重组人Ⅲ型胶原基组织工程角膜植入兔眼生物相容性研究

背景组织工程角膜由于更接近活体角膜形态，植入体内易于成活而成为当今眼科学关注的热点。目的探讨组织工程角膜重组人Ⅲ型胶原（RHC-Ⅲ）／聚[3-（甲基丙烯酰胺）丙基-二甲基（3-磺丙）胺]（PMPDSAH）互穿聚合物网络（IPN）（RHC-Ⅲ／PMPDSAHIPN）水凝胶植入兔眼的生物相容性及其作为角膜替代物的可行性。方法中国大耳白兔108只按照随机数字表法分为2个组，实验组90只，正常对照组3只，其他15只兔（30只眼）为同种异体移植组提供供体角膜。实验组根据角膜材料的不同分为RHC-Ⅲ／PMPDSAH IPN组、负载神经生长因子（NGF）的NGFRHC—Ⅲ／PMPDSAH IPN组和同种异体移植组，每组各30只兔，均取右眼为手术眼。将实验组3种材料移植入兔角膜前板层，术后裂隙灯下观察有无排斥反应，对角膜透明度、角膜新生血管（CNV）的变化进行评分，记录各组兔术眼角膜上皮化时间，观察期为6个月。分别于术后3d、1周、2周及术后1、3、6个月每组各取5只兔角膜行苏木精-伊红染色，术后6个月采用免疫组织化学法检测角膜上皮细胞特异性标志蛋白角蛋白K3的表达。对实验组3个亚组各时间点角膜透明度和CNV评分的差异比较进行多组独立样本的Kraskal—WallisH检验，3个亚组角膜上皮化时间比较采用单因素方差分析及LSD—t检验。结果实验的6个月中，RHC—Ⅲ／PMPDSAH IPN组、NGF RHC-Ⅲ／PMPDSAH IPN组和同种异体移植组兔术眼的植片均未脱出，未见免疫排斥反应。术后6个月，RHC—Ⅲ／PMPDSAH IPN组、NGFRHC-Ⅲ／PMPDSAH IPN组和同种异体移植组角膜透明度、CNV与正常对照组比较差异均无统计学意义（H=4．34，P=0．23；H=2．60，P=0．46）。NGFR HC-Ⅲ／PMPDSAH IPN组角膜上皮化时间最短，平均为（4．97±0．63）d，与RHC—Ⅲ／PMPDSAH IPN组和同种异体移植组比较差异均有统计学意义（t=11．97，P=0．00；t=5．80，P=0．00）；RHC-Ⅲ／PMPDSAH IPN组和同种异体移植组比较差异有统计学意义（t=6．32，P=0．00）。RHC—Ⅲ／PMPDSAH IPN组和NGF RHC-Ⅲ／PMPDSAH IPN组移植材料与兔角膜融合较好，术后2周材料部分降解，术后1个月材料均完全降解，术后6个月新生胶原纤维排列整齐，角膜上皮细胞中K3表达阳性。结论RHC—Ⅲ／PMPDSAH IPN与兔眼的生物相容性较好，NGF可以有效地促进角膜创口愈合和上皮再生，提高其力学强度后，有望作为一种安全有效的角膜替代物。

256排螺旋增强CT联合血清COL3A1、ANXA10水平对非小细胞肺癌的诊断价值及与预后的相关性研究

目的 探究256排螺旋增强CT(MSCT)联合血清Ⅲ型胶原蛋白α-1链(COL3A1)、膜联蛋白A10(ANXA10)水平对非小细胞肺癌(NSCLC)的诊断价值及与预后的相关性。方法 选取2018年3月-2020年3月在本院确诊的NSCLC患者(n=82)作为研究对象,选取同期在我院通过检查确诊的肺部良性病变的志愿者为对照组(n=95),按照实际随访情况将NSCLC患者划分为预后良好组(n=22)和预后不良组(n=60),比较各组血清COL3A1、ANXA10水平。受试者工作特征(ROC)曲线用于分析256排螺旋增强CT联合血清COL3A1、ANXA10水平对NSCLC的诊断价值。结果 NSCLC组血清COL3A1、ANXA10水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。预后不良组血清COL3A1、ANXA10水平高于预后良好组,差异有统计学意义(P<0.05)。预后不良组患者表面通透性(PS)、血流量(BF)水平比预后良好组高,差异有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线显示,血清COL3A1、ANXA10可辅助诊断NSCLC的曲线下面积(AUC)分别为0.822、0.827,256排螺旋增强CT诊断NSCLC的AUC是0.813,三者联合诊断的AUC为0.947,均优于各自单独检测(Z=3.630、3.484、3.606,P<0.05)。结论 256排螺旋增强CT联合血清COL3A1、ANXA10对NSCLC有一定的辅助诊断价值,三者联合诊断效能更高,血清COL3A1、ANXA10水平升高与NSCLC患者不良预后有一定的关系。

水飞蓟素对单侧输尿管梗阻大鼠肾脏的保护作用

水飞蓟植物被作为一种传统药物预防肝脏纤维化广泛用于临床。肝纤维化的发生机制主要为肝脏中细胞外基质（Extracellular matrix，ECM）合成与降解失衡，导致细胞外基质在肝脏内过度沉积。肝脏纤维化和肾脏间质纤维化的发生机理基本相似，但目前尚未见水飞蓟素用于预防肾小管间质纤维化（Tubulointerstitial fibrosis。TIF）的报道。本实验旨在通过单侧输尿管梗阻（Unilateral ureteral obstruction，UUO）建立TIF的模型，应用水飞蓟素治疗．观察肾组织病理及Ⅲ型胶原蛋白表达的变化，寻找其预防TIF的证据．为延缓TIF提供可靠的实验依据和理论基础。

慢性氟中毒大鼠肝组织Col-Ⅰ、Col-Ⅲ及α-SMA的表达

目的观察慢性氟中毒大鼠肝组织胶原蛋白-Ⅰ型(Col-Ⅰ)、胶原蛋白-Ⅲ型(Col-Ⅲ)及α-平滑肌动蛋白(α-SMA)表达情况,探讨慢性氟中毒是否有导致大鼠肝纤维化的作用。方法将48只SD大鼠按体重(90~100 g)采用随机数字表法分为对照组(饮用水氟离子浓度<0.5 mg/L),低、中、高浓度氟组(饮用水氟离子浓度分别为5.0、50.0、100.0 mg/L),每组12只(雌、雄各半),饲养6个月。采用氟离子选择电极法检测骨氟、尿氟含量;苏木精-伊红(HE)染色及马松染色法光镜下观察肝组织病理形态学改变及胶原纤维沉积情况;实时荧光定量PCR及免疫组织化学染色法观察肝组织Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、α-SMA mRNA及蛋白表达情况。结果4组大鼠骨氟、尿氟[骨氟:(92.52±5.64)、(112.21±11.86)、(142.99±7.87)、(235.63±11.55)mg/kg,尿氟:(5.47±0.88)、(17.78±1.48)、(54.16±5.96)、(121.11±6.32)mg/L]比较,差异均有统计学意义(P均<0.001)。光镜下,随着染氟浓度增加,肝细胞水肿程度加重,中央静脉周围及汇管区胶原纤维沉积显著增多。低、中、高浓度氟组大鼠Col-ⅠmRNA表达水平(1.20±0.09、1.80±0.08、1.58±0.06)均高于对照组(1.00±0.00,P均<0.05);中、高浓度氟组大鼠Col-Ⅲ、α-SMA mRNA表达水平(Col-Ⅲ:1.15±0.14、1.64±0.24,α-SMA:1.69±0.02、2.34±0.06)均高于低浓度氟组(Col-Ⅲ:0.59±0.17,α-SMA:0.80±0.13,P均<0.05)。随着染氟浓度增加,大鼠肝组织Col-Ⅰ(0.00±0.00、0.03±0.01、0.08±0.01、0.13±0.02)、Col-Ⅲ(17803.05±3221.16、47523.15±3490.10、127786.35±13008.86、237233.03±47614.63)、α-SMA(516.83±181.18、2885.03±864.92、11186.94±2394.08、37182.43±12390.59)蛋白表达水平均增加(P均<0.05)。结论长期摄入过量氟可能引起大鼠肝脏中央静脉周围及汇管区胶原纤维产生增多,进而引起肝纤维化形成。

槲皮素通过调节TGF-β_(1)/Smad抑制增生性瘢痕的形成

目的:探讨槲皮素对人增生性瘢痕成纤维细胞(HSFb)及其介导的TGF-β_(1)/Smad信号通路中相关蛋白表达的影响。方法:提取人增生性瘢痕成纤维细胞进行原代培养并鉴定;采用CCK-8法检测不同浓度的槲皮素(50~600μmol·L^(-1))处理后的HSFb细胞活力;Western blot检测α-SMA、COL-Ⅲ、TGF-β_(1)、Smad2、Smad7的蛋白表达,免疫荧光检测α-SMA的表达以及HSF和HSFb中波形蛋白的表达。结果:与模型组相比,槲皮素(250,500μmol·L^(-1))可降低α-SMA蛋白的表达(P<0.05)并显著下调COL-Ⅲ蛋白的表达(P<0.05或P<0.01),其中500μmol·L^(-1)槲皮素组对HSFb细胞Ⅲ-型胶原分泌的抑制作用最强,并显著降低TGF-β_(1)和Smad2的蛋白表达;显著上调Smad7蛋白表达并且呈浓度依赖性,差异均具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:槲皮素主要通过抑制COL-Ⅲ、α-SMA、TGF-β_(1)/Smad通路的活化从而抑制增生性瘢痕的形成。

Effects of Electroacupuncture on Serum Indexes of Rats with Hepatic Fibrosis

Objective： To observe the effects of electroacupuncture on the histopathological changes and serum indexes of rats＇ liver, and to investigate the mechanism of electroacupuncture in treating hepatic fibrosis of rats. Methods： The rat model of hepatic fibrosis was induced with carbon tetrachloride. Then, the rats were divided into electroacupuncture group, medicine group, and model group. The collagen of liver, and serum hyaluronic acid （HA）, laminin （LN）, procollagen Ⅲ （PⅢNP）, and collagen Ⅳ （C-Ⅳ） were detected with morphologic methods and radioimmunoassay. Results： Compared with normal rats, the collagen was hyperplasia in the liver tissue, and the contents of the serum HA, LN, and PⅢ NP were higher in the model group. The collagen area of liver tissue, and the contents of the serum HA, and LN were lower in rats treated with electroacupuncture than model rats. The contents of serum of PⅢ NP, and C-Ⅳ changed little. Conclusion： Electroacupuncture had some effects of prevention and treatment, and the mechanism may relate to the effects of electroacupuncture in protecting liver cells, inhibiting synthesis of extracellular matrix, and promoting the breakup of collagen.