禽流感病毒通用型及H5亚型套式荧光RT-PCR检测方法研究

将套式PCR与荧光RT-PCR技术相结合,叠加这两种技术在敏感性和特异性方面的优势,建立敏感性高于常规荧光RT-PCR的套式荧光RT-PCR检测方法。从GenBank下载禽流感病毒NP基因和HA基因序列,通过比对选取较为保守的片段,设计AIV通用型及H5亚型套式荧光RT-PCR引物和TaqMan探针;利用体外转录技术制备阳性对照,构建目的片段重组质粒;经反应体系和反应条件的优化,建立套式荧光RT-PCR检测方法。试验结果表明,该方法可特异性地检测禽流感病毒及H5亚型AIV,在30份鱼类养殖水样中检测到19份阳性样品,具有较高的敏感性和良好的特异性;具有高通量、快速的特点,可对大批量样品同时进行检测,试验耗时仅需5h,是自然环境样品中极微量禽流感病毒检测的好方法。

H9亚型禽流感病毒实时荧光RT-PCR检测方法的建立与应用

为建立一种快速准确检测H9亚型禽流感病毒基因的检测方法,根据GenBank中H9亚型禽流感病毒血凝素编码基因进行荧光检测引物和探针设计,建立了一种针对H9亚型禽流感病毒的荧光RT-PCR检测方法。利用该方法进行灵敏度和特异性检测,并用本方法和国家标准中的荧光RT-PCR检测方法,同时对临床样本进行检测。结果显示,仅H9亚型禽流感病毒出现了正常荧光检测曲线,而其他病毒及阴性对照均未出现;检测灵敏度为RNA终浓度10-4 ng/μL(1.30×104 copies/μL);临床样本检测结果与国标方法一致,符合率为100%。结果表明,该方法特异性强、灵敏度高,可用于H9亚型禽流感病毒检测。

禽流感病毒通用型荧光RT-PCR快速检测方法的应用

荧光PCR技术是将荧光素标记的探针与引物一起，在荧光PCR仪中反应，电脑对整个反应进行实时监测，避免了交叉污染，大大提高检测的敏感性。荧光PCR的与普通PCR比较，敏感性提高约100倍，可检测到组织中的微量病毒。

国家三类新兽药禽流感病毒H7亚型荧光RT-PCR检测试剂盒

一、兽药名称通用名:禽流感病毒H7亚型荧光RT-PCR检测试剂盒。英文名:Avian Influenza Virus Subtype H7 Real-time RT-PCR Detection Kit商品名:无。

浅析快速检测H7N9禽流感病毒的方法

随着H7N9禽流感病毒开始蔓延,一些医学者开始对H7N9禽流感病毒的检测方法进行研究,逐渐提出了RT-PCR检测方法、实时荧光RT-PCR检测方法、三重PCR检测方法、纳米荧光颗粒试纸条检测方法和NASBA检测方法等,其中,实时荧光RT-PCR检测方法是目前为止较为成熟的检测方法。该方法是根据H7N9亚型禽流感病毒HA和NA核苷酸序列,设计并合成靶基因为HA和NA的2对引物而建立的1种快速检测H7N9亚型禽流感病毒的方法。基于此,介绍1种快速检测H7N9亚型禽流感的方法——实时荧光RT-PCR检测方法。

荧光RT-PCR在临床检测的应用

用建立的荧光RT -PCR检测中强毒力新城疫病毒的方法检测了 5批临床样品 ,其中有禽肉、鸡咽喉拭子 /泄殖腔拭子、鸽泄殖腔拭子 ,其中检出 3份样品中有中强毒力新城疫病毒 。

H7N9禽流感病毒实时荧光RT-PCR检测方法的建立与评价

目的应用Taq Man探针实时荧光RT-PCR技术,建立一种快速检测H7N9禽流感病毒的方法。方法针对H7N9禽流感病毒的HA和NA基因分别设计特异性引物和Taq Man-LNA探针,建立H7N9禽流感病毒特异性实时荧光RT-PCR快速检测方法。结果本研究建立的方法对检测H7N9禽流感病毒株的灵敏度达到10 PFU/ml。该方法特异性强,与其他亚型流感病毒株及呼吸道病原体无交叉反应。与对照方法相比,本研究方法的检测阳性符合率为99.07%,阴性符合率为100%,Kappa值为0.993。结论建立的检测试剂盒具有快速灵敏、结果准确可靠等优点,适用于H7N9禽流感病毒的分子生物学检测和监测。

两项猪链球菌检测方法国家标准将发布

最近，北京检验检疫局承担的国家标准《猪源链球菌通用荧光PCR检测方法》和《猪链球菌2型荧光PCR检测方法》通过了国家标准委组织的有关专家审定。专家们认为，这两项国家标准可操作性强，内容完整，达到了国际先进水平，填补了国内空白。《猪源链球菌通用荧光PCR检测方法》和《猪链球菌2型荧光PCR检测方法》两项国家标准是由北京局在成功建立猪链球菌荧光PCR快速检测方法并通过专家鉴定的基础上制定的，该检测技术包括猪链球菌通用荧光PCR快速检测技术、猪链球菌2型荧光PCR检测技术。它的一大显著特点，就是将传统细菌分离方法的3-d检测时间缩短为1．5h。同时具有快速、敏感、特异、安全等优势，克服了易污染、敏感性低的缺陷。该方法是北京局利用“十五”国家科技攻关项目建立的荧光RT-PCR技术平台检测禽流感病毒基础上，继制定禽流感病毒检测国家标准系列后，制定的又一个重要的国家标准。国家标准委即将发布实施该国家标准，为我国开展猪链球菌的检测提供强大的技术支持。

我国已初步建立食品安全检测技术体系

我国已初步建立了食品安全检测技术体系，为保障我国百姓“从农田到餐桌”的食品安全提供了有力保障。截至目前，我国食品安全检测技术体系建立了219项实验室检测方法，其中农药多残留检测方法可检测150种农药，兽药多残留检测方法可检测122种兽药，并研制出了81个检测技术相关试剂（盒）和现场快速检测技术。此外，针对H5、H7、H9等不同亚型禽流感病毒的荧光RT-PCR检测试剂盒的研制成功，在保证我国禽肉进出口贸易安全中发挥了重要作用。