羊种布鲁菌VirB5蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备羊种布鲁菌Ⅳ型分泌系统蛋白VirB5的单克隆抗体,为布鲁菌病的病原学诊断及研究提供基础。方法将纯化的VirB5蛋白以60μg/只的剂量对4只SPF级雌性BALB/c小鼠进行皮下注射免疫,以30μg/只的剂量每2周加强免疫1次,共3次;2周后,取小鼠眼眶静脉血测定抗体效价,再经腹腔注射进行第4次加强免疫;3d后,取小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤SP2/0细胞按5∶1的比例进行融合。对融合的细胞进行3次细胞筛选及单克隆化,建立稳定分泌VirB5抗体的杂交瘤细胞株;对1只BALB/c小鼠进行杂交瘤细胞腹腔注射,待小鼠腹部明显膨大时收集腹水并进行抗体效价测定。单克隆抗体免疫学特性鉴定分别采用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)、蛋白免疫印迹法。结果共建立6株能够分泌VirB5抗体的单克隆细胞株(2-2、2-12、2-19、2-25、2-31和2-40)。其中,细胞株2-19能够稳定分泌特异性识别VirB5纯化蛋白的抗体,经鉴定其分泌的VirB5抗体为IgG1亚型、κ轻链,单抗亲和常数为1.6×10^8,且腹腔注射细胞株2-19的小鼠腹水抗体效价为1∶51200。结论成功制备出布鲁菌Ⅳ型分泌系统蛋白VirB5的高亲和性单克隆抗体,抗体能够快速与病原菌表面蛋白特异性结合,为布鲁菌病病原学诊断方法的建立提供了一种备选材料。