炎性因子对星形胶质细胞的活化及sPLA2-ⅡA表达的机制及影响

目的探索在炎性因子作用下,星形胶质细胞的活性变化及其产生的分泌型磷脂酶A2-ⅡA(secretory phospholipase A2 of groupⅡA,sPLA2-ⅡA)表达量的变化,进一步探讨其可能存在的机制。方法在体外原代培养大鼠大脑皮质星形胶质细胞的基础上,取第4代培养的细胞用于实验。随机分为对照组和实验组,实验组分别为:10 ng/ml白介素-1β(interleukin-1beta,IL-1β)组,100 ng/ml IL-1β组,10 ng/ml肿瘤坏死因子-α(tumornecrosisfactor,TNF-α)组,100 ng/mlTNF-α组,10 ng/ml IL-1β+10 ng/mlTNF-α组,100 ng/mlIL-1β+100 ng/mlTNF-α组。24 h后用细胞增殖-毒性检测试剂盒检测细胞活力。选取10 ng/mlIL-1β+10 ng/mlTNF-α组继续进行实验。通过实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitativereal-timepolymerasechainreaction,qRT-PCR)和酶联免疫吸附测定,检测sPLA2-ⅡA的表达量变化,并通过qRT-PCR检测核因子κB(nuclearfactor-kappaB,NF-κB)、NF-κB抑制蛋白激酶α(inhibitor of NF-κB kinaseα,IKKα)、NF-κB抑制蛋白激酶β(inhibitor of NF-κB kinaseβ,IKKβ)的mRNA变化。结果通过分离、纯化获得了形态典型的大鼠大脑皮质星形胶质细胞,细胞形态不规则,突起较多较长,呈放射状。胶质纤维酸性蛋白免疫染色显示纯度达95%以上。实验组细胞的活性均高于对照组。其中,100 ng/mlIL-1β组、100 ng/mlTNF-α组、10 ng/mlIL-1β+10 ng/mlTNF-α组和100 ng/ml IL-1β+100 ng/mlTNF-α组的细胞活性明显高于对照组(t=0.07、0.12、0.53、0.39,P<0.05)。与对照组相比,10 ng/ml IL-1β+10 ng/ml TNF-α组sPLA2-ⅡA的mRNA和蛋白水平表达量显著升高(t=9.615、11.635,P<0.05),NF-κB、IKKα、IKKβ的mRNA均增高(t=4.015、4.719、6.509,P<0.05)。结论炎性因子IL-1β与TNF-α联合应用可刺激星形胶质细胞活化,并能够不同程度地刺激sPLA2-ⅡA的表达,该过程可能与NF-κB通路有关。

ⅡAsPLA2、TFF3在胃癌及癌前病变中的表达及意义

目的探讨ⅡA分泌型磷脂酶A2(secretory phospholipase A2 groupⅡA,ⅡAsPLA2)、三叶因子3(trefoil factor 3,TFF3)在胃癌及癌前病变中的表达及其意义。方法采用免疫组化法检测二者在90例胃癌、80例胃黏膜异型增生及30例正常胃黏膜组织中的表达。结果ⅡA sPLA2、TFF3在轻度、中度+重度异型增生胃黏膜、早期胃癌、进展期胃癌各组中的表达均高于正常胃黏膜组,它们之间存在统计学意义(P<0.05)。结论ⅡA sPLA2表达降低可能与胃癌的侵袭性以及转移间存在着某种相关性,其低表达是胃癌预后评估的一个潜在指标。TFF3可能是胃黏膜恶性变过程中的早期分子事件,在胃黏膜恶性变及其以后的恶性演进过程中起作用,对胃癌早期诊断、治疗以及预测胃癌发生癌周组织转移可能具有重要的提示作用,二者在胃癌的发生、发展及演变过程中起着协同的作用,并对胃癌的预后存在一定的指导作用。

联合检测冠心病患者ⅡA分泌型磷脂酶A2和脂蛋白相关磷脂酶A2的临床意义

目的 探讨冠心病患者联合检测血清ⅡA分泌型磷脂酶A2 （secretory groupⅡA phospholipase A2,ⅡA-sPLA2）及脂蛋白相关磷脂酶A2 （LP-PLA2）对于其诊疗的意义.方法 对健康对照组50例、急性心肌梗死（AMI）组13例、稳定型心绞痛（UAP）组17例和不稳定型心绞痛（SAP）组70例的生化指标（主要ⅡA-sPLA2和LP-PLA2水平）进行测定,统计分析各组之间的差异是否有统计学意义.结果 随着冠心病患者病变程度加剧,HDL水平有降低的趋势,即AMI组比SAP和UAP组患者的HDL水平均高,三组相比差异均有统计学意义（t=3.013-3.987,均P＞0.05）.ⅡA-sPLA2和LP-PLA2在冠心病各亚型患者中的水平明显比对照组高,且AMI组比SAP和UAP组,SAP比UAP患者的水平均高,差异有统计学意义（t=3.507-9.967,均P＜0.05）.ⅡA-sPLA2和LP-PLA2指标之间呈正相关关系（r=0.657,P＜0.05）,HDL分别和ⅡA-sPLA2与LP-PLA2之间呈显著的负相关关系（r=-0.351,-0.294,均P＜0.05）.结论 ⅡA-sPLA2与LP-PLA2含量将可能是治疗冠状动脉粥样硬化和预防心血管疾病的新指标.

人分泌型磷脂酶A2-ⅡA的功能性动力学特征研究

目的 人分泌型磷脂酶A-ⅡA (secretory phospholipase Agroup ⅡA,sPLA-ⅡA)在调节细胞脂质代谢和信号传导中具有重要作用,参与了多种急、慢性炎症反应。研究其动力学和变构与功能的关系具有重要意义。方法 利用弹性网络模型(elastic network model, ENM)、微扰响应扫描(perturbation-response scanning, PRS)和蛋白质结构网络(protein structure network,PSN)方法对来自人sPLA-ⅡA的31个分子的结构动力学和变构效应进行分析,并探索其动力学共性和特异性与功能的关系。结果 结果表明,对酶的催化和结构稳定起关键作用的催化残基和参与二硫键形成的半胱氨酸残基具有低运动性,这是对酶共有功能的要求;而涉及与钙离子或膜结合的5个结构区域具有高运动性,它们体现了酶成员的特异性。另外,高运动性区域在PRS分析中显示出对外界微扰响应的高敏感性,表明其在变构调节中起重要作用,而低敏感性残基则在维持结构稳定方面发挥了重要作用。残基运动相关性分析发现,人sPLA分子催化位点周围的强相关运动有利于酶催化功能的发挥。结论 本研究有助于深入理解人sPLA-ⅡA成员分子的动力学及功能性变构机制,可为药物设计和准确设计具有精细调节活性的蛋白质提供指导。

人分泌型磷脂酶A2(hsPLA2-IIA)基因的克隆、表达及活性鉴定

目的为了构建人分泌型磷脂酶A2(secretaryphospholipaseA2,sPLA2-IIA)的有效表达系统,从胎脾中提取总RNA。方法采用RT-PCR方法扩增出编码sPLA2-IIA的基因定向地克隆于硫氧环蛋白基因融合表达载体pET32a的TrxA基因3′末端,构建符合读码框的融合表达载体pET32a-sPLA2-IIA。37℃下经IPTG诱导,hsPLA2-IIA融合蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中获得高效表达,表达产物以包涵体的形式存在。包涵体经8mol/L尿素溶解、复性后检测结果显示具有较高的催化活性并呈现剂量依赖关系。结论以大肠杆菌为宿主,成功表达了hsPLA2-IIA蛋白,为进一步进行hsPLA2-IIA的大量生产和功能研究奠定了基础。

食管鳞癌组织中磷脂酶A_2 mRNA检测与分析

目的探讨分泌型磷脂酶A2-Ⅱa(secretory phospholipase A2-Ⅱa,sPLA2-Ⅱa)及胞浆型磷脂酶A2(cytosolic phospholipase A2,cPLA2)mRNA表达与食管癌发生、发展及浸润、转移的关系。方法应用原位杂交法检测45例食管鳞癌组织、22例癌旁不典型增生组织及45例正常食管黏膜组织中sPLA2-Ⅱa及cPLA2 mRNA表达。结果食管鳞癌组织中sPLA2-Ⅱa mRNA表达与癌的浸润深度、淋巴结转移及TNM分期密切相关(P<0.05);在食管鳞癌癌变过程中sPLA2-Ⅱa mRNA表达在正常黏膜组织、癌旁不典型增生组织及癌组织中的表达率依次增高,组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。cPLA2 mRNA表达与癌的浸润深度、淋巴结转移及TNM分期均密切相关(P<0.05);cPLA2 mRNA在正常食管黏膜组织、癌旁不典型增生组织及癌组织中的表达率依次增高,组间比较差异有统计学意义(P<0.05),sPLA2-Ⅱa及cPLA2的表达呈正相关(rp=0.429,P=0.003)。结论 sPLA2-Ⅱa及cPLA2 mRNA在食管鳞癌组织中表达显著升高,并与食管鳞癌生物学行为关系密切,提示sPLA2-Ⅱa及cPLA2低表达与食管鳞癌的发生、发展有关,sPLA2-Ⅱa及cPLA2可作为食管鳞癌早期诊断和判断预后的辅助指标。

胰腺癌术后生存率的影响因素

目的:探讨影响胰腺癌术后生存率的影响因素。方法:回顾性分析2010年1月至2012年12月本院178例行胰十二指肠切除术治疗的胰腺癌患者(研究组)以及81例同期健康体检者(对照组)的临床资料,分析术后生存率的影响因素。单因素分析采用Logistic二元回归模型,筛选有统计学意义的指标纳入COX风险回归模型进行多因素分析。结果:Kaplan-Meier结果显示,178例患者术后1年、2年、3年总体生存率分别为56.2%、18.0%、1.7%。单因素分析结果表明,性别、年龄、肿瘤位置与术后生存率无相关性(P>0.05);而肿瘤大小、肿瘤分化程度、临床分期、淋巴结转移、肝转移、血清sPLA2-ⅡA、CD44v6、整合素β1和CA19-9水平与术后生存率有相关性(P<0.05)。COX多因素回归分析显示,临床分期、淋巴结转移、肝转移、血清sPLA2-ⅡA、CD44v6、整合素β1和CA19-9水平对患者术后生存率的影响差异有统计学意义(P<0.05),是影响术后生存率的独立危险因素。患者术前、术后1周血清sPLA2-ⅡA、CD44v6、整合素β1和CA19-9表达水平显著高于对照组(P<0.05),而术后1个月的表达水平与对照组差异均无统计学意义(P>0.05)。患者术后血清sPLA2-ⅡA、CD44v6、整合素β1和CA19-9表达水平均逐渐下降,术后1个月的表达水平均显著低于术前(P<0.05)。患者术后1个月sPLA2-ⅡA、CD44v6、CA19-9表达水平显著低于术后1周(P<0.05),整合素β1表达水平和术后1周差异无统计学意义(P>0.05)。sPLA2-ⅡA、CD44v6、整合素β1和CA19-9低表达患者的术后生存率均显著高于高表达的患者(P<0.05)。结论:在进行胰腺癌治疗时应特别注意临床分期、淋巴结转移、肝转移、血清sPLA2-ⅡA、CD44v6、整合素β1和CA19-9水平等影响预后的独立危险因素,以提高生存率。