Δ6去饱和酶催化合成γ-亚麻酸

报道了含Δ6去饱和酶的深黄被孢霉菌丝提取物催化亚油酸合成γ-亚麻酸. 研究了辅酶、温度、时间等对γ-亚麻酸合成的影响. 结果表明, 反应温度降低, γ-亚麻酸的产率提高. 在10 ℃以下, γ-亚麻酸的产率达到最大值; 苹果酸盐对该反应有明显促进作用. γ-亚麻酸的产率随体系pH增加而增加, 且在pH=7～8时产率较高; 该反应需在分子氧存在下进行; NADPH, ATP和CoA是该反应的必需辅酶. 在优化的反应条件下, γ-亚麻酸的产量达到0.21 mg/mL.

军曹鱼△6脂肪酸去饱和酶的cDNA序列克隆与基因表达

为了研究海水鱼合成高度不饱和脂肪酸(Highly unsaturated fatty acids,HUFAs)的关键酶,本研究克隆了军曹鱼(Rachycentron canadum)的△6脂肪酸去饱和酶的部分cDNA序列。根据GenBank已公布的其他鱼类的△6脂肪酸去饱和酶cDNA序列进行分析,设计了一对用于PCR扩增军曹鱼的△6脂肪酸去饱和酶基因保守序列的引物;然后以军曹鱼肝总RNA为模板,通过RT-PCR的方法扩增出一段长度为743bp的片段,该片段经纯化后,连接至pMD18-T载体上进行测序。结果显示,该片段与欧洲狼鲈(Dicentrarchus labrax)△6脂肪酸去饱和酶基因的覆盖区同源性为90.4%,该蛋白结构含有2个组氨酸保守区(HDFGH和HFQHH)和2个跨膜结构域,具有典型的△6脂肪酸去饱和酶结构特点。通过荧光定量PCR(Real-time quantityPCR,RTQ-PCR)检测该基因在军曹鱼幼鱼不同组织中的表达量,发现△6脂肪酸去饱和酶基因在军曹鱼脑的表达量最高;其次是肝;再其次是心、肠、脾、肾、鳃;而肌肉和皮肤的表达量相对较低,在脂肪组织中没有检测到△6去饱和酶基因的表达。结论为,军曹鱼具有合成HUFAs的关键酶—△6脂肪酸去饱和酶,在其所有组织中以脑之含量最多。

锦鲤Δ6脂肪酸去饱和酶基因克隆及表达研究

旨在揭示变温鱼类合成HUFAs过程中的关键酶及其功能,以锦鲤(Cyprinus carpiokoi)为材料,通过RT-PCR扩增获得了一段长度为854 bp的Δ6脂肪酸去饱和酶基因的c DNA序列片段,并对其进行了序列分析和蛋白产物结构预测。结果显示,该片段与南亚野鲮(Labeo rohita)Δ6脂肪酸去饱和酶基因有93.5%的同源性,编码的蛋白产物具有典型的Δ6脂肪酸去饱和酶结构特点,包含2个组氨酸保守区(HDFGH、HFQHH)和2个跨膜结构域。荧光定量PCR表明,Δ6脂肪酸去饱和酶在锦鲤肝脏中的表达量最高,在肠、脑和心脏中表达量依次降低,而在肌肉和鳃的表达量相对较低。幼鱼在不同培养水温下,各组织中该基因的表达量均随温度的下降而升高,以适应低温环境。

卵形鲳鲹耐低温候选基因△6FAD全长cDNA序列的克隆与表达分析

采用c DNA末端快速扩增(Rapid amplification of c DNA ends,RACE)技术克隆了卵形鲳鲹△6脂肪酸去饱和酶(△6FAD)的c DNA全长序列,并对其基因和蛋白序列结构特征进行了生物信息学分析,同时采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)技术分析了该基因在不同温度条件下的表达差异及低温下的时序表达模式。结果显示,卵形鲳鲹△6FAD基因c DNA序列全长1 908 bp,其中开放阅读框为1 329 bp,3'非编码区431 bp,5'非编码区135 bp,共编码442个氨基酸;其编码蛋白属于疏水性蛋白,无信号肽特征,含有大量蛋白质二级结构和该家族典型的组氨酸富集区及细胞色素b5结构域。系统进化分析表明,卵形鲳鲹△6FAD基因与尖吻鲈、军曹鱼的△6FAD基因在进化关系上最为接近,其次是大菱鲆、蓝鳍金枪鱼和点带石斑鱼,但与斑马鱼、小鼠和人△6FAD基因进化关系较远。实时荧光定量PCR结果表明,该基因的表达与环境温度和胁迫时间存在明显相关性,其表达水平在降温过程中随温度降低而先缓慢下降后又迅速升高,在不同的低温环境下表现出不同的时序表达模式:13℃时,随时间延长该基因的表达量呈现先降低后又升高至原来水平的变化趋势,16℃和19℃时则表现出一种随时间延长逐渐降低的反馈式调节方式。

原发性高血压患者空腹血清游离脂肪酸组成的变化

目的观察原发性高血压患者空腹血游离脂肪酸(freefattyacid,FFA)组成改变。方法采用社区人群整群抽样、病例对照方法,筛选出高血压患者109例,其中肥胖患者70例,非肥胖患者39例,并以饮食习惯相近的123例血压正常个体(其中肥胖个体66例,非肥胖者57人)为对照,用高效液相色谱直接衍生化法检测空腹血清各种FFA浓度,放免法测定胰岛素水平。结果(1)与血压正常个体比较,原发性高血压患者血清游离多不饱和脂肪酸(PUFA)水平降低(P=0.004),饱和脂肪酸(SFA)水平有增高趋势(P=0.06),P/S比值降低(P=0.000);血清PUFA中,n3PUFA水平降低[(高血压组95.8±39.6vs正常组122.0±33.4)μmol/L,P=0.000],n6PUFA水平有降低趋势(P=0.124);前者主要是DHA水平(22:6n3)降低所致[分别为(高血压组64.7±39.2vs正常组94.2±31.3)μmol/L,P=0.000],EPA(20:5n3)水平无明显变化,而α亚麻酸水平(18:3n3)则升高(分别为高血压组21.2±7.2vs正常组17.5±7.6)μmol/L,P=0.000],后者的亚油酸(18:2n6)水平有降低趋势(P=0.052)而AA(20:4n6)水平无明显变化。(2)与非高血压者相比较,原发性高血压患者C22:6/C20:5比值(n3Δ6去饱和酶活性指数)降低(P=0.002),C20:5/C18:3比值(n3Δ5、Δ6去饱和酶活性指数)有降低趋势(P=0.065)。(3)回归分析显示空腹血n3PUFA水平与舒张压水平独立负相关。结论原发性高血压患者存在空腹血游离脂肪酸组成改变,表现为PUFA(主要是n3类)水平降低和P/S比值降低;这种改变提示α亚麻酸向DHA的(22:6n3)生物转化缺陷与n3Δ6去饱和酶活性降低有关;这种改变与舒张压水平的升高独立相关。

FADS2基因rs174575多态性与乳汁多不饱和脂肪酸水平的关系研究

目的 探讨Δ6去饱和酶基因（FADS2）rs174575位点基因多态性对乳汁多不饱和脂肪酸（PUFA）水平的影响。方法 采用3天24 h膳食回顾调查乳母膳食PUFA摄入情况;于乳母产后22-25天收取成熟乳20 ml,气相色谱仪检测乳汁8种PUFA水平,试剂盒提取乳汁基因组DNA,并运用Sequenom mass array平台检测FADS2基因rs174575位点基因多态性。结果rs174575位点主等位基因C频率为90.2%,次等位基因G频率为9.8%;主等位基因纯合子CC携带者乳汁a-亚麻酸（ALA）低于G等位基因携带者ALA水平;而主等位基因纯合子CC携带者n-6与n-3系PUFA比值大于G等位基因携带者比值。结论 FADS2 rs174575基因多态性与乳母乳汁ALA水平及n-6/n-3比值水平相关联。