铜绿假单胞菌环丙沙星耐药株Ⅱ类拓扑异构酶基因突变的研究

用PCR方法 ,扩增 2 6株临床分离铜绿假单胞菌环丙沙星耐药株、4株环丙沙星敏感菌株和PA0 1菌株的Ⅱ类拓扑异构酶 gyrA、gyrB、parC和 parE基因的喹诺酮类药物耐药决定区 (QRDR)基因片断 ;并对铜绿假单胞菌II类拓扑异构酶基因突变与耐药性关系进行研究。结果表明 90 %以上的铜绿假单胞菌耐药株表现出Ⅱ类拓扑异构酶基因突变 (2 6株中有 2 4株 )。突变主要发生在 gyrA基因 (2 2株 )和 parC基因 (14株 )上 ,其中 gyrA基因的第 83位氨基酸密码子表现出高频突变 (2 2株中有 2 1株 ,ACC→ATC ,占 90 % ) ,parC基因第 80位氨基酸密码子也表现出较高的突变率 (14株中有 12株 ,TCG→TTG ,占 60 % ) ,4株耐药株的 gyrB和 3株耐药株的 parE基因发生单点突变 ,2株耐药株II类拓扑异构酶基因未检测到突变。用二倍稀释法 ,测定部分喹诺酮和 β 内酰胺类药物对耐药突变株的体外抗菌活性。表明铜绿假单胞菌Ⅱ类拓扑异构酶基因突变株对诺氟沙星、左氧氟沙星、哌拉西林、头孢他啶和亚胺培南表现出不同的敏感性。试验所用 2 4株突变株对诺氟沙星呈现 10 0 %的耐药 ;对左氧氟沙星 65 %的耐药 ;40 %的菌株对哌拉西林表现出耐药 ;3 0 %的菌株对头孢他啶耐药 ;75

粪肠球菌Ⅱ型拓扑异构酶基因突变与耐氟喹诺酮类药物关系的研究

目的检测粪肠球菌对氟喹诺酮类药物的敏感性，探讨Ⅱ型拓扑异构酶基因突变与耐氟喹诺酮类药物的关系。方法用二倍琼脂稀释法检测6种氟喹诺酮类药物对60株粪肠球菌临床分离株的体外抗菌活性，随机筛选出11株对环丙沙星不同程度耐药菌，PCR扩增gyrA，gyrB，parC，parE基因的喹诺酮耐药决定区（QRDR），产物测序后分析。结果6种药物的相对抗粪肠球菌活性（MIC50，MIC90）从强到弱为：妥舒沙星〉加替沙星，司帕沙星〉左氧氟沙星〉氧氟沙星，环丙沙星；以妥舒沙星抗菌活性最强，氧氟沙星和环丙沙星抗菌活性最差；序列比较发现，有9株耐药株Ⅱ型拓扑异构酶基因发生突变，突变发生在gyrA基因（6株）和parC基因（9株），其中编码gyrA的Ser83→Ile，Arg和编码parC的Ser80→Ile，Arg的密码子表现出高频突变，gyrB和pare编码的氨基酸序列没有改变；未发现gyrA突变单独存在，同时具gyrA和parC突变的MIC值是仅具parC突变菌株MIC值的4倍以上。结论氟喹诺酮类抗菌药新品种妥舒沙星、加替沙星和司帕沙星的抗粪肠球菌活性较老一代药物更强；粪肠球菌对老一代氟喹诺酮类药物存在不同程度的耐药；gyrA基因83，87位突变及parC基因80，84住突变都可引起粪肠球菌对氟喹诺酮类药物产生耐药，但以parC基因80住突变为主；低耐药株往往是parC基因单位点突变，高耐药株同时合并有gyrA基因双位点突变。

成都地区拓扑异构酶基因突变在解脲脲原体对氟喹诺酮类药物耐药中的作用

目的探讨拓扑异构酶基因gyrA、gyrB、parC和parE突变与解脲脲原体对氟喹诺酮类药物耐药的关系,提供本地区耐药解脲脲原体的流行病学资料。方法联合固体培养法和16SrRNA基因测序技术对解脲脲原体进行鉴定,采用微量肉汤稀释法进行最低抑菌浓度的测定。基因扩增采用聚合酶链反应,测序结果用DNAMAN软件和BLAST进行分析。结果2021年9月—2022年2月本院区微生物实验室共收到支原体培养标本1387例,其中解脲脲原体单独阳性感染的有635例,解脲脲原体阳性率为45.78%(635/1387)。随机选取58株解脲脲原体阳性菌株进行微量肉汤稀释法药敏试验和拓扑异构酶基因QRDR区的扩增测序,解脲脲原体对左氧氟沙星和莫西沙星的耐药率分别为79.31%(46/58)和5.17%(3/58)。ParC S83L、ParC T125A和GyrB P462S的变异率分别占79.31%(46/58)、15.52%(9/58)和5.17%(3/58)。所有菌株的gyrA和parE基因未发现突变位点。结论拓扑异构酶基因parC 248位碱基C突变为T导致的ParC S83L变异为解脲脲原体对氟喹诺酮类药物耐药的主要机制,parC和gyrB基因的双突变可导致耐药性的进一步增加。

新型非喹诺酮类细菌ⅡA型拓扑异构酶抑制剂抗菌药物研究进展

自1962年第一代喹诺酮类药物萘啶酮酸发明以来,成百上千种可分为四代的喹诺酮衍生物已经被成功合成,并且细菌ⅡA型拓扑异构酶(DNA旋转酶和拓扑异构酶IV)已经被确认为该类抗菌药物的作用靶点。先前研究表明:细菌DNA复制过程对菌体生长与存活至关重要,而这一过程需要DNA旋转酶和拓扑异构酶IV的共同作用。在过去50多年中,喹诺酮类药物的广泛使用也说明这一药物作用靶点在临床治疗上的重要性;但是由于对喹诺酮类药物不恰当的使用乃至滥用,导致细菌耐药性的逐步上升,为确保这一行之有效的抗菌药物作用靶点继续发挥其良好的治疗效果,研发作用于该靶点的非喹诺酮类抗菌药物来克服现有的喹诺酮耐药迫在眉睫。

拓扑异构酶Ⅱα和Ki-67表达与子宫肉瘤预后的相关性研究

目的通过检测DNA拓扑异构酶Ⅱα(TopoⅡα)、细胞核相关抗原-67(Ki-67)的表达水平,评价子宫肉瘤细胞增殖的生物学行为,寻找其预后相关因素。方法回顾性分析解放军总医院因子宫肉瘤行肿瘤切除手术的患者48例。按照国际妇产科联盟(FIGO)分期标准,分为Ⅰ期22例,Ⅱ期12例,Ⅲ期8例,Ⅳ期6例。按照美国妇科肿瘤组(GOG)病理组织学分类,包括子宫平滑肌肉瘤(LMS)19例,子宫内膜间质肉瘤(ESS)21例,子宫恶性中胚叶混合瘤(MMMT)8例。应用免疫组织化学(IHC)方法检测TopoⅡα、Ki-67在子宫肉瘤中的表达水平并分析其与子宫肉瘤预后的相关性。结果TopoⅡα和Ki-67的高增殖(LI)组(阳性表达细胞数>25%)患者的2年、5年生存率与低LI组(阳性表达细胞数≤25%)患者比较均无明显差别,但总体生存率高LI组均明显低于低LI组(分别为P=0.002,P=0.004)。TopoⅡα和ki-67低LI组患者的复发包块体积均大于高LI组(P=0.005,P=0.000),且复发时间均明显长于高LI组(P=0.000,P=0.000)。TopoⅡα与Ki-67表达呈明显正相关(r=0.9355,P=0.000)。COX多因素分析表明,除病理类型及分期外,TopoⅡα和Ki-67的表达与患病年龄、初潮年龄、孕产次、月经周期及经期、是否绝经均无关。结论TopoⅡα与Ki-67均可作为细胞增殖的特异性标记物,但TopoⅡα在反映细胞精确的增殖状态方面较Ki-67可能有更好的特异性,结合病理类型及分期,可能对判断子宫肉瘤的预后具有重要指导意义。

非小细胞肺癌拓扑异构酶Ⅱα的表达及其与Ki67、p53的关系

目的 研究非小细胞肺癌患者拓扑异构酶Ⅱα (TopoisomeraseⅡα ,TopoⅡα)的表达 ,并探讨其与Ki6 7蛋白、p5 3基因的关系。 方法 免疫组织化学SP法检测 94例无术前化疗史的非小细胞肺癌患者肿瘤组织TopoⅡα、Ki6 7蛋白的表达 ,并用聚合酶链反应 单链构象多态性 (PCR SSCP)分析p5 3基因 5、 6、 7、 8外显子的突变。结果TopoⅡα、Ki6 7蛋白阳性率分别为 30 % ( 2 8/ 94 )和 39% ( 37/ 94 ) ,且TopoⅡα的表达在鳞癌中明显高于腺癌 (P <0 0 5 ) ,中、低分化的肿瘤组织高于分化较好的肿瘤 (P <0 0 5、P <0 0 1) ,吸烟患者高于非吸烟患者 (P <0 0 1)。等级相关结果显示TopoⅡα的表达与Ki6 7呈正相关 (r =0 7381,P <0 0 1)且与p5 3基因也相关 (r =0 2 6 2 3,P<0 0 5 ) ,p5 3基因突变型组TopoⅡα的表达显著高于野生型组 (P <0 0 5 )。 结论 ①TopoⅡα的表达与肿瘤分化程度以及核增殖抗原Ki6 7显著相关 ,其检测可作为研究非小细胞肺癌增殖活性、分化程度的特异指标。②p5 3基因与TopoⅡα的相关性提示TopoⅡα的过表达可能受 p5

应用组织芯片探讨宫颈癌前病变及宫颈癌中DNA拓扑异构酶Ⅱα的表达及其临床意义

目的：探讨DNA拓扑异构酶Ⅱα（TopoⅡα）蛋白在宫颈癌前病变及宫颈癌中的表达及其在宫颈癌发生发展中的作用。方法选取2007-2008年在山西省肿瘤医院行宫颈病变诊治的患者，其中包括慢性宫颈炎，低级别和高级别宫颈上皮内瘤变（CIN）和宫颈浸润性鳞癌（SCC）的患者分别21、33、30、73例，制作组织芯片，应用免疫组织化学法（SP）检测宫颈组织中TopoⅡα蛋白的表达情况。结果结果TopoⅡα蛋白在慢性宫颈炎上皮组织、CINⅠ、CINⅡ～Ⅲ、SCC中的表达率分别是5％，12％，90％，97％，表达率逐渐增加，高级别CIN和浸润性鳞癌的表达显著高于低级别CIN和正常宫颈组织，差异有统计学意义；而高级别CIN与浸润性癌之间、低级别CIN与正常宫颈上皮之间的表达差异均无统计学意义。结论 TopoⅡα蛋白表达随着宫颈癌前病变的严重程度的加重而增加，因此T o poⅡα蛋白可能参与了宫颈上皮的异常增生和恶性转变。

DNA拓扑异构酶Ⅱ抑制剂研究进展

在DNA复制,转录和有丝分裂等重要的生命过程中,拓扑异构酶Ⅱ是一种重要的酶。拓扑异构酶Ⅱ抑制剂是一种重要的药物,用于包括乳腺癌,肺癌,睾丸癌,淋巴瘤和肉瘤在内的多种恶性肿瘤的治疗。本文综述了几种拓扑异构酶Ⅱ抑制剂的作用机制,毒性,药理和临床应用,这些抑制剂包括依托泊苷,替尼泊苷,多柔比星,柔红霉素,表柔比星,伊达比星和米托蒽醌。本文将着重讲述关于这些药物以及拓扑异构酶Ⅱ抑制剂的发展情况的新信息。

不同喹诺酮耐药表型解脲脲原体Ⅱ型拓扑异构酶变异的研究

目的分析不同喹诺酮耐药表型解脲脲原体(Uu)的Ⅱ型拓扑异构酶的突变范围及其同源性,并进行突变与耐药关系的分析。方法选取不同喹诺酮耐药表型Uu共100株(中敏感Uu50株,耐药Uu50株),扩增Uu的Gyr A、Gyr B、Par C、Par E基因,对聚合酶链反应(PCR)产物进行突变分析,研究不同喹诺酮耐药表型Uu的DNA螺旋酶、拓扑异构酶Ⅳ的突变范围及其同源性,并分析突变与耐药关系。结果 1 Uu与大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌等同源性较高,Gyr A、Par C同源性分别为82%、73%、66%与63%、65%、76%。2 100株喹诺酮耐药Uu中,发生Gyr A基因突变、Gyr B基因突变、Par C基因突变以及Par E基因突变率的分别为67%(67株)、0、63%(63株)以及8%(8株),同时发生Gyr A与Par C基因突变的Uu株为38株。3突变株中,Gyr A发生Asp-112(66例)与His-103变异(1例),Par C发生Ser-83(61例)、Ser-84(1例)以及Ala-125(1例)变异,Par E发生Val-417变异(8例)。结论 Uu的Ⅱ型拓扑异构酶中,与耐药密切相关的为Gyr A与Par C基因,其次为Par E基因,Gyr B基因与耐药无关。因此临床上应重点针对Gyr A与Par C基因的突变进行研究,以期降低其变异率对减少Uu的喹诺酮类药物耐药具有重要的研究价值。

肺癌中MDR基因产物LRP、P-gp、GST-π、TopoⅡ的表达及临床意义

目的:探讨多药耐药(MDR)基因产物LRP、P-gp、GST-π、TopoⅡ在肺癌中的表达及临床相关性。方法:应用单克隆抗体、免疫组化技术S-P法,对70例肺癌标本进行上述4种MDR指标检测。结果:在肺癌组织中LRP、P-gp、GST-π、TopoⅡ表达的阳性率分别为75.7%、70.0%、82.9%、84.3%,其与性别、年龄、部位、临床分期无关(P>0.05);在未分化、小细胞型肺癌中LRP、P-gp、GST-π表达的阳性率明显降低(P<0.05),而TopoⅡ表达的阳性率则升高(P<0.05,低分化型肺癌除外)。结论:LRP、P-gp、GST-π、TopoⅡ在未化疗过的肺癌组织中均有不同程度的高表达,且与肺癌的某些生物学行为有关,联合检测有助于化疗药物的选择及预后的判断。

TOPOⅡα与蒽环类药物在乳腺癌术后辅助治疗中的效果分析

乳腺癌是最常见的女性肿瘤之一，合理的全身治疗，可以降低乳腺癌患者的病死率。烷化剂、蒽环类药物和紫杉醇类药物是乳腺癌常用的化疗方案。选择有效的化疗方案提高治疗的有效率和生存期，是实现乳腺癌个体化治疗的关键。拓扑异构酶Ⅱα（topoisomerase Ⅱα，Topo Ⅱα）为催化拓扑结构改变的酶系，它在DNA的合成、转录、核分裂以及在形成正确的染色体结构、染色体分离和浓缩中发挥重要的作用。蒽环类药物通过抑制Topo Ⅱα和DNA链的结合导致DNA链断裂，从而引起细胞死亡。作者自2011年1月至2013年1月回顾性分析了Topo Ⅱα在可手术切除乳腺癌患者中的表达情况，旨在探讨乳腺癌组织中Topo Ⅱα的表达与蒽环类药物的关系。报道如下。

胃腺癌组织拓扑异构酶Ⅱα、周期蛋白G1表达与临床病理特征、幽门螺杆菌感染的关系研究

目的分析胃腺癌组织拓扑异构酶Ⅱα(TopoⅡα)、细胞周期蛋白G1(cyclin G1)表达及其与临床病理特征、幽门螺杆菌(Hp)感染的关系。方法回顾性收集2018年5月至2022年5月在六安市中医院就诊的217例胃腺癌患者的癌组织及癌旁正常组织标本,采用免疫组织化学染色(S-P)法检测TopoⅡα、cyclin G1表达。比较胃腺癌组织及癌旁正常组织TopoⅡα、cyclin G1表达的差异;采用单因素及多因素Logistic回归分析胃腺癌组织TopoⅡα、cyclin G1表达与临床病理特征的关系;比较不同TopoⅡα、cyclin G1表达胃腺癌患者Hp感染情况,分析TopoⅡα、cyclin G1表达与Hp感染的相关性。结果胃腺癌组织TopoⅡα、cyclin G1阳性表达率均高于癌旁组织[60.83%(132/217)比29.95%(65/217)、62.67%(136/217)比0],差异有统计学意义(χ^(2)=41.73、198.07,P<0.01)。不同组织学分化程度、T分期、N分期、TNM分期的胃腺癌组织TopoⅡα、cyclin G1阳性表达率比较差异均有统计学意义(P<0.05),且伴远处转移的胃腺癌组织TopoⅡα阳性表达率高于无远处转移的胃腺癌组织(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,组织学分化程度、T分期、N分期是TopoⅡα阳性表达的危险因素(P<0.05);组织学分化程度、T分期、N分期、TNM分期是cyclin G1阳性表达的危险因素(P<0.05)。217例胃腺癌患者中,Hp阳性率为81.57%(177/217);TopoⅡα、cyclin G1阳性表达的胃腺癌患者Hp阳性率高于TopoⅡα、cyclin G1阴性表达患者[87.12%(115/132)比72.94%(62/85)、87.50%(119/136)比71.60%(58/81)],差异有统计学意义(χ^(2)=6.92、8.53,P<0.05)。Kendall tau-b相关系数分析结果显示,TopoⅡα、cyclin G1表达与Hp感染呈正相关(r=0.179、0.198,P<0.05)。结论TopoⅡα、cyclin G1蛋白在胃腺癌组织中有较高的阳性率,并与胃腺癌组织学分化程度、T分期、N分期等病理特征和Hp感染相关。

拓扑异构酶基因突变在脲原体对喹诺酮耐药中的作用

脲原体是引起泌尿生殖系感染性疾病的重要病原之一，包括2个生物群，14个血清型，其中血清型1、3、6、14属于生物Ⅰ群，其余10个血清型属于生物Ⅱ群。后来，Femdndez Molina等对脲原体进行基因分析，又把其分为2个基因群Ureaplasma parvum（微小脲原体，Up）和Ureaplasma urealyticum（解脲脲原体，Uu），分别与生物Ⅰ和Ⅱ群完全吻合。不同的生物群和亚群与脲原体的致病性密切相关，而且随着抗生素的广泛应用，其耐药问题也日趋严重，尤其是对某些喹诺酮耐药率已超过60％。Bebear等报道，拓扑异构酶Ⅱ（GyrA/GyrB）和拓扑异构酶Ⅳ（ParC／ParE）基因变是脲原体对喹诺酮耐药的原因之一，

慢性化脓性中耳炎中的肺炎克雷伯菌对氟喹诺酮类药物的耐药机制

目的研究慢性化脓性中耳炎病例中分离肺炎克雷伯菌Ⅱ型拓扑异构酶基因突变与耐氟喹诺酮类药物的关系。方法用二倍琼脂稀释法检测6种氟喹诺酮类药物对40株肺炎克雷伯菌临床分离株的最低抑菌浓度,PCR扩增gyrA、parC基因的喹诺酮耐药决定区(QRDR),产物测序后分析。结果有26株Ⅱ型拓扑异构酶基因发生突变,突变发生在gyrA基因(26株)和parC基因(13株),其中编码GyrA的Ser83→Tyr、Phe、Ile和编码ParC的Ser80→Ile密码子表现出高频突变,gyrA突变单独存在,同时具gyrA和parC突变的M IC值是仅具gyrA突变菌株M IC值的4倍以上。结论 gyrA基因83、87位突变及parC基因80、84位突变都可引起肺炎克雷伯菌对氟喹诺酮类药物产生耐药,但以gyrA基因83位突变为主;低耐株往往是gyrA基因单位点突变,高耐株同时合并有parC基因双位点突变。

胰腺导管腺癌中HER2/neu和拓扑异构酶Ⅱα基因的变化及相关性分析

目的探讨胰腺导管腺癌(简称胰腺癌)中 HER2/neu 和拓扑异构酶Ⅱα(TOP2A)基因的变化及其意义。方法应用免疫组织化学(EnVision 法)和多色荧光原位杂交技术,检测26例中国人胰腺导管腺癌及癌旁胰腺组织、10例慢性胰腺炎组织、10例正常胰腺组织中 TOP2A 和 HER2/neu蛋白表达及基因状态的变化,分析蛋白表达与基因扩增间的关系,以及 TOP2A 和 HER2/neu 基因改变的相关性,并探讨二者与胰腺癌临床病理改变之间的关系。结果 26例胰腺癌组织中免疫组织化学显示 TOP2A 阳性表达指数从0.5%至70%,12例(46.2%)胰腺癌组织 HER2/neu 蛋白阳性表达。荧光原位杂交结果显示 TOP2A 和 HER2/neu 基因扩增的胰腺癌各10例(38.5%),其中9例为TOP2A 和 HER2/neu 共同扩增,癌旁胰腺组织、慢性胰腺炎及正常胰腺组织均未检测到 TOP2A和HER2/neu 蛋白表达及基因扩增。TOP2A 和 HER2/neu 蛋白表达水平与基因扩增无显著相关性(P>0.05)。TOP2A 和 HER2/neu 基因扩增具有显著的相关性(P<0.01)。结论胰腺癌中 TOP2A 和HER2/neu 的蛋白表达与基因扩增无相关性;TOP2A 和 HER2/neu 基因的共同扩增可能在胰腺癌发生发展中起重要作用,联合检测 TOP2A 和 HER2/neu 基因状态对于胰腺癌的靶向治疗可能具有一定的指导意义。

大肠癌组织中P-gp和GST-π及TopoⅡ的表达及其临床意义的研究

目的:探讨多药耐药P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)、谷胱甘肽转移酶(glutathione-S-trannsferaseπ,GST-π)和拓扑异构酶(DNA topoisomeraseⅡ,TopoⅡ)在大肠癌组织中的表达及临床意义。方法:应用免疫组化SP法联合检测P-gp、GST-π和TopoⅡ在84例大肠癌组织和20例正常大肠黏膜组织中的表达,并结合临床病理参数进行分析。结果:P-gp、GST-π在大肠癌组织中的表达率分别为71.4%(60/84)和75.0%(63/84),高于正常大肠黏膜组织(8/20和11/20),χ2值分别为6.91和3.14,P均<0.05;P-gp表达强度与临床分期相关,高分期P-gp表达(86.7%、39/45)较低分期(65.5%、19/29)高,χ2=5.28,P<0.05;TopoⅡ在大肠癌组织中的阳性率为45.3%(38/84),低于正常大肠黏膜组织65%(13/20),χ2=0.382,P>0.05;高、中和低分化腺癌P-gp(87.5%、80.7%和54.5%)和GST-π(87.5%、82.5%和54.5%)的表达率由高到低;TopoⅡ的表达率由低到高(37.5%、45.6%和63.6%)。淋巴结转移组P-gp和GST-π的表达显著高于无淋巴结转移组,P<0.05。结论:P-gp、GST-π和TopoⅡ均在大肠癌原发性多药耐药中起重要作用。联合检测P-gp、GST-π和TopoⅡ对于大肠癌化疗方案选择具有一定的指导意义。