基于IL-6/MMP-9/COL-Ⅳ信号通路探讨加味真武汤对慢性肾功能衰竭大鼠肾间质纤维化的影响

目的:观察加味真武汤对慢性肾衰竭(CRF)大鼠白细胞介素-6(IL-6)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、Ⅳ型胶原蛋白(COL-Ⅳ)的调控作用,探究其治疗CRF的潜在机制。方法:将50只雄性SD大鼠随机分为造模组40只和正常组10只,造模组大鼠连续腺嘌呤灌胃12周制备CRF模型。造模成功后将造模组按随机数字表法分为模型组、加味真武汤低剂量(7.2g·kg^(-1)·d^(-1))组、加味真武汤中剂量(14.4g·kg^(-1)·d^(-1))组、加味真武汤高剂量(28.8g·kg^(-1)·d^(-1))组、盐酸贝那普利(10 mg·kg^(-1)·d^(-1))组进行灌胃,正常组、模型组予等体积蒸馏水灌胃,持续干预4周。给药期间,定期检测各组大鼠体质量;给药结束后,检测大鼠血肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)、24 h尿蛋白定量(24 h-UTP)水平;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠血清IL-6水平;分别采用苏木素-伊红(HE)、马松(Masson)染色观察肾组织病理形态学变化;免疫组化法(IHC)检测大鼠肾脏细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、IL-6、MMP-9、COL-Ⅳ蛋白表达结果;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测大鼠肾组织ICAM-1 mRNA、IL-6 mRNA、MMP-9 mRNA、COL-ⅣmRNA表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠肾组织ICAM-1、IL-6、MMP-9、COL-Ⅳ蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠SCr、BUN、24 h-UTP水平显著升高(P<0.01);血清IL-6含量显著上升(P<0.01);大鼠肾小管管腔扩张伴萎缩,小管上皮细胞坏死、肿胀、空泡变性,间质内大量炎症细胞浸润,胶原纤维沉积;肾小管间质内IL-6、ICAM-1、COL-Ⅳ呈强阳性表达,MMP-9表达减弱;模型组大鼠ICAM-1 mRNA、IL-6mRNA、COL-ⅣmRNA水平显著升高(P<0.01),MMP-9 mRNA水平显著降低(P<0.05);肾组织ICAM-1、IL-6、COL-Ⅳ蛋白表达显著升高(P<0.01),MMP-9蛋白表达显著降低(P<0.01)。与模型组比较,经加味真武汤治疗后,大鼠24 h-UTP、SCr、BUN水平均有大幅降低(P<0.01);血清IL-6含量显著下降(P<0.01);大鼠肾脏病损明显改善,胶原纤维沉积减少;IL-6、ICAM-1、COL-Ⅳ在肾小管、间质内表达减弱,MMP-9在肾小管间质内表达增强;大鼠ICAM-1 mRNA、IL-6 mRNA、COL-ⅣmRNA水平显著降低(P<0.01),MMP-9 mRNA水平明显升高(P<0.05);肾脏内ICAM-1、IL-6、COL-Ⅳ蛋白表达显著下降(P<0.01),MMP-9蛋白表达显著上升(P<0.01)。结论:加味真武汤可能通过调控IL-6/MMP-9/COL-Ⅳ信号通路,进而减轻蛋白尿,改善肾功能,减轻肾脏病理损害,延缓CRF肾间质纤维化进展。