COL4A5基因c.4518_c.4519 insC新突变所致X连锁显性遗传Alport综合征的分子遗传学及临床分析

目的:通过对胶原蛋白Ⅳ型α5链(collagen type Ⅳα 5 chain,COL4A5)基因进行分析,为1例X-连锁性遗传性Alport综合征家系的分子诊断和遗传咨询提供依据。探讨Alport综合征COL4A5基因移码突变谱及临床表型。方法:应用全外显子组测序技术进行基因检测,应用Sanger测序法对候选致病变异进行验证。结果:病人肾损害渐进展,出现肉眼血尿、肾病综合征,抗感染治疗后蛋白尿及肉眼血尿可缓解。先证者肾脏病理活检:病理表现为基底膜厚薄不一,致密层增厚,部分呈撕裂状和蛛网状。高通量测序和一代测序结果均提示病人COL4A5基因49号外显子存在c.4518_c.4519 insC(p.Gln1507Profs*14)的杂合变异;病人父母均不携带该变异。结论:首次报道了COL4A5基因该位点的新生变异为病人的发病原因,丰富了COL4A5基因变异谱,为该X-连锁性遗传性肾炎家系的分子诊断及产前诊断提供了依据;对指导家族中母亲及女儿再生育,通过产前基因诊断或胚胎植入前遗传学诊断技术,阻断该疾病有重要意义。

肾组织石蜡切片免疫荧光检测在诊断X连锁Alport综合征中的应用

目的:建立X连锁Alport综合征(XLAS)肾组织石蜡切片型胶原A5链免疫荧光检测方法,探讨其临床应用价值。方法:将对照组及XLAS患儿各4例肾组织,分别行石蜡切片及冰冻切片型胶原A5链间接免疫荧光染色,比较分析染色结果。石蜡切片分别采用微波修复、胃蛋白酶消化及微波修复+胃蛋白酶消化三种抗原修复方法进行修复,比较三者的修复效果。结果:单独微波修复、胃蛋白酶消化均不能修复肾组织型胶原A5链,微波修复+胃蛋白酶消化法可修复A5链。组织经微波修复10min,胃蛋白酶消化10min后,肾小球基底膜型胶原A5链免疫荧光染色在对照组患儿为连续线状阳性表达,在X连锁遗传型女性患儿为间断线状阳性,男性患儿为阴性。结果均与冰冻切片免疫荧光染色结果一致。结论:经微波修复+胃蛋白酶消化双抗原修复法的石蜡切片免疫荧光检测肾组织型胶原A5链能较好地应用于XLAS诊断,可对既往临床不典型XLAS病例进行回顾性诊断,为XLAS的诊断和研究提供了一种可靠的技术手段。