凝血因子Ⅸ/凝血因子Ⅹ结合蛋白家族的研究进展

凝血因子Ⅸ /Ⅹ结合蛋白家族是近来发现的C型动物凝集素超家族中一个亚家族 .它们存在于蝰科蛇毒中 ,不具有酶活性 ,通过与凝血因子Ⅸ或凝血因子Ⅹ结合来延长凝血时间 .在钙离子存在下结合在凝血因子Ⅸ /Ⅹ分子中γ 羧基谷氨酸区域 .它们彼此之间具有很高的序列同源性 ,都是由两条同源的肽链通过一对二硫键相连 .两条肽链都具有C型糖识别区的二硫键构型 ,各含一个钙离子结合位点 .其中habu凝血因子Ⅸ /Ⅹ结合蛋白的晶体结构已经测定 ,除掉相互交叠的中心环外 。

双抗体夹心ELISA法测定人凝血因子IX蛋白

用双抗体夹心ELISA法测定人凝血因子IX蛋白。在转入了外源人凝血因子IX基因的CHO细胞和HSF细胞的培养液中均测得一定量的IX因子蛋白,其量相当于正常人血浆IX因子蛋白的0.89%～3.81%,而对照细胞均为阴性结果。对一例血友病B患者(IX:C<0.1%)的分析结果表明,其血浆中含有的IX因子蛋白量相当于正常人的52.3%,因而将此病例归属于血友病B^R型。本法灵敏度高、特异性强、重复性好,可与一期法相互补充,应用于临床血友病B的诊断、分类、家系分析及携带者的检出。

成肌细胞介导的hF Ⅸ蛋白在小鼠体内的持续表达

目的：以小鼠C2C12成肌细胞为对象开展血友病乙基因治疗研究。方法：首先将构建好的带有MCK增强手和hCMV启动子的反转录病毒载体G1NaMCⅨ转染PA317细胞，并用其上情感染C2C12细胞，所得克隆细胞在离体分别进行了Southern、Northern、Western鉴定。进一步用带有hFⅨcDNA的C2C12细胞进行C3H小鼠活体表达研究。结果：hFⅨ活体表达量与细胞注射数量、细胞离体表达量呈正相关，使用免疫抑制剂可提高hFⅨ活体表达量并延长表达时间；较长时间间隔后进行重复注射亦可延长hFⅨ表达时间。结论：同种异体成肌细胞存在免疫排斥现象，较长时间间隔重复注射可提高移植细胞存活率，从而有助于实现成肌细胞介导的血友病乙基因治疗。