成人重型血友病A患者凝血因子Ⅷ药代动力学研究

目的:检测成人重型血友病A患者的凝血因子Ⅷ(FⅧ)药代动力学(PK)参数,对PK参数可能的影响因素进行相关性研究,并对患者进行PK指导下的个体化预防治疗。方法:对23例FⅧ抑制物阴性的成人重型血友病A患者的FⅧPK参数进行检测,分析患者年龄、血管性血友病因子抗原(vWF:Ag)水平、血型、体重和体重指数(BMI)、FⅧ基因突变对于FⅧPK参数的影响,并根据PK参数推荐个体化预防方案。结果:FⅧ平均半衰期(t_(1/2))为20.6±9.3(11.47-30.12)h。t_(1/2)随着年龄增长(r=0.580)和vWF:Ag水平升高(r=0.814)呈延长趋势。平均药时曲线下面积(AUC)为913±399(328-1878)IU·h/dl,与年龄(r=0.557)和vWF:Ag水平(r=0.784)呈正相关。平均驻留时间(MRT)为24.7±12.4(13.2-62.2)h,与年龄(r=0.664)和vWF:Ag水平(r=0.868)呈正相关。FⅧ平均回收率(IVR)为2.59±0.888(1.5-4.29)(IU/dl)/(IU/kg),平均清除率(CL)为3±1.58(0.97-7.18)ml/(kg·h),IVR和CL与年龄及vWF:Ag均无明显相关性。PK指导的个体化给药模式下,15例患者为超低剂量、6例为小剂量、2例为中剂量预防方案。结论:成人重型血友病A患者FⅧ半衰期个体差异较大,患者年龄越大,vWF:Ag水平越高,FⅧ半衰期越长。需要根据FⅧPK参数进行个体化给药,以优化预防治疗模式。

基于FⅧ探讨不同脱盐方式的效果及对其成分的影响

目的基于人凝血因子Ⅷ(human coagulation factorⅧ,FⅧ)比较5种脱盐方法的脱盐效果及对FⅧ成分的影响,为蛋白脱盐方式提供参考。方法分别用Sephadex G-25 Medium凝胶、Fractogel EMD BioSEC凝胶、超滤、室温透析和4℃透析5种方法对人FⅧ进行脱盐处理。通过Na^(+)、柠檬酸根离子、甘氨酸去除率评估脱盐效果。通过脱盐前后FⅧ蛋白回收率、FⅧ活性(coagulation factorⅧactivity,FⅧ∶C)、VWF抗原(VWF antigen,VWF∶Ag)、VWF活性(VWF activity,VWF∶Ac)、VWF多聚体及SDS-PAGE分析,评估其对FⅧ成分的影响。结果在脱盐效果方面:Na+在超滤脱盐时去除率最低,为(97.90±0.06)%,Fractogel EMD BioSEC凝胶脱盐去除率最高,为(99.82±0.07)%。除Sephadex G-25 Medium凝胶脱盐与Fractoge EMD BioSEC凝胶脱盐间Na^(+)去除率无统计学意义(P=0.90)外,其他4种方法间Na+去除率存在统计学意义。甘氨酸在超滤脱盐时去除率最低,为(95.78±0.42)%,Fractogel EMD BioSEC凝胶脱盐去除率最高,为(99.81±0.08)%。除超滤脱盐外,其他4种脱盐方法间甘氨酸去除率无统计学意义。柠檬酸根离子在5种方法间去除率均无统计学意义(P=0.85)。对于FⅧ成分的影响方面:超滤脱盐FⅧ∶C、VWF∶Ag、VWF∶Ac及蛋白回收率最高,分别为(18.34±1.99)IU/mL、(11.81±0.33)IU/mL、(12.26±0.58)IU/mL、(97.13±1.37)%。5种方法脱盐前后VWF∶Ac/VWF∶Ag无明显变化。SDS-PAGE及VWF多聚体分析表明,不同脱盐方法对蛋白组成种类影响不明显。结论尽管不同方式脱盐对FⅧ蛋白组成种类无明显影响,但脱盐效果存在差异,不同方式脱盐对蛋白回收率、FⅧ∶C、VWF∶Ag及VWF∶Ac影响显著。蛋白处理过程中,对于脱盐方式的选择应给予足够重视。

血浆制品中凝血因子Ⅷ含量及抽检结果的影响因素分析

目的探讨献血者的血型、性别、年龄及其交互作用如何影响冷沉淀和新鲜冰冻血浆中凝血因子Ⅷ(FⅧ)的含量及其质量抽检结果,以期为血液制品质量控制和临床输血策略的优化提供科学依据。方法回顾性分析2022年—2023年间本站对456袋冷沉淀和128袋新鲜冰冻血浆的质量监测数据,并利用卡方检验、独立样本t检验、ANOVA、LSD检验以及多元线性和二元logistic回归等方法对各组数据进行分析。结果冷沉淀与新鲜冰冻血浆中FⅧ的不合格率显著高于其他质控项目。冷沉淀中AB型的FⅧ含量最高,O型最低;新鲜冰冻血浆中O型FⅧ含量同样最低。冷沉淀中青年组的FⅧ含量最低,中老年组最高;新鲜冰冻血浆中青年组的FⅧ含量显著低于中年组与中老年组。血型与年龄均独立影响冷沉淀及新鲜冰冻血浆中FⅧ含量,血型、性别与年龄的交互作用均未对其产生显著影响。冷沉淀中AB型及年龄的增长是FⅧ含量的正向影响因素,而O型为负向影响因素;新鲜血浆中O型同样表现为负向影响,中年及老年组为正影响因素。此外,O型血与冷沉淀和新鲜冰冻血浆的不合格风险显著相关。结论FⅧ含量的不合格率在冷沉淀及新鲜冰冻血浆质量控制项目中最高,血型和年龄是影响FⅧ含量的关键因素,其中O型血显著增加了冷沉淀及新鲜冰冻血浆FⅧ不合格的风险。

广东省重组人凝血因子Ⅷ药物评价与遴选专家共识

重组人凝血因子Ⅷ为众多权威指南推荐的血友病A首选替代治疗药物。重组人凝血因子Ⅷ各品种能够暂时替代患者体内缺失的凝血因子Ⅷ,具有相同的药物作用机制,但在经济性、药学特性及其他属性等方面存在差异。为此,广东省药学会药物警戒专业委员会组织药学与临床专家共同制定了《广东省重组人凝血因子Ⅷ药物评价与遴选专家共识》,对我国已上市的6种重组人凝血因子Ⅷ从药学特性、有效性、安全性、经济性及其他属性等五大方面进行多维度评价,为医疗机构药品遴选及临床合理用药提供参考依据。

不同条件储存制备对新鲜冰冻血浆凝血因子Ⅷ活性的影响

目的探讨不同条件储存制备新鲜冰冻血浆(FFP)的凝血因子Ⅷ(FⅧ)活性的变化。方法随机选取捐献全血的无偿献血者102名,将采集的全血在不同条件下储存制备新鲜冰冻血浆,分为A组(储存温度为20~24℃)、B组(储存温度为2~6℃后复温至37℃)、C组(储存温度为2~6℃血袋垂直)、D组(储存温度为2~6℃),分别于储存8 h、12 h和24 h各检测一次FⅧ活性。结果新鲜冰冻血浆的FⅧ活性随着制备时间的延长而呈下降趋势,其中以A组的FⅧ检测水平最高,其次为B组>C组>D组;A组全血在储存24 h后制备FFP的FⅧ含量合格率最高,为100.00%,明显高于B、C、D三组;上述结果差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论不同条件下储存制备新鲜冰冻血浆的凝血因子Ⅷ活性会产生明显变化,以20~24℃室温条件下全血储存24 h内制备FFP的合格率最高。

人凝血因子Ⅷ生产场地变更的质量可比性分析

目的对生产场地变更前后生产的人凝血因子Ⅷ(factorⅧ,FⅧ)开展质量可比性研究。方法对生产场地变更前后生产的FⅧ定量质量指标、相关杂质和稳定性数据进行比较研究。结果场地变更前后生产的FⅧ定量质量指标均符合标准要求,有关杂质包括铝残留量、磷酸三丁酯残留量、聚山梨酯80残留量、聚乙二醇(PEG)残留量均符合标准要求,其他杂质包括人纤维蛋白原、纤维结合蛋白、纤溶酶原、IgA、IgM、IgG含量均极低且质量相当,VWF(血管性血友病因子)在场地变更前后含量无明显变化,但明显高于国内其他厂家市售产品。加速稳定性和长期稳定性试验结果表明FⅧ效价在方法学误差范围内存在波动,结果均符合标准要求。结论FⅧ生产场地变更未对其制品质量产生影响。

重组人凝血因子Ⅷ在重型血友病A患者中的药代动力学研究

目的:应用myPKFiT计算重组人凝血因子Ⅷ在重型血友病A患者中的药代动力学参数,为血友病A患者提供个体化治疗方案。方法:纳入自2021年1月至2021年12月共42名应用重组人凝血因子Ⅷ进行预防治疗的重型血友病A患者,采用myPKFiT计算FⅧ药代动力学参数,并制定血友病A患者个体化治疗方案。结果:42例重型血友病A患者中位年龄31(16-50)岁,平均体重为54.0±9.9 kg,FⅧ的半衰期为12.05±1.6 h,FⅧ活性至基线1%以上的时间为62.3±15.3 h,应用myPKFiT指导后0出血率由39%显著提高至49%,年出血率由3.6±2.5降低至2.1±2.0,年关节出血率由3.2±2.2降低至1.9±0.9,均有统计学差异(P<0.05)。结论:重型血友病A患者通过myPKFiT测定药代动力学参数指导个体化治疗可以显著降低患者的年出血率和年关节出血率。

凝血因子Ⅷ抑制物阳性血友病患者APTT纠正试验结果分析

目的:分析凝血因子Ⅷ抑制物阳性血友病患者APTT纠正试验结果,提高APTT纠正试验在凝血因子Ⅷ抑制物筛查中的价值。方法:收集并稀释制备不同滴度凝血因子Ⅷ抑制物血浆80份进行常规的即刻及37℃孵育2 h APTT纠正试验,选取15份样本进行即刻和常温孵育15 min、30 min、1和2 h及37℃孵育30 min、1和2 h APTT纠正试验。结果:APTT纠正试验结果与凝血因子Ⅷ抑制物滴度呈明显的相关性,ROC曲线下37℃孵育2 h APTT纠正试验判断有无凝血因子Ⅷ抑制物最佳诊断界点是43.8 s(敏感度85.90%,特异度100%),区分高滴度与低滴度Ⅷ抑制物的最佳诊断界点为52.4 s(敏感度98.18%,特异度95.65%)。即刻APTT无法纠正的临界凝血因子Ⅷ抑制物滴度为5.14 BU/ml,37℃孵育2 h APTT不能纠正对应的凝血因子Ⅷ抑制物的滴度为1.31 BU/ml。对不同时间和温度下APTT纠正试验结果进行配对t检验,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:APTT纠正试验结果可作为凝血因子Ⅷ抑制物的筛查指标,较低Ⅷ抑制物滴度时呈明显的对温度-时间的依赖性,血友病患者即刻APTT无法纠正则应警惕较高滴度凝血因子Ⅷ抑制物存在的可能。

血浆蛋白Z及凝血因子Ⅷ水平活性检测在小儿原发性肾病综合征诊断中的应用

目的探讨血浆蛋白Z及凝血因子Ⅷ水平活性检测在小儿原发性肾病综合征诊断中的应用。方法选取2020年1月至2022年1月期间来该院实施小儿原发性肾病综合征救治患儿50例(25例急性期及25例恢复期)作为观察对象,将其确立为观察组;同时段选取来该院健康体检儿童50例作为对照组,并对两组观察对象抽取静脉血液,实施血浆蛋白Z(酶联免疫吸附法)及凝血因子Ⅷ水平活性(磁珠法)检测。随即比对两组观察对象血浆蛋白Z水平指数及凝血因子Ⅷ水平活性。结果通过观察结果可知,观察组血浆蛋白Z指数(0.48±0.37)显著低于对照组(1.59±0.26),凝血因子Ⅷ指数(149.58±23.18)则显著高于对照组(120.65±14.37),差异有统计学意义(P<0.05);通过数据结果可知,恢复期血浆蛋白Z(1.08±0.21)显著高于急性期(0.31±0.10),而恢复期凝血因子Ⅷ水平(135.65±14.16)显著低于急性期(159.58±23.08),组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论相较于健康儿童,小儿原发性肾病综合征患儿自身血浆蛋白Z指数较低,凝血因子Ⅷ水平指数较高,且小儿原发性肾病综合征患儿急性发作期与恢复期血浆蛋白Z指数和凝血因子Ⅷ水平也有明显的差异。通过对两项指标的检测研究,可以明确判定小儿原发性肾病综合征病症发展情况,便于为后续治疗提供依据。

使用药代动力学管理工具myPKFiT预测中国血友病A患者凝血因子Ⅷ活性

目的在中国血友病A患者中评估用于指导使用无血浆/血清方法制备的基因重组人凝血因子Ⅷ剂量的管理工具myPKFiT对维持凝血因子Ⅷ活性水平至目标阈值和药代动力学参数的预测效果。方法以中国既往接受过治疗的血友病A患者的疗效和安全性的研究(登记号:CTR20140434)中的9例重型血友病A患者为研究对象,应用myPKFiT对维持一定目标凝血因子Ⅷ活性阈值下的重组人凝血因子Ⅷ剂量进行预测,并评估myPKFiT对个体药代动力学参数的预测性能。结果对于基于6种稀疏采样和2种给药方案的共12个方案组合,57%~88%的受试者可在至少80%的给药间隔内保持在目标凝血因子Ⅷ活性阈值1 U/dl(1%)之上。使用myPKFiT从稀疏采样获得的清除率及至凝血因子Ⅷ活性1%时间的估计值与从密集采样中获得的数据相当。结论myPKFiT能够提供足够的剂量预测值以使中国重型血友病A患者的凝血因子Ⅷ活性水平维持在稳态下的目标阈值以上,且对清除率和至凝血因子Ⅷ活性1%的时间等关键药代动力学参数具有良好的预测性能。

凝血因子Ⅷ、血小板反应蛋白1及可溶性Axl受体酪氨酸激酶在慢性肾小球肾炎患者中的表达情况及诊断价值

目的分析慢性肾小球肾炎(CGN)患者血浆凝血因子Ⅷ(FⅧ)、血小板反应蛋白1(TSP-1)及可溶性Axl受体酪氨酸激酶(sAxl)水平,并探讨三者对CGN的诊断价值。方法选取63例CGN患者作为研究组,55例健康体检者作为对照组。比较两组研究对象的一般临床资料,以及血浆FⅧ活性、TSP-1水平、sAxl水平。分析CGN患者血浆FⅧ活性、TSP-1水平和sAxl水平与肾功能的相关性。采用受试者工作特征曲线分析FⅧ、TSP-1及sAxl对CGN的诊断价值。结果与对照组相比,研究组患者的24 h尿蛋白水平、血尿素氮水平、血肌酐水平、血尿酸水平、血浆FⅧ活性、血浆TSP-1水平、sAxl水平均升高,肾小球滤过率(GFR)降低(均P<0.05)。CGN患者血浆FⅧ活性及TSP-1、sAxl水平与血尿素氮水平、血肌酐水平、血尿酸水平均呈正相关,与GFR均呈负相关(均P<0.05)。血浆FⅧ活性、TSP-1水平、sAxl水平单独检测及联合检测诊断CGN的灵敏度分别为87.30%、77.78%、85.71%、84.13%,特异度分别为56.36%、50.91%、58.18%、61.82%,曲线下面积分别为0.724、0.719、0.702、0.793。结论CGN患者血浆FⅧ活性及TSP-1、sAxl水平明显升高,且与肾功能具有一定相关性,三者联合检测对CGN具有较高的诊断价值。

血清IgM、凝血因子Ⅷ与IgA肾病患者肾脏预后的关系

目的探讨血清免疫球蛋白M(IgM)、凝血因子Ⅷ(FⅧ)与IgA肾病患者肾脏预后的关系。方法选取2017年6月至2019年6月该院收治的112例IgA肾病患者作为观察组,另外选取120例同期来该院体检的健康人作为对照组。根据肾小管间质损害程度,将IgA肾病患者分为轻度组(36例)、中度组(49例)和重度组(27例)。连续随访3年,根据IgA肾病患者肾脏预后情况,分为预后良好组(81例)和预后不良组(31例)。采用酶联免疫吸附试验检测血清IgM、FⅧ水平;采用受试者工作特征曲线评估血清IgM、FⅧ对IgA肾病患者肾脏预后的预测价值;采用多因素Logistic回归分析影响IgA肾病患者肾脏预后的危险因素。结果观察组血清IgM水平低于对照组,FⅧ水平高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。重度组血清IgM水平低于中度组、轻度组,血清FⅧ水平高于中度组、轻度组,且中度组血清IgM水平低于轻度组,血清FⅧ水平高于轻度组,差异均有统计学意义(P<0.05)。预后不良组血清IgM水平低于预后良好组,FⅧ水平高于预后良好组,差异均有统计学意义(P<0.05)。血红蛋白<120.0 g/L(OR=2.60,95%CI:1.39~4.87)、24 h尿蛋白定量≥1.5 g/24 h(OR=2.49,95%CI:1.37~4.53)、血肌酐≥106μmol/L(OR=2.36,95%CI:1.35~4.14)、血清IgM<0.81 g/L(OR=3.69,95%CI:1.57~8.66)、血清FⅧ≥174.24%(OR=3.04,95%CI:1.47~6.29)是IgA肾病患者发生肾脏预后不良的独立影响因素(P<0.05)。血清IgM、FⅧ预测IgA肾病患者肾脏预后的曲线下面积(AUC)分别为0.786(95%CI:0.726~0.846)、0.847(95%CI:0.797~0.897),截断值分别为0.81 g/L、174.24%,特异度分别为53.62%、67.43%,灵敏度均为92.12%,二者联合预测的AUC为0.916(95%CI:0.866~0.966),特异度为85.19%,灵敏度为86.97%。结论血清IgM、FⅧ水平与IgA肾病患者的疾病严重程度和肾脏预后显著相关,IgM水平越低、FⅧ水平越高,患者的病情越严重,预后越差,且二者联合检测有利于IgA肾病患者肾脏预后的判断,有临床推广应用价值。

免疫性复发性流产患者CD31、CD34及FⅧ表达量变化及其与病理学特征的关系

目的探讨与分析免疫性复发性流产患者CD31、CD34及FⅧ表达量变化及其与病理学特征的关系。方法2021年2月到2022年9月选择在安阳市妇幼保健院诊治的非人为原因流产100例作为研究组,同期选择在安阳市妇幼保健院人工流产患者100例作为对照组,检测两组CD31、CD34、FⅧ表达量情况并进行影响因素分析。结果研究组蜕膜组织CD31、CD34及FⅧ阳性细胞百分率低于对照组(P<0.05)。在两组200例患者中,Spearsman分析显示蜕膜组织中CD31、CD34、FⅧ表达量与免疫性复发性流产都存在相关性(P<0.05)。在两组200例患者中,在免疫性复发性流产作为因变量,以蜕膜组织中CD31、CD34、FⅧ表达量作为自变量,多因素条件Logistic回归显示蜕膜组织中CD31、CD34、FⅧ表达量都为导致免疫性复发性流产发生的重要因素(P<0.05)。结论免疫性复发流产患者多伴随有CD31、CD34及FⅧ的异常表达,免疫性复发性流产患者CD31、CD34及FⅧ表达量变化及其与病理学特征存在明显的相关性。

小儿原发性肾病综合征患儿血浆蛋白Z、凝血因子Ⅷ活性的检验研究

目的分析原发性肾病综合征患儿的检验指标,探讨血浆蛋白Z、凝血因子Ⅷ活性水平的检验意义。方法将本院在2020年10月至2021年10月之间收治的原发性肾病综合征患儿中选取40例作为研究组。保持均衡性抽取同一时间段内的40名健康儿童(对照组),均为健康体检者。对所有儿童检测,纳入血浆蛋白Z水平、凝血因子Ⅷ活性等指标,对不同组别和不同发病阶段患儿体内该水平的差异。结果研究组的血浆蛋白Z与对照组对比可见差异,SPSS分析可见低于对照组,血浆蛋白Z在急性期的含量明显低于恢复期(P<0.05)。研究组凝血因子Ⅷ含量统计学分析差异明显,SPSS分析可见其水平高于对照组,急性期的含量远高于恢复期(P<0.05),均具有统计学意义。结论原发性肾病综合征儿童检验指标可能发生变化,其中以血浆蛋白Z含量变化明显,同时凝血因子Ⅷ活性发生改变。检测上述指标能够分析疾病状态,可作为疾病诊疗和预后分析的依据,具有重要临床研究价值。

血友病A患者凝血因子Ⅷ抑制物产生机制及相关遗传因素研究进展

血友病A是一种发病率为1/5000的出血性疾病,目前主要的治疗方式仍为替代治疗,治疗过程中产生凝血因子Ⅷ(FⅧ)的中和性抗体(FⅧ抑制物)是本病最大的并发症之一,将大大影响疾病治疗效果。抑制物的产生是多因素共同作用的结果,包括遗传因素和非遗传因素,遗传因素是主要因素,非遗传因素为次要因素。遗传因素包括FⅧ基因突变、免疫应答基因多态性、种族、家族史、血型。本文综述血友病A患者FⅧ抑制物产生机制及相关遗传因素的最新进展。

血清4型禽腺病毒Ⅷ蛋白真核表达及其对LMH细胞天然免疫相关基因的影响

【目的】分析血清4型禽腺病毒(FAdV-4)Ⅷ蛋白(ProteinⅧ,pⅧ)对宿主天然免疫相关基因表达的影响,为进一步研究FAdV-4的致病机理提供参考依据。【方法】通过PCR扩增FAdV-4Ⅷ基因编码区序列,与pEF1α-HA载体连接,构建重组表达质粒pEF1α-HA-Ⅷ。用pEF1α-HA-Ⅷ重组表达质粒(试验组)和pEF1α-HA空质粒(对照组)转染LMH细胞,利用Western blotting和间接免疫荧光验证Ⅷ蛋白表达情况,实时荧光定量PCR测定STING、MDA5、TBK1、MAVS、NF-κB、IRF7、IFN-α、INF-β、IL-6、IL-8、IL-15和IL-1β基因的表达水平。【结果】Ⅷ基因开放阅读框(ORF)全长744 bp,共编码247个氨基酸残基,真核表达获得的Ⅷ重组蛋白与鼠源HA标签单克隆抗体产生特异性反应,在34 kD处得到单一条带;间接免疫荧光检测可见绿色荧光,说明Ⅷ重组蛋白在LMH细胞中得到良好表达。与对照组相比,Ⅷ重组蛋白在LMH细胞中表达后,模式受体STING基因的表达水平显著提高5.6倍(P<0.05,下同),MDA5基因的表达水平提高30%;接头蛋白TBK1和MAVS基因表达水平分别较对照组显著提高1.5和2.4倍;转录因子IRF7的表达水平显著提高3.4倍,而NF-κB基因被抑制表达。同时,干扰素(IFN-α和IFN-β)和白介素(IL-6、IL-8、IL-15和IL-1β)的表达水平均上调,IFN-α和IFN-β分别极显著上调19.2和14.4倍(P<0.01),而IL-6、IL-8、IL-15和IL-1β分别显著上调4.1、2.1、6.0和7.9倍。【结论】在LMH细胞中过表达FAdV-4 pⅧ,STING、MDA5、TBK1、MAVS、IRF7、IFN-α、IFN-β、IL-6、IL-8、IL-15和IL-1β等天然免疫相关基因呈上调表达,表明Ⅷ蛋白对FAdV-4激发宿主的天然免疫具有一定促进作用。

凝血因子Ⅷ和凝血因子Ⅸ活性检测影响因素的分析

目的 验证离心力对凝血因子FⅧ(FⅧ)活性和凝血因子FⅨ(FⅨ)活性检测的影响。方法 用全自动血凝分析仪测定室温700 g、1500 g、396 g和4℃1000 g、1500 g离心15 min以及4℃2700 g离心10 min,不同离心力条件下即刻和冷冻后48 h FⅧ和FⅨ的活性并进行数据统计分析。结果 6种不同离心方法得到的血浆,不管是立即检测还是冻存后检测,FⅧ和FⅨ的活性水平在不同离心力条件下没有显著性差异(P>0.05),同一离心力条件下冷冻后FⅧ活性水平跟即刻检测结果有统计学差异(P<0.05),同一离心条件下FⅨ活性在即刻和冷冻后检测结果无统计学差异(P>0.05)。结论 从离心机类型、离心力转速到离心时间和离心温度多方面分析,在一定离心力范围内不同离心力对FⅧ活性和FⅨ活性检测的影响不大,冻融会影响凝血因子Ⅷ活性水平检测,凝血因子Ⅸ活性检测不受冻融影响。

Nei核酸内切酶Ⅷ样蛋白1对过氧化氢诱导的晶状体上皮细胞凋亡与自噬的影响

目的探究Nei核酸内切酶Ⅷ样蛋白1(NEIL1)对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的晶状体上皮细胞(LECs)凋亡与自噬的影响。方法以年龄相关性白内障(ARC)患者、接受透明晶状体摘除术的黄斑前膜患者的晶状体前囊膜样本和晶状体上皮细胞系SRA01/04细胞为研究对象,采用RT-PCR实验检测NEIL1 mRNA表达。将SRA01/04细胞随机分为对照组、OE-Vector组和OE-NEIL1组,采用RT-PCR和Western blot检测过表达效率;将细胞随机分为对照组、H_(2)O_(2)组、OE-Vector H_(2)O_(2)组、OE-NEIL1 H_(2)O_(2)组,采用CCK-8法检测细胞活力,Western blot检测自噬相关蛋白(ATG7、P62、Beclin1、LC3-I和LC3-II)和凋亡相关蛋白(Bax和Bcl-2)的表达,荧光染色检测细胞凋亡与线粒体膜电位情况。结果ARC患者晶状体前囊膜样本中的NEIL1 mRNA表达显著低于黄斑前膜患者,且H_(2)O_(2)组SRA01/04细胞中NEIL1 mRNA的表达同样低于对照组(均为P<0.05)。RT-PCR与Western blot检测结果显示,OE-NEIL1组SRA01/04细胞中NEIL1 mRNA和蛋白表达均显著高于OE-Vector组(均为P=0.000)。与对照组相比,H_(2)O_(2)组SRA01/04细胞中细胞活力显著降低;Bax蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下调;Mito-Tracker标记活细胞数显著减少,Annexin V-FITC标记的凋亡细胞数显著增多,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。与OE-Vector H_(2)O_(2)组相比,OE-NEIL1 H_(2)O_(2)组SRA01/04细胞中细胞活力显著升高;自噬相关蛋白(ATG7、P62、Beclin1、LC3-I和LC3-II)表达均显著上调;Bax蛋白表达下调,Bcl-2蛋白表达上调;Mito-Tracker标记的活细胞数增加,Annexin V-FITC标记的凋亡细胞数减少,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论在H_(2)O_(2)诱导氧化应激条件下,NEIL1可通过促进LECs的自噬,维持LECs内环境稳定,增加其细胞活力从而减少LECs凋亡,参与ARC的发生发展。

血源性人凝血因子Ⅷ治疗血友病A患者的有效性及安全性评价

目的评价血浆源性人凝血因子Ⅷ(coagulation factorⅧ,FⅧ)在治疗血友病A患者中的有效性及安全性。方法本文采用多中心、单臂、开放性设计开展Ⅲ临床试验,5家研究中心共入组54例患者,根据受试者体重、病情严重程度等因素计算FⅧ输注量,计算首次输注后10 min FⅧ活性输注效率值作为主要疗效指标,首次输注后24 h内对受试者出血症状与体征改善作为次要疗效指标进行有效性评分。通过记录不良事件,在治疗后d90及d180检测病原微生物指标及凝血因子Ⅷ抑制物来进行安全性评价。结果54名受试者首次输注后10 min的FⅧ活性输注效率均值为171.9%,中位数为169.5%,均高于设定的目标值100%。首次输注后24 h内对受试者出血症状与体征改善进行评分,其中“显效”19例(35.2%),“良效”35例(64.8%),临床总有效率达到100%。5名(9.3%)受试者发生6例次与药物相关的不良反应。治疗后d90、d180检测乙型肝炎表面抗原、丙型肝炎抗体、HlV抗体、梅毒螺旋体抗体、凝血因子Ⅷ抑制物,未发现阴性转阳性病例。结论该FⅧ制剂,输注后能在短期内显著提高血友病A患者的FⅧ活性水平、输注效率高,能达到较好治疗水平,并能有效控制和缓解出血症状和体征,总体安全性良好。

遗传性联合凝血因子Ⅴ和Ⅷ缺乏症的诊疗现状

遗传性联合凝血因子Ⅴ和Ⅷ缺乏症(F5F8D)是一种罕见的常染色体隐性遗传性疾病,发病率约为1/百万,无性别差异。该病主要是LMAN1基因及MCFD2基因突变引起。临床上主要表现为轻至中度的出血倾向。实验室检查为FⅤ和FⅧ的活性同时下降所致的凝血酶原时间及活化部分凝血活酶时间延长。本文针对该病的发病机制、临床表现及诊疗进展等展开综述,以期提高儿科医师对该疾病的认识。