黄芩甙对柯萨奇Ⅲ型病毒性心肌炎病毒复制的影响

目的采用观察细胞病理变化(CPE)的方法,探讨黄芩甙对柯萨奇Ⅲ型病毒复制的影响。方法通过细胞培养,用先吸附病毒再加入药物、先用药物处理后攻击病毒和直接灭活的方法,观察黄芩甙的药效学作用。结果在病毒先感染细胞后加入黄芩甙的实验中,低病毒感染量(10TCID50)时,显示出对柯萨奇Ⅲ型病毒有一定的抗病毒活性;在黄芩甙与病毒同时加入的实验中,在100TCID50、10TCID50时,均显示出对柯萨奇Ⅲ型病毒的抑制作用。结论黄芩甙对柯萨奇Ⅲ型病毒有一定的抗病毒活性。

新生儿和小婴儿Ⅲ型副流感病毒肺炎55例

目的探讨新生儿和小婴儿Ⅲ型副流感病毒（PIV3）肺炎的临床特点，提高对该病的诊治水平。方法2005年8月-2007年7月依据肺炎临床诊断标准和实验室间接免疫荧光法诊断并住院治疗的新生儿和小婴儿PIV3肺炎55例，对该组患儿的临床特点进行回顾性分析，包括患儿的性别、年龄、症状、体征、肺部X线特点、实验室检查结果、治疗情况及预后等。结果肺炎患儿55例中小婴儿占80％（44／55例），新生儿占20％（11／55例）。季节分布以春夏最多。城郊病例占74．5％（41／55例），城区病例占25，5％（14／55例）。均有咳嗽，刺激性咳嗽或痉挛性咳嗽34例（61．8％），咳嗽同时呛奶39例（70．9％）；发热26例（47．3％），多为短期轻度发热；喘息14例（25．5％）。肺部细湿哕音20例，其中伴喘鸣8例，有喘鸣音无湿啰音6例，肺部呼吸音粗伴痰鸣音21例。肺外表现主要有轻度吐奶、腹泻；胸片示右肺受累18例，左肺2例，双肺35例。病程1～2周16例，〉2～3周28例，〉3周11例，病程最长者32d。55例患儿中42例（76．4％）未使用抗生素，患儿均未接受抗病毒治疗。55例均临床痊愈出院，其中35例出院2周内随访，未见到肺部严重受损。结论春夏是新生儿和小婴儿PIV3肺炎发病高峰，病程长，临床表现为刺激性咳嗽，右肺易受累，并发症少是其主要特征，临床特点和实验室检查相结合有利于准确诊断和治疗。

甘草抗病毒有效部位体外抗副流感病毒(Ⅲ型)作用的研究

目的:研究甘草抗病毒有效部位(GC3-1-4)体外抑制副流感病毒(Ⅲ型)的作用。方法:采用煎煮法和柱层析法提取分离得到甘草抗病毒有效部位(CC3-1-4)。以病毒唑为阳性对照药,采用细胞病变抑制实验观察CC3-1-4在Hela细胞中对副流感病毒(Ⅲ型)的抑制作用。结果GC3-1-4半数申毒浓度(TQ50))为144．17μg／ml;抑制副流感病毒(Ⅲ型)的半数有效浓度(EC50)为12.82μg/ml,治疗指数(TI)为11．25;GC3-1-4对副流感病毒(Ⅲ型)的抑制作用存在量效反应关系;在感染后6h以內给药,GC3-1-4对副流感病毒(Ⅲ型)均有抑制作用。结论:GC3-1-4在Hela细胞中对副流感病毒(Ⅲ型)有抑制作用。

实验小鼠呼肠孤病毒Ⅲ型抗体的实验室检测能力验证结果评价

目的通过实验小鼠呼肠孤病毒Ⅲ型抗体检测能力验证计划,了解实验动物检测机构检验能力,提高实验动物质量检测水平。方法按照CNAS批准的能力验证方案,血清经过标定后,经过稳定性和均匀性检验合格,作为能力验证样品。采用随机编号,发样给参加单位,并附作业指导书。在规定时限提交检验报告和原始记录复印件,其结果与样品预检结果一致的判为满意结果,不一致或未能提交结果的判为不满意结果。结果共有17个省市的27个实验动物检测机构报名参加本次能力验证项目。27个检测机构均提交了满意结果,占总参加机构的100%。采用酶联免疫吸附实验(ELISA)方法的有26个检测机构,采用免疫荧光实验(IFA)方法的有1个检测机构。结论实验动物质量检测机构实验小鼠呼肠孤病毒Ⅲ型抗体检测能力较高,实施能力验证计划能够反映实验室的检测水平。

清热合剂体外抗腺病毒Ⅲ型作用

目的研究清热合剂对腺病毒Ⅲ型(adv3)的抑制作用。方法采用细胞培养技术,以双黄连为阳性对照药,观察清热合剂在非洲绿猴肾细胞(VERO)和咽喉癌上皮细胞(HEP-2)中对adv3的抑制作用。结果在VERO细胞中,清热合剂半数中毒浓度(TD50)为31.62mg·mL-1,抗adv3的半数有效浓度(IC50)为0.45mg·mL-1,治疗指数(TI)为70.27;在HEP-2细胞中,TD50为32.10mg·mL-1,抗adv3的IC50为0.52mg·mL-1,TI为61.73。清热合剂对adv3抑制作用存在明显的量效关系(P<0.01)。结论清热合剂在VERO和HEP-2细胞中对adv有明显抑制作用。

Ⅲ型副流感病毒肺炎症候学特点

自70年代以来,我国有关小儿病毒性肺炎的报道均以腺病毒和呼吸道合胞病毒肺炎为多,有关副流感病毒肺炎报道甚少。我们于1992年6月～1993年5月收治176例小儿病毒性肺炎,获得急性期和恢复期双份血清164例,采用ELISA—IgG法检出阳性病毒106例,其中副流感病毒Ⅲ型62例。本文就其临床症候学特点进行分析,并与同期检出的呼吸道合胞病毒肺炎20例进行比较。

鲤疱疹病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型研究进展

近年来,鲤疱疹病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型(Cyprinid herpesvirusⅠ、Ⅱ、Ⅲ)病毒给我国鲤科鱼的养殖造成了严重的经济损失。CyHV-Ⅰ主要危害1龄以上的鲤,对鲫、圆腹雅罗鱼、鲤与金鱼杂交种等也有危害。CyHV-Ⅱ仅感染金鱼、鲫及其普通变种如异育银鲫、金鱼和鲤的杂交体,对鱼卵、鱼苗、鱼种、亲鱼等各个时期均有危害,而幼鱼较成鱼易受到感染。鲤除了幼鱼不易受CyHV-Ⅲ影响,其他所有龄期均对其敏感。CyHV-Ⅲ不仅鲤能感染,其他鲤科鱼、锦鲤和鲫的杂交后代、锦鲤和金鱼的杂交后代均对其易感,金鱼、鲟均可作为CyHV-Ⅲ潜在的携带载体。就3种病毒的流行现状,临床症状,引发疾病的病理特征,检测方法等取得的研究进展进行综述。

呼肠孤病毒Ⅲ型(Reo3)RT-PCR检测方法的建立

目的建立呼肠孤病毒Ⅲ型(Reo3)RT-PCR检测方法,应用于实验动物及人用动物源性材料及生物制品外源Reo3的检测。方法根据已发表的呼肠孤病毒Ⅲ型(Reo3)M1基因序列,设计合成引物。提取Reo3细胞毒RNA,以其为模板,进行PCR扩增。优化反应条件,进行特异性、敏感性、重复性试验。结果建立的Reo3RT-PCR检测方法特异、敏感、稳定。以Reo3 RNA逆转录产物为模板,所能检测RNA最小模板浓度为0.42pg/μL,可检测病毒最小滴度为10-9/mL。结论建立的呼肠孤病毒Ⅲ型(Reo3)RT-PCR检测方法可用于实验动物及人用动物源性材料及生物制品外源Reo3的检测。

ICR小鼠感染呼肠孤病毒Ⅲ型的实验研究

目的利用呼肠孤病毒Ⅲ型(Reo-3)感染ICR小鼠,分析小鼠的临床体征、靶器官病毒载量及血清抗体水平的动态变化。方法通过动物体内适应试验增强病毒毒力,利用尾静脉注射与腹腔注射途径建立系统性感染ICR小鼠模型,观察动物临床体征,于感染0d、4 d、7 d、18 d、25 d、35 d、72 d、129 d分别采集小鼠(2~3只小鼠)血液并剖检。47 d、81 d、103 d随机对3只小鼠进行血液采集跟踪。采用实时qPCR方法检测靶器官病毒核酸量,ELISA方法检测血清抗体水平。结果病毒经过4次小鼠体内适应其毒力明显增强。小鼠攻毒后6 d、7 d、9 d、10 d、11d、16d出现死亡,实时qPCR结果显示,肝脏病毒载量最高,其次是心、脾、肺。多数器官病毒载量峰值出现在6~11 d,129 d后,多数靶器官检测阴性。血清抗体最早在18 d达到阳性,25 d达到峰值,并维持高抗体水平至试验结束。结论小鼠体内适应方法可以明显增强Reo-3毒力,该病毒感染可引起小鼠多器官炎症反应,并导致小鼠死亡。本研究为该病毒模型建立及致病机理研究提供了参考数据。

呼肠孤病毒Ⅲ型免疫荧光检测方法的建立及初步应用

目的 建立呼肠孤病毒Ⅲ型(Reo3)免疫荧光(IFA)检测方法,应用于人用动物源性生物材料及生物制品外源Reo3的检测。方法滴定病毒TCID50,筛选Reo3敏感细胞,依据国标IFA法制备抗原片,方阵法滴定免疫荧光素最佳工作浓度。并进行特异性、敏感性和稳定性试验。结果选取BSC-1细胞作为Reo3敏感细胞,病毒感染力滴度(TCID50)为10-5.8/mL;免疫荧光素最佳工作浓度为1∶100;与小鼠鼠痘(Ect)病毒、小鼠肝炎(MHV)病毒均无交叉反应;稳定性和敏感性试验显示,不同时间IFA检测灵敏度均为1∶1280;可检测到的病毒滴度最低为10-4.1/mL。结论建立的IFA法敏感性、特异性强,稳定性好,可用于人用动物源性生物材料及生物制品Reo3的检测。

病毒唑体外抗副流感病毒(Ⅲ型)作用的实验研究

目的:观察病毒唑体外对副流感病毒( 型)的抑制作用。方法:采用细胞病变抑制实验,观察病毒唑在Hela细胞中对副流感病毒( 型)的抑制作用。结果:病毒唑半数中毒浓度(TC50 )为1783.86μg/ m l;抗副流感病毒( 型)的半数有效浓度(EC50 )为11.5 3μg/ ml,治疗指数(TI)为15 4 .71;病毒唑对副流感病毒( 型)的抑制作用存在明显的量效反应关系(P<0 .0 1) ;在感染病毒后0～2 4 h,每隔2小时加一次药,病毒唑的5 0、2 5、12 .5、6 .2 5 μg/ ml组对副流感病毒( 型)均有抑制作用(P<0 .0 1) ;病毒唑对副流感病毒( 型)有预防和中和作用(P <0 .0 1)。结论:病毒唑在Hela细胞中对副流感病毒( 型)有明显的抑制作用,其作用机制是多途径的。

脊髓灰质炎Ⅲ型病毒Sabin株C抗原及D抗原生物学特性研究

目的对脊髓灰质炎Ⅲ型病毒Sabin株C抗原和D抗原在形态、感染特性、核酸含量和结构基因核苷酸序列、抗原不同结构蛋白质含量及2种抗原免疫原性等方面的差异进行比较观察,为脊髓灰质炎疫苗的生产评估、检定及进一步在蛋白质翻译后水平研究2种抗原的差异提供依据。方法采用二次氯化铯(CsCl)密度梯度离心的方法分离纯化脊髓灰质炎Ⅲ型病毒Sabin株C、D抗原,对分离的C、D抗原采用微量BCA(bicinchonininc acid)法检测蛋白质浓度,电镜观察病毒形态和纯度,聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis,PAGE)检测病毒不同结构蛋白质组成和含量,逆转录PCR(reverse transcription-PCR,RT-PCR)定量检测2种抗原单位质量携带核酸含量,并测序比较结构基因核苷酸序列差异;以中高剂量的C、D抗原分别免疫Wistar雌性大鼠,观察2种抗原体内诱生中和抗体的能力。结果脊髓灰质炎Ⅲ型病毒Sabin株单位质量D抗原的病毒滴度高于C抗原约4个对数值;单位质量D抗原的核酸含量高于C抗原近64倍,D抗原和C抗原结构基因核苷酸序列无差异;单位质量D抗原VP1蛋白质含量高于C抗原1.67倍;一次免疫后,D抗原诱导的中和抗体是C抗原的10~50倍。结论脊髓灰质炎Ⅲ型病毒Sabin株D抗原比C抗原具有较强的免疫原性,上述研究结果为脊髓灰质炎疫苗C、D抗原的检测、鉴定及进一步的疫苗效力研究和提高疫苗效力提供了实验依据。

2a/Ⅲ型丙型肝炎病毒基因组非结构4区全长序列的扩增、克隆及分析

目的 获得 2a/Ⅲ型丙型肝炎病毒 (HCV)基因组全长非结构 (NS) 4区克隆并作序列分析。方法 用限制性片段长度多态性分析 (RFLP)基因分型方法筛选出 2a/Ⅲ型HCV一株。为了获得该毒株全长NS4区基因序列 ,依据代表株序列的NS3区之 3′末端及NS5区之 5′末端相对保守区域合成引物 ,以RT -nested -PCR方法扩增一段 1.3kb的片段cDNA ;将此片段插入pUC19质粒载体。结果 克隆了丙型肝炎基因组非结构NS4区全长基因 ,构建了pUC -NS4重组体 ,对重组体进行酶切鉴定 ,克隆的cDNA与预计的片段大小相符 ,并作序列测定。结论 获得全长NS4区基因克隆 ,经序列分析表明 ,与日本HC -J6有较高的同源性 (92 .1%)。

Ⅲ型副流感病毒肺炎临床分析

目的:分析Ⅲ型副流感病毒PIV3肺炎的临床特点,提高对该病的诊治水平。方法:采用回顾性调查方法,对2014年1-12月收治的49例PIV3肺炎患儿发病季节、年龄、临床表现、实验室检查、胸片、肺功能检查、治疗及预后进行分析。结果:春夏季39例(79.59%),发病年龄<1岁30例(61.22%),临床症状主要为咳嗽、发热、喘息、肺部粗湿啰音,喘息患儿易合并肺功能异常,胸片以双肺受累多见,少部分患儿有一过性中性粒细胞减少,49例均治愈出院,出院1周随访肺功能均恢复正常。结论:春夏是PIV3肺炎的高发季节,婴儿为高发人群,临床症状主要为咳嗽、发热、喘息,并发症少,以抗病毒及对症治疗为主,极少数合并细菌感染者需抗生素治疗,预后良好。

草鱼Ⅲ型呼肠孤病毒外衣壳蛋白VP38的表达分析及多克隆抗体制备

为进一步开展草鱼Ⅲ型呼肠孤病毒外衣壳蛋白VP38的生物学功能研究准备实验材料,同时探讨并构建一种草鱼Ⅲ型呼肠孤病毒的免疫学检测方法。实验构建了VP38的原核表达质粒pET28a-VP38,转化至BL21感受态细胞后利用IPTG(Isopropyl β-D-Thiogalactoside)诱导表达,8 mol/L尿素溶解重组蛋白后免疫小鼠,制备鼠抗VP38多克隆抗体;利用制备的抗体探究Grass carp reovirus 104(GCRV-104)感染后VP38在翻译水平的表达动力学;利用Western blot、间接免疫荧光分析(IFA)对抗体进行评估;构建VP38的真核表达载体pEGFP-N1-VP38,转染至草鱼性腺(Grass carp ovary,GCO)细胞内进行亚细胞定位分析。结果显示:重组VP38蛋白在原核表达系统中以包涵体形式存在;制备的鼠抗VP38多克隆抗体既能够识别重组VP38蛋白,也能够识别GCO细胞感染GCRV-104后表达的VP38蛋白;GCRV-104感染后72h VP38主要分布在细胞质中,与亚细胞定位结果一致;VP38在感染的前期微量表达,感染中后期大量表达。本研究制备的鼠抗VP38多克隆抗体具有较高的效价和较好的特异性,为构建草鱼Ⅲ型呼肠孤病毒的免疫学检测方法提供了较好的技术路线。

白介素-9在鼠Ⅲ型肝炎病毒诱导的暴发性肝炎小鼠肝脏自然杀伤细胞及自然杀伤T细胞的表达研究

目的:研究MHV-3(鼠Ⅲ型肝炎病毒)感染所致的暴发性肝炎小鼠模型中,IL(白细胞介素)-9在肝脏NK(自然杀伤细胞)及NKT细胞的表达变化,及其与肝损伤之间的关系。方法:BALB/cJ小鼠腹腔注射100pfu(空斑形成单位)MHV-3建立小鼠暴发性肝炎模型,应用流式细胞术荧光分析法检测MHV-3感染0小时、24小时、48小时和72小时肝脏NK及NKT细胞表达IL-9的比例变化,并检测小鼠血清中丙氨酸转氨酶(ALT)水平。结果:BALB/cJ小鼠感染MHV-3后,IL-9在肝脏NK细胞的表达在感染24小时显著升高(P<0.05),并于48小时达最高水平(P<0.05);在肝脏NKT细胞的表达于感染24小时显著升高(P<0.05),并于48小时达最高水平,且均与肝损伤指标(血清ALT水平)呈正相关。结论:随着感染时间延长,肝脏分泌IL-9的NK和NKT淋巴细胞显著升高,提示IL-9参与了MHV-3诱导的暴发性肝炎小鼠免疫诱导的肝脏损伤发病过程。

患儿副流感病毒Ⅲ型的检测及其对免疫细胞的影响

目的:分析新蔡县急性呼吸道感染(ARI)患儿副流感病毒(PIV)Ⅲ型的流行情况及患儿外周血免疫细胞的变化。方法:采集2005年6月至2010年12月急性呼吸道感染住院患儿的鼻咽分泌物,应用直接免疫荧光法检测副流感病毒3型抗原;应用流式细胞仪检测副流感病毒Ⅲ型感染患儿外周血免疫细胞的变化。IgM抗体检测采用酶联免疫吸附试验法,用免疫投射比浊法进行免疫球蛋白IgG、IgA、IgM的检测。结果:≤1岁的患儿的IgG低于参考范围,1～13岁的患儿IgM均高于正常水平。副流感病毒Ⅲ型感染肺炎患儿外周血CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+细胞、CD19+CD21+B细胞百分比和对照组相仿;CD16+CD56+T细胞百分比较对照组减少(P<0.05);CD4+/CD8+比值较对照组升高(P<0.05)。结论:PIVⅢ在婴儿中感染率较高;而且PIVⅢ可导致患儿免疫细胞功能紊乱。

MAPREC与MNVT评价Ⅲ型Sabin株脊髓灰质炎病毒神经毒力的比较

目的用PCR扩增及限制性酶切分析突变技术(MAPREC)和猴体神经毒力试验(MNVT)评价同一批Ⅲ型Sabin株脊灰病毒神经毒力的结果差异。方法采用MAPREC技术,检测Ⅲ型Sabin株脊灰病毒神经毒力关键位点472位点突变率;采用MNVT病理切片分析,评价Ⅲ型Sabin株脊灰病毒神经毒力。结果 MAPREC检测待测样品核酸472位点突变率均值为0.324%,低于高突变参考品的0.621%。MNVT切片结果分析表明,xtest–xref=0.169,小于C1。对同一批样品,MAPREC与MNVT分析结果一致。结论在Ⅲ型Sabin株脊灰病毒神经毒力检测方面,操作简单,试验周期短的MAPREC技术可作为金标准MNVT的有益补充。

抗HPV生物蛋白敷料联合干扰素α-2b治疗CINⅢ合并高危型HPV阳性患者的效果探讨

目的探讨抗人乳头瘤病毒(HPV)生物蛋白敷料联合干扰素α-2b治疗宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅲ合并高危型HPV阳性患者的临床效果。方法72例CINⅢ合并高危型HPV阳性患者,随机分为对照组和实验组,各36例。对照组患者选择常规宫颈锥切术进行治疗,实验组患者在对照组基础上选择抗HPV生物蛋白敷料联合干扰素α-2b进行治疗。比较两组患者的治疗效果及Rsfl、Piwil2、TOPL和LRIG3、SARI、IEX-1。结果实验组患者治疗总有效率为94.44%,高于对照组的72.22%,差异具有统计学意义(P<0.05)。实验组患者Rsfl(0.32±0.05)、Piwil2(0.25±0.06)、TOPL(0.46±0.09)均明显低于对照组的(1.06±0.15)、(1.02±0.12)、(0.98±0.12),差异具有统计学意义(P<0.05)。实验组患者LRIG3、SARI、IEX-1高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论对CINⅢ合并高危型HPV阳性患者采用抗HPV生物蛋白敷料联合干扰素α-2b治疗疗效显著,其能够有效抑制肿瘤细胞的增殖和浸润性生长,是一种安全有效的治疗方案,值得进行进一步的推广与应用。

利用噬菌体展示技术筛选草鱼呼肠孤病毒VP39蛋白相互作用多肽

VP39是草鱼呼肠孤Ⅲ型病毒(GCRV GenotypeⅢ,GCRV-Ⅲ)S9基因编码的蛋白,为研究VP39蛋白在GCRV-Ⅲ感染草鱼细胞过程中行使的生物学功能,将克隆VP39基因序列并构建原核表达载体pET32a-VP39,通过原核表达得到VP39-HIS融合蛋白;利用VP39蛋白溶液免疫小鼠,制备鼠抗VP39多克隆抗体,通过Western Blot对抗体进行评估;利用制备的多克隆抗体探究GCRV-Ⅲ感染细胞过程中VP39蛋白表达动力学;利用噬菌体展示技术筛选与VP39蛋白特异性结合的多肽序列并进行分析。SDS-PAGE电泳结果显示,VP39-HIS融合蛋白可良好溶于PBS中,蛋白大小约为39 kD;Western Blot检测表明实验所制备的VP39多克隆抗体在1﹕10000稀释比例下,既能识别原核表达的VP39-HIS融合蛋白,也能识别GCRV-Ⅲ感染CIK细胞后表达的VP39蛋白,具有良好的效价与特异性;在病毒侵染过程中,VP39前期表达量较少,在中后期大量表达;噬菌体展示技术筛选出两条多肽与VP39蛋白有高度亲和性,经过在NCBI上比对后发现草鱼基因组中有7个基因与筛出的多肽具有同源性,表明其可能与VP39存在相互作用。研究制备了鼠抗VP39多克隆抗体,为GCRV-Ⅲ的免疫学检测方法提供了新的路径;结合多肽的筛选也为VP39在GCRV-Ⅲ侵染过程中参与的生物学功能研究奠定了基础。