葛根素对实验性糖尿病大鼠主动脉Ⅳ型胶原基因表达的抑制作用

目的观察葛根素对实验性糖尿病大鼠主动脉Ⅳ型胶原基因表达的抑制作用。方法利用链脲佐菌素腹腔注射法诱导建立1型糖尿病大鼠模型,将实验用SD大鼠随机分为正常对照组、糖尿病组、葛根素3个剂量(20、40、80 mg.kg-1,ip)治疗组。治疗16周,观察治疗期间及治疗后大鼠的一般状况及血糖、糖化血红蛋白(HbA1c)的变化情况;用苏木精-伊红染色、原位杂交法检测主动脉内膜Ⅳ型胶原基因表达情况。结果造模4组大鼠均出现主动脉病理形态改变;葛根素能改善糖尿病模型大鼠的基本状况(体质量、精神状态等),降低糖化血红蛋白含量(P<0.05),降低主动脉Ⅳ型胶原基因(P<0.05)表达,且呈一定的剂量依赖关系。结论葛根素可通过抑制主动脉基因表达对糖尿病模型大鼠主动脉起到保护作用。

Ⅳ型胶原蛋白基因α1对胃癌细胞增殖、转移及凋亡的调控作用与机制

目的探讨Ⅳ型胶原蛋白基因α1(COL4A1)对胃癌细胞增殖、转移及凋亡的影响以及其潜在的调控机制。方法采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)法检测胃癌组织和人正常胃黏膜上皮细胞GES-1及胃癌细胞(SGC-7901、MKN-28、BGC-803、MGC-823、MKN-45和AGS)中COL4A1基因的表达。根据6种胃癌细胞中COL4A1基因的表达情况,AGS和SGC-7901细胞被用于后续的细胞功能验证实验。将AGS、SGC-7901细胞接种于6孔板,并于融合度达到90%后,将2种细胞分为对照组、阴性对照(NC)小干扰RNA(siRNA)组、siCOL4A1-1组、siCOL4A1-2组和siCOL4A1-2+740 Y-P组。对照组细胞正常培养,不进行任何处理;NC siRNA组细胞转染NC siRNA,siCOL4A1-1组细胞转染siCOL4A1-1,siCOL4A1-2组细胞转染siCOL4A1-2,siCOL4A1-2+740 Y-P组细胞转染siCOL4A1-2,然后使用50 mg·L^(-1)的740 Y-P处理90 min。采用RT-qPCR检测5组细胞中COL4A1基因的表达情况,根据检测结果选择siCOL4A1-2组细胞进行后续实验。采用细胞计数试剂盒-8检测对照组、NC siRNA组、siCOL4A1-2组和siCOL4A1-2+740 Y-P组AGS和SGC-7901细胞培养1、2、3、4 d时的增殖能力,膜联蛋白-V/异硫氰酸荧光素实验检测4组AGS、SGC-7901细胞凋亡情况,Transwell实验检测4组AGS、SGC-7901细胞迁移和侵袭能力,Western blot检测4组AGS、SGC-7901细胞中磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)通路相关蛋白表达。结果siCOL4A1-2组AGS细胞的增殖能力在培养3 d和4 d时显著低于对照组和NC siRNA组(P<0.05),SGC-7901细胞的增殖能力在培养1、2、3、4 d时均显著低于对照组和NC siRNA组(P<0.05);siCOL4A1-2+740 Y-P组AGS细胞的增殖能力在培养3 d和4 d时显著高于siCOL4A1-2组(P<0.05),SGC-7901细胞的增殖能力在培养1、2、3、4 d时均显著高于siCOL4A1-2组(P<0.05);其余各组细胞增殖能力比较差异均无统计学意义(P>0.05)。siCOL4A1-2组AGS、SGC-7901细胞的凋亡率均显著高于对照组和NC siRNA组(P<0.05);siCOL4A1-2+740 Y-P组AGS、SGC-7901细胞的凋亡率均显著低于siCOL4A1-2组(P<0.05);其余各组2种细胞凋亡率比较差异均无统计学意义(P>0.05)。siCOL4A1-2组AGS、SGC-7901细胞迁移能力和侵袭能力均显著低于对照组和NC siRNA组(P<0.05);siCOL4A1-2+740 Y-P组AGS、SGC-7901细胞迁移能力和侵袭能力均显著高于siCOL4A1-2组(P<0.05);其余各组2种细胞迁移能力和侵袭能力比较差异无统计学意义(P>0.05)。对照组与NC siRNA组AGS、SGC-7901细胞中p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt值比较差异无统计学意义(P>0.05);siCOL4A1-2组AGS、SGC-7901细胞中p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt值显著低于对照组和NC siRNA组(P<0.01);siCOL4A1-2+740 Y-P组AGS、SGC-7901细胞中p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt值显著高于siCOL4A1-2组(P<0.01)。结论沉默COL4A1能够通过抑制PI3K/Akt通路的激活抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭能力,促进细胞凋亡。

COL4A1/A2基因变异在脑出血、蛛网膜下腔出血和梗死后出血转化散发性出血性脑血管病的不同表达和机制

目的:研究Ⅳ型胶原蛋白基因α1/α2(COL4A1/A2)基因变异在脑出血(ICH)、蛛网膜下腔出血(SAH)和梗死后出血转化(HT)散发性出血性脑血管病的不同表达和机制。方法:回顾性分析临沂市第三人民医院2019年2月-2021年10月收治的67例ICH患者(ICH组)、61例SAH患者(SAH组)及58例HT患者(HT组)相关资料。另取同期在医院接受体检的健康志愿者50例记作对照组。比较各组COL4A1/A2基因变异发生率。此外,对比不同预后ICH、SAH及HT患者的COL4A1/A2基因变异发生率。结果:ICH组COL4A1/A2基因变异发生率分别为8.96%、7.46%,SAH组COL4A1/A2基因变异发生率分别为8.20%、8.20%,HT组COL4A1/A2基因变异发生率分别为13.79%、12.07%,均高于对照组(P<0.05)。预后不良ICH患者COL4A1/A2基因变异发生率分别为20.00%、20.00%,均高于预后良好患者(P<0.05)。预后不良SAH患者的COL4A1/A2基因变异发生率均为22.22%、22.22%,均高于预后良好患者的2.33%、2.33%(P<0.05)。预后不良HT患者的COL4A1/A2基因变异发生率分别为30.00%、30.00%,均高于预后良好患者的5.26%、2.63%(P<0.05)。结论:COL4A1/A2基因变异可能介导了ICH、SAH及HT发生、发展过程,且和患者预后密切相关。

COL4A1在miR-29b对N2B细胞氧糖剥夺/再灌注损伤保护作用中的调控机制研究

目的通过构建N2B神经细胞氧糖剥夺(OGD)/再灌注(R)模型验证miR-29b对神经细胞的保护作用,探讨Ⅳ型胶原蛋白基因α1(COL4A1)在miR-29b对神经细胞OGD/R损伤保护作用中的调控机制。方法正常和缺氧条件培养N2B细胞,实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-29b表达。细胞计数试剂盒(CCK)-8、克隆形成、Hoechst实验,流式细胞术分别检测不同处理组细胞增殖、凋亡情况。免疫印迹双荧光素酶验证miR-29b靶基因是否为COL4A1;N2B细胞转染miR-29b mimics,RT-qPCR和免疫印迹检测COL4A1表达。构建COL4A13’非翻译区(UTR)野生型和突变型载体、靶基因,设计合成COL4A1,转染N2B细胞,缺氧培养,CCK-8、克隆形成、Hoechst实验,流式细胞术检测不同处理组细胞增殖、凋亡情况。结果OGD/R细胞中miR-29b表达较正常细胞组降低。在相同缺氧/复氧条件下培养细胞中miR-29表达上调,细胞增殖能力明显增强,凋亡明显抑制。miR-29b表达上调抑制COL4A1表达,但转染COL4A1及其对照组后,COL4A1对照组细胞增殖明显高于过表达组,凋亡明显低于过表达组。结论miR-29b对N2B神经细胞OGD/R模型具有保护作用,通过抑制COL4A1表达减轻缺氧对N2B神经细胞的损伤。miR-29b可通过调节COL4A1表达减少缺血/缺氧再灌注对神经细胞的损伤。

COL4A1在肝癌中的表达及其对肝癌细胞迁移、侵袭能力的影响

目的探讨血清Ⅳ型胶原蛋白基因α1(COL4A1)在肝癌组织中的表达,分析敲低COL4A1表达对肝癌细胞迁移及侵袭能力的影响。方法采用Western blot法检测COL4A1在68例肝癌及配对癌旁组织的表达水平;运用siRNA技术敲低肝癌细胞COL4A1表达,采用CCK-8试验检测其对肝癌细胞增殖能力的影响,采用Transwell试验检测其对肝癌细胞迁移和侵袭能力的影响。结果生物信息学分析提示COL4A1mRNA在肝癌中高表达(P<0.01);COL4A1在肝癌组织表达水平明显高于癌旁组织(P<0.05),敲低COL4A1表达明显降低肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力(P<0.05)。结论 COL4A1在肝癌组织中高表达,并促进肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭。