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匍枝根霉(Rhizopus stolonifer)As3.38△6-脂肪酸脱氢酶基因的克隆与酵母表达 被引量:1
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作者 陆合 柴友荣 +2 位作者 张学昆 雷天刚 李加纳 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期59-63,共5页
通过气相色谱法(GC)快速分析8种真菌的脂肪酸成分,发现匍枝根霉(Rhizopus stolonifer)具有较高的γ-亚麻酸含量,利用RT-PCR和RACE方法获得了全长为1475bp的匍枝根霉△6-脂肪酸脱氢酶基因的cDNA序列,其中开放阅读框为1380bp,编码459个氨... 通过气相色谱法(GC)快速分析8种真菌的脂肪酸成分,发现匍枝根霉(Rhizopus stolonifer)具有较高的γ-亚麻酸含量,利用RT-PCR和RACE方法获得了全长为1475bp的匍枝根霉△6-脂肪酸脱氢酶基因的cDNA序列,其中开放阅读框为1380bp,编码459个氨基酸。生物信息学分析所克隆的基因具有△6-脂肪酸脱氢酶的典型结构:N端具有细胞色素b5结构、具有3个保守的组氨酸区序列和跨膜结构;把该基因的开放阅读框序列连接到表达载体pYES2.0上,构建重组表达载体pYRnD6D,并将其转入缺陷型酿酒酵母INVScl中进行表达。GC分析表明,该序列在酵母中获得了表达,表达产物表现出△6-脂肪酸脱氢酶的酶学活性,能将底物亚油酸转化为γ-亚麻酸。新生成的γ-亚麻酸占酵母细胞总脂肪酸的12.25%。 展开更多
关键词 Γ-亚麻酸 △6-脂肪酸 匍枝根霉(Rhizopus stolonifer) 酵母表达
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深黄被孢霉Δ~6-脂肪酸脱氢酶基因敲除及鉴定 被引量:1
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作者 张学炜 王笑梅 +4 位作者 李明春 魏东盛 陈雪 王宇凡 邢来君 《南开大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期67-72,共6页
以产油丝状真菌深黄被孢霉M6—22(Mortierella isabellina 6-22)为出发菌株,利用亚硝基胍诱变技术筛选到一株对潮霉素药物敏感的菌株Mortierella isabellina 6-22—4,同时构建了含有潮霉素抗性基因表达单元和深黄被孢霉△6-脂肪酸... 以产油丝状真菌深黄被孢霉M6—22(Mortierella isabellina 6-22)为出发菌株,利用亚硝基胍诱变技术筛选到一株对潮霉素药物敏感的菌株Mortierella isabellina 6-22—4,同时构建了含有潮霉素抗性基因表达单元和深黄被孢霉△6-脂肪酸脱氢酶基因5’与3’端部分同源序列的重组质粒PD4M16,用于对深黄被孢霉△6-脂肪酸脱氢酶基因的敲除.通过PEG/CaCl2介导的原生质体转化法,将质粒PD4M16转化入深黄被孢霉M6—22—4菌株.转化子经潮霉素抗性选择平板筛选、分子检测获得了一个△^6-脂肪酸脱氢酶基因缺失的突变株Mut6.气相色谱分析结果显示,该突变株γ-亚麻酸特征峰消失,相应地亚油酸产量显著增加.培养结果表明该突变株的菌落形态、颜色及生长状况与出发菌株M6—22或M6—22—4相比均有显著改变。 展开更多
关键词 深黄被孢霉 △6-脂肪酸基因 缺失突变 同源重组 Γ-亚麻酸
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不同N端序列长度匍枝根霉△6-脂肪酸脱氢酶重组子的表达
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作者 陆合 张碧波 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期107-110,共4页
克隆并在酵母中表达两个不同N段序列长度的匍枝根霉△6-脂肪酸脱氢酶重组子,其中长序列的重组子LYRnD6D是从匍枝根霉中克隆的△6-脂肪酸脱氢酶基因,编码459个氨基酸,N端序列为MSTLDRQSIFTIKELESISQRIHDG-DEEAMKFIII;短序列重组子SYRnD6... 克隆并在酵母中表达两个不同N段序列长度的匍枝根霉△6-脂肪酸脱氢酶重组子,其中长序列的重组子LYRnD6D是从匍枝根霉中克隆的△6-脂肪酸脱氢酶基因,编码459个氨基酸,N端序列为MSTLDRQSIFTIKELESISQRIHDG-DEEAMKFIII;短序列重组子SYRnD6D是预测的匍枝根霉△6-脂肪酸脱氢酶基因的ORF序列,N端序列为MKFIIIDKKVY,编码430个氨基酸;两个重组子均具有△6-脂肪酸脱氢酶保守的组氨酸序列和HPGG序列,长序列的N端比短序列长29个氨基酸残基(MSTLDRQSIFTIKELESISQRIHDGDE-EA)。两个重组子在缺陷型酵母中均得到了的表达,产生了γ-亚麻酸。利用酶的相对活力比较两个重组子在同一温度下的稳定性,长序列重组子的酶在15℃下反应4h后相对活力仍有74%,而短序列酶的相对活力只有43%,所以长序列重组子酶在低温下比短序列酶稳定性高,是因为长序列多出的氨基酸序列增加了酶的稳定性。 展开更多
关键词 序列长度 △6-脂肪酸 匍枝根霉 表达 稳定性
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深黄被孢霉Δ~6-脂肪酸脱氢酶基因在毕赤氏酵母SMD1168中表达的研究
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作者 王长远 全越 +2 位作者 沈冰蕾 姚笛 于长青 《农产品加工(下)》 2016年第7期1-3,8,共4页
引物根据△6-脂肪酸脱氢酶(D6D)基因以及酵母蛋白表达载体pGAPZctA的多克隆位点进行引物设计,并在上游插入ECoRI位点、下游插入XhoI位点,从深黄被孢霉中克隆D6D基因,构建pMD18-T-D6D载体与pGAPZtxA—D6D载体。将重组质粒线性化,... 引物根据△6-脂肪酸脱氢酶(D6D)基因以及酵母蛋白表达载体pGAPZctA的多克隆位点进行引物设计,并在上游插入ECoRI位点、下游插入XhoI位点,从深黄被孢霉中克隆D6D基因,构建pMD18-T-D6D载体与pGAPZtxA—D6D载体。将重组质粒线性化,并将其电转导入到毕赤氏酵母(PichiapastorisSMD1168)中,Zeocin抗生素筛选高拷贝转化子,对重组菌进行诱导表达。经过Tricine—SDS—PAGE分析和蛋白质免疫印迹(Westernbloting)试验,证明△6-脂肪酸脱氢酶融合蛋白具有免疫学活性。结果成功构建了重组酵母pGAPZdA—SMD1168,为利用基因工程菌生产y-亚麻酸(GLA)奠定理论基础。 展开更多
关键词 深黄被孢霉 △6-脂肪酸 毕赤氏酵母SMD1168 pGAPZctA表达载体
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低温对2种紫草科植物△^6-脂肪酸脱氢酶基因表达的影响 被引量:2
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作者 张芳转 周晶 +1 位作者 陈光辉 李冠 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期101-105,共5页
以紫草科植物新疆软紫草(Arnebia euchroma)和假狼紫草(Nonea capsica(willd.)G.Don)为材料,翻译延伸因子EF1a为内参基因,利用半定量逆转录聚合酶链式反应(semi-RT-PCR)技术,对2种紫草植物中γ-亚麻酸合成关键酶基因△6-脂肪酸脱氢酶基... 以紫草科植物新疆软紫草(Arnebia euchroma)和假狼紫草(Nonea capsica(willd.)G.Don)为材料,翻译延伸因子EF1a为内参基因,利用半定量逆转录聚合酶链式反应(semi-RT-PCR)技术,对2种紫草植物中γ-亚麻酸合成关键酶基因△6-脂肪酸脱氢酶基因的表达进行研究。结果表明,△6-脂肪酸脱氢酶基因在紫草植物的叶、茎、根中均表达,在低温诱导不同时间后紫草植物叶片中△6-脂肪酸脱氢酶基因的表达有所增强。气相色谱分析显示,其产物γ-亚麻酸在低温下积累,推测紫草科植物叶片中△6-脂肪酸脱氢酶基因表达量增加可能与适应低温胁迫的逆境有关。 展开更多
关键词 低温 △6-脂肪酸 Γ-亚麻酸 表达分析
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Genome-wide Analysis of Glucose-6-phosphate Dehydrogenase(G6PDH) and Its Evolution in Eucalyptus grandsis 被引量:3
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作者 林元震 张志毅 +1 位作者 林善枝 刘纯鑫 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2011年第9期1276-1278,共3页
[Objective] The aim of this study was to perform genome-wide analysis of glucose-6-phosphate dehydrogenase(G6PDH) and reveal its evolution in Eucalyptus grandsis.[Method] The gene character,protein sequence and phyl... [Objective] The aim of this study was to perform genome-wide analysis of glucose-6-phosphate dehydrogenase(G6PDH) and reveal its evolution in Eucalyptus grandsis.[Method] The gene character,protein sequence and phylogenetic tree of G6PDH gene were analyzed by BLAST and other bioinformatics software within Eucalyptus grandsis whole genome database.[Result] Six G6PDH genes,including one cytomic type and five plastids,were detected in the E.grandsis genome.All the G6PDHs have conserved motifs of motif 1,motif 2,motif 3,motif 7,motif 9 and motif 11.Furthermore,promoter sequences of all E.grandsis G6PDH contain TATA box,enhancer,light-responsive,hormone-responsive and stress-responsive regulatory elements.[Conclusion] This study provided reference for the further revealing molecular function of E.grandsis G6PDH gene family 展开更多
关键词 Eucalyptus grandsis Glucose-6-phosphate dehydrogenase Evolution analysis Conserved motif
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毛霉△^6-脂肪酸脱氢酶随机突变文库的构建与分析 被引量:1
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作者 宋芬芬 江贤章 +1 位作者 陈清霞 黄建忠 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期694-701,共8页
毛霉Mucor sp.EIM-10△6-脂肪酸脱氢酶是γ-亚麻酸合成途径的关键酶。为提高脂肪酸脱氢酶的活性以及研究该酶一级结构对酶活性的影响,利用易错PCR对毛霉△6-脂肪酸脱氢酶基因(mcd6)进行随机突变,将PCR产物与大肠杆菌-酿酒酵母穿梭表达载... 毛霉Mucor sp.EIM-10△6-脂肪酸脱氢酶是γ-亚麻酸合成途径的关键酶。为提高脂肪酸脱氢酶的活性以及研究该酶一级结构对酶活性的影响,利用易错PCR对毛霉△6-脂肪酸脱氢酶基因(mcd6)进行随机突变,将PCR产物与大肠杆菌-酿酒酵母穿梭表达载体PYMD6PMCD6连接,获得随机突变质粒PYTBMCD6,转化酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae,构建了原始库容为4.6×104 CFU的△6-脂肪酸脱氢酶的随机突变表达文库。随机突变表达文库的构建与分析为定点突变等酶蛋白的理性设计奠定基础。 展开更多
关键词 △6-脱氢酶 易错PCR 随机突变 毛霉 Γ-亚麻酸
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Effects of variant UDP-glucuronosyltransferase 1A1 gene, glucose-6-phosphate dehydrogenase deficiency and thalassemia on cholelithiasis 被引量:1
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作者 Yang-Yang Huang Ching-Shui Huang +3 位作者 Sien-Sing Yang Min-Shung Lin May-Jen Huang Ching-Shan Huang 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2005年第36期5710-5713,共4页
AIM: To test the hypothesis that the variant UDP- glucuronosyltransferase 1A1 (UGT1A1) gene, glucose-6- phosphate dehydrogenase (G6PD) deficiency, and thalassemia influence bilirubin metabolism and play a role in... AIM: To test the hypothesis that the variant UDP- glucuronosyltransferase 1A1 (UGT1A1) gene, glucose-6- phosphate dehydrogenase (G6PD) deficiency, and thalassemia influence bilirubin metabolism and play a role in the development of cholelithiasis. METHODS: A total of 372 Taiwan Chinese with cholelithiasis who had undergone cholecystectomy and 293 healthy individuals were divided into case and control groups, respectively. PCR and restriction fragment length polymorphism were used to analyze the promoter area and nucleotides 211, 686, 1 091, and 1 456 of the UGT1A1 gene for all subjects and the gene variants for thalassemia and G6PD deficiency. RESULTS: Variation frequencies for the cholelithiasis patients were 16.1%, 25.8%, 5.4%, and 4.3% for A(TA)6 TAA/A(TA)TTAA (6/7), heterozygosity within the coding region, compound heterozygosity, and homozygosity of the UGT1A1 gene, respectively. Comparing the case and control groups, a statistically significant difference in frequency was demonstrated for the homozygous variation of the UGT1A1 gene (P = 0.012, Z2 test), but not for the other variations. Further, no difference was demonstrated in a between-group comparison of the incidence of G6PD deficiency and thalassemia (2.7% vs 2.4% and 5.1% vs 5.1%, respectively). The bilirubin levels for the cholelithiasis patients with the homozygous variant-UGT1A1 gene were significantly different from the control analog (18.0±6.5 and 12.7±2.9 μmol/L, respectively; P〈0.001, Student's ttest).CONCLUSION: Our results show that the homozygous variation in the UGT1A1 gene is a risk factor for the development of cholelithiasis in Taiwan Chinese. 2005 The WJG Press and Elsevier Inc. All rights reserved 展开更多
关键词 UGT1A1 gene G6PD deficiency THALASSEMIA CHOLELITHIASIS
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T_5代γ-亚麻酸转基因大豆的遗传稳定性分析 被引量:2
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作者 陈晟 郭丽琼 +1 位作者 宋景深 林俊芳 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期24-28,共5页
利用PCR检测和标记基因抗性检测对表达γ-亚麻酸转基因大豆第5代植株的外源基因遗传稳定性及目的基因和抗性基因的分离情况进行了分析。结果表明:在20个转基因大豆株系中,有2个转基因大豆株系(TS824和TS825)只含有△6-fad基因而没有bar... 利用PCR检测和标记基因抗性检测对表达γ-亚麻酸转基因大豆第5代植株的外源基因遗传稳定性及目的基因和抗性基因的分离情况进行了分析。结果表明:在20个转基因大豆株系中,有2个转基因大豆株系(TS824和TS825)只含有△6-fad基因而没有bar基因;7个转基因大豆株系(TS81、TS83、TS85、TS87、TS811、TS814、TS818)只含有bar基因而没有△6-fad基因;9个转基因大豆株系(TS88、TS89、TS810、TS813、TS815、TS816、TS817、TS819和TS820)既有△6-fad基因也有bar基因;2个转基因大豆株系(TS82和TS86)既没有△6-fad基因也没有bar基因。因此,△6-fad基因在部分株系中获得了稳定的遗传,同时有2个株系目的基因和抗性基因在后代中分离。 展开更多
关键词 遗传稳定性 转基因大豆 Γ-亚麻酸 △6-脂肪酸
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武定鸡和大围山微型鸡脂肪酸含量及FADSFADS2基因表达差异研究 被引量:4
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作者 李凯 豆腾飞 +6 位作者 荣华 徐志强 佟荟全 段小花 葛长荣 贾俊静 李琦华 《中国家禽》 北大核心 2018年第5期13-16,共4页
脂肪酸是影响家鸡肉品质的重要风味物质,Δ6-脂肪酸脱氢酶基因(FADS2)是不饱和脂肪酸生物合成过程中的关键酶。研究以武定鸡和大围山微型鸡为研究对象,检测肌肉组织中脂肪酸含量及FADS2基因表达量,比较不同鸡种脂肪酸含量及FADS2基因表... 脂肪酸是影响家鸡肉品质的重要风味物质,Δ6-脂肪酸脱氢酶基因(FADS2)是不饱和脂肪酸生物合成过程中的关键酶。研究以武定鸡和大围山微型鸡为研究对象,检测肌肉组织中脂肪酸含量及FADS2基因表达量,比较不同鸡种脂肪酸含量及FADS2基因表达差异。结果显示,整体上,武定鸡腿肌中饱和脂肪酸(SFA)、单不饱和脂肪酸(MUFA)、不饱和脂肪酸(USFA)、多不饱和脂肪酸(PUFA)、必需脂肪酸(EFA)及总脂肪酸含量和FADS2 m RNA表达量均显著高于大围山微型鸡,且在部位和周龄上存在显著差异。研究表明,武定鸡风味比大围山微型鸡优良,FADS2基因是影响家鸡肉品质的重要候选基因。 展开更多
关键词 武定鸡 大围山微型鸡 脂肪酸含量 △6-脂肪酸基因
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A novel mis-sense mutation (G1381A) in the G6PD gene identified in a Chinese man
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作者 任晓琴 杜传书 +3 位作者 蒋玮莹 陈路明 林群娣 何永蜀 《Chinese Medical Journal》 SCIE CAS CSCD 2001年第4期63-65,108,共4页
Objective To detect new mutations among 29 glucose 6 phosphate dehydrogenase (G6PD) deficient individuals from Yunnan province Methods The nitroblue tetrazolium (NBT) method was used to screen G6PD deficient ind... Objective To detect new mutations among 29 glucose 6 phosphate dehydrogenase (G6PD) deficient individuals from Yunnan province Methods The nitroblue tetrazolium (NBT) method was used to screen G6PD deficient individuals Mutation was identified by single strand conformation polymorphism (SSCP), amplification created restriction site (ACRS), amplification refractory mutation system (ARMS) and DNA sequencing Results Among 29 cases, 18 cases of G1388A, 1 case of C1004A, and 1 case of G1381A were identified Nine cases remained to be defined The G1381A mutation is a novel mis sense mutation, with a substitution of threonine for alanine (A461T) The resultant G6PD had reduced enzymatic activity In addition, G1381A caused a restriction site of Stu I to disappear, providing a rapid method for the detection of this mutation Conclusion A novel mis sense mutation G1381A was found This mutation results in a substitution of threonine for alanine, producing enzyme with reduced activity The loss of the Stu I restriction site offers a rapid method for the detection of this mutation 展开更多
关键词 G6PD gene · G6PD gene mutation · mutation · glucose 6 phosphate dehydrogenase deficiency
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