利用1型糖尿病小鼠模型分析犬成纤维生长因子21的长效降糖效果

本研究分别将Fc片段、穿膜肽R11和穿膜肽TAT与犬成纤维生长因子21(canine fibroblast growth factor 21,cFGF-21)相连构建了3种融合蛋白,旨在探讨cFGF-21对1型糖尿病的长效降糖作用。用链脲佐菌素(STZ)建立1型糖尿病小鼠模型,随后分别用cFGF-21、R11-cFGF-21、Fc-cFGF-21和TAT-cFGF-21治疗。治疗分为3个阶段:1)每天给药一次(第1~14天);2)每3 d给药一次(第15~29天);3)每5 d给药一次(第30~44天)。在治疗过程中,每隔3 d检测一次小鼠血糖,在每阶段结束时检测试验小鼠12 h内血糖波动。试验结束前,对所有小鼠进行口服葡萄糖耐量试验。通过ELISA法检测小鼠血清中炎症相关因子IL-10、IL-1β、IL-17A和抗炎因子IL-10表达水平。通过Real-time PCR检测肝、脂肪、肠和肾等组织中的糖代谢相关因子的转录水平。试验结束后,对所有小鼠进行糖基化血红蛋白(HbA1c)、血脂四项和肝功能、血清胰岛素和HbA1c检测并对小鼠胰腺组织进行病理分析。结果显示:在治疗的第一阶段,与cFGF-21组相比,TAT-cFGF-21降糖效果明显降低,R11-cFGF-21和Fc-cFGF-21组没有显著差异;在治疗的第二、三阶段,与cFGF-21组相比,TAT-cFGF-21组血糖明显上升,R11-cFGF-21和Fc-cFGF-21组可在给药3~5 d内能将血糖控制在更低的水平。治疗8周后,与cFGF-21组相比,R11-cFGF-21和Fc-cFGF-21组口服葡萄糖耐量(OGTT)和血脂紊乱明显改善,糖化血红蛋白(HbA1c)接近正常水平,肝损伤明显修复,而TAT-cFGF-21组与cFGF-21组没有明显差距。此外,ELISA检测和HE染色结果显示,相较cFGF-21和TAT-cFGF-21组,R11-cFGF-21和Fc-cFGF-21组氧化应激和炎症反应得到显著改善且胰岛β细胞修复效果明显。经R11和Fc修饰的cFGF-21长效降糖能力的显著增加,而TAT-cFGF-21长期的降血糖能力较弱。此外,经R11和Fc修饰的cFGF21能显著改善氧化应激、胰腺炎症和脂质代谢,修复肝损伤和胰岛β细胞,治疗效果明显优于cFGF21。

INHB、AMH及IL-21水平与卵巢良性肿瘤患者卵巢储备功能的相关性分析

目的分析血清抑制素B(Inhibin B,INHB)、抗苗勒管激素(Anti-mullerian hormone,AMH)及白细胞介素-21(Interleukin-21,IL-21)水平与卵巢良性肿瘤患者卵巢储备功能的相关性。方法收集2020年1月-2023年12月黑龙江中医药大学附属第二医院妇科收治的104例卵巢良性肿瘤患者为研究对象,根据患者术后3个月时窦卵泡计数(Antral gollicle count,AFC)分为卵巢储备低功能组(n=46)与正常组(n=58)。比较两组患者的一般资料,术前及术后3个月血清INHB、AMH及IL-21水平。采用多因素Logistic回归模型分析卵巢良性肿瘤患者卵巢储备功能的影响因素,采用受试者工作特征(Receiver operator characteristic curve,ROC)曲线分析INHB、AMH及IL-21水平对卵巢良性肿瘤患者卵巢储备功能的评估价值,采用Pearson分析AFC值与INHB、AMH及IL-21水平的相关性。结果与本组术前相比,术后3个月两组患者血清INHB、AMH水平均降低,IL-21水平均升高(P<0.05)。与正常组术后3个月相比,低功能组血清IL-21水平升高,INHB、AMH水平降低;卵泡刺激素(Follicle stimulating hormone,FSH)、黄体生成激素(Luteinizing hormone,LH)水平升高,雌二醇(Estradiol,E2)水平较低(P<0.05)。Logistic回归模型分析显示,术后3个月时血清IL-21水平是卵巢良性肿瘤患者卵巢储备功能低下的独立危险因素,血清INHB、AMH水平是其保护因素(P<0.05)。ROC曲线分析显示,术后3个月时患者血清INHB、AMH及IL-21水平诊断卵巢储备功能的AUC(95%CI)分别为0.707(0.610~0.792)、0.731(0.635~0.813)、0.802(0.712~0.873),联合评估的AUC(95%CI)为0.866(0.785~0.925),联合检测对卵巢储备功能低下的评估价值高于单项指标应用(P<0.05)。Pearson相关性分析显示卵巢良性肿瘤患者中血清INHB、AMH水平与AFC呈正相关(r=0.554、0.617,P均<0.05),血清IL-21水平与AFC呈负相关(r=-0.466,P<0.05)。结论术后3个月的血清INHB、AMH及IL-21水平与卵巢良性肿瘤患者卵巢储备功能具有密切相关性,三者联合应用对卵巢良性肿瘤患者术后卵巢储备能力的评估有重要参考价值。

PD-1免疫抑制剂对不同CY211表达水平非小细胞肺癌患者治疗效果的观察

目的 探究程序性细胞死亡蛋白-1(PD-1)免疫抑制剂对不同细胞角蛋白19片段抗原21-1(CY211)表达水平的非小细胞肺癌患者治疗效果。方法 选取2022年5月至2023年5月在天长市中医院接受治疗的非小细胞肺癌100例患者为研究对象,以3.3 ng/mL为临界值,将CY211≥3.3 ng/mL作为高表达组(45例)、CY211<3.3 ng/mL作为低表达组(55例)。且对所有纳入患者给予PD-1免疫抑制剂进行治疗。比较2组肺功能指标、T淋巴细胞亚群、炎性因子、不良反应发生情况、临床疗效的变化情况。结果 治疗后,2组干扰素-γ(IFN-γ)水平有所降低,第1秒用力呼气量/用力肺活量(FEV1/FVC)、第1秒用力呼气的容积占预计值的百分比(FEV1%pred)、最大通气量(MVV)、CD_(4)^(+)/CD_(8)^(+)、CD_(3)^(+)、CD_(4)^(+)、白介素-10(IL-10)、白介素-6(IL-6)水平有所升高,且低表达组较高表达组改善良好(P<0.01)。2组不良反应发生率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。低表达组疾病控制率(DCR)、客观缓解率(ORR)较高表达组上升(P<0.05)。结论 对非小细胞肺癌患者实施PD-1免疫抑制剂治疗,效果明显,且CY211低表达患者疗效更优,可有助于改善患者T淋巴亚群及炎性因子,提升肺功能,减少不良反应的发生,以促进患者病情加快恢复。

新创栏目的品牌化生存策略——兼谈《21@21》的品牌竞争力

本文通过对上海东方卫视《21@21》栏目品牌竞争力的探讨,力在剖析品牌栏目的市场竞争力何在。品牌竞争力之一:差异化发展战略打造"唯一性"品牌竞争力之二:稳定高效的"品牌背书者"——东方卫视;品牌竞争力之三:嘉宾与主持人品牌对位互动;品牌竞争力之四:国际水准的制作团队;品牌竞争力之五:跨媒体经营运作模式。最终得出结论:只有认真分析栏目所处位势的优劣条件,积极采取应对措施,缩短栏目由品牌挑战者转入品牌领导者的时间,才能降低风险指数,增加胜算。这是《21@21》品牌化之路的当务之急。

甲基转移酶3调控pri-miR-21甲基化修饰在糖尿病肾病肾脏纤维化中的作用

目的·探讨甲基转移酶3(methyltransferase like 3,METTL3)调控pri-miR-21的N^(6)-甲基腺苷(N^(6)-methyladenosine,m^(6)A)甲基化修饰在糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)小鼠肾脏纤维化发病机制中的作用。方法·采用8周龄雄性db/db小鼠作为DN模型小鼠,db/m小鼠作为对照,同时按照是否经尾静脉注射S-腺苷高半胱氨酸水解酶抑制剂3-脱氮腺苷(3-deazaadenosine,DAA),共随机分为4组(5只/组),分别为db/m组、db/db组、db/m+DAA组和db/db+DAA组;8周龄开始注射DAA,注射1次/5 d,共注射8次。DAA干预结束后继续饲养小鼠至19周龄,收取各组小鼠血、尿、肾脏组织标本。检测血糖、血肌酐、尿白蛋白肌酐比(albumin-to-creatinine ratio,ACR),肾脏行苏木精-伊红(H-E)染色、Masson染色及天狼星红染色观察病理变化;试剂盒检测肾脏总RNA中m^(6)A的甲基化水平;Western blotting检测肾脏METTL3及纤维化相关蛋白表达;实时定量PCR检测肾脏总pri-miR-21和成熟miR-21;使用免疫磁珠富集肾脏组织中m^(6)A甲基化RNA,并通过PCR检测其中m^(6)A甲基化的pri-miR-21。结果·相较于db/m组,db/db组小鼠血糖,血肌酐,ACR,肾脏METTL3、m^(6)A甲基化修饰水平、纤维化相关蛋白、总pri-miR-21、m^(6)A甲基化pri-miR-21和成熟miR-21表达水平均显著增加(均P<0.05),小鼠肾脏系膜基质增多、肾小球基底膜增厚、胶原纤维累积显著增加。相较于db/db组,db/db+DAA组血糖,血肌酐,ACR,肾脏m^(6)A甲基化修饰水平、纤维化相关蛋白、m^(6)A甲基化pri-miR-21和成熟miR-21表达水平均显著下降(均P<0.05),总pri-miR-21表达水平显著升高(P=0.000),METTL3蛋白表达水平未见显著变化,小鼠肾脏损伤及纤维化程度显著减轻。结论·pri-miR-21的m^(6)A甲基化修饰促进miR-21成熟,进而促进DN小鼠肾脏纤维化的发生发展;抑制METTL3可通过调控pri-miR-21的m^(6)A甲基化修饰抑制DN小鼠肾脏纤维化。

血清FGF-21 IL-13 sVEGFR-2与急性心力衰竭患者短期预后的关系

目的 探讨血清成纤维细胞生长因子-21(FGF-21)、白细胞介素-13(IL-13)、可溶性血管内皮生长因子受体-2(sVEGFR-2)水平与急性心力衰竭患者短期预后的相关性。方法 选取2019年1月至2020年12月在我院接受治疗的急性心力衰竭患者136例作为心力衰竭组。选取同期在我院健康体检者80例作为健康对照组。采用ELISA法检测血清FGF-21、IL-13、sVEGFR-2水平。随访1年,根据急性心力衰竭患者有无不良心血管事件发生分为预后良好组和预后不良组,并分析影响患者1年内临床结局的危险因素。采用ROC曲线,分析FGF-21、IL-13、sVEGFR-2对急性心力衰竭患者预后不良的诊断效能。结果 心力衰竭组血清FGF-21、IL-13高于健康对照组[FGF-21(pg/mL):74.81±16.29 vs. 19.37±5.11, IL-13(pg/mL):5.14±1.23 vs.1.62±0.54,P<0.001]、sVEGFR-2低于健康对照组(ng/mL:6.30±1.57 vs.15.18±4.29,P<0.05)。预后不良组血清FGF-21、IL-13、NT-proBNP分别高于预后良好组[FGF(pg/mL):92.31±20.84 vs.67.52±13.70, IL-13(pg/mL):6.94±1.75 vs.4.39±1.18, NT-proBNP(ng/L):4689.16±132.50 vs.2120.59±51.48],LVEF值、血清sVEGFR-2低于预后良好组[LVEF(%):45.27±6.13 vs.53.95±7.80, sVEGFR(ng/mL):4.85±1.24 vs.6.98±2.31,P<0.05]。多因素Logistic回归分析结果显示,LVEF(95%CI 0.265~0.840,P<0.001)及血清NT-proBNP(95%CI 1.002~2.317,P=0.015)、FGF-21(95%CI 1.438~5.019,P<0.001)、IL-13(95%CI 1.027~3.165,P=0.006)、sVEGFR-2(95%CI 1.190~4.283,P=0.002)是影响急性心力衰竭患者不良预后的独立危险因素。ROC曲线结果显示,血清FGF-21、IL-13、sVEGFR-2及三项联合检测预测急性心力衰竭患者不良预后的曲线下面积分别为0.810、0.775、0.821、0.918。结论 血清FGF-21、IL-13、sVEGFR-2水平与急性心力衰竭患者NYHA分级及临床预后密切相关,联合检测血清FGF-21、IL-13、sVEGFR-2对评估患者不良预后有较高参考价值。

新复合杂合基因突变致非经典21-羟化酶缺陷症1例报告并文献复习

目的 报道1例非经典21-羟化酶缺陷症(21-hydroxylase deficiency, 21-OHD)患者的基因类型,丰富该类疾病的遗传数据库。方法 收集我院收治的1例非经典21-OHD患者临床资料,结合基因测序结果,以明确诊断。采集其亲属外周血,针对CYP21A2进行高通量基因测序,并结合相关文献进行复习。结果 患者,女,16岁,临床表现为阴蒂肥厚,无月经来潮,多毛、痤疮,青春前期身体呈生长加速现象,骨龄提前。基因检测结果显示,CYP21A2基因有两个复合杂合变异[错义突变c.1451G>A(p:R484Q),缺失突变deletion exon 1~3]。通过对其家系进行测序,发现错义突变c.1451G>A(p:R484Q)来自于其外祖父及母亲,而缺失突变deletion exon 1~3来自于其祖母和父亲。结论 发现了1例新复合杂合基因突变致非经典21-羟化酶缺陷症患者,丰富了21-OHD致病突变数据库,有助于提高临床医师对该病的认识。

原发性干燥综合症患者血清IL-21水平及其临床意义

目的通过检测原发性干燥综合症(pSS)患者血清白细胞介素-21(IL-21)的表达水平,探讨其水平变化与pSS患者其他实验室检测指标关系以及其在pSS发病中的作用。方法选取符合2002年修订的pSS国际分类标准的40例初诊pSS患者。采用双抗体夹心ELISA方法检测该组患者及30例正常对照者血清中IL-21的水平。同时,采用免疫化学发光法检测患者的甲状腺情况包括FT3、FT4、TSH、TgAb、TPOAb。抗SSA和抗SSB抗体、ESR、血清蛋白电泳检测分别采用免疫双扩散法、魏氏法、全自凝胶法。并与患者的其他临床表现进行统计学分析。结果pSS患者血清IL-21水平为(1051±335)ng/L,明显高于正常对照组水平[(466±90)ng/L,P<0.05]。特别是pSS患者中抗体阳性组、有腮腺肿痛组、皮疹组、合并甲状腺功能减退组血清IL-21水平均高于各自阴性对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。而且pSS患者中IL-21水平与γ-球蛋白及血沉存在明显正相关(r=0.715,P<0.05;r=0.740,P<0.05)。结论pSS患者血清IL-21水平明显升高,且与γ-球蛋白及血沉存在明显正相关,提示IL-21可能参与pSS的发病过程。

外周血成纤维细胞生长因子-21在脓毒症及感染性休克中的表达

目的探讨脓毒症患者外周血成纤维细胞生长因子-21(FGF-21)的表达,及其在感染性休克方面的预测作用.方法采用前瞻性对照研究,根据诊断标准将病例分为脓毒症非感染性休克组(简称脓毒症组)、感染性休克组,检测并记录观察指标.采用ELISA法检测受试者血浆FGF-21表达水平,并与相关指标作比较,结果进行统计学分析.结果本研究最终纳入符合脓毒症诊断标准的急诊科患者41例,其中感染性休克组16例,脓毒症非感染性休克组25例,另取正常成人对照组20例.与正常对照组(pg/mL:36.38±18.83)相比,脓毒症非感染性休克患者(pg/mL:280.97±230.90)血浆FGF-21水平升高,差异有统计学意义(P<0.05);与脓毒症非感染性休克患者相比,感染性休克患者(pg/mL:931.95±590.90)血浆FGF-21水平升高,差异有统计学意义(P<0.05);逻辑回归结果显示,FGF-21和SOFA评分可作为脓毒症患者发生感染性休克的独立预测因子;FGF-21预测感染性休克的ROC曲线下面积(AUC)为0.870(95%CI0.763~0.977).结论脓毒症患者血FGF-21表达水平升高,且其水平与PCT、动脉血乳酸、SOFA评分和APACHEⅡ评分具有良好相关性;FGF-21、SOFA评分可作为感染性休克的独立预测因子,FGF-21有望作为急诊室诊断脓毒症和感染性休克富有价值的生物学标志物.

IL-21及其在自身免疫病中的研究进展

白介素-21(IL-21)是近年来被发现和关注的一个四螺旋束的细胞因子,主要由活化的CD4^+Th细胞和NKT细胞分泌,与IL-2、IL-4和IL-15具有高度同源性。它的受体属于Ⅰ型细胞因子受体,由α链和γc链组成,广泛分布于T细胞、B细胞、自然杀伤细胞、树突状细胞、巨噬细胞和角质化细胞等细胞表面,在固有免疫和适应性免疫中发挥重要作用。IL-21具有多效性,在类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、炎症性肠病等一些自身免疫病的发病机制中起着重要的作用。本文就IL-21及其与自身免疫病的关系作一综述。

重症肌无力患者外周血中IL-21的表达及其与血清抗AChR抗体类别转换的关系

目的:探讨白细胞介素(IL)-21在重症肌无力(MG)发病中的作用及其对血清抗乙酰胆碱受体(AChR)抗体类别转换的影响。方法:采集26例MG患者和18例健康对照者的外周血,应用ELISA技术检测外周血血清中抗AChR-IgG及其亚型IgG1,IgG2,IgG3的水平以及IL-21的浓度,利用RT-PCR技术检测外周血单个核细胞上IL-21RmRNA的表达水平,采用流式细胞学技术检测其中8例患者B细胞上IL-21R的表达水平,并分析它们之间的关系。结果:MG患者组血清中IL-21浓度(31.686±8.499pg/mL)高于正常对照组(15.147±6.366 pg/mL),差异具有统计学意义(P<0.01);MG患者组PB-MCs上IL-21RmRNA的表达(0.139±0.052)高于正常对照组(0.101±0.022),差异具有统计学意义(P<0.05);但二者在眼肌型和全身型亚组中差异均无统计学意义(P>0.05)。8例MG患者B细胞上的IL-21R的表达水平(1.074±0.375)高于正常对照组(0.389±0.391),差异具有统计学意义(P<0.05)。抗AChR-Ab阳性患者血清IL-21浓度与抗AChR-IgG水平呈正相关,相关系数为0.689(P<0.05),但其与IgG1,IgG2,IgG3亚型的水平均无相关性(P>0.05);PBMCs上IL-21RmRNA的表达与血清抗AChR-IgG及其IgG1,IgG2,IgG3亚型的水平均无相关性(P>0.05);B细胞上IL-21R的表达与抗AChR-IgG及IgG1,IgG3亚型水平呈正相关(分别为P<0.05,P<0.01,P<0.05),而与抗AChR-IgG2的水平无相关性(P>0.05)。结论:IL-21可能通过作用于B细胞上的IL-21R,影响MG患者血清中抗AChR抗体向IgG1和IgG3亚型转换,从而对MG发病起促进作用。

FGF-21对2型糖尿病并大血管病变兔糖脂代谢的影响

目的探讨FGF-21对2型糖尿病并大血管病变兔糖脂代谢的影响。方法建立2型糖尿病动脉粥样硬化兔模型,实验分为四组,A组:生理盐水治疗组;B组:FGF-21治疗组;C组:胰岛素治疗组;D组:FGF-21+胰岛素治疗组。观察各组治疗前后空腹及餐后2h血糖、4周末血脂的变化。结果 (1)B、C、D组均较A组可明显的降低空腹血糖及餐后2h血糖,三组之间差异无统计学意义(P>0.05),增加FGF-21剂量时,可有效地降低血糖及餐后2h血糖。(2)与A组比较,B、C、D组均可明显降低血浆总胆固醇及低密度脂蛋白胆固醇,升高高密度脂蛋白胆固醇,B、C两组比较差异无统计学意义(P>0.05),D组对血脂调节优于B、C两组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 FGF-21可改善2型糖尿病并大血管病变兔的糖脂代谢,和剂量有一定的相关性;FGF-21可协同胰岛素调节脂类代谢。

miR-21靶向PDCD4调控非小细胞肺癌A549细胞的增殖与迁移

目的:探讨miR-21靶向程序性细胞死亡因子4(programmed cell death factor 4,PDCD4)对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)A549细胞增殖和迁移的影响及其作用机制。方法:采用脂质体转染技术分别将miR-21 mimics、miR-21inhibitors、miR-NC质粒转染到对数生长期的A549细胞,转染48 h后在荧光显微镜下观察转染效率,用qPCR法检测A549细胞中miR-21、PDCD4 mRNA的表达水平。用双荧光素酶报告基因验证miR-21与PDCD4的靶向关系,用MTT法检测细胞的增殖能力,用Transwell小室法检测细胞的迁移能力,用ELISA法检测各组细胞培养液中TNF-α水平,用WB法检测细胞中PDCD4、NF-κB p65、p-NF-κB p65蛋白的表达水平。结果:成功构建miR-21过表达和沉默的A549细胞系。双荧光素酶报告基因实验证实miR-21靶向抑制PDCD4表达。过表达miR-21可明显抑制A549细胞中PDCD4 mRNA表达(P<0.01),促进细胞的增殖与迁移能力(P<0.05或P<0.01),提高TNF-α分泌水平(P<0.01),下调PDCD4蛋白的表达(P<0.01),上调p-NF-κB p65蛋白的表达(P<0.05)。沉默miR-21对细胞的影响则与过表达miR-21的作用相反。结论:过表达miR-21可促进A549细胞增殖和迁移能力,该作用可能与其靶向抑制PDCD4、激活NF-κB/TNF-α通路有关。

中国人21-羟化酶缺乏症基因型和临床表型特点研究

利用快速可靠的基因突变检测方法研究中国人 2 1 羟化酶缺乏症 (2 1 hydroxylasedeficiency ,2 1 OHD)基因突变特点及基因型和临床表型的关系。用 8例非经典型患者、35例经典型患者及 34例正常对照者基因组DNA作模板 ,用特定引物特异性扩增CYP2 1的两个片段 ,片段 1从Exon1→Exon3,片段 2从Exon3→Exon10。用片段 1和片段 2为模板进行第二轮PCR ,用特定限制性内切酶消化后经琼脂糖凝胶电泳鉴定 9种突变 ,包括Del、Exon3Del8bp、Q318X、R35 6W、Exon6Cluster、i2g、I172N、P30L和V2 81L。结果表明 ,4 3例患者的 86个等位基因中的 79个(91 9% )检测出突变 ,最常见的是I172N(36 0 % ) ,其次为i2g(2 0 9% )、Del(8 6 % )、P30L(7 0 % )、Q318X(7 0 % )、V2 81L(4 7% )、R35 6W(2 3% )、E6Cluster(2 3% )和Exon3Del8bp(1 2 % )。失盐型、单纯男性化型和非经典型 2 1 羟化酶缺乏症各临床分型中最常见的突变分别是Del(4 4 4 % )、I172N(4 4 2 % )和P30L(37 5 % )。另外根据对 2 1 羟化酶活性影响程度将基因型分为轻、中、重 3组 ,3组间初诊年龄、17 羟孕酮 (17 OHP)、该病亚型构成均存在显著差异 (P <0 .0 5 ) ,提示基因型决定临床表型。研究结果表明 ,中国人 2 1 OHD最常见的突变为I172N、i2g和Del,中?

3T3-L1脂肪细胞膜FGF-21结合蛋白的初步鉴定

成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor,FGF)-21是最近发现的1个可以独立调节血糖的细胞因子,有望成为治疗2型糖尿病的备选药物.但是,FGF-21调解血糖的机理尚不十分清楚.为探讨该因子功能受体,应用偶联方法,以3T3-L1脂肪细胞为靶标,以FGF-21为诱饵,在3T3-L1脂肪细胞膜上寻找结合蛋白.结果表明,生物素标记的FGF-21可与脂肪细胞膜蛋白形成分子质量大小约300kD以上两组复合物.竞争试验显示,非标记的FGF-21可与生物素标记的FGF-21竞争、抑制标记的FGF-21参入复合物;应用非标记FGF-21剂量越大,抑制后者参入复合物的程度越强.结果提示,该复合物是FGF-21特异性的.此外,随着生物素标记的FGF-21剂量增加,观察到的标记复合物越多;但是,当FGF-21剂量达12.5mg/L以上时,观察到的复合物数量不再增加.实验结果提示,复合物形成与FGF-21剂量相关;FGF-21特异结合的蛋白质结合位点饱和后,复合物形成量最大.同时,采用FGF受体特异性抑制剂SU5402可特异性抑制FGF-21在3T3-L1脂肪细胞中的促进葡萄糖吸收作用,提示本实验所观察到的FGF-21-膜蛋白复合物可能就是FGF-21-FGF受体.

IL-21单克隆抗体对MRL/lpr狼疮小鼠的治疗作用

目的:探讨IL-21单克隆抗体对MRL/lpr狼疮小鼠的免疫治疗作用。方法:将20只MRL/lpr狼疮小鼠随机分为模型组和治疗组,每组10只;同年龄同性别C57BL/6小鼠10只作为正常组。治疗组小鼠每周腹腔注射IL-21单克隆抗体(100μg),正常组及模型组小鼠每周腹腔注射等量生理盐水(100μg),连续干预8周。干预结束后观察小鼠皮毛、活动等一般性状及浅表淋巴结大小,并采集小鼠血液、尿液及肾脏标本。采用Western blot法检测三组小鼠肾组织中IL-21蛋白表达情况;采用ELISA法比较三组小鼠血清抗ds-DNA抗体、ANA抗体、血尿素氮、肌酐和炎症因子IL-17A、TGF-β1水平;采用生物化学法比较三组小鼠24 h尿蛋白水平。结果:与正常组比较,模型组小鼠肾组织IL-21、血清抗ds-DNA、ANA抗体水平、尿素氮、肌酐、IL-17A浓度及24 h尿蛋白水平均升高(P<0.05),TGF-β1浓度降低(P<0.01);与模型组比较,治疗组小鼠肾组织IL-21、血清抗ds-DNA、ANA抗体水平、尿素氮、肌酐、IL-17A浓度、24 h尿蛋白水平均降低(P<0.05),TGF-β1浓度升高(P<0.01)。结论:腹腔注射IL-21单克隆抗体可改善MRL/lpr狼疮小鼠免疫功能与肾损害,提示治疗机制可能与重塑Th17/Treg相关细胞因子平衡有关。

人白细胞介素-21cDNA克隆及其在大肠杆菌系统的表达

目的 :克隆人细胞因子IL 2 1全长cDNA及其在大肠杆菌中表达 ,并进一步检测其表达产物的功能。方法 :抽取外周血 ,分离淋巴细胞 ;抗CD3抗体刺激后 ,提取总RNA ,通过RT PCR获得两个部分重叠的IL 2 1cDNA片段 (分别为 5′端 2 4 2bp ,3′端 4 2 5bp) ,重组PCR扩增出IL 2 1全长cDNA。DNA测序正确后 ,将成熟IL 2 1cDNA的编码框序列构建到原核表达载体pET2 8a(+)中。卡那霉素平板筛选及PCR鉴定 ,挑出阳性克隆进行扩增、转化大肠杆菌进行IPTG诱导表达。SDS PAGE、Westernblotting鉴定 ,亲和层析分离纯化得到Mr 为 186 0 0的带有组氨酸标签重组人IL 2 1融合蛋白。透析法重折叠复性 ,MTT法测定其对T细胞增殖活性。结果 :成功获得人IL 2 1全长cDNA ,并以包涵体形式表达于大肠杆菌中。重折叠后的rhIL 2 1融合蛋白具有与抗CD3抗体共刺激T细胞增殖作用。结论 :获得具有生物学活性的rhIL 2 1细胞因子 ,为进一步研究其功能奠定基础。

FGF-21通过上调肝脏LDL受体的表达降低血浆中LDL水平

目的成纤维细胞生长因子-21(FGF-21)可降低实验动物血浆中的低密度脂蛋白(LDL)的浓度,但其作用机制尚不清楚,本实验试图通过研究FGF-21对LDLR的调节作用揭示FGF-21调节血浆LDL浓度的机制。方法向谷氨酸钠(MSG)肥胖大鼠连续注射FGF-21蛋白40d后,检测其血浆中LDL的变化,并用荧光定量PCR的方法结合免疫荧光检测FGF-21对肝脏组织中LDLR mRNA及蛋白的影响。结果 MSG肥胖鼠经FGF-21处理,血浆内的LDL降低18%,其肝脏组织中LDLR mRNA含量提高9倍;HepG2细胞内的LDLR mRNA表达量随FGF-21处理时间增加而提高,且呈剂量依赖性;流式细胞仪检测显示,经FGF-21处理后HepG2细胞表面LDLR蛋白数量增加。结论 FGF-21通过增加肝细胞的LDLR表达量从而降低血浆中LDL浓度。

IL-21/BCL-6/Blimp-1在囊性包虫病中的表达特点研究

目的:研究IL-21/BCL-6/Blimp-1在囊性包虫病患者体内的表达,和参与包虫病发病的作用机制。方法:收集27例新疆医科大学第一附属医院住院肝包虫病患者及同期30名健康体检者的外周静脉血。用ELISA方法检测血浆IL-21水平,确诊的CE患者用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测患者外周血单个核细胞中IL-21/BCL-6/Blimp-1 mRNA的表达量。同时,在包虫病患者组中追踪17例治愈者,测定其在治疗前、治疗后IL-21/BCL-6/Blimp-1的表达量。结果:(1)实时荧光定量PCR结果显示,与健康对照组相比,囊性包虫病患者外周单个核细胞中IL-21/BCL-6 mRNA水平明显升高,差异均具有统计学意义(P<0.05)。但Blimp-1升高不明显。在包虫病治疗前治愈后的结果对比中可观察到IL-21/BCL-6/Blimp-1 mRNA的表达下调,差异均具有统计学意义(P<0.05)。(2)ELISA方法结果显示,CE患者外周血清中IL-21水平与健康对照组相比显著升高并在治愈之后基本回至正常水平,差异具有统计学意义(P<0.05)。IL-21与BCL-6呈正相关(r=0.733,P<0.01);IL-21与Blimp-1无相关性(P=0.179);Blimp-1与BCL-6无相关性(P=0.157)。结论:在人感染细粒棘球蚴的病程发展中,BCL-6、Blimp-1可能通过调节IL-21的表达,促进人体免疫系统抵抗寄生虫感染。IL-21、BCL-6、Blimp-1在手术有效治疗后明显下降,表明这三种因子参与了包虫病发展的免疫机制。

儿童过敏性紫癜患者血清IL-21、TGF-β、TNF-α和IgA1的变化及其意义

目的观察儿童过敏性紫癜(HSP)患者血清白细胞介素-21(IL-21)、转化生长因子-β(TGF-β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和免疫球蛋白A1(IgA1)的变化及意义。方法收集我院儿科2013年6月至2015年8月收治的HSP急性期患儿200例,按照尿常规结果分为HSP组(n=109)和紫癜性肾炎(HSPN)组(n=91)。选取同时期在我院健康体检中心体检的20例健康儿童作为对照组。检测并分析三组儿童的血清IL-21、TGF-β、TNF-α、免疫球蛋白及补体水平变化,比较各组间IgA/C3值变化,并对HSP组患儿血清因子进行Pearson相关分析。结果 HSP组和HSPN组患儿的IL-21水平显著低于对照组,TGF-β、TNF-α、IgA1、IgA水平和IgA/C3显著高于对照组,且HSPN组TNF-α、IgA水平和IgA/C3显著高于HSP组,差异均有统计学意义(P>0.05或P<0.01),而IgG、IgM、C3和C4分别与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05);Pearson相关性分析结果显示,IL-21与TGF-β、TNF-α、IgA1、IgA及IgA/C3均无相关性(P>0.05),TGF-β与TNF-α呈正相关(P<0.05),IgA1与IgA、IgA/C3均呈正相关(P<0.05)。结论检测血清IL-21、TGF-β、TNF-α及IgA1有助于明确儿童过敏性紫癜的发生发展,及早采取措施,可防止病情继续恶化形成紫癜性肾炎。