P16、△NP63在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及相关性研究

目的探讨P16、△NP63蛋白在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达、意义及其相关性。方法采用免疫组化SP法检测42例宫颈鳞癌,90例宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN),25例慢性宫颈炎组织石蜡切片中P16、△NP63蛋白的表达。结果(1)从慢性宫颈炎组织、CIN到宫颈鳞癌,P16、△NP63的表达均递增,差异有统计学意义(P<0.01)。(2)P16蛋白表达与宫颈癌患者的年龄、临床分期及癌细胞分化程度无关,△NP63蛋白表达与宫颈癌患者年龄、临床分期无关,与癌细胞分化程度呈负相关,在分化程度差的肿瘤组织中表达增高(P<0.05)。(3)在CIN和宫颈鳞癌中,P16与△NP63蛋白表达呈正相关(rs=0.6226,P<0.01)。结论P16、△NP63参与了CIN、宫颈鳞癌的发生、发展,其免疫组化检测对宫颈癌的早期诊断有参考价值。

△Np63基因沉默对膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响及分子机制

目的探讨癌基因△Np63对膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响,并初步探讨其可能的分子机制。方法通过将△Np63特异性短发夹RNA(△Np63-shRNA)和非特异性短发夹RNA(Control-shRNA)转染膀胱移行细胞癌(transitional cell carcinom a of bladder,TCCB)5637细胞,用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Westernblot分别检测△Np63、p27kip1、p57kip2mRNA和蛋白的表达水平,WST-1法检测细胞增殖活性,利用流式细胞术(FCM)检测细胞周期分布,TUNEL法检测细胞凋亡情况。结果特异性的△Np63-shRNA能够有效地沉默△Np63并上调p27kip1和p57kip2的基因和蛋白水平,转染△Np63-shRNA的5637细胞的增殖能力明显受到抑制(P<0.05),且明显促进了细胞的凋亡(P<0.05)。结论靶向△Np63基因的shRNA片段可以有效的抑制人膀胱癌5637细胞的增殖并促进其凋亡,其可能的机制是通过上调p27kip1和p57kip2的表达实现的。

子宫颈鳞状细胞癌中△Np63α、DPC4/Smad4和P21的表达及其临床意义

目的研究△Np63α、DPC4/Smad4和P21在子宫颈鳞状细胞癌中的表达情况。方法采用免疫组织化学ElivisionTMPlus法检测100例子宫颈鳞状细胞癌组织、40例子宫颈上皮内瘤变(CIN)和40例正常子宫颈组织中△Np63α、DPC4/Smad4和P21蛋白的表达情况。分析三者在子宫颈鳞状细胞癌的发生发展中的相互作用,及其与子宫颈鳞状细胞癌发生、发展和预后的关系。结果从正常子宫颈组织到子宫颈上皮内瘤变及子宫颈鳞状细胞癌,△Np63α和DPC4/Smad4的表达逐渐下降,P21的表达逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.01);同时,三者的表达均与肿瘤的分化程度、临床分期和淋巴结转移有关(P<0.01)。另外,△Np63α与DPC4/Smad4的表达呈正相关关系(r=0.581,P<0.05);而DPC4/Smad4和△Np63α的表达与P21的表达均成负相关(r=-0.449,r=-0.254,P均<0.05)。同时,生存分析显示:△Np63α和DPC4/Smad4阳性表达组5年生存率显著高于其阴性表达组,差异有显著性(P<0.001);而P21阳性表达组则显著低于阴性表达组,差异有显著性(P<0.05)。结论△Np63α、DPC4/Smad4和P21的表达与子宫颈癌组织的发生发展、转移和预后等均有关;联合检测三者的表达情况,对子宫颈鳞状细胞癌的进展及预后判断有重要意义。

△Np63在食管鳞癌组织中的表达及意义

目的探讨p53基因家族新成员截短型p63(△Np63)在食管鳞癌组织中的表达及其意义。方法采用RT-PCR法检测50例食管鳞癌及50例正常食管组织中△Np63 mRNA的表达情况,分析其与食管鳞癌患者各临床病理指标的关系。结果△Np63 mRNA在食管鳞癌组织中的阳性表达率(74.0%)及表达水平(1.036±0.157)均显著高于正常食管组织(40.0%,0.954±0.110),并且其在食管鳞癌组织中的阳性表达率及表达水平与分化程度和淋巴结转移密切相关(P<0.05)。结论在食管鳞癌组织中存在△Np63的过表达,并且这种表达可能与食管鳞癌的浸润、转移有关。

子宫内膜、正常早孕和自然流产蜕膜组织中△Np63的表达

目的观察△Np63蛋白在自然流产蜕膜组织中的表达,探讨△Np63在胚泡植入和早期妊娠维持中的作用。方法收集自然流产的蜕膜27例组织(其中胚胎停止发育23例、习惯性流产1例及不全流产3例),正常早孕蜕膜66例,非妊娠期子宫内膜组织57例(其中增生期33例,分泌期24例),用SP免疫组化染色法观察△Np63的表达。结果△Np63广泛表达于腺上皮和间质细胞中。增生期和分泌期子宫内膜中△Np63主要表达在腺上皮,蜕膜组织中△Np63在间质蜕膜细胞中的有较强的表达。流产组△Np63蛋白阳性率为55.6%,明显低于增生期的90.9%、分泌期的87.5%及正常早孕组的86.4%(P<0.05)。△Np63高表达率在分泌期组及流产组分别为16.7%和11.2%,明显低于增生期的63.6%和正常早孕组的57.6%(P<0.01)。结论△Np63可能参与子宫内膜的生理周期变化,并与子宫内膜向早孕蜕膜组织转化及维持早孕关系密切。

p40(△Np63)和p63在乳腺肌上皮细胞诊断中的价值

目的研究p40(△Np63)在不同乳腺病变中肌上皮细胞的表达情况,探讨p40(△Np63)在乳腺肌上皮细胞诊断中的价值。方法应用免疫组化En Vision法检测正常乳腺组织、腺病、普通性导管增生、非典型导管增生、导管原位癌及浸润性导管癌中p40(△Np63)和p63的表达,并比较两者间的差异。结果 p40(△Np63)和p63均表达于正常乳腺组织、腺病、普通性导管增生、非典型导管增生和导管原位癌中的肌上皮细胞,p40(△Np63)和p63在这些病变的肌上皮细胞的阳性率相同,差异不显著(P>0.05);在浸润性导管癌中均未见p40(△Np63)和p63的表达。仅p40(△NP63)的表达强度略高于p63,但有轻度的背景染色。结论 p40(△Np63)可作为诊断乳腺肌上皮细胞的标记物,与p63具有相同的染色效果。

△Np63在喉癌中的表达及意义

目的:探讨喉癌中△Np63蛋白表达及其与临床病理的关系。方法:应用免疫组化SP法检测喉癌和正常喉黏膜中△Np63蛋白的表达。结果:喉癌中△Np63的阳性表达率为75.0%,正常喉粘膜中的阳性表达率为15.0%,组间比较差异具有显著性(P<0.01)。阳性表达率与组织学分级有关(P<0.05)。结论:△Np63可能与喉癌的发生、分化和预后有关,可以作为喉鳞癌和腺癌鉴别诊断的依据。

肾细胞癌组织中△Np63和MDM2蛋白的表达及其临床意义

目的探讨△Np63和MDM2蛋白在肾细胞癌组织中的表达及其与肿瘤侵袭与转移的关系。方法应用免疫组织化学SP法,检测76例肾细胞癌和14例正常肾组织中△Np63和MDM2蛋白的表达。结果肾癌组织与正常肾组织中△Np63、MDM2蛋白的表达差异有显著性（F=28.34、22.57,q=6.471～12.529,P〈0.05）;不同病理类型的肾癌组织中△Np63、MDM2蛋白的表达差异均无显著性（q=0.093～2.169,P〉0.05）;不同临床分期肾癌组织中△Np63、MDM2蛋白的表达差异有显著性（F=24.59、10.82,q=4.694～11.971,P〈0.05）。△Np63和MDM2蛋白的表达存在着显著相关性（rs=0.513,P〈0.05）。结论△Np63和MDM2蛋白可以作为反映肾细胞癌侵袭和转移潜能的生物学指标。

△Np63(p40)和p63在前列腺基底细胞中的表达

目的探讨△Np63(p40)和p63在前列腺各种病变基底细胞中的表达情况。方法应用免疫组化En Vision法检测良性前列腺增生症、单纯性萎缩、前列腺基底细胞增生、腺病、高级别前列腺上皮内瘤变和前列腺癌中△Np63(p40)和p63的表达。结果细针穿刺活检标本中,p40和p63均表达于所有良性前列腺病变中的基底细胞,p40与p63的表达分布基本一致,但p40染色略强于p63。TURP标本中,p40与p63在所有良性前列腺病变中的基底细胞表达,表达模式与表达强度与细针穿刺活检标本相同。20例前列腺癌中,p40和p63表达均阴性。结论△Np63(p40)也是一种很好的前列腺基底细胞标记物,可与p63联合应用于前列腺癌的诊断和鉴别诊断。

食管癌中△Np63与p33蛋白表达的意义

目的探讨食管癌发生发展过程中△Np63、p33蛋白的表达及其与食管癌病理特征的关系。方法采用免疫组织化学S-P方法检测51例食管癌组织中及其正常黏膜组织中△Np63和p33蛋白的表达。结果1)在食管癌组织及其正常黏膜中△Np63蛋白的表达差异具有统计学意义(P<0.05);2)在食管癌组织及其正常黏膜中p33蛋白的表达差异具有统计学意义(P<0.05);3)△Np63与p33蛋白都与食管癌的分化程度、浸润深度及淋巴结转移有关(P<0.05),但与食管癌的大体分型无关(P>0.05),二者无明显相关性。结论△Np63蛋白可能参与食管癌的发生、发展,且为食管癌发生的早期事件,△Np63可作为判断肿瘤预后评估和诊断的标志物。p33蛋白与食管癌的发生发展密切相关,可作为肿瘤诊断的标志物。

△NP63和HSP27在宫颈癌的表达及意义

目的 探讨宫颈癌中△NP63和HSP27的表达及意义。方法 应用免疫组化SP法检测20例慢性宫颈炎上皮、30例宫颈上皮不典型增生和50例宫颈癌中△NP63和HSP27蛋白的表达。同时对35例宫颈鳞状上皮细胞癌进行mRNA杂交。结果 宫颈癌中△NF63蛋白表达率76％;HSP27蛋白表达率74％;表达率及强度明显高于慢性宫颈炎及轻、中度不典型增生上皮(P<0.05),与重度不典型增生差异不显著(P>0.05)。宫颈腺癌中△NP63无表达。HSP27表达率低(1/3)。在宫颈鳞状细胞中△NP63蛋白和mRNA的表达率及强度,低分化高于中、高分化,与临床分期密切相关;HSP27蛋白和mRNA的表达率及强度,中、高分化高于低分化,与临床分期无相关性。结论△NP63、HSP27可能与宫颈鳞状细胞癌的发生及预后有关。

食管鳞癌△Np63基因的检测

目的: 探讨△Np63基因作为食管鳞癌检测指标的可能性. 方法: 50例新鲜食管鳞癌组织,未经放疗或化疗,癌旁组织15例,用免疫组化和RT PCR方法检测组织和外周血△Np63表达情况. 食管癌患者外周血标本21例,用RT PCR方法检测了△Np63mRNA表达情况,胃腺癌12例和10例健康人外周血作为对照. 结果: 食管鳞癌组织△Np63蛋白和mRNA表达明显高于癌旁组织,分别是96%和60% (P<0. 01). 食管癌21例外周血检测中△Np63 mRNA阳性率38%,而胃腺癌和健康人外周血中未见表达. 结论: 食管鳞癌的发生和△Np63过度表达有关,△Np63mRNA外周血检测可以作为一个食管鳞癌的肿瘤标志物.

皮肤良、恶性增殖性疾病中△Np63的检测

目的观察△Np63在皮肤良、恶性增殖性疾病中的表达,并探讨其意义。方法应用免疫组化SP法检测30例脂溢性角化症、30例日光性角化病、30例基底细胞癌及10例正常皮肤组织中△Np63的表达,并采用Image-Pro Plus6.0(IPP)图像分析软件定量测定每个视野中阳性表达的平均光密度值。结果△Np63在脂溢性角化症组表达的平均光密度为0.0391±0.0169,日光性角化病组为0.0262±0.0184;基底细胞癌组为0.0498±0.0222;正常皮肤组为0.0056±0.0019。△Np63在各组的阳性表达差异有统计学意义(P<0.05),它除在脂溢性角化症及基底细胞癌组的表达差异无统计学意义(P>0.05)外,余组内两两比较的差异也均有统计学意义(P均<0.05);但是它在不同部位的脂溢性角化症、日光性角化病和基底细胞癌中的表达差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论再次印证了△Np63是未分化上皮来源肿瘤的标记物。

△Np63、p21^(WAF1)及MDM2基因蛋白在鼻咽癌组织表达的研究

目的 :探讨鼻咽癌组织中△Np6 3、p2 1WAF1 和MDM2蛋白的表达及意义。方法 :采用免疫组化方法研究△Np6 3、p2 1WAF1 和MDM2蛋白在 6 0例鼻咽癌活检组织的表达 ,6 0例鼻咽癌的组织类型包括角化性鳞癌 3例 ;非角化性癌 5 7例 ,其中含未分化癌 12例。结果 :6 0例鼻咽癌抗△Np6 3染色成不同程度阳性反应 ,表现为细胞核棕黄色。其中角化性鳞癌呈弱阳性表达 ,癌巢周边基底样细胞阳性略呈环状分布 ,或弥散分布 ;非角化性癌多呈强阳性反应 ,染色深 ,呈弥漫或片状分布 ,癌旁粘膜及正常鼻咽粘膜仅基底层和上基层细胞呈阳性表达。p2 1WAF1 在鼻咽癌、癌旁上皮及正常粘膜上皮的阳性率分别为 2 6 %、15 %、7% ,在三组的表达无显著性差异 ;MDM2在鼻咽癌、癌旁上皮及正常粘膜上皮的阳性率分别为 19%、5 %、4 % ,在癌组和非癌组表达有显著性差异。结论 :△Np6 3蛋白在鼻咽非角化性癌中高表达 ,表明与细胞恶性增生密切相关 ,可能在癌细胞多相性退分化中起作用 ,是鼻咽非角化性癌有价值的诊断指标。MDM2在鼻咽癌组的表达显著高于对照组 ,起癌基因作用。△Np6 3和MDM2均抑制p5 3转录活性 ,使NPC中p5 3虽然无突变却缺乏失活。p5 3活性低则不能上调p2 1WAF1 ,G1 关卡失去功能 ,形同虚设。△Np6 3及MDM2高表达和p2 1WAF1

ΔNp63 mRNA在膀胱癌组织中的表达及意义

目的探讨ΔNp63 mRNA在膀胱移行细胞癌(TCCB)中的表达及意义。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测48例TCCB患者肿瘤组织、10例对照膀胱组织ΔNp63 mRNA的表达,并分析ΔNp63 mRNA表达与TCCB临床分期、病理分级等的关系。结果48例TCCB组织中ΔNp63 mRNA表达阳性率为75.0%(36/48),对照组膀胱组织中ΔNp63蛋白表达阳性率为0.0%(0/10),TCCB组ΔNp63 mRNA表达阳性率明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。不同临床分期肿瘤组织中ΔNp63 mRNA表达阳性率、各组间ΔNp63 mRNA表达阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。不同病理分级肿瘤组织中ΔNp63 mRNA表达阳性率、各组间ΔNp63mRNA表达阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。结论TCCB组ΔNp63mRNA表达水平均明显高于对照组,提示ΔNp63与TCCB的发生密切相关,其可能为TCCB发生的重要促进因素,ΔNp63 mR-NA表达水平和TCCB的临床分期、病理分级没有相关性,故ΔNp63在TCCB进展中的作用有待进一步研究。

宫颈癌前病变中ΔNP63与HPV16 E7表达的研究

目的:研究宫颈上皮内瘤变中ANP63和HPV16 E7 mRNA的表达情况,寻找用于临床评估CIN病变进展趋势的生物学标志物。方法:收集临床71例薄层液基细胞标本,采用SP免疫组化法检测细胞中ANP63的蛋白表达,RT-PCR法检测残留标本中HPV16 E7的mRNA转录情况。结果:1．ANP63定位于异常鳞状上皮细胞和腺细胞,在CIN中表达高于炎症组(P< 0．05);2．HPV16 E7在CIN中表达明显高于炎症组(P<0．05);3．CIN中ANP63与HPV16 E7的检测结果具有较好的一致性。结论:ANP63可作为CIN的生物学标志物辅助细胞学筛查;ANP63可间接反映HPV16 E7的转录情况,有利于临床评估高危型病毒HPV16的致瘤能力。

喉鳞癌中ΔNp63和ΔNp73的表达及临床意义

目的通过研究喉鳞癌中ΔNp63和ΔNp73的表达及与患者各临床病理参数的关系,探讨其在喉鳞癌发生、发展中的作用。方法采用免疫组化二步法,检测40例喉鳞癌及相应癌旁组织中ΔNp63和ΔNp73的表达情况。结果ΔNp63和ΔNp73在喉鳞癌组织中的阳性表达率分别为85%(34/40)和82.5%(33/40)。喉癌组织中ΔNp63和ΔNp73的表达显著高于相应癌旁组织(P<0.001)。ΔNp63在喉癌组织中的表达与肿瘤分化程度有关(P<0.05);而与患者性别、临床分期、有无淋巴结转移等无关。ΔNp73在喉癌组织中的表达与患者性别、肿瘤分化程度、临床分期、有无淋巴结转移等无关(P>0.05)。喉癌组织中ΔNp63和ΔNp73的表达无显著相关性(r=0.16,P>0.05)。结论ΔNp63和ΔNp73可能作为癌基因维持肿瘤细胞干细胞样的增殖特性,在喉鳞癌的发生、发展中发挥重要作用,并可能成为喉癌成瘤机制研究中的重要靶点。

人膀胱癌荷瘤鼠中shRNA沉默ΔNp63基因对肿瘤的抑制和cyclin D_1表达的影响

目的利用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术沉默ΔNp63基因的表达,研究其对人膀胱癌裸鼠皮下移植模型的抑瘤作用,同时检测ΔNp63基因被抑制后对细胞周期素D1(cyclin D1)表达的影响。方法建立人膀胱癌裸鼠皮下移植模型,构建ΔNp63基因特异性shRNA(short hairpin)表达质粒,将表达质粒转染荷瘤鼠瘤体。将符合实验条件的15只裸鼠分为3组:ΔNp63-shRNA组、Control-shRNA组与生理盐水组,每组5只。观察各组肿瘤生长情况、瘤组织超微结构的改变,检测ΔNp63基因和蛋白、增殖细胞核抗原(PCNA)和cyclin D1蛋白表达的变化。结果转染质粒8周后,ΔNp63-shRNA组与生理盐水组瘤体积有显著性差异(P<0.01),抑瘤率为74.44%,Control-shRNA组与生理盐水组体积无显著性差异(P>0.05)。病理结果显示ΔNp63-shRNA组肿瘤生长受到抑制,细胞核分裂象减少,可见大量肿瘤细胞坏死和凋亡、炎症细胞浸润。RT-PCR结果显示ΔNp63-shRNA组ΔNp63基因表达降低。免疫组化结果显示ΔNp63、PCNA、cyc-lin D1蛋白表达均降低。结论ΔNp63特异性shRNA质粒表达载体沉默ΔNp63基因后,可显著抑制人膀胱癌裸鼠肿瘤的生长,ΔNp63可能通过抑制cyclin D的表达而抑制肿瘤的细胞增殖。

ΔNp63在早孕小鼠子宫内膜表达规律的研究

目的：初步探讨p53基因家族新成员——截断型 p63(ΔNp63)在小鼠生殖中的作用。方法：收集动情周期各期和早孕2 d、3 d、4 d、5 d小鼠子宫内膜,共8组,每组10只小鼠。运用RT-PCR技术检测ΔNp63 mRNA的表达规律；免疫组织化学SP法检测小鼠子宫内膜中ΔNp63蛋白的表达情况。结果：1)RT-PCR：动情前期ΔNp63 mRNA明显高表达；动情间期和动情期表达减弱；动情后期表达极低；早孕期间小鼠子宫内膜ΔNp63 mRNA表达较未孕组高,并逐渐增强,孕5 d达高峰。2)免疫组织化学：ΔNp63蛋白在间质细胞胞浆表达,表达规律基本上与mRNA水平的表达规律相似。结论：ΔNp63在动情前期高表达,可能与子宫内膜间质细胞增殖、生长有关；在早孕期间高表达,说明它很可能进一步促进间质细胞分裂,顺利转化成蜕膜细胞,进而有利于提高窗口期子宫的容受性。