3种3D打印模型辅助治疗RobinsonⅡB2型锁骨骨折

背景:随着3D打印技术在医学中的应用及发展,使得骨科内固定手术迈向精准化、个体化,通过3D打印技术获得的等比例骨折模型进行术前模拟、规划,实现了由传统的2D图像向更加形象、精细的立体实物的跨越,让术者提前了解骨折类型、预演复位顺序,进而实现骨折手术的个体化实施,优化了手术过程,带来更佳的术后恢复效果和更少的手术并发症。目的:比较3种3D打印模型结合计算机虚拟复位技术辅助切开复位接骨板内固定和传统切开复位接骨板内固定治疗RobinsonⅡB2型锁骨骨折的临床疗效。方法:将80例RobinsonⅡB2型锁骨骨折患者随机分为试验组(40例)和对照组(40例),试验组利用3种3D打印模型(患侧锁骨骨折模型、计算机模拟锁骨骨折复位后模型、健侧锁骨镜像模型)结合计算机虚拟复位技术在术前进行体外手术预演,最后利用健侧锁骨镜像模型进行3D打印来提前弯折和选择接骨板进行内固定,对照组直接进行切开复位接骨板内固定。比较两组患者入院至手术时间、术中出血量、手术时间、透视次数、对接骨板的折弯次数、骨折愈合时间、并发症发生情况及两组患者治疗前后目测类比评分、Constant肩关节功能评分。结果与结论:试验组患者入院至手术时间长于对照组(P<0.05);试验组患者手术时间、术中透视次数及对接骨板的折弯次数均小于对照组(P<0.05);试验组患者骨折愈合更快,并发症更少(P<0.05);两组患者术中出血量无统计学差异(P>0.05);两组患者Constant评分均有随时间延长而上升的趋势(F=613.50,P<0.001),但组间比较差异无显著性意义(F=0.08,P=0.78),测量次数与分组无交互效应(F=0.27,P=0.66)。两组患者目测类比评分随时间延长而下降(F=1149.55,P<0.001),但组间比较差异无显著性意义(F=0.02,P=0.88),测量次数与分组无交互效应(F=1.02,P=0.36)。结果表明使用3D打印模型结合计算机虚拟复位技术进行术前预演,可以缩短手术时间、减少术中透视及对接骨板折弯的次数,同时具有骨折愈合更快、并发症更少的优势,并能达到与传统切开复位接骨板内固定相似的功能恢复。

血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受体拮抗剂在AIS中的应用进展

急性缺血性脑卒中(AIS)是脑卒中最常见的类型,具有高发病率、高致残率、高病死率、高复发率等特征。抗血小板治疗一直是AIS急性期和二级预防的重要手段。传统的抗血小板药物,如阿司匹林、氯吡格雷,治疗AIS具有较好的临床效果,但由于可增加出血风险,限制了其临床应用。血小板膜糖蛋白(GP)Ⅱb/Ⅲa受体拮抗剂是一类新型的抗血小板药物,可通过阻断血小板聚集的最终共同通路,发挥强效抗血栓作用。目前,阿昔单抗、替罗非班和依替巴肽三种GPⅡb/Ⅲa受体拮抗剂已被批准用于临床。GPⅡb/Ⅲa受体拮抗剂单独治疗,或联合静脉溶栓治疗,或联合血管内治疗,在预防AIS进展、抑制支架血栓形成、改善功能预后和降低病死率等方面均展现出了较好的临床效果。但GPⅡb/Ⅲa受体拮抗剂可能会导致血小板减少症和出血等并发症,治疗期间需密切监测血常规和凝血功能,以提高其用药安全性。

IgG受体FcγRⅡB调节实验性自身免疫性脑脊髓炎致神经元损伤及Th17/Treg免疫平衡的作用研究

目的:探究IgG受体FcγRⅡB对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型小鼠神经元损伤与Th17/Treg失衡的作用。方法:C57BL/6小鼠随机分组为对照组、EAE组、FcγRⅡB组、EAE+FcγRⅡB组,每组15只,皮下注射MOG35-55肽诱导EAE模型,并给予FcγRⅡB慢病毒液处理;造模后每日称量小鼠体质量,进行神经功能评分,持续30 d;30 d后处死小鼠,HE染色观察脑组织病理形态学变化,LFB染色评估脊髓髓鞘结构变化,免疫荧光染色检测脊髓大脑皮质神经元核抗原(NeuN)和Caspase-3表达,TUNEL染色检测神经元细胞凋亡,ELISA检测血清IL-6、IL-17、IL-10及TGF-β水平,流式细胞术分析脾脏Th17、Treg细胞比例分布,Western blot测定脊髓组织维甲酸相关孤儿受体γt(RORγt)与Forkhead家族转录因子3(Foxp3)蛋白表达。结果:与对照组比较,EAE组小鼠体质量下降,神经功能评分升高,脑组织内炎症细胞浸润明显,脊髓中出现脱髓鞘迹象,NeuN荧光表达强度减弱而Caspase-3荧光表达强度增强,TUNEL阳性着色细胞多,细胞凋亡数增加,血清中IL-6和IL-17水平升高,IL-10和TGF-β水平降低,脾脏内Th17细胞比例升高,Treg比例降低,脊髓组织内RORγt蛋白表达上调,Foxp3蛋白表达下调(P<0.05);与EAE组比较,EAE+FcγRⅡB组小鼠体质量增加,神经功能评分降低,脑组织内炎症细胞浸润减轻,脊髓脱髓鞘现象得到改善,NeuN荧光表达强度增强,Caspase-3荧光表达强度减弱,TUNEL阳性着色细胞较少,细胞凋亡数减少,血清中IL-6和IL-17水平降低,而IL-10和TGF-β水平升高,同时脾脏内Th17细胞比例降低,Treg比例升高,脊髓组织内RORγt蛋白表达下调而Foxp3蛋白表达上调(P<0.05)。结论:FcγRⅡB对EAE小鼠具有神经保护作用,可减轻其脑组织炎症细胞浸润及脱髓鞘现象,作用机制可能与调节细胞因子水平及Th17/Treg细胞免疫平衡有关。

锁定钢板结合带袢钢板治疗NeerⅡb型锁骨远端骨折的临床效果

目的:分析锁定钢板结合带袢钢板治疗NeerⅡb型锁骨远端骨折的临床效果。方法:选取2018~2021年南平市建阳第一医院治疗的60例NeerⅡb型锁骨远端骨折患者为研究对象,并依据患者的治疗方式将其分入研究组30例和对照组30例,对照组采用锁定钢板治疗,研究组采用锁定钢板结合带袢钢板治疗。比较两组切口长度、骨折愈合时间等手术指标、肩关节功能、活动度等功能评分、总体恢复优良率、生活质量改善情况。结果:两组切口长度、住院时间相比差异无统计学意义(P>0.05);研究组手术时间长于对照组,而骨折愈合时间显著短于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);研究组术中出血量明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。研究组肩关节功能、活动度等功能评分均显著高于对照组,生活质量改善情况均显著优于对照组,总体恢复优良率明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:锁定钢板结合带袢钢板治疗NeerⅡb型锁骨远端骨折具有良好的临床效果,虽然会造成术中出血量增多,但并不会引起住院时间延长,且能够显著提升患者的肩关节功能,最终提高患者的生活质量。

波尔山羊ACVRⅡB基因5′调控区多态性及其与初生体重体尺的关联分析

旨在探讨波尔山羊激活素受体ⅡB(activin A receptor typeⅡB,ACVRⅡB)基因5′调控区多态性及其对初生体重体尺的影响。从103只波尔山羊耳组织中提取基因组DNA,扩增ACVRⅡB基因5′调控区序列,测序鉴定SNPs位点,分析遗传多态性,并与波尔山羊初生体重、体尺进行关联分析。结果显示,鉴定到g.-1776C>G、g.-1725G>A、g.-1697C>T、g.-1604G>A、g.-1569G>C 5个SNPs位点,其中g.-1725G>A位点AA型在群体中频率为0.049,AG型为0.359,GG型为0.592,PIC为0.29,处于中度多态;g.-1569G>C位点CG型在群体中频率为0.167,GG型为0.833,PIC为0.14,处于低度多态。连锁分析发现g.-1725 G>A与g.-1697C>T、g.-1569G>C完全连锁(相关性为100%)。关联分析发现,g.-1725G>A位点AG型初生重、初生体长均显著高于GG型(P<0.05);g.-1569G>C位点CG型初生体高显著高于GG型。综上,g.-1725G>A位点可作为波尔山羊早期生长选育的候选分子标记。

内镜下金属止血夹联合埃索美拉唑治疗Forrest Ⅱb级急性非静脉曲张性消化道出血的效果及经济效益分析

目的 评估内镜下金属止血夹联合埃索美拉唑治疗ForrestⅡb级急性非静脉曲张性上消化道出血(NVOGIB)的疗效,并分析该联合疗法的经济效益。方法 回顾性分析48例经内镜下金属止血夹联合埃索美拉唑治疗的ForrestⅡb级NVOGIB患者临床资料(联合组),并将经性别、年龄等基线资料1∶1匹配的48例埃索美拉唑治疗的ForrestⅡb级NVOGIB患者作为对照组。记录两组临床疗效、病情转归情况(输血率、住院时间、7 d再出血率)及不良反应发生情况,比较两组治疗1个月后黏膜愈合情况(再生黏膜成熟度及组织学再生黏膜成熟度),并对两种治疗方案行成本-效果分析。结果 联合组临床疗效显著高于对照组(P <0.05),住院时间则显著低于对照组(P <0.05)。两组输血率、7 d再出血率及不良反应发生情况比较,差异无统计学意义(P> 0.05)。治疗1个月后,联合组再生黏膜成熟度、组织学再生黏膜成熟度均优于对照组(P <0.05)。联合组成本高于对照组(P <0.05),但联合组成本-效果比为91.45,低于对照组的97.07;与联合组相比,对照组每增加1个单位治疗总有效率,需要增加费用52.15元。结论 内镜下金属止血夹联合埃索美拉唑治疗ForrestⅡb级NVOGIB效果显著,安全可靠,且更经济。

血小板糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受体拮抗剂在直接经皮冠状动脉介入治疗中的应用

斑块破裂导致血栓形成过程中，血小板首先在血管壁损伤部位黏附、激活，随后通过纤维蛋白原与血小板糖蛋白（GP）Ⅱb／Ⅲa受体结合，使相邻的血小板连在一起，这是血小板聚集的共同最后通路。血小板GPⅡb／Ⅲa受体拮抗剂通过阻断纤维蛋白原与GPⅡb／Ⅲa受体结合，抑制血小板聚集，被认为是目前最强的抗血小板聚集药物。

参芪蛭龙汤对膜性肾病模型小鼠肾组织中FcγRⅠ、FcγRⅡB、FcγRⅢA表达的影响

目的 探讨参芪蛭龙汤对膜性肾病(MN)模型小鼠肾组织中FcγRⅠ、FcγRⅡB、FcγRⅢA表达的影响。方法 60只SPF级ICR小鼠,6周龄,体重(23±4)g,雌雄各半,按照随机数字表法分为空白组(10只)和造模组(50只)。造模组小鼠注射阳离子化牛血清白蛋白,复制MN小鼠模型。取其中造模成功的40只小鼠按照随机数字表法分为模型组,参芪蛭龙汤高、低剂量组(24、12 g/kg)和雷公藤多苷片组(14 mg/kg),每组10只。给药4周后,处死小鼠。HE、Masson染色观察肾脏组织病理变化;免疫荧光法观察肾组织中FcγRⅠ、FcγRⅡB、FcγRⅢA蛋白荧光强度;Western blot检测肾脏组织内FcγRⅠ、FcγRⅡB、FcγRⅢA蛋白表达;RT-PCR检测肾脏组织中FcγRⅠ、FcγRⅡB、FcγRⅢA mRNA表达。结果 HE染色显示空白组小鼠上皮细胞、基底膜、肾小管及肾间质形态结构均未见明显异常。模型组小鼠肾小球体积增大,肾小球毛细血管袢扩张,血细胞溢出,肾小球系膜增厚,肾小囊腔增大,局部肾小囊腔壁上皮严重破损。与模型组比较,参芪蛭龙汤高剂量组小鼠可见肾小球体积减小,基底膜增厚减轻,肾小囊壁上皮未破损或局部破损。Masson染色显示空白组小鼠肾小球基底膜正常。模型组小鼠上皮下大量嗜复红蛋白沉积,可见基底膜基质反应,肾小管空泡样脂肪变性,肾间质淋巴大量增生。与模型组比较,各给药组小鼠病变减轻,以参芪蛭龙汤高剂量组改善更加明显。与空白组比较,模型组FcγRⅠ、FcγRⅢA蛋白荧光增强,FcγRⅡB蛋白荧光减弱(P<0.05);与模型组比较,参芪蛭龙汤高剂量组FcγRⅠ、FcγRⅢA蛋白荧光减弱(P<0.05),参芪蛭龙汤高、低剂量组FcγRⅡB蛋白荧光增强(P<0.05);与参芪蛭龙汤低剂量组比较,参芪蛭龙汤高剂量组FcγRⅠ、FcγRⅢA蛋白荧光减弱,FcγRⅡB蛋白荧光增强(P<0.05)。与空白组比较,模型组FcγRⅠ、FcγRⅢA蛋白表达升高,FcγRⅡB蛋白表达降低(P<0.05);与模型组比较,参芪蛭龙汤高剂量组FcγRⅠ、FcγRⅢA蛋白表达降低,参芪蛭龙汤高、低剂量组FcγRⅡB蛋白表达升高(P<0.05);与参芪蛭龙汤低剂量组比较,参芪蛭龙汤高剂量组FcγRⅡB蛋白表达升高,FcγRⅢA蛋白表达降低(P<0.05)。与空白组比较,模型组FcγRⅠ、FcγRⅢA mRNA表达升高,FcγRⅡB mRNA表达降低(P<0.05);与模型组比较,参芪蛭龙汤高、低剂量组FcγRⅠ、FcγRⅢAmRNA表达降低,FcγRⅡB mRNA表达升高(P<0.05);与参芪蛭龙汤低剂量组比较,参芪蛭龙汤高剂量组FcγRⅠ、FcγRⅢA mRNA表达降低,FcγRⅡB mRNA表达升高(P<0.05)。结论 参芪蛭龙汤对MN小鼠的治疗作用与改善肾组织病理改变,减少FcγRⅠ、FcγRⅢA蛋白的表达,增加FcγRⅡB蛋白表达有关,其中高浓度的参芪蛭龙汤效果更好。

喙锁韧带重建联合解剖锁定钢板与锁骨钩钢板治疗锁骨远端NeerⅡb型骨折的疗效比较

目的:观察比较锁骨远端NeerⅡb型骨折患者采用切开复位喙锁韧带重建联合解剖锁定钢板内固定术与锁骨钩钢板内固定术治疗的临床疗效。方法:纳入江西省赣州市南康区第二人民医院骨伤科收治的锁骨远端NeerⅡb型骨折患者98例,根据治疗方案的差异将其分为对照组(49例)与观察组(49例)。对照组采用切开复位锁骨钩钢板内固定术治疗,观察组采用切开复位喙锁韧带重建联合解剖锁定钢板内固定术治疗。比较两组的临床疗效及术后并发症的发生率,并评估其手术前后的Constant-Murley肩关节功能评分和视觉模拟评分法(VAS)评分。结果:(1)观察组的临床总有效率为93.88%,显著高于对照组的79.59%(P<0.05)。(2)术前,两组的Constant-Murley肩关节功能评分及VAS评分相比差异无统计学意义(P>0.05)。术后1个月,两组的Constant-Murley肩关节功能评分均显著高于术前,且观察组高于对照组(P<0.05);两组的VAS评分均显著低于术前,且观察组低于对照组(P<0.05)。(3)术后,观察组中有2例患者出现并发症,其中1例发生肩关节周围骨折,1例发生肩痛;对照组中有9例患者出现并发症,其中6例发生肩痛,3例发生肩关节功能障碍。观察组的术后并发症发生率为4.08%,显著低于对照组的18.37%(P<0.05)。结论:针对锁骨远端NeerⅡb型骨折患者,切开复位喙锁韧带重建联合解剖锁定钢板内固定术较切开复位锁骨钩钢板内固定术疗效更佳,有利于患者肩关节功能的恢复,并能降低术后的疼痛程度和并发症发生率。

冠心病患者血小板CD62p及GpⅡb/Ⅲa的变化

目的 观察冠心病患者血小板膜P选择素(CD62p)和GpⅡb/Ⅲa(PAC 1)的变化及其临床意义。方法 采用流式细胞术(FCM)三色荧光标记技术检测40例冠心病患者及30名正常人血小板膜CD62p和PAC 1的阳性百分率。结果 冠心病组血小板CD62p[ (27. 6±14. 0)% ]与PAC 1[ (31. 8±16. 7)% ]阳性百分率显著高于对照组[ (3. 1±1. 5)%, (7. 0±1. 8)%,P均<0. 01]。结论 CD62p和PAC 1是血小板活化的敏感和特异指标,全血流式细胞术测血小板功能可用于冠心病的监测和评价抗血小板药物的疗效,监测治疗干预的效果和预测并发症。

绿色荧光蛋白(GFP)融合于人整合蛋白α_(Ⅱb)C端不影响α_(Ⅱb) β_3复合物在CHO细胞正常表达

本研究选择αⅡb作为靶蛋白观察绿色荧光蛋白(GFP)标记对αⅡbβ,复合物生物合成过程和表达的影响。 从人αⅡb表达载体p3.1-2b中经PCR扩增的αⅡb基因全长cDNA,插入表达载体pEGFP-N1中构建αⅡbGFP融合蛋 白表达载体,测序正确后利用脂质体将重组质粒与表达人整合蛋白β3亚基的真核表达质粒p3.1-3a共转染CHO 细胞,对转染后细胞用Western blot方法鉴定αⅡbGFP基因在CHO细胞中的表达并用激光共聚焦显微镜确定融合 蛋白的细胞内定位。结果表明:经限制性内切酶酶切图谱分析和DNA序列测定证实目的基因已插入重组质粒, Western blot证明转基因CHO细胞有人αⅡbGFP基因的表达,融合蛋白细胞内定位研究显示αⅡbGFP可以由内质网 转运至高尔基体。结论:成功构建了人αⅡbGFP融合蛋白真核表达载体;GFP融合于αⅡbC端不影响αⅡbβ3复合物 在CHO细胞的正常表达。

TightRope内固定治疗Neer ⅡB型锁骨远端骨折的疗效分析

目的探讨TightRope内固定治疗NeerⅡB型锁骨远端骨折的临床疗效。方法选取2018年1月—2021年12月期间采用TightRope内固定治疗NeerⅡB型锁骨远端骨折的患者18例。回顾性分析术前和术后第1、3、6、12个月疼痛评分和肩关节功能评分,观察术后并发症和骨折愈合情况。结果18例患者均得到至少12个月的随访(12.8±1.0)月,骨折均愈合无复位丢失。术前美国肩肘外科医师协会(American Shoulder and Elbow Surgeons,ASES)评分(17.5±3.9)分,末次随访时ASES评分(95.4±3.7)分;术前视觉模拟评分(visual analogue scale,VAS)(7.5±0.8)分,末次随访时VAS评分(0.4±0.6)分。末次随访时ASES评分及VAS评分均优于术前,均有显著差异(P<0.05)。结论TightRope内固定治疗NeerⅡB型锁骨远端骨折疗效满意,术后未出现并发症,肩关节功能恢复良好。

血小板糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受体拮抗剂在治疗急性冠状动脉综合征中的应用

急性冠状动脉综合征的主要发病机制是冠状动脉内粥样斑块破裂，血小板活化聚集．血小板血栓形成，因此抗血小板治疗是治疗急性冠状动脉综合征的关键。血小板糖蛋白Ⅱb／Ⅲa（GPⅡb／Ⅲa）受体拮抗剂是通过抑制血小板聚集的最终共同通路发挥抗血小板作用，其抗血小板作用更彻底。国外血小板GPⅡb／Ⅲa受体拮抗剂应用于临床已经有10余年的历史，也进行了多个大规模、随机、多中心、双盲、前瞻性临床研究（PRISM、PRISMPLUS、RESTORE），

血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受体与子痫前期

糖蛋白Ⅱb/Ⅲa(glycoproteinⅡb/Ⅲa,GPⅡb/Ⅲa)受体是血小板膜上最丰富的一种蛋白,在血小板聚集、血栓形成过程中起关键性调节作用。子痫前期是一种病因不明伴有多系统功能障碍的病理妊娠,表现为高血压、蛋白尿、高凝血、高纤溶倾向,是围产期孕产妇死亡的主要原因,又是产妇远期并发心脑血管疾病的高危因素。GPⅡb/Ⅲa受体在子痫前期发病过程中起"承前启后"的调节作用,有可能为子痫前期的病因探索、临床治疗提供新的突破。

血小板膜糖蛋白GP Ⅱb/Ⅲa及其受体拮抗剂与冠心病

血小板膜糖蛋白GPⅡb/Ⅲa是血小板膜上的一种糖蛋白受体,在凝血过程中的血小板黏附和聚集中起关键作用,血小板激活导致GPⅡb/Ⅲa构型发生变化,继而使GPⅡb/Ⅲa受体与配体纤维蛋白原的结合加强,纤维蛋白原在相邻血小板分子间形成桥梁,导致血小板聚集的加速。GPⅡb/Ⅲa受体拮抗剂正是基于这一原理应用于冠心病的治疗中,临床实验已证实其在PTCA术后、不稳定性心绞痛、急性心肌梗死具有良好的疗效,研究GPⅡb/Ⅲa及其受体拮抗剂具有重要意义。因而,本文对GPⅡb/Ⅲa及其受体拮抗剂与冠心病作一简要阐述。

GPⅡb/Ⅲa抑制剂抗血小板机理及临床应用进展

GPⅡb/Ⅲa糖蛋白复合物在血小板聚集过程中起关键作用,GPⅡb/Ⅲa抑制剂也逐渐开始应用于血栓性疾病的预防和治疗。本文着重综述GPⅡb/Ⅲa在血小板聚集中的作用及GPⅡb/Ⅲa抑制剂在抗血小板聚集的临床应用。

血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受体拮抗剂ETBT对血小板功能的影响

目的:观察血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa(GPⅡb/Ⅲa)拮抗剂——依替巴肽(Eptifibatide,ETBT)对血小板聚集、释放、收缩血块和促凝活性等的影响。方法:在正常人全血或富血小板血浆(PRP)中加入不同浓度ETBT,分别检测二磷酸腺苷(ADP)诱导的血小板最大聚集率(rPAmax)、血小板CD62p表达百分率、血块收缩率和血小板3因子(PF3)有效性,通过与对照组比较获得ETBT对血小板功能的抑制率。结果:各种浓度(0.5～5.0μM)ETBT均对rPAmax有显著抑制作用(P<0.01),且随ETBT浓度增加而增加;较高浓度(5.0～10μM)ETBT对血块收缩有显著抑制作用(P<0.01);ETBT(0～80μM)ETBT对血小板CD62p表达(P=0.425)和PF3有效性没有明显抑制作用。结论:ETBT显著抗血小板聚集作用,但对血小板CD62p表达和促凝作用的影响较小;ETBT抗血小板聚集及抑制血块收缩的作用与其浓度呈正相关。

不同治疗模式对ⅡB期宫颈癌患者预后和生活质量的影响

目的评价不同治疗方式对ⅡB期宫颈癌患者预后及生活质量的影响。方法回顾性分析2000年01月01日至2010年12月31日,在广西医科大学附属肿瘤医院妇瘤科住院治疗的269例ⅡB期宫颈癌患者的病例资料,根据不同治疗方式分成4组。组1:单纯放射治疗组43例;组2:同步放化疗组98例;组3:新辅助化疗或放化疗+手术组76例;组4:新辅助化疗或放化疗+手术+术后放疗和(或)化疗组52例,比较各组患者的5年生存率、5年无瘤生存率及生活质量,并分析影响预后的因素。结果组2的预后最好,组4的预后最差;组2的预后优于组3,但差异无统计学意义;组1的预后优于组4,差异无统计学意义;组2、组3的预后优于组1、组4,差异有统计学意义。组1及组2的生活质量较差。结论新辅助化疗或放化疗后加手术治疗尽管可改善部分ⅡB期宫颈癌的预后及生活质量,但仍需进一步开展前瞻性随机对照临床研究进一步证实。