白印迹法测定稳定转染细胞中TopoⅡαmRNA和蛋白的表达；分别采用四甲基偶氮唑蓝比色法、流式细胞仪和高效液相色谱法测定TopoⅡαRNA干扰前后细胞的耐药指数、细胞周期和细胞内顺铂含量的变化。结果（1）转染psilencer4．1-CMV-neo—TopoⅡα质粒后能抑制SKOV3／DDP细胞中TopoⅡα基因的表达，TopoⅡαsiRNA（＋）SKOV3／DDP和SKOV3／DDP细胞中TopoⅡαmRNA的表达水平分别为0和0．92±0．08；两种细胞中TopoⅡα蛋白的表达水平分别为0．51±0．04和1．95±0．09，两者比较，差异有统计学意义（P〈0．01）。（2）SKOV3／DDP细胞转染TopoⅡαsiRNA后耐药指数下降，TopoⅡαsiRNA（＋）SKOV3／DDP和SKOV3／DDP细胞的耐药指数分别为3．46和5．05，两者比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。（3）TopoⅡαsiRNA（＋）SKOV3／DDP细胞的G0／G1期、G2／M期细胞比例较SKOV3／DDP细胞增加，S期细胞比例减少（P均〈0．05）。（4）TopoⅡαsiRNA（＋）SKOV3／DDP细胞经20μg／ml顺铂处理24h后，其顺铂含量（157．20ng）较SKOV3／DDP细胞（63．99ng）升高，两者比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论阻断卵巢癌耐顺铂细胞中TopoⅡα基因的表达能逆转其对顺铂的耐受性。

癌相关成纤维细胞对乳腺癌细胞株MCF-7耐药基因MDR1、GST-π、TOPO-Ⅱ表达的影响

目的 观察乳腺癌相关成纤维细胞（CAFs）对乳腺癌细胞耐药基因表达的影响,探讨微环境对乳腺癌化疗耐药的作用.方法 取10例乳腺癌患者新鲜手术后标本进行原代间质细胞的分离、培养及纯化,并行免疫组化鉴定CAFs.收集CAFs培养上清（CM）与乳腺癌细胞株MCF-7间接共培养,应用免疫组化法检测与CAFs共培养的乳腺癌细胞株MCF-7及单独培养的MCF-7中耐药蛋白P-糖蛋白（P-gp）、谷胱甘肽-S转移酶（GST-π）和DNA拓扑异构酶Ⅱ（TOPO-Ⅱ）表达情况.结果 经免疫组化α-SMA鉴定为纯化的CAFs;与CAFs共培养的MCF-7中耐药基因P-gp、GST-π表达较单独培养的MCF-7中的表达明显增强（P＜0.05）,而TOPO-Ⅱ的表达差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 肿瘤微环境在介导乳腺癌的化疗耐药过程中起了一定的作用.