DNA甲基转移酶1和组蛋白脱乙酰基酶1在胰腺组织中的表达及其临床意义

背景:近年针对DNA甲基化和组蛋白乙酰化修饰的表观遗传学研究是探索胰腺癌发生机制的新热点。目的:研究DNA甲基转移酶1(DNMT1)和组蛋白脱乙酰基酶1(HDAC1)在胰腺上皮内瘤变(PanIN)和胰腺癌组织中的表达,探讨其可能的临床意义。方法:以免疫组化SP法检测DNMT1、HDAC1在10例正常胰腺组织、39例证实含有PanIN的胰腺癌旁组织和54例胰腺导管腺癌(PDAC)组织中的表达。结果:DNMT1和HDAC1在胰腺组织中的阳性表达率均随组织异型程度的增加而逐渐增高,即正常胰腺导管(0%)<PanIN-1A(7.2%±1.2%,10.7%±5.0%)<PanIN-1B(24.5%±9.6%,40.1%±8.0%)<PanIN-2(30.0%±11.9%,51.2%±13.4%)<PanIN-3(46.7%±11.2%,73.1%±11.3%)<PDAC(56.7%±27.5%,82.5%±19.4%),差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:DNMT1和HDAC1表达增强是胰腺癌发生的早期事件,两者共同促进了胰腺癌的进展,可能成为胰腺癌早期诊疗的新靶点。

哮喘大鼠肺T细胞中组蛋白去乙酰基酶1的表达及对组蛋白修饰的影响

目的明确哮喘大鼠肺T淋巴细胞中的组蛋白去乙酰基酶1(HDAC1)蛋白表达水平及组蛋白整体乙酰化和甲基化水平,探讨其在哮喘发病机制中的作用。方法 16只Wistar大鼠随机分为对照组和哮喘组(每组8只),用卵白蛋白(OVA)致敏并激发建立哮喘大鼠模型。通过哮喘临床表现、气道高反应性测定、肺组织HE染色、血清和BALF中细胞因子IL-4、γ干扰素(IFN-γ)及IgEELISA测定,判断哮喘大鼠模型是否成功。分离肺T细胞并进行纯度鉴定。Western blot检测肺T细胞HDAC1蛋白表达水平,组蛋白H3、H4整体乙酰化,以及H3k9整体二甲基化水平。结果与对照组比较,哮喘组HDAC1蛋白表达水平低于对照组(P<0.05),组蛋白H3、H4整体乙酰化水平和H3k9整体二甲基化水平差异均无统计学意义。结论肺T细胞HDAC1可能参与了支气管哮喘的发病环节,组蛋白整体乙酰化和甲基化水平与哮喘发病无明显相关性,HDAC1对组蛋白修饰作用可能是一个基因转录特异性事件。

组蛋白去乙酰基酶抑制剂NL101对大鼠神经元的作用

目的：观察组蛋白去乙酰基酶新抑制剂NL101对同型半胱氨酸（HCA）诱导大鼠神经元毒性损伤的保护作用,以及对正常神经元的损伤作用.方法：使用HCA（5 mmol/L）诱导大鼠皮层混合细胞及原代神经元的损伤,观察不同浓度NL101对损伤的影响,检测神经元及胶质细胞的活性、数量、形态以及坏死的变化,并观察NL101对正常神经元的作用;以同类药SAHA（suberoylanilide hydroxamic acid）作为对照.结果：0.001 ～ 10 μmol/L的NL101对HCA诱导的皮层混合细胞数量减少没有明显影响;但1、10 μmol/L的NL101可明显减少细胞坏死（P＜0.05）;1μmol/L的NL101可增加神经元数量.1、10μmol/L的NL101可明显降低原代神经元活性（均P ＜0.05）;但0.01 ～ 10 μmol/L的NL101可显著减轻HCA诱导的神经元活性降低（均P＜0.05）;1、10 μmol/L的NL101可减少HCA引起的神经元坏死（均P ＜0.05）.NL101的作用与SAHA大致相当.结论：NL101对HCA诱导的神经元损伤有保护作用,高浓度NL101对神经元有明显的毒性作用,与经典的SAHA作用相似.

组蛋白去乙酰化酶3用于急性心肌梗死经皮冠状动脉介入治疗后慢血流或无复流风险评估

目的探讨术前组蛋白去乙酰化酶3(HDAC3)对急性心肌梗死(AMI)患者经皮冠状动脉介入治疗(PCI)术后慢血流/无复流风险的评估价值。方法选取2020年6月至2022年6月在唐山市工人医院接受PCI的AMI患者280例,根据PCI术后心肌灌注分级(TIMI)血流分级分为慢血流/无复流组(TIMI≤Ⅱ级)54例和正常血流组(TIMI>Ⅱ级)226例。比较2组人口学特征、基础疾病、入院时基线资料、术前冠状动脉造影结果及术前实验室指标。采用多因素logistic回归分析确定AMI患者PCI术后慢血流/无复流的影响因素,绘制ROC曲线分析相关指标对慢血流/无复流的预测价值。结果慢血流/无复流组吸烟史、Killip分级Ⅱ级比例、心率、再灌注时间、血清低密度脂蛋白胆固醇、中性粒细胞计数/淋巴细胞比值(NLR)、D-二聚体及HDAC3水平高于正常血流组,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。多因素logistic回归分析显示,再灌注时间、NLR、HDAC3是AMI患者PCI术后慢血流/无复流的影响因素(P<0.05,P<0.01)。再灌注时间+NLR预测AMI患者PCI术后慢血流/无复流的ROC曲线下面积为0.798(95%CI:0.664~0.922,P=0.002),敏感性与特异性分别为0.87、0.73;再灌注时间+NLR联合血清HDAC3预测AMI患者PCI后慢血流/无复流的ROC曲线下面积为0.903(95%CI:0.790~0.922,P<0.01),敏感性与特异性分别为0.93、0.84。结论术前HDAC3水平是AMI患者PCI术后慢血流/无复流的影响因素,在再灌注时间和NLR的基础上检测术前血清HDAC3可为慢血流/无复流的评估提供额外的预测价值。

组蛋白乙酰基转移酶1在肝癌细胞中介导的蛋白质乙酰化修饰谱分析

赖氨酸乙酰化是重要的蛋白质翻译后修饰之一,广泛存在于细胞的生理和病理过程。组蛋白乙酰基转移酶1(HAT1)作为第一个被鉴定的蛋白ε-氨基赖氨酸乙酰基转移酶,具有介导组蛋白和非组蛋白乙酰化的作用。然而,在肝癌细胞中HAT1介导的乙酰化蛋白质及其修饰位点目前仍不清楚。本研究首先揭示了HAT1在肝癌组织中呈高表达,并且与预后呈负相关。在建立HAT1敲除HepG2肝癌细胞系的基础上,应用乙酰化修饰蛋白质组学,对肝癌细胞的蛋白质乙酰化修饰谱进行了鉴定和分析,结果鉴定出HepG2肝癌细胞中547种蛋白质上的858个乙酰化修饰位点,发现HAT1影响了68种蛋白质上74个位点的赖氨酸乙酰化修饰。生物信息学分析确定了HAT1修饰的底物蛋白质与多种信号通路有关,涉及疾病发生过程、RNA生物学、剪接体和核小体组装、氧化应激、各种信号通路以及代谢途径等。我们进一步验证了HAT1介导的蛋白质乙酰化修饰能够促进肝癌细胞的异常脂代谢。应用CCK8、克隆形成和Edu细胞增殖检测等方法证实,HAT1对肝癌细胞的增殖具有明显的促进作用。为此,本研究揭示的肝癌细胞中HAT1介导的蛋白质乙酰化修饰位点,对进一步阐明肝癌发病的分子机制具有重要的理论意义,并为开发抗肝癌药物提供了精准的靶标。

铝对大鼠记忆及海马内组蛋白乙酰基转移酶1表达的影响

目的:通过研究亚慢性铝暴露对大鼠记忆功能及组蛋白乙酰基转移酶1(HAT1)表达的影响,探究铝损伤记忆功能的机制。方法:将Wistar大鼠随机分为对照组(control)和低染毒组(Al-L)、中染毒组(Al-M)、高染毒组(Al-H),以出生当天(1 d)至90 d持续染毒方式建立亚慢性铝暴露大鼠模型。用Morris水迷宫检测大鼠的记忆功能,用尼氏染色法观察海马CA1区神经细胞的形态改变,real time RT-PCR检测大鼠海马HAT1 mRNA的表达,Western Blot检测大鼠海马HAT1蛋白的表达。结果:与对照组相比,染铝组大鼠在目标象限停留时间较短,穿越平台次数较少,表明大鼠空间记忆能力受损;尼氏染色显示大鼠海马CA1区神经细胞形态受损,同时大鼠海马HAT1 mRNA和蛋白表达均降低。结论:亚慢性铝暴露降低大鼠海马CA1区HAT1表达,可能导致大鼠空间记忆功能障碍。

组蛋白脱乙酰基酶与肾间质纤维化的关系及药物干预研究

目的研究在幼年大鼠肾间质纤维化模型——单侧输尿管结扎(UUO)模型中组蛋白脱乙酰基酶(HDAC1,HDAC2)和转化生长因子-β1(TGF-β1)组织定位表达趋势、相关性及可能的病理意义,及应用HDAC抑制剂丙戊酸钠的干预效果。方法采用单侧输尿管结扎方法制备幼鼠肾间质纤维化模型,以第1、3、5、7、14天为观察点,采用苏木素-伊红(HE)和Masson染色评价各组各时间点肾小管受损的程度,用免疫组织化学法检测大鼠肾组织中HDAC1、HDAC2及TGF-β1蛋白定位,表达趋势及相关性研究。统计学方法采用单因素方差分析和Pearson相关分析。结果模型组HDAC1、HDAC2、TGF-β1与肾小管间质损伤程度均明显高于对照组(P<0.05);TGF-β1的随着时间的延长,表达强度增强,各时间点组内比较差异有统计学意义(P<0.05),HDAC1和HDAC2表达在第7天到达高峰,第14天时反而有所下降(P<0.05);丙戊酸组各时间点的表达明显低于模型组(P<0.05),但仍高于对照组(P<0.05);HDAC1、HDAC2与TGF-β1、肾小管间质损伤程度呈正相关。结论在幼年大鼠肾小管间质损伤过程中,HDAC1、HDAC2和TGF-β1的表达上调有重要的致病意义,而丙戊酸钠有明显的干预效应。

罗红霉素通过缺氧诱导因子-1α对吸烟哮喘小鼠组蛋白去乙酰化酶表达的影响

目的:探讨罗红霉素通过缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)对吸烟哮喘小鼠组蛋白去乙酰化酶(HDAC2)表达的影响。方法:SPF级雌性BALB/c小鼠40只,按随机数字表法随机平均分为正常对照组、哮喘组、吸烟哮喘组、罗红霉素干预4组。用卵白蛋白(OVA)致敏和激发的方法制备哮喘和吸烟哮喘模型,其中吸烟哮喘组在激发后置于自制熏箱内被动吸烟,对照组则用生理盐水代替OVA。分析支气管肺泡灌洗液(BALF)中的细胞分类计数;观察各组小鼠肺组织病理学变化;酶联免疫吸附(ELISA)法测定BALF中肿瘤坏死因子(TNF)-α水平,并采用Western blot测定各组小鼠肺组织中HIF-1α及HDAC2表达情况,并作相关性分析。结果:哮喘组和吸烟哮喘组嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、淋巴细胞、巨噬细胞计数比例与正常对照组相比有统计学差异(P<0.01),吸烟哮喘组中性粒细胞计数比例显著高于哮喘组(P<0.01);罗红霉素干预组嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、淋巴细胞计数比例与吸烟哮喘组相比有统计学差异(P<0.01)。哮喘组和吸烟哮喘组肺组织HIF-1α表达均显著高于正常对照组(0.67±0.03、0.85±0.07比0.42±0.03)且吸烟哮喘组显著高于哮喘组,罗红霉素干预组(0.52±0.05)低于吸烟哮喘组(均P<0.01);哮喘组和吸烟哮喘组肺组织HDAC2表达均显著低于正常对照组(2.04±0.12、1.74±0.06比3.93±0.08)(均P<0.01)且吸烟哮喘组显著低于哮喘组,罗红霉素干预组(2.53±0.09)高于吸烟哮喘组(均P<0.05)。吸烟哮喘组肺组织中HIF-1α与HDAC2的表达呈显著负相关(r=-0.879,P<0.01)。吸烟哮喘组BALF中TNF-α水平显著高于哮喘组、正常对照组(均P<0.01),罗红霉素干预组TNF-α水平显著低于吸烟哮喘组(P<0.01)。结论:罗红霉素可能通过抑制HIF-1α的表达上调吸烟哮喘小鼠HDAC2,从而改善气道炎症。

组蛋白去乙酰化酶1及基质金属蛋白酶-2在肝细胞癌组织中的表达及意义

目的探讨组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)在肝细胞癌(HCC)患者肝组织中的表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学方法检测42例HCC和相应的癌旁组织中HDAC1及MMP-2蛋白的表达,并分析其与临床病理参数的关系。结果 HCC组织中,HDAC1及MMP-2蛋白的表达明显高于癌旁组织(P<0.01,P<0.05);HDAC1蛋白的表达与患者性别、年龄、肿瘤大小、AFP浓度、肿瘤分化程度、脉管癌栓无关联(P>0.05),与肿瘤TNM分期相关联(P<0.05);MMP-2蛋白的表达与患者性别、年龄、肿瘤大小、AFP浓度、肿瘤分化程度无关联(P>0.05),与脉管癌栓、肿瘤TNM分期相关联(P<0.05,P<0.01);HCC组织中,HDAC1及MMP-2蛋白的表达呈正相关(P<0.01)。结论 HDAC1及MMP-2在HCC患者肝组织中表达有一定的肿瘤特异性,二者的高表达提示HCC已属晚期。

大黄素调控组蛋白乙酰化促进HpG2肝癌细胞焦亡及凋亡的发生

目的 研究天然产物大黄素是否能够影响HpG2肝癌细胞中组蛋白乙酰化水平,进而加速肝癌细胞焦亡和凋亡,为肝癌的治疗提供新的靶点。方法 CCK-8法检测不同浓度大黄素对Hp G2细胞活力的影响;生物信息学分析TCGA数据库中肝癌患者组蛋白乙酰化相关基因表达情况,验证候选基因赖氨酸乙酰基转移酶2A(KAT2A)与细胞凋亡通路的相关性;实时荧光定量PCR(q PCR)检测Hep G2细胞与L02细胞KAT2A m RNA水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大黄素对Hp G2细胞中组蛋白乙酰转移酶(HAT)、组蛋白去乙酰转移酶(HDAC)、白细胞介素(IL)-1β、IL-18的影响;流式细胞术检测大黄素对肝癌细胞凋亡的影响;Western blot检测细胞凋亡、细胞焦亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2-相关X蛋白质(Bax)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、胱天蛋白酶1(Caspase-1)、Gasdermin家族成员D N端(GSDMD-N)及KAT2A的表达情况。结果 大黄素能降低Hp G2细胞活性,半抑制浓度(IC_(50))95%置信区间为58.12~66.52μmol/L。与正常肝组织相比,组蛋白乙酰化相关基因m RNA水平在肝癌组织中表达增高,且KAT2A变化倍数最大[log_2(Fold Change)=2.010,P<0.01];在肝癌组织中,KAT2A m RNA的表达与细胞凋亡通路呈负相关(r_s=-0.230,P<0.01)。与L02细胞相比,KAT2A m RNA在Hep G2中表达升高(P<0.05);与对照组相比,大黄素干预组HAT和HDAC的表达水平下降,IL-18、IL-1β表达水平水平增高,细胞凋亡率升高,KAT2A、BAX的表达降低,Bcl-2、NLRP3、GSDMD-N及Caspase-1表达水平升高(P<0.05)。结论 大黄素可抑制肝癌细胞活力,加速细胞凋亡和焦亡,其机制可能与调控KAT2A表达相关。

卵巢癌患者外周血HDAC2、PD-L1蛋白及调节性T细胞水平与临床病理特征和预后的关系分析

目的探讨卵巢癌(OC)患者外周血组蛋白脱乙酰基酶(HDAC2)、程序性死亡配体1(PD-L1)蛋白及调节性T细胞(Treg)水平与临床病理特征和预后的关系。方法选取2018年7月至2019年9月在张家口市第一医院确诊治疗的60例OC患者作为研究组,根据随访3年患者生存情况分为生存组(n=43)、死亡组(n=17);另选取同期同一医院确诊的60例卵巢良性肿瘤患者作为对照组。采用流式细胞术检测外周血Treg、辅助性T细胞17(Th17)和Th17/Treg水平,采用酶联免疫吸附试验法检测HDAC2和PD-L1蛋白水平。分析Treg、Th17、Th17/Treg、HDAC2和PD-L1蛋白水平与临床病理特征间的关系;治疗后随访3年,分析比较生存组和死亡组患者外周血Treg、Th17、Th17/Treg、HDAC2和PD-L1蛋白水平;采用Logistic回归分析OC患者预后的影响因素。结果研究组患者Treg、Th17、Th17/Treg、HDAC2和PD-L1水平均显著高于对照组(P<0.05);OCⅠ期、Ⅱ期、Ⅲ期和Ⅳ期患者Treg、Th17、Th17/Treg、HDAC2和PD-L1蛋白水平均依次升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。临床分期、残存病灶大小、淋巴结转移、Treg、Th17、Th17/Treg、HDAC2和PD-L1蛋白水平均为OC患者预后的影响因素(P<0.05)。结论Treg、Th17、Th17/Treg、HDAC2和PD-L1蛋白参与并影响OC的发展,与患者预后密切相关。

过表达慢病毒载体介导miR-1转染L6细胞增殖分化及组蛋白去乙酰化酶的表达

背景:有研究认为组蛋白去乙酰化酶能够影响肌肉的分化和增殖,且其与miR-1关联紧密,但其具体调控机制尚不明确。目的:分析mi R-1过表达对L6成肌细胞增殖分化及组蛋白去乙酰化酶表达水平的影响。方法:构建表达含miR-1的重组慢病毒载体,进行测序和酶切鉴定,稳定转染L6成肌细胞,采用RT-PCR检测miR-1的表达水平。取稳定转染miR-1重组慢病毒载体的L6成肌细胞(miR-1组)、转染空质粒重组慢病毒载体的L6成肌细胞(空载组)及未转染的L6成肌细胞(空白组),培养24,48,72,96 h后,采用CCK-8法检测细胞增殖,荧光显微镜下观察细胞形态变化,Western blot检测培养72 h后的α肌动蛋白表达;培养24,72,120 h后,Western blot与RT-PCR检测mi R-1组、空载组组蛋白去乙酰化酶蛋白及基因的表达。结果与结论:①miR-1慢病毒载体经酶切和测序鉴定正确,转染48 h后,mi R-1组L6成肌细胞miR-1基因表达显著高于空载组、空白组(P <0.01),实现了miR-1在L6成肌细胞中过表达;②培养24,48,72,96 h后,3组细胞增殖能力比较差异无显著性意义(P> 0.05);③培养24,48 h时,miR-1组与空白组、空载组细胞形态无明显差异;72 h以后,miR-1组呈梭形的成熟肌细胞显著增多,且细胞α肌动蛋白表达明显高于空载组、空白组,证实miR-1过表达促进了L6成肌细胞的分化;④随着时间推移,miR-1组的组蛋白去乙酰化酶蛋白条带较空载组明显变淡、变细;miR-1组培养不同时间点的组蛋白去乙酰化酶基因表达均低于空载组(P <0.01);⑤结果表明,miR-1过表达可促进L6成肌细胞的分化能力,其机制与抑制组蛋白去乙酰化酶4的表达相关。

组蛋白去乙酰化酶1对非酒精性脂肪性肝病细胞模型胰岛素抵抗的影响

目的建立高脂诱导的HepG2非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)细胞模型,分析组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)表达对NAFLD细胞胰岛素抵抗(IR)的促进作用。方法将HepG2细胞分为对照组、模型组(OA)和抑制剂组[OA+Pyroxamide(HDAC1抑制剂)]。采用CCK-8法绘制HepG2细胞标准生长曲线,并筛选OA和Pyroxamide的最佳药物作用浓度和作用时间;油红O染色比较细胞内脂滴蓄积程度;全自动生化仪检测细胞内ALT、AST、TG、TC含量;RT-qPCR法和Western Blot法分别检测细胞内HDAC1、胰岛素受体底物-1(IRS-1)mRNA和蛋白表达量。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果0.25 mmol/L OA处理24 h为细胞最佳造模浓度和持续时间,20μmol/L处理24 h为Pyroxamide最佳给药浓度和持续时间;模型组相比于对照组ALT、AST、TG、TC含量均明显升高,而抑制剂组相比于模型组ALT、AST、TG、TC含量均显著降低(P值均<0.05)。各组细胞内HDAC1 mRNA和蛋白表达量比较,模型组高于对照组,抑制剂组低于模型组,差异均有统计学意义(P值均<0.05);各组细胞内IRS-1 mRNA和蛋白表达量相比,模型组低于对照组,抑制剂组高于模型组,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。结论HDAC1通过抑制IRS-1分子的表达,促进IR,参与了NAFLD的发生与发展,HDAC1抑制剂Pyroxamide通过减轻IR,对肝脏起保护作用。

组蛋白赖氨酸甲基转移酶DOT1L抑制剂分子水平高通量筛选模型的建立

类端粒沉默干扰体1(disruptor of telomeric silencing 1-like,DOT1L)是一种能够催化组蛋白H3第79位赖氨酸(H3K79)发生甲基化修饰的表观遗传调控酶,是第一个被发现不含有SET结构域的赖氨酸甲基转移酶.H3K79位点的甲基化程度能够影响和调控某些特定基因的表达,与急性髄性白血病(acute myelocytic leukemia,AML)的发生与发展密切相关.为建立一种分子水平DOT1L小分子抑制剂的高通量筛选模型,以EPZ-5676为阳性化合物,探讨最佳反应酶浓度、底物浓度及反应时间等,并对优化后的反应体系进行检测和确认.通过对多种参数优化使得高通量筛选体系的Z'因子达到0.54,表明已成功建立了DOT1L小分子抑制剂高通量筛选模型.

人源化PD-1单抗联合组蛋白去乙酰化酶抑制剂罗米地辛治疗T细胞淋巴瘤的临床前研究

背景与目的PD-1单抗或组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase inhibitor,HDAC)抑制剂单药治疗T细胞淋巴瘤有效,但缓解持续时间并不理想,两药联合在T细胞淋巴瘤中是否有协同作用,目前尚未有报道。本研究旨在T细胞淋巴瘤小鼠肿瘤模型中探索PD-1单抗联合组蛋白去乙酰化酶抑制剂罗米地辛的药物组合抗肿瘤疗效,并优化给药方案及给药剂量。方法采用小鼠T细胞淋巴瘤肿瘤细胞系EL4,在转基因的人源化PD-1小鼠中建立肿瘤细胞系移植模型,分为8组(罗米地辛0.33 mg/kg、罗米地辛1 mg/kg、PD-110 mg/kg、罗米地辛0.33 mg/kg同步加PD-110 mg/kg、罗米地辛1 mg/kg同步加PD-110 mg/kg、罗米地辛0.33 mg/kg序贯PD-110 mg/kg、罗米地辛1mg/kg序贯PD-110 mg/kg组),记录各组小鼠肿瘤大小,绘制肿瘤生长曲线,计算肿瘤抑制率,观察体重及生存情况变化。结果无论在同步给药还是在序贯给药条件下,高剂量或低剂量的罗米地辛联合PD-1单抗较PD-1单药组均可显著抑制肿瘤生长,差异具有统计学意义;低剂量(1/3最大耐受剂量,maximum tolerated dose,1/3 MTD)联合组相较罗米地辛单药可抑制肿瘤生长,但差异无统计学意义;高剂量(MTD)联合组较低剂量联合组显示相似的肿瘤抑制作用。结论罗米地辛联合PD-1单抗治疗T细胞淋巴瘤优于PD-1单药,但罗米地辛联合PD-1单抗是否优于罗米地辛单药需要进一步临床研究的证实。

多环芳烃暴露对焦炉工DNA甲基化转移酶1和组蛋白去乙酰化酶1蛋白表达的影响

目的分析焦炉工外周血中DNA甲基化转移酶1(DNMT1)、组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)蛋白的表达情况,探讨焦炉工人肺癌筛查的生物标志物。方法以152名男性焦炉工人为接触组,以141名男性水处理工为对照组。采集2组人员晨尿,用高效液相色谱法检测其内暴露指标1-羟基芘(1-OH-Py)的水平。同时采集晨起空腹静脉血,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中DNMT1、HDAC1蛋白的表达,并分析DNMT1、HDAC1蛋白的表达与焦炉工人工龄、工种、吸烟、饮酒等的关系。结果接触组尿1-OH-Py水平[(0.043±0.011)μg/mmol Cr]和血清中DNMT1[(28.4±7.2)μg/L]、HDAC1蛋白[(382±64)μg/L]的表达高于对照组[(0.017±0.004)μg/mmol Cr、(17.6±3.0)μg/L、(246±25)μg/L],差异有统计学意义(P<0.001)。接触组中不同工种间DNMT1、HDAC1蛋白表达水平也不同,差异有统计学意义(P<0.05)。随着焦炉作业工龄的增加,接触组DNMT1、HDAC1蛋白表达水平都有逐渐升高的趋势,差异有统计学意义(P<0.001)。结论血清中DNMT1、HDAC1蛋白可作为焦炉工人肺癌早期筛查的生物标志物。

慢性哮喘肺组织组蛋白去乙酰化酶活性降低对气道平滑肌细胞表型转变的影响

目的探讨慢性哮喘病理生理过程中肺组织组蛋白去乙酰化酶(HDAC)活性变化趋势及其对气道平滑肌细胞表型及生物学性状的影响。方法构建慢性哮喘小鼠模型,检测肺组织HDAC活性。以HDAC抑制剂曲古霉素A(TSA)刺激体外培养的大鼠气管平滑肌及人原代支气管平滑肌细胞,采用蛋白质印迹、MTT、Transwell及三维凝胶收缩等方法检测抑制HDAC活性对气道平滑肌细胞表型转变的影响及其相应的细胞增殖、迁移、收缩能力的变化。结果慢性哮喘组小鼠肺组织HDAC活性为(0.371±0.054)μmol/(L·μg),较正常对照组的(0.603±0.034)μmol/(L·μg)显著降低,差异有统计学意义(P<0.01)。TSA(0.5μmol/L)作用后12～24h,体外培养的大鼠气管平滑肌环及人支气管平滑肌细胞的α-sm-actin、SM22-α表达明显增加,作用后24h及48h支气管平滑肌细胞数目分别为(1.719±0.044)×104及(1.808±0.009)×104个,明显低于空白对照组的(1.911±0.048)×104及(2.537±0.01)×104个(P<0.05)。血小板源性生长因子(PDGF)诱导的支气管平滑肌细胞迁移数也在TSA作用后显著降低(88±7.632vs52±7.5,P<0.05)。此外,TSA作用24h后的三维凝胶收缩率[(9.885±7.084)%]较空白对照组[(44.844±3.808)%]及PDGF组[(41.315±7.943)%]明显降低(P<0.05)。结论慢性哮喘小鼠肺部HDAC的活性下降,可能与气道平滑肌细胞向"收缩型"转变有关,但HDAC活性下降并不增加细胞的收缩能力。

组蛋白去乙酰化酶抑制剂与PD98059缀合物对皮肤鳞状细胞癌的疗效研究

目的探讨组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂与PD98059缀合物的体内、外抗皮肤鳞状细胞癌(SCC)作用。方法采用HDAC试剂盒测试缀合物SAHA-PD98059对HDAC活性的抑制作用;采用5-[3-(羧基甲氧基)苯基]-3-(4,5-二甲基-2-噻唑基)-2-(4-磺基苯基)-2H-四唑内盐(MTS)试剂盒测试缀合物SAHA-PD98059对A431、HSC-5、Colo16和SCC-124种SCC细胞增殖的抑制作用。构建A431皮下荷瘤鼠模型,并将其随机分为SAHAPD98059组、SAHA组、PD98059组和空白对照组,连续灌胃给药18 d,每隔2 d记录小鼠体质量,测量肿瘤体积。通过对小鼠主要器官行HE染色评价缀合物SAHA-PD98059的生物安全性。结果缀合物SAHA-PD98059抑制HDAC活性的半抑制浓度(IC_(50))为(142.9±1.2)nmol/L。缀合物SAHA-PD98059在HDAC活性口袋中能够与氨基酸残基H142、G151、T312形成氢键,而母体化合物SAHA可与氨基酸残基H142、H143、T312形成氢键。与母体化合物PD98059及SAHA相比,缀合物SAHA-PD98059对皮肤鳞癌细胞A431、HSC-5、Colo16和SCC-12的抗增殖活性均更强,其中缀合物SAHA-PD98059对A431细胞增殖的抑制作用最强[IC_(50)=(1.7±0.2)μmol/L]。缀合物SAHA-PD98059对人正常皮肤细胞TE353.sk基本无毒性。体内研究表明,缀合物SAHA-PD98059的半数致死量(LD_(50))为647.5 mg/kg,并可显著抑制A431肿瘤的增长。HE染色发现,缀合物SAHA-PD98059对主要器官无明显毒性。结论缀合物SAHA-PD98059用于治疗SCC安全有效,其效果强于单一使用SAHA或PD98059。

组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275对人宫颈癌SiHa细胞迁移和侵袭的影响

目的:观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275对人宫颈癌SiHa细胞迁移和侵袭的作用,并探讨其作用的可能机制。方法:应用不同浓度MS-275体外作用于人宫颈癌SiHa细胞,通过划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力。蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞内组蛋白H4乙酰化水平,实时定量聚合酶链反应(PCR)方法检测细胞核因子κB(NF-κB)和尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)基因mRNA表达。结果:经MS-275作用后,随MS-275浓度的增加,人宫颈癌SiHa细胞迁移速度降低,穿过Transwell滤膜的细胞数量减少。同时细胞内组蛋白H4乙酰化水平增加,细胞NF-κB和uPA基因mRNA表达降低。结论:MS-275可抑制人宫颈癌SiHa细胞迁移和侵袭能力,提高组蛋白乙酰化水平,降低NF-κB和uPA基因表达可能是其作用机制之一。

组蛋白去乙酰酶抑制剂抗肿瘤机制研究进展

组蛋白的乙酰化调节在基因表达的渐成说调控中起重要作用。抑制组蛋白去乙酰酶成为逆转与癌症相关的异常渐成说变化的一种方法。临床前试验研究发现组蛋白去乙酰酶抑制剂有很强的特异性抗癌活性,有几类组蛋白去乙酰酶抑制剂已进入临床试验研究阶段。但是,组蛋白去乙酰酶抑制剂抗肿瘤作用的分子机制目前尚未完全阐明。因此,综述组蛋白去乙酰酶抑制剂抗肿瘤机制研究的最新进展将有助于它的开发和应用。