基于miR-139/Wnt/β-catenin信号通路探讨参附注射液对慢性心力衰竭大鼠心肌纤维化的保护作用

目的探讨参附注射液对盐酸异丙肾上腺素(isoprenaline hydrochloride,ISO)诱导的慢性心力衰竭(chronic heart failure,CHF)大鼠心肌纤维化的作用与机制。方法采用随机数字表法将45只SD大鼠随机分为正常组9只,造模组36只,采用ISO背部皮下多点注射14天制备CHF大鼠模型,再正常饲养14 d通过模型验证和评价,期间死亡大鼠5只,未成模大鼠4只。将造模成功的27只大鼠按随机数字表法分为3组:模型组(腹腔注射6 mL·kg^(-1)氯化钠注射液+灌胃10 mL·kg^(-1)蒸馏水)、参附注射液组(腹腔注射6 mL·kg^(-1)参附注射液+灌胃10 mL·kg^(-1)蒸馏水)、卡托普利组(腹腔注射6 mL·kg^(-1)生理盐水+灌胃10 mL·kg^(-1)蒸馏水,蒸馏水含8.8 mg·kg^(-1)卡托普利,相当于临床等效量)。药物干预15 d后,检测各组大鼠心功能及心肌纤维化的相关指标:超声心动图、体质量、心脏质量指数及左心室质量指数;ELISA法检测氨基末端脑钠肽前体(N-terminal pro brain natriuretic peptide,NT-proBNP);HE染色、Masson染色检测心肌组织病理形态及纤维化状态;RT-qPCR检测心肌组织中miR-139、Wnt家族成员3a(Wnt family member 3a,Wnt3a)、β-连环蛋白(β-catenin)、糖原合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase 3β,GSK3β)、Ⅰ型胶原蛋白(typeⅠcollagen,Col-Ⅰ)、Ⅲ型胶原蛋白(typeⅢcollagen,Col-Ⅲ)及α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)mRNA的表达;Western blot检测心肌组织中Wnt3a、β-catenin、GSK3β、Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、α-SMA、MMP-2、MMP-9蛋白表达。结果与正常组比较,模型组左室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF)、左室短轴缩短率(left ventricular fraction shortening,LVFS)、体质量降低(P<0.01),左室舒张末期内径(left ventricular end diastolic diameter,LVEDD)、左室收缩末期内径(left ventricular end systolic diameter,LVESD)、NT-proBNP、心脏质量指数、左心室质量指数升高(P<0.01),miR-139表达量下降(P<0.01),Wnt3a、β-catenin、GSK3β、Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、α-SMA、MMP-2、MMP-9蛋白和mRNA表达升高(P<0.01);细胞排列紊乱,心肌纤维化明显,伴有明显的炎症浸润。与模型组比较,参附注射液组LVEF、LVFS、体质量升高(P<0.01或P<0.05),LVEDD、LVESD、NT-proBNP、心脏质量指数、左心室质量指数降低(P<0.01),miR-139表达量升高(P<0.01),Wnt3a、β-catenin、GSK3β、Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、α-SMA、MMP-2、MMP-9蛋白和mRNA表达降低(P<0.01);细胞排列趋于整齐,纤维结缔组织增生及炎症细胞浸润现象减少,胶原纤维沉积减少,纤维化程度减轻。结论参附注射液能改善CHF大鼠心功能及心肌纤维化状态,其机制可能与调控miR-139/Wnt/β-catenin信号通路有关。

缺氧缺血性脑病新生儿血清miR-139-5p,HDAC4和GFAP表达水平及其临床价值研究

目的分析血清微小核糖核酸(micro RNA,miR)-139-5p,组蛋白去乙酰化酶4(histone deacetylase 4,HDAC4)和胶质纤维酸性蛋白(glialfibrillary acidic protein,GFAP)与新生儿缺氧缺血性脑病(hypoxic-ischemic encephalopathy,HIE)脑损伤严重程度的关系。方法选取2017年1月~2022年3月广元市中心医院分娩的HIE新生儿72例为研究对象(研究组);同期健康的足月新生儿75例为对照组。实时荧光定量PCR检测血清中miR-139-5p,HDAC4表达水平。酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清GFAP水平。Logistic回归分析影响HIE患儿重度脑损伤发生的因素。结果与对照组相比,研究组血清GFAP(1.30±0.37ng/L vs 0.50±0.15ng/L),HDAC4相对表达水平(2.05±0.39 vs 1.02±0.21)升高,miR-139-5p相对表达水平(0.63±0.14 vs 1.01±0.22)和NBNA评分(33.20±1.43分vs 39.85±2.23分)降低,差异具有统计学意义(t=17.304,20.046,12.436,21.424,均P<0.05);与轻中度组相比,重度组血清GFAP(1.61±0.47ng/L vs 1.16±0.33ng/L),HDAC4(2.43±0.37 vs 1.87±0.40)相对表达水平升高,miR-139-5p相对表达水平(0.38±0.10 vs 0.74±0.16)和NBNA评分(30.52±1.54分vs 34.46±1.38分)降低,差异具有统计学意义(t=4.690,5.669,9.900,10.884,均P<0.05)。Logistic回归分析显示,miR-139-5p低表达,HDAC4高表达,低NBNA评分,低出生后1 min内Apgar评分是影响HIE患儿重度脑损伤发生的危险因素(Waldχ^(2)=5.772~6.969,OR=1.519~1.709,均P<0.05)。Pearson分析显示,血清miR-139-5p表达水平与GFAP,HDAC4呈负相关(r=-0.416,-0.579,均P<0.05),血清HDAC4表达水平与GFAP呈正相关(r=0.437,P<0.05)。Spearman分析显示,血清mi R-139-5p表达水平与NBNA评分、出生后1 min内Apgar评分、出生后5 min内Apgar评分呈正相关(r=0.398,0.367,0.348,均P<0.05);血清HDAC4表达水平与NBNA评分、出生后1 min内Apgar评分、出生后5 min内Apgar评分呈负相关(r=-0.364,-0.345,-0.332,均P<0.05)。结论HIE患儿血清中miR-139-5p表达降低,HDAC4表达升高,mi R-139-5p,HDAC4与HIE患儿脑损伤严重程度有关。

miR-139-5p增强二甲双胍抑制正常糖培养下人胰腺癌细胞系PANC-1增殖

目的研究不同葡萄糖浓度培养条件下,二甲双胍(Met)对人胰腺癌细胞系PANC-1增殖的影响,并确定miR-139-5p是否参与此过程。方法采用梯度浓度的二甲双胍(0、5、10、20 mmol/L)分别在25 mmol/L葡萄糖[高糖(HG)组]或5 mmol/L葡萄糖[正常糖(NG)组]培养条件下处理PANC-1细胞。培养48 h后,检测细胞的增殖、凋亡、迁移及细胞周期。通过RT-qPCR检测miR-139-5p的表达情况,同时将miR-139-5p模拟物转染到PANC-1细胞中以明确其作用。结果无论是在HG,还是NG培养条件下,二甲双胍均可抑制PANC-1细胞的增殖、促进细胞凋亡(P<0.05),并诱导细胞周期阻滞在S期和G 2/M期(P<0.05)。在NG培养条件下,二甲双胍的抗增殖和促凋亡作用更显著(P<0.05)。此外,仅在NG培养条件下,二甲双胍使miR-139-5p的表达上调(P<0.001),且miR-139-5p模拟物可以抑制该培养条件下无二甲双胍干预下PANC-1细胞的增殖(P<0.05),并增强5 mmol/L二甲双胍的抗增殖作用和10 mmol/L二甲双胍的促凋亡作用(P<0.05)。结论在正常糖培养条件下,二甲双胍对PANC-1细胞增殖的抑制、对细胞凋亡的诱导以及细胞周期阻滞作用均较高糖培养条件下更为显著。这些作用部分可能与上调miR-139-5p有关。

动态心电图联合血清组蛋白去乙酰化酶4和微小RNA-139-5p在急性心肌梗死诊断和预后评估中的应用价值

目的探究动态心电图(DCG)联合血清组蛋白去乙酰化酶4(HDAC4),微小RNA-139-5p(miR-139-5p)在急性心肌梗死(AMI)诊断和预后评估中的应用价值。方法选取2021年1月至2023年1月衡水市人民医院收治的AMI患者102例,根据出院后6个月内是否发生心血管不良事件(MACE)分为良好组66例和不良组36例;另选同期健康体检者70例为对照。所有研究对象行DCG检查;采用酶联免疫法检测血清HDAC4水平,qRT-PCR法检测血清miR-139-5p表达。ROC曲线预测血清HDAC4、miR-139-5p及DCG联合血清HDAC4、miR-139-5p对AMI诊断及预后的价值;四表格法分析DCG对AMI诊断及预后的价值。结果AMI患者血清HDAC4水平显著低于健康体检者,miR-139-5p水平显著高于健康体检者(P<0.05)。良好组患者血清HDAC4水平高于不良组患者,miR-139-5p水平低于不良组患者(P<0.05)。HDAC4诊断AMI的AUC为0.789,敏感度为63.73%,特异度为82.86%;miR-139-5p诊断AMI的AUC为0.791,敏感度为73.53%,特异度为81.43%;DCG诊断AMI的AUC为0.782,敏感度为73.53%,特异度为82.86%。DCG联合血清HDAC4、miR-139-5p水平诊断AMI的AUC为0.916,显著高于单项检测(Z_(HDAC4-联合)=3.735,P<0.001,ZmiR-139-5p-联合=3.467,P<0.001;ZDCG-联合=4.444,P<0.001)。HDAC4诊断AMI患者预后的AUC为0.898,敏感度为80.56%,特异度为86.36%;miR-139-5p诊断AMI患者预后的AUC为0.857,敏感度为77.78%,特异度为80.30%;DCG诊断AMI患者预后的AUC为0.790,敏感度为77.78%,特异度为80.30%;DCG联合血清HDAC4、miR-139-5p水平诊断AMI患者预后的AUC为0.931,显著高于单项检测(Z_(HDAC4-联合)=2.005,P=0.045,ZmiR-139-5p-联合=2.707,P=0.007;ZDCG-联合=3.969,P<0.001)。结论DCG联合血清HDAC4、miR-139-5p水平在AMI的诊断和预后评估中具有重要应用价值。

miRNA-139-5p通过靶向调控CXCR4/CXCL12信号通路逆转非小细胞肺癌A549细胞顺铂耐药

目的:探讨miRNA-139-5p对非小细胞肺癌A549细胞顺铂(cisplatin,DDP)耐药的影响,及其可能的分子机制。方法:采用DDP浓度递增法诱导A549细胞建立DDP耐药细胞株A549/DDP,将miR-139-5p mimics、无义序列(mimics-NC)、CXCR4过表达质粒(pcDNA3.1-CXCR4)、pcDNA3.1空载质粒(Vector)转染至A549/DDP细胞中,将细胞分为mimics-NC组(转染无义序列)、mimics组(转染miR-139-5p mimics)、mimics+Vector组(共转染miR-139-5p mimics和空载质粒)和mimics+CXCR4组(共转染miR-139-5p mimics和CXCR4过表达质粒),另设置空白对照组(blank)。不同浓度DDP处理,MTT法检测细胞增殖活性,并计算IC 50值和耐药指数(resistance index,RI);qRT-PCR法检测细胞中miR-139-5p和CXCR4 mRNA表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot法检测细胞中耐药相关蛋白P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)及CXCR4/CXCL12信号通路相关蛋白表达水平;双荧光素酶报告基因实验验证miR-139-5p与CXCR4的靶向关系。结果:不同浓度DDP处理24 h后,耐药株A549/DDP及其亲本A549细胞IC 50值分别为(208.87±27.89)μmol/L和(31.66±6.30)μmol/L,RI=6.59。与亲本A549细胞比较,耐药株A549/DDP中miR-139-5p的表达水平明显降低(P<0.05),而CXCR4 mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。与mimics-NC组比较,mimics组A549/DDP细胞增殖活性明显降低(P<0.05),细胞凋亡率明显升高(P<0.05),细胞中CXCR4 mRNA和蛋白以及P-gp、MRP1、PI3K(p110α)和p-AKT/AKT等蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。与mimics+Vector组比较,mimics+CXCR4组A549/DDP细胞增殖活性显著升高(P<0.05),细胞凋亡率显著降低(P<0.05),而细胞中CXCR4、P-gp、MRP1、PI3K(p110α)和p-AKT等蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实,miR-139-5p靶向负调控CXCR4表达。结论:miRNA-139-5p通过靶向下调CXCR4表达,提高非小细胞肺癌DDP耐药细胞株A549/DDP对DDP的药物敏感性。

miR-139-5p靶向Notch1抑制前列腺癌细胞上皮间质转化与转移

目的 探讨miR-139-5p靶向调节Notch1表达对前列腺癌(PCa)细胞上皮间质转化(EMT)和转移能力的影响。方法 收集福建医科大学附属泉州第一医院泌尿外科手术切除的PCa组织标本,购买PCa细胞系,分别以良性前列腺增生(BPH)标本和人前列腺上皮细胞系为对照。采用qRT-PCR实验和Western-blot实验分别检测组织和细胞中miR-139-5p和Notch1的表达;采用双荧光素酶报告实验验证miR-139-5p与Notch1的靶向关系;采用Western-blot实验检测细胞EMT标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和Vimentin蛋白水平;采用Transwell实验检测细胞迁移能力;采用裸鼠尾静脉注射肿瘤细胞的方式建模,评估肺部肿瘤转移灶的情况。结果 在组织学和细胞水平上,与BPH组织比较,前列腺癌miR-139-5p低表达,而Notch1高表达,差别有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,高表达miR-139-5p的PC-3细胞E-cadherin表达升高,N-cadherin和Vimentin表达降低;Transwell迁移实验每视野穿膜细胞数更少;裸鼠肺转移模型中平均肺转移瘤病灶数目更少,差别有统计学意义(P<0.05)。miR-139-5p mimics转染同时过表达Notch1,与单纯miR-139-5p mimics转染比较,E-cadherin水平降低,而N-cadherin和Vimentin水平升高,Transwell迁移实验中穿膜细胞数也增加,差别有统计学意义(P<0.05)。过表达miR-139-5p降低PC-3细胞Notch1的mRNA和蛋白表达水平。双荧光素酶报告实验结果显示,野生型Notch1的PC-3细胞中,转染miR-139-5p mimics组细胞荧光活性显著低于miR-NC处理组,差别有统计学意义(P<0.05)。结论 miR-139-5p在PCa中低表达,可通过上调其表达靶向抑制Notch1,从而抑制PCa细胞EMT和远处转移。

miR-139-5p在老年胃癌中的表达及其与患者临床病理特征和预后关系

目的:探讨miR-139-5p在老年胃癌中的表达及其与患者临床病理特征和预后关系。方法:选取我院收治的38例老年胃癌患者(年龄>65岁)为研究对象,采用Real-time PCR法检测患者癌组织、淋巴结和癌旁正常胃组织中miR-139-5p、转录因子4(TCF4)表达水平。应用免疫组织化学法检测胃癌组织和癌旁正常胃组织中TCF4蛋白表达水平。分析比较miR-139-5p、TCF4表达水平与胃癌患者临床病理特征的关系。同时采用生物信息法分析TCGA数据库中胃癌患者的预后数据,比较TCF4高低表达组患者总生存(OS)和无疾病进展生存(DFS)是否存在差异。结果:正常胃组织和胃癌组织中miR-139-5p相对表达量分别为-3.06±1.43和-4.09±2.13,差异有统计学意义(P=0.016)。未转移淋巴结和转移淋巴结中miR-139-5p相对表达量分别为0.25±1.64和-1.59±1.67,差异有统计学意义(P=0.001)。转录因子4(TCF4)基因3’-UTR区域ACUGUAC序列与miR-139-5p 5’-UTR区域UGACAUC结合紧密。提示TCF4可能为miR-139-5p的靶基因。Real-time PCR结果显示,TCF4基因在胃癌组织和转移淋巴结组织中的表达水平显著高于对应的癌旁组织(P=0.036)和未转移淋巴结组织(P=0.027)。且癌组织中TCF4的表达水平与miR-139-5p呈负相关(r_(pearson)=-0.42,P=0.03)。免疫组化显示TCF4蛋白主要表达于细胞核和细胞浆,38例患者癌组织中TCF4蛋白阳性26例(68.4%),阴性12例(31.6%)。miR-139-5p表达水平与胃癌患者淋巴结转移(P<0.05)和肿瘤病理分级(P<0.05)有关。TCF4表达水平与胃癌患者淋巴结转移(P<0.05)和肿瘤浸润深度(P<0.05)有关。Log-rank检验显示,TCF4高表达组患者总生存(OS)显著低于TCF4低表达患者(HR=1.4,P=0.032),而高低表达组患者无疾病进展生存(DFS)差异无统计学意义(HR=1.4,P=0.094)。结论:miR-139-5p在老年胃癌患者中低表达,并可能通过靶向调控TCF4抑制肿瘤的进展。TCF4高表达与胃癌患者总生存期减低有关,并有望成为胃癌预后不良的分子标志物。

结肠癌患者血清miR-139-3p和miR-377-3p表达水平及肠道菌群的变化及其与复发转移的关系

目的分析结肠癌患者血清miR-139-3p和miR-377-3p表达水平与临床病理的关系、肠道菌群的变化及其与复发转移的关系。方法选取2019年3月至2021年3月入该院接受根治术治疗的结肠癌患者共126例作为结肠癌组,另选取同期在该院接受体检的体检健康者共83例作为健康对照组。观察两组血清miR-139-3p和miR-377-3p的表达水平及肠道菌群状态情况,对比不同临床特征的结肠癌患者血清指标表达水平,对比不同复发转移情况的结肠癌患者肠道菌群的变化情况,分析结肠癌患者血清miR-139-3p和miR-377-3p表达水平与其临床病理及肠道菌群表达的相关性。结果结肠癌组血清miR-139-3p和miR-377-3p较健康对照组均呈更高表达,差异有统计学意义(均P<0.05);结肠癌组术前、术后的双歧杆菌数量均低于健康对照组,大肠杆菌数量均高于健康对照组,差异有统计学意义(均P<0.05);结肠癌组中发生复发转移、低分化、临床分期处于Ⅲ期的患者血清miR-139-3p和miR-377-3p呈更高表达,差异有统计学意义(均P<0.05);Spearman相关系数分析显示,血清miR-139-3p、miR-377-3p表达水平与结肠癌患者临床分期、复发转移均呈正相关,与临床分化程度呈负相关(均P<0.05);复发转移组患者双歧杆菌数量较未复发转移组明显更低,大肠杆菌数量较未复发转移组相比明显升高,差异有统计学意义(均P<0.05);Pearson相关系数分析显示,血清miR-139-3p、miR-377-3p与结肠癌患者大肠杆菌数量呈正相关,上述两项指标与双歧杆菌数量呈负相关(均P<0.05)。结论结肠癌根治术后双歧杆菌属高表达和大肠杆菌属低表达意味着结肠癌患者复发转移风险更低,血清miR-139-3p和miR-377-3p与结肠癌患者临床分期、肿瘤分化程度、复发转移及肠道菌群变化均密切相关,后续临床针对结肠癌患者可通过监测上述两项血清指标及肠道菌群来辅助评估患者临床病情严重程度,对优化完善诊疗方案、降低患者复发转移风险具有积极作用。

川芎嗪调控miR-139-5p/CXCR4通路促进骨髓间充质干细胞迁移

[目的]探讨川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)是否通过调控miR-139-5p/趋化因子受体4(chemokine receptor 4,CXCR4)促进骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)迁移。[方法]采用全骨髓贴壁法培养SD大鼠BMSCs,50、100μmol·L^(-1)的TMP预处理BMSCs 24 h,脂质体3000转染miR-139-5p mimic、inhibitor,以细胞划痕和Transwell实验检测BMSCs迁移能力,双萤光素酶报告基因系统检测miR-139-5p与CXCR4之间的靶向性,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction,Real-time qPCR)检测miR-139-5p表达,免疫印迹法检测CXCR4蛋白表达。[结果]与正常对照组比较,转染miR-139-5p mimic后,细胞划痕愈合减慢(P<0.01),Transwell小室迁移的细胞数量减少(P<0.01),CXCR4蛋白表达下调(P<0.05),而转染miR-139-5p inhibitor的作用相反。双萤光素酶报告基因检测结果表明,CXCR4是miR-139-5p的潜在靶基因(P<0.01)。与正常对照组比较,50、100μmol·L^(-1)TMP预处理均下调miR-139-5p表达(P<0.01);与TMP组比较,TMP+miR-139-5p mimic组划痕愈合减慢(P<0.01),Transwell小室迁移的细胞数量减少(P<0.01),CXCR4蛋白表达下调(P<0.01),TMP+miR-139-5p mimic NC组无明显变化(P>0.05)。[结论]TMP可促进BMSCs迁移,其机制可能与下调miR-139-5p,增加CXCR4的表达有关。

城市公园园林植物配置研究——以晋中市139铁路公园为例

在我国社会经济快速发展的大背景下,为了提升城市环境生态质量,促进城市公园高质量发展,通过实地调查,文献查阅等方法,对晋中市榆次区典型的139公园内植物种类、生长状况和配置进行了系统的调查分析与归纳总结,阐述了城市公园园林植物配置原则,以及植物配置现存的问题,探索适合城市公园的植物景观设计策略,以期对同类城市公园植物景观配置提供一些理论支撑。

脑脊液miR-139、miR-22水平对肺腺癌脑转移瘤的诊断价值研究

目的分析脑脊液微小RNA-139(miR-139)、微小RNA-22(miR-22)水平对肺腺癌脑转移瘤的诊断价值。方法选取2017年6月至2021年12月于该院收治并确诊为肺腺癌脑转移瘤患者80例作为肺腺癌脑转移组,单纯肺腺癌无转移患者60例作为肺腺癌无转移组。采用实时荧光定量PCR检测所有患者脑脊液中miR-139、miR-22水平。分析肺腺癌脑转移瘤患者脑脊液中miR-139、miR-22水平与临床病理参数的关系及这两个微小RNA水平的相关性,影响肺腺癌患者发生脑转移瘤的危险因素,以及miR-139、miR-22对肺腺癌患者发生脑转移瘤的诊断价值。体外培养肺腺癌细胞A549,并随机分为对照(Control)组、miR-139模拟物(mimic)组、miR-22 mimic组、miR-139抑制物(inhibitor)组、miR-22 inhibitor组,检测各组miR-139、miR-22水平及细胞侵袭和迁移能力。结果与肺腺癌无转移组相比,肺腺癌脑转移组患者脑脊液中miR-139、miR-22水平显著降低(P<0.05)。肺腺癌脑转移瘤患者脑脊液中miR-139、miR-22水平与原发肿瘤数目、原发肿瘤分化程度、淋巴结转移有关(P<0.05)。肺腺癌脑转移瘤患者脑脊液中miR-139与miR-22水平呈正相关(P<0.05)。miR-139低表达、miR-22低表达是影响肺腺癌患者发生脑转移瘤的独立危险因素(P<0.05)。脑脊液中miR-139、miR-22单独及二者联合诊断肺腺癌患者发生脑转移瘤的曲线下面积分别为0.827、0.795、0.953。过表达miR-139、miR-22可显著抑制A549细胞的侵袭和迁移,而抑制miR-139、miR-22则可以观察到相反的结果(P<0.05)。结论肺腺癌脑转移瘤患者脑脊液中miR-139、miR-22均呈低水平,二者对肺腺癌脑转移瘤的诊断均具有一定价值。

miR-139-5p对人肝癌细胞增殖和侵袭的影响

目的 探讨微小RNA(miRNA)-139-5p在肝癌组织中的表达及其对人肝癌细胞增殖、侵袭的影响和潜在的分子机制。方法 采用生物信息学方法,从GEO数据库中下载GSE36915数据集,进行差异miRNA分析,结合TCGA-LICH数据集中的生存数据,筛选与预后显著相关的miRNA。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-139-5p在肝癌及其癌旁组织中的表达。利用CCK-8实验、Transwell实验观察miR-139-5p对人肝癌细胞SK-Hep-1和SMMC-7721的表型变化。采用高通量测序检测过表达miR-139-5p的SK-Hep-1细胞中基因表达的变化,确定miR-139-5p调控的潜在的信号通路和靶基因,并采用免疫印迹实验和报告基因实验进行验证。结果 通过对GSE36915数据集进行分析,共鉴定到50个显著差异表达的miRNA。结合TCGA-LICH数据集中的生存数据,发现在差异最显著的20个miRNA中,miR-15b-3p、miR-1180-3p、miR-139-5p、miR-139-3p与预后显著相关,最终确定miR-139-5p为进一步研究对象。miR-139-5p在100对肝癌组织的相对表达水平显著低于对应癌旁组织[(0.50±0.33) vs (1.02±0.43),P<0.001],且低水平的miR-139-5p肝癌患者中位生存期较短(25.5个月vs 43.0个月,P<0.01)。人肝癌细胞系SK-Hep-1和SMMC-7721中过表达miR-139-5p,可以显著抑制肝癌细胞的增殖和侵袭。高通量测序分析发现,在过表达miR-139-5p的SK-Hep-1细胞中,差异表达基因显著富集在Sphingolipid信号通路。经免疫印迹实验和报告基因实验验证,Sphingolipid信号通路中神经酰胺合成酶6(ceramide synthase 6,CerS6)是miR-139-5p的新的靶点。结论 miR-139-5p在肝癌组织中表达减少,导致其下游靶基因CerS6过量表达,从而激活Sphingolipid信号通路,促进肝癌发生发展。本研究提示miR-139-5p可以作为肝癌治疗的新的靶点。

结肠癌患者血清微小RNA-193a-5p和微小RNA-139-5p表达检测及其对预后的影响

目的:检测结肠癌患者血清微小RNA-193a-5p(miR-193a-5p)和微小RNA-139-5p(miR-139-5p)表达水平,分析其对预后的影响。方法:选取结肠癌患者109例为结肠癌组,选取同期体检健康者100例为健康组。收集两组临床资料,采用实时荧光定量PCR检测血清miR-193a-5p和miR-139-5p的表达。分析miR-193a-5p和miR-139-5p表达与结肠癌患者临床病理特征的关系。采用Cox风险比例模型分析结肠癌患者预后的影响因素。绘制Kaplan-Meier曲线进行生存分析。结果:结肠癌组miR-193a-5p和miR-139-5p表达明显低于健康组(均P<0.001)。结肠癌患者血清miR-193a-5p和miR-139-5p表达与性别、年龄、病理分型、肿瘤部位、肿瘤直径无明显相关性(均P>0.05),与临床分期、分化程度、局部浸润深度和淋巴结转移具有明显相关性(均P<0.001)。Cox风险比例模型分析结果显示,临床分期、分化程度、局部浸润深度、淋巴结转移、miR-193a-5p和miR-139-5p是结肠癌患者预后的影响因素(均P<0.05)。miR-193a-5p低表达组患者5年总生存率明显低于miR-193a-5p高表达组,miR-139-5p低表达组患者5年总生存率明显低于miR-139-5p高表达组(均P<0.05)。结论:血清miR-193a-5p和miR-139-5p在结肠癌患者中表达均明显降低,可能在结肠癌中发挥着抑癌基因的作用。检测血清中miR-193a-5p和miR-139-5p的表达水平有助于结肠癌的诊断及预后评估,可能成为结肠癌早期诊断和预后判断的分子标志物。

颈动脉血流动力学、hsa-microRNA-139-5p与2型糖尿病大血管病变的相关性研究

目的 探究剪切应力相关的颈动脉多普勒超声参数在2型糖尿病(T2DM)大血管病变早期诊断中的临床价值,并通过对剪切应力敏感性微小RNAs(miRs) hsa-miR-139-5p的研究在基因水平进行相关机制的进一步探究。方法 选择2022年1—12月在本院内分泌科就诊的T2DM患者200例作为研究对象,将T2DM合并大血管病变患者100例设为T2DM大血管病变组(观察组),将单纯T2DM患者100例设为单纯T2DM组(对照组)。比较两组研究对象颈总动脉(CCA)收缩期最大流速(PSV)、CCA舒张末期容积(EDV)和CCA血管阻力指数(RI)等超声参数,研究对象工作特征(ROC)分析各参数对T2DM大血管病变的诊断价值。预测T2DM大血管病变相关的剪切应力敏感性miRs,选择目标miR。qRT-PCR测定两组研究对象外周血单个核细胞hsa-miR-139-5p表达水平,免疫印迹蛋白试验(WB)测定其下游靶基因VEGF和IGFIR蛋白表达,并进行统计学分析。结果 T2DM大血管病变组CCA-PSV、CCA-EDV明显低于单纯T2DM组(P<0.001),T2DM大血管病变组CCA-RI明显高于单纯T2DM组(P<0.001)。CCA-PSV和CCA-EDV是T2DM大血管病变的独立危险因素,对于T2DM大血管病变的诊断价值较高。T2DM大血管病变组单个核细胞hsa-miR-139-5p表达高于单纯T2DM组(P<0.001)。T2DM大血管病变组VEGF的表达高于单纯T2DM组(P<0.05),单纯T2DM组IGFIR表达高于T2DM大血管病变组(P<0.05)。结论 hsa-miR-139-5p通过调节下游靶基因VEGF和IGFIR的表达参与T2DM大血管病变的发生发展,而CCA-PSV和CCA-EDV作为间接反映血管壁剪切应力的血流动力学参数或可作为T2DM大血管病变早期诊断的临床影像学参考指标。

MiR-139-5p靶向RIPK1/RIPK3/MLKL信号通路对慢性脑低灌注大鼠认知障碍的影响

目的探究微小RNA(miR)-139-5p靶向受体相互作用蛋白激酶(RIPK)1/RIPK3/混合系列蛋白激酶结构域蛋白(MLKL)信号通路对慢性脑低灌注(CCH)大鼠认知障碍的影响。方法将60只SPF级SD大鼠采用随机数字表法分为假手术组(Sham组)、模型组(Model组)、miR-NC组、miR-139-5p mimic组、miR-139-5p mimic+RIPK1抑制剂Nec-1组(miR-139-5p mimic+Nec-1组),每组12只。除Sham组外,其余组均采用永久性结扎双侧颈总动脉构建CCH模型。采用新物体识别实验、Morris水迷宫实验评价大鼠的认知功能;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠海马组织谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素6(IL-6)水平。实时荧光定量PCR(qPCR)法检测大鼠海马组织miR-139-5p及RIPK1、RIPK3、MLKL m RNA表达。Western blot法检测大鼠海马组织RIPK1、RIPK3、MLKL、突触素(SYP)、突触后密度蛋白95(PSD95)、α-突触核蛋白(α-SYN)蛋白的表达。双萤光素酶报告基因实验验证miR-139-5p和RIPK1的靶向关系。结果与Sham组相比,Model组大鼠分辨系数降低,目标象限停留时间缩短,海马组织miR-139-5p、GSH-Px、SOD水平降低,SYP、PSD95蛋白表达降低(P<0.05),逃避潜伏期延长,海马组织MDA、TNF-α、IL-6水平升高,RIPK1、RIPK3、MLKL mRNA和蛋白、α-SYN蛋白表达升高(P<0.05)。与Model组、miR-NC组相比,miR-139-5p mimic组相关指标的表达趋势与上述相反(P<0.05)。Nec-1进一步促进了上调miR-139-5p表达对CCH大鼠认知功能的恢复(P<0.05)。miR-139-5p和RIPK1存在结合位点。结论上调miR-139-5p可能通过靶向抑制RIPK1/RIPK3/MLKL信号通路减轻CCH大鼠的认知障碍。

LncRNA FUT8-AS1调控miR-139-5p促进糖尿病合并脑梗死大鼠血管生成的机制研究

目的:探讨lncRNA FUT8-AS1调控miR-139-5p对糖尿病(DM)合并脑梗死(CI)大鼠血管的影响。方法:将雄性Wistar大鼠随机分为对照组、DM+CI组、Vector组、shFUT8-AS1组、miR-139-5p Agomir组、pcDNA-FUT8-AS1组和pcDNA-FUT8-AS1+miR-139-5p Agomir组。采用TTC染色检测CI面积,免疫组化染色检测血管内皮生长因子(VEGF)和FMS样酪氨酸激酶(FLT-1)蛋白表达,并检测内皮依赖性微血管密度(MVD)。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测FUT8-AS1、VEGF、FLT-1 mRNA表达。Western blotting检测VEGF蛋白表达。双荧光素酶实验检测FUT8-AS1与miR-139-5p的靶向关系。结果:与对照组比较,DM+CI组CI面积显著增加,脑组织FUT8-AS1、FLT-1 mRNA表达上调,VEGF mRNA及蛋白表达上调,miR-139-5p表达下调(均P<0.05)。与Vector组相比,pcDNA-FUT8-AS1组FLT-1和VEGF mRNA及蛋白表达上调,MVD增加(均P<0.05);shFUT8-AS1组和miR-139-5p Agomir组FLT-1和VEGF mRNA及蛋白表达下调,MVD减少(均P<0.05)。与pcDNA-FUT8-AS1组相比,pcDNA-FUT8-AS1+miR-139-5p Agomir组FLT-1和VEGF mRNA及蛋白表达下调,MVD减少(均P<0.05)。结论:过表达FUT8-AS1通过靶向miR-139-5p上调VEGF和FLT-1表达,促进DM合并CI大鼠血管生成。

外周血miR-29b、miR-139水平与Th1/Th2的相关性及对银屑病的诊断价值

目的探讨外周血微小RNA(miR)-29b、miR-139水平与外周血辅助性T淋巴细胞(Th)1/Th2的相关性及对银屑病的诊断价值。方法选取2020年4月至2021年4月在该院入院治疗的89例银屑病患者为银屑病组,根据银屑病疾病分期将患者分为活动期37例和静止期52例,根据皮损严重程度分为轻度组24例、中度组36例和重度组29例。另选取同期来该院进行体检的体检健康者60例作为对照组。采用实时荧光定量PCR检测外周血miR-29b、miR-139及T细胞转录因子(T-bet)、GATA结合蛋白3(GATA3)水平;流式细胞仪检测外周血Th1、Th2细胞比例;酶联免疫吸附试验检测血清Th1、Th2相关细胞因子水平;Pearson相关分析银屑病患者外周血miR-29b、miR-139水平与Th1/Th2、T-bet、GATA3的相关性;受试者工作特征(ROC)曲线分析外周血miR-139、miR-29b水平对重度银屑病的诊断价值。结果银屑病组miR-139、T-bet、IL-2、IFN-γ水平、Th1细胞比例、Th1/Th2均高于对照组(P<0.05),miR-29b、GATA3、IL-4、IL-10水平、Th2细胞比例均低于对照组(P<0.05);活动期患者miR-139、T-bet、IL-2、IFN-γ水平、Th1细胞比例、Th1/Th2高于静止期患者(P<0.05),miR-29b、GATA3、IL-4、IL-10水平、Th2细胞比例低于静止期患者(P<0.05);Th1细胞比例、Th1/Th2、miR-139、T-bet、IL-2、IFN-γ水平随着皮损严重程度增加呈升高趋势,Th2细胞比例、miR-29b、GATA3、IL-4、IL-10水平随着皮损严重程度增加呈降低趋势(P<0.05);银屑病患者外周血miR-139水平与Th1/Th2、T-bet呈正相关,与GATA3呈负相关(P<0.05);miR-29b水平与Th1/Th2、T-bet呈负相关,与GATA3呈正相关(P<0.05)。miR-139、miR-29b联合诊断重度银屑病的曲线下面积为0.917,灵敏度为93.10%,特异度为81.64%,二者联合诊断效能优于miR-139、miR-29b单独诊断(Z=2.882、1.993,P=0.004、0.043)。结论银屑病患者外周血miR-139水平升高,miR-29b水平降低,与Th1/Th2、Th1/Th2相关细胞水平及转录因子具有一定的相关性,二者联合对银屑病的诊断具有较高效能。

彩色多普勒超声联合血清miR-139-3p水平检测在凶险性前置胎盘合并胎盘植入诊断中的应用价值

目的探讨彩色多普勒超声(彩超)联合血清miR-139-3p水平检测在凶险性前置胎盘(PPP)合并胎盘植入诊断中的应用价值。方法前瞻性选取2022年1月至12月入同济大学附属第一妇婴保健院产科接受剖宫产手术的PPP患者65例作为研究对象,其中胎盘非植入患者为38例(胎盘非植入组),PPP伴胎盘植入患者为27例(胎盘植入组)。PPP伴胎盘植入者中,中央型为13例,部分型为8例,边缘型为6例。同时收集同院产科行剖宫产手术的无妊娠合并症、无胎盘前置的孕妇60例作为对照组。所有研究对象均行彩超检查及血清miR-139-3p检查,采用四格表法分析彩超诊断PPP合并胎盘植入的价值;采用受试者工作特征曲线(ROC)分析彩超联合血清miR-139-3p水平对PPP合并胎盘植入的诊断效能。结果与对照组相比,胎盘非植入组和胎盘植入组中miR-139-3p水平明显降低(P<0.05);与胎盘非植入组相比,胎盘植入组中miR-139-3p水平显著降低(P<0.05);中央型患者血清中miR-139-3p水平明显低于部分型和边缘型(P<0.05),部分型患者血清中miR-139-3p水平明显低于边缘型(P<0.05);彩超联合血清miR-139-3p水平检测诊断PPP的曲线下面积、灵敏度、阳性预测值及阴性预测值均高于彩色超声以及miR-139-3p单独诊断,差异有统计学意义(P<0.05)。结论PPP合并胎盘植入患者血清中miR-139-3p表达水平降低,彩超联合血清中miR-139-3p表达水平检测在PPP合并胎盘植入中具有一定的诊断效能。

急性冠脉综合征患者血清miR-139-5p表达水平与短期预后的关联性分析

目的分析急性冠脉综合征(ACS)患者血清miR-139-5p表达水平与短期预后的关联性。方法招募2021年1月至2021年9月安徽省第二人民医院收治的因胸痛入院的ACS患者176例,其中不稳定型心绞痛(UAP)患者100例(UAP组)、急性心肌梗死(AMI)患者76例(AMI组)。另选择同期因胸痛入院,并经冠脉造影检查排除冠心病的28例患者为对照组。于患者入院次日抽静脉血检测血清miR-139-5p和血管内皮细胞生长因子受体-1(VEGFR-1)表达水平,并收集患者其他临床资料。对所有患者进行6个月随访,记录其主要心血管不良事件(MACE)发生情况。结果与对照组比较,UAP组和AMI组血清miR-139-5p表达水平更高,VEGFR-1表达水平更低,差异有统计学意义(P<0.05)。且AMI组血清miR-139-5p表达水平较UAP组显著升高(P<0.05),但两组血清VEGFR-1表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。Pearson相关性分析结果显示,ACS患者血清miR-139-5p表达水平与VEGFR-1表达水平呈负相关(r=-0.189,P=0.010)。Cox回归分析结果显示,较高的血清miR-139-5p表达水平是促进MACE发生的危险因素(P<0.05)。受试者工作特征(ROC)曲线分析结果显示,血清miR-139-5p表达水平能有效预测术后MACE发生[AUC(95%CI)=0.81(0.73~0.89),P<0.001],其最佳截断值为2.08,对应的灵敏度为82.83%,特异度为66.28%。K-M曲线分析结果显示,血清miR-139-5p表达水平≥2.08的ACS患者的无MACE生存时间较血清miR-139-5p表达水平<2.08者更短,差异有统计学意义(P<0.001)。结论ACS患者具有较高的血清miR-139-5p表达水平,血清miR-139-5p表达水平≥2.08时提示患者发生MACE的风险较大,应引起临床医师关注。

IRS-1/PI3K/Akt2信号通路调控miR-139-5p对2型糖尿病大鼠的干预效果

目的分析基于胰岛素受体底物1(IRS-1)/磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt2)信号通路调控微小核糖核酸139-5p(miR-139-5p)对2型糖尿病大鼠的干预效果。方法选取52只雄性SPF级Wistar大鼠,12只大鼠作为对照组,另外40只建立2型糖尿病模型,将建模成功36只大鼠采用随机数字表法分为模型组、沉默组、过表达组,每组各12只。对照组、模型组大鼠注射同剂量0.9%氯化钠溶液,沉默组大鼠尾静脉注射10μL miR-139-5p沉默慢病毒悬液,过表达组大鼠尾静脉注射10μL miR-139-5p过表达慢病毒悬液,于miR-139-5p转染后,对各组大鼠毛发光泽度、活动、形态等一般情况进行观察。对各组大鼠miR-139-5p、IRS-1、PI3K、Akt2表达量、血糖相关指标[胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、空腹胰岛素、空腹血糖、胰岛β细胞功能指数(HOMA-β)]、炎症因子[白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)]水平、血脂变化水平、IRS-1/PI3K/Akt2信号通路蛋白表达量进行检测。结果与对照组相比,模型组、沉默组、过表达组miR-139-5p表达量、HOMA-β、IRS-1、PI3K、Akt2 mRNA表达量、IRS-1、磷酸化IRS-1(p-IRS-1)、PI3K、磷酸化PI3K(p-PI3K)、Akt2、磷酸化Akt2(p-Akt2)表达量均降低,HOMA-IR、空腹胰岛素、空腹血糖、IL-6、TNF-α、总胆固醇、甘油三酯均升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,沉默组、过表达组miR-139-5p表达量、HOMA-IR、空腹胰岛素、空腹血糖、IL-6、TNF-α、总胆固醇、甘油三酯均降低,HOMA-β、IRS-1、PI3K、Akt2 mRNA表达量、IRS-1、p-IRS-1、PI3K、p-PI3K、Akt2、p-Akt2表达量均升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与沉默组相比,过表达组miR-139-5p相对表达量、HOMA-IR、空腹胰岛素、空腹血糖、IL-6、TNF-α、总胆固醇、甘油三酯降低,HOMA-β、IRS-1、PI3K、Akt2 mRNA表达量、IRS-1、p-IRS-1、PI3K、p-PI3K、Akt2、p-Akt2表达量升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论上调miR-139-5p表达,可调节2型糖尿病大鼠体内血糖、血脂水平,其机制可能与IRS-1/PI3K/Akt2信号通路有关。