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多重实时荧光PCR相对定量法快速诊断唐氏综合征
被引量:
8
1
作者
高斌
肖白
+10 位作者
邹起练
黄尚志
王立荣
钮淑兰
闫梅
雷箴
贾兴元
王战勇
袁海昕
吴燕
刘敬忠
《遗传》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第8期934-938,共5页
为了建立一种基于多重实时荧光相对定量PCR技术并应用之于唐氏综合征分子诊断,选择21号染色体上唐氏综合征特异区域基因片段(DSCR3)为目的基因,以12号染色体上的磷酸甘油醛脱氢酶基因(GAPDH)为参照基因,设计合成两对引物以及分别以不同...
为了建立一种基于多重实时荧光相对定量PCR技术并应用之于唐氏综合征分子诊断,选择21号染色体上唐氏综合征特异区域基因片段(DSCR3)为目的基因,以12号染色体上的磷酸甘油醛脱氢酶基因(GAPDH)为参照基因,设计合成两对引物以及分别以不同荧光标记的TaqMan探针,在同一个反应管中进行扩增。以相对定量指标△CT值区分唐氏综合征患者与正常人。采用EB病毒转化技术,把唐氏综合征患者外周血B淋巴细胞转化成永生淋巴母细胞系作为标准品。通过优化反应条件,使得目的基因和参照基因的扩增效率基本一致,接近100%,模板浓度在3~300ng/μL范围内,△CT值的变异系数小于15%,浓度在30ng/μL时,变异系数最小(<10%),以该浓度的DNA作为模板进行批内和批间实验的△CT值重复性好,变异系数分别为9.8%和13.3%。运用建立的方法检测20例唐氏综合征患者的血标本和30例正常人的血标本,正常人△CT值范围是-1.90~-1.30,患者的△CT值范围是-2.95~-2.15,两组之间无交叉重叠,有明显差异(P<0.001)。唐氏综合征患者永生细胞系建系成功,染色体核型和DNA分析表明建系前后遗传是稳定的。因此,实时荧光定量PCR比较△CT值的相对定量法快速诊断唐氏综合征是可行的。
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关键词
唐氏综合征
荧光定量PCR
相对定量
△ct值
永生细胞系
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职称材料
题名
多重实时荧光PCR相对定量法快速诊断唐氏综合征
被引量:
8
1
作者
高斌
肖白
邹起练
黄尚志
王立荣
钮淑兰
闫梅
雷箴
贾兴元
王战勇
袁海昕
吴燕
刘敬忠
机构
首都医科大学附属北京朝阳医院基础医学研究中心
福建医科大学细胞生物学与遗传学系
中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学遗传室
北京大学第一医院中心实验室
出处
《遗传》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第8期934-938,共5页
基金
北京市自然科学基金资助项目(编号:JS96004)资助~~
文摘
为了建立一种基于多重实时荧光相对定量PCR技术并应用之于唐氏综合征分子诊断,选择21号染色体上唐氏综合征特异区域基因片段(DSCR3)为目的基因,以12号染色体上的磷酸甘油醛脱氢酶基因(GAPDH)为参照基因,设计合成两对引物以及分别以不同荧光标记的TaqMan探针,在同一个反应管中进行扩增。以相对定量指标△CT值区分唐氏综合征患者与正常人。采用EB病毒转化技术,把唐氏综合征患者外周血B淋巴细胞转化成永生淋巴母细胞系作为标准品。通过优化反应条件,使得目的基因和参照基因的扩增效率基本一致,接近100%,模板浓度在3~300ng/μL范围内,△CT值的变异系数小于15%,浓度在30ng/μL时,变异系数最小(<10%),以该浓度的DNA作为模板进行批内和批间实验的△CT值重复性好,变异系数分别为9.8%和13.3%。运用建立的方法检测20例唐氏综合征患者的血标本和30例正常人的血标本,正常人△CT值范围是-1.90~-1.30,患者的△CT值范围是-2.95~-2.15,两组之间无交叉重叠,有明显差异(P<0.001)。唐氏综合征患者永生细胞系建系成功,染色体核型和DNA分析表明建系前后遗传是稳定的。因此,实时荧光定量PCR比较△CT值的相对定量法快速诊断唐氏综合征是可行的。
关键词
唐氏综合征
荧光定量PCR
相对定量
△ct值
永生细胞系
Keywords
Down's syndrome
fluorescence quantitative PCR
△ct
value
immortalized cell line
分类号
R450 [医药卫生—治疗学]
R714.5 [医药卫生—妇产科学]
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题名
作者
出处
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被引量
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1
多重实时荧光PCR相对定量法快速诊断唐氏综合征
高斌
肖白
邹起练
黄尚志
王立荣
钮淑兰
闫梅
雷箴
贾兴元
王战勇
袁海昕
吴燕
刘敬忠
《遗传》
CAS
CSCD
北大核心
2007
8
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