基于Nrf2/HO-1信号通路研究下调miR-29对慢性心律失常大鼠的干预作用

目的探讨基于核因子E2相关因子(Nrf)2/血红素氧合酶(HO)-1信号通路研究下调微小RNA(miR)-29对慢性心律失常大鼠的干预作用。方法选取40只健康雄性大鼠,10只为正常组,其余30只建立慢性心律失常模型,分为模型组、上调组、下调组,4组分别干预。对各组心肌组织进行苏木素-伊红(HE)染色,采用酶联免疫吸附试验检测血浆抗人脑N端B型钠尿肽前体(NT-proBNP)水平,多普勒超声测定左室收缩末期内径(LVESD)、左室舒张末期内径(LVEDD)、左室射血分数(LVEF)水平变化,无创血流动力学检测收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、平均动脉压(MAP)、心率(HR)。结果与正常组对比,模型组、上调组Nrf2、HO-1、miR-29表达显著上升,下调组Nrf2表达显著下降,miR-29、HO-1表达显著升高(均P<0.05);与模型组对比,上调组HO-1、Nrf2、miR-29表达显著升高,下调组Nrf2、miR-29表达显著下降,HO-1表达显著上升(P<0.05);与上调组对比,下调组Nrf2、miR-29、HO-1表达显著下降(均P<0.05)。与正常组相比,模型组、上调组、下调组SBP、DBP、MAP、HR、LVEF水平明显降低,NT-proBNP、LVESD、LVEDD明显升高(均P<0.05);与模型组相比,上调组、下调组SBP、DBP、MAP、HR水平明显升高,上调组心功能指标明显升高,下调组LVESD、LVEDD、NT-proBNP水平明显降低、LVEF水平明显升高(均P<0.05);与上调组相比,下调组SBP、DBP、MAP、HR、LVEF水平明显升高,NT-proBNP、LVESD、LVEDD水平明显降低(均P<0.05)。结论下调miR-29表达可有效改善慢性心律失常大鼠心功能及血流动力学指标,保护心脏,其机制可能与激活Nrf2/HO-1通路相关。

1型糖尿病患儿血清miRNA-29和TRAF3水平及临床意义

目的探讨1型糖尿病(T1DM)患儿血清微小RNA-29(miRNA-29)和肿瘤坏死因子受体相关因子3(TRAF3)水平及临床意义。方法选取2021年6月至2023年1月该院收治的78例T1DM患儿作为观察组,另选取同期60例健康儿童作为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测两组血清miRNA-29水平,采用酶联免疫吸附试验检测两组血清白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素γ(IFN-γ)、TRAF3水平。采用多因素Logistic回归分析儿童T1DM发生的危险因素;绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析miRNA-29和TRAF3辅助诊断儿童T1DM的价值,并计算曲线下面积(AUC)。结果观察组IL-6、TNF-α、IFN-γ、miRNA-29和TRAF3水平均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。T1DM患儿血清miRNA-29和TRAF3与IL-6、TNF-α、IFN-γ均呈正相关(P<0.05)。T1DM患儿血清miRNA-29与TRAF3呈正相关(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,IL-6、TNF-α、IFN-γ、miRNA-29和TRAF3水平升高均为儿童T1DM发生的独立危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,miRNA-29和TRAF3辅助诊断儿童T1DM的AUC分别为0.866、0.798,均高于IL-6(0.601)、TNF-α(0.687)、IFN-γ(0.572)。结论miRNA-29、TRAF3可能通过介导炎症损伤而参与T1DM的发生,二者有助于儿童T1DM的辅助诊断。

基质金属蛋白酶1、3,基质金属蛋白酶组织抑制剂1和miR-29在大鼠肺纤维化中及活性维生素D3处理后的表达与作用

目的:探讨大鼠肺纤维化发生发展中基质金属蛋白酶1(MMP1)、MMP3、基质金属蛋白酶组织抑制剂1(TIMP1)及miR-29的表达和作用以及活性维生素D3[1,25(OH)_2D_3]处理对这些基因表达的影响。方法:雄性SD大鼠随机分为预防组和治疗组。预防组分为对照组Ⅰ、模型组Ⅰ和给药组Ⅰ,治疗组分为对照组Ⅱ、模型组Ⅱ和给药组Ⅱ。模型组Ⅰ/Ⅱ和给药组Ⅰ/Ⅱ经气管注入博莱霉素,对照组Ⅰ/Ⅱ经气管注入生理盐水。预防组和治疗组分别于术后第2和14天腹腔注射给药,给药组给予活性维生素D3,模型组给予活性维生素D3溶剂,对照组给予生理盐水。预防组的各组分别于术后第14、21、28天处死大鼠取材,治疗组的各组分别于术后第21和28天处死大鼠取材。实时定量PCR检测大鼠肺组织中miR-29a及TIMP1 mRNA表达水平,免疫组织化学检测组织中MMP1、MMP3和TIMP1的表达水平。结果:模型组Ⅰ/Ⅱ和给药组Ⅰ/Ⅱ中的MMP1、MMP3和TIMP1的表达均明显高于相同时间点对照组Ⅰ/Ⅱ中的表达,而miR-29a的表达明显低于相应的对照组Ⅰ/Ⅱ;给药组Ⅰ/Ⅱ中MMP1、MMP3和TIMP1的表达均低于相应时间点的模型组Ⅰ/Ⅱ的表达,而给药组Ⅰ/Ⅱ中miR-29a的表达则高于模型组Ⅰ/Ⅱ中的表达。结论:MMP1、MMP3、TIMP1和miR-29在大鼠肺纤维化发生发展中具有重要作用,活性维生素D3可以促进miR-29表达,抑制MMP1、MMP3、TIMP1的表达;可能是通过miR-29调节包括MMP1、MMP3、TIMP1在内的多种靶基因来发挥抑制纤维化的作用。

miR-29和ZO-1在大鼠血神经屏障中的作用研究

目的:观察重组组织型纤溶酶原激活剂(rt PA)通过miR-29对大鼠外周神经闭锁小带蛋白-1(ZO-1表达水平的影响。方法:健康雌性SD大鼠随机分为对照组(Control)、rt PA组(rt PA)和无催化活性rt PAi组(rt PAi)。3组大鼠分别在坐骨神经旁注射生理盐水、rt PA和rt PAi,2 h后利用real time RT-PCR、Western Blot及免疫荧光方法检测坐骨神经内ZO-1的mRNA和蛋白表达水平变化,并采用real time RT-PCR方法检测坐骨神经miR-29的表达水平。结果:与对照组相比,rt PA组大鼠坐骨神经周围注射rt PA后,ZO-1的mRNA表达下降(P <0. 05),Western Blot发现ZO-1蛋白表达水平下降(P <0. 05),免疫荧光检测同样发现ZO-1表达减少;无催化活性的rt PAi处理大鼠坐骨神经后,神经束膜内ZO-1的mRNA及蛋白水平同样明显下降(P <0. 05);与对照组相比,rt PA和rt PAi处理2 h后大鼠坐骨神经内miR-29表达均明显增高(P <0. 05)。结论:rt PA通过减少神经束膜中ZO-1表达水平,增加神经束膜通透性,其作用不依赖于其对凝血酶原复合物的催化功能,可能通过增加miR-29表达下调ZO-1蛋白表达水平。

5'-氮杂-2'-脱氧胞苷对HT-29和LoVo结直肠癌细胞株中Wif-1基因甲基化状态、mRNA表达及蛋白表达的影响

目的探讨甲基化酶抑制剂5'-氮杂-2'-脱氧胞苷(5'-Aza-2'-deoxycytidine,5'-Aza-CdR)对结直肠癌细胞株HT-29和LoVo中Wif-1基因甲基化水平及蛋白表达的影响。方法用不同浓度(0.5、1.0、1.5μmol/L)5'-Aza-CdR处理结直肠癌细胞株HT-29和LoVo。应用TaqMan探针为基础的实时定量PCR(Methylight)方法、SYBR Green PCR方法及蛋白印迹实验(Western blot)检测药物处理前后HT-29和LoVo细胞中Wif-1基因的甲基化状态、mRNA和蛋白表达。结果 Methylight检测HT-29和LoVo细胞中Wif-1蛋白在药物作用后异常甲基化得到逆转;实时荧光定量PCR和Western Blot检测到0.5、1.0、1.5μmol/L 5'-Aza-CdR处理后Wif-1基因mRNA和蛋白重新表达,实时荧光定量PCR检测DMSO对照组和不同浓度5'-Aza-CdR(0.5、1.0、1.5μmol/L)在HT-29细胞株相对表达量分别为(1.000±0.000)、(1.207±0.052)、(1.790±0.033)和(2.016±0.123);在LoVo细胞株相对表达量分别为(1.000±0.000)、(1.294±0.048)、(1.893±0.061)和(2.204±0.041)。Western blot检测Wif-1蛋白检测DMSO对照组和不同浓度5'-Aza-CdR在HT-29细胞株相对表达量分别为(0.456±0.040)、(0.511±0.025)、(0.857±0.031)和(0.934±0.047);LoVo细胞株相对表达量分别为(0.842±0.032)、(0.844±0.044)、(0.854±0.037)和(0.856±0.034)。以上作用均呈时间、剂量依赖性,Wif-1基因mRNA在HT-29细胞株表达和LoVo细胞株表达差异均有高度统计学意义(F=144.823,P=0.000;F=476.195,P=0.000)。Wif-1蛋白表达在HT-29细胞株表达差异有高度统计学意义(F=129.674,P=0.000),但Wif-1蛋白表达在LoVo细胞株表达差异无统计学意义(F=0.117,P=0.948)。结论结直肠癌细胞株HT-29和LoVo中Wif-1启动子甲基化可能是导致该基因表达下调甚至失活的主要原因。5'-Aza-CdR能够较成功地逆转结直肠癌细胞株HT-29和LoVo中Wif-1基因的甲基化状态,并能恢复mRNA及蛋白重新表达。

5'-氮杂-2'-脱氧胞苷对结直肠癌细胞株HT-29和LoVo中MLH-1基因甲基化状态、mRNA及蛋白表达的影响

目的:探讨甲基化酶抑制剂5'-氮杂-2'-脱氧胞苷(5'-Aza-2'-deoxycytidine)对结直肠癌细胞株HT-29和Lo Vo中MLH-1基因甲基化水平、mRNA及蛋白表达的影响。方法:用不同浓度5'-氮杂-2'-脱氧胞苷处理结直肠癌细胞株HT-29和Lo Vo。应用Taq Man探针为基础的实时定量PCR(Methylight)方法、SYBR Green PCR方法及蛋白印迹实验(Western blot)检测药物处理前后HT-29和Lo Vo细胞中MLH-1基因的甲基化状态、mRNA和蛋白表达。结果:Methylight检测HT-29细胞株中MLH-1蛋白在药物作用后异常甲基化得到逆转;实时荧光定量PCR和Western Blot检测到0.5、1.0、1.5μmol/L 5'-氮杂-2'-脱氧胞苷处理后MLH-1基因mRNA和蛋白表达上调,实时荧光定量PCR检测对照组和不同浓度实验组在HT-29细胞株相对表达量分别为1.000±0.000、1.171±0.126、1.356±0.085和1.422±0.090;在Lo Vo细胞株相对表达量分别为1.000±0.000、1.117±0.094、1.273±0.062和1.285±0.070。Western blot检测MLH-1蛋白对照组和不同浓度实验组在HT-29细胞株相对表达量分别为0.114±0.033、0.365±0.040、0.831±0.041和0.849±0.051;Lo Vo细胞株相对表达量分别为0.602±0.020、0.621±0.028、0.934±0.029和1.057±0.045。以上作用均呈时间、剂量依赖性,MLH-1基因mRNA在HT-29细胞株表达(F=8.918,P=0.010)和Lo Vo细胞株表达(F=8.351,P=0.011)具有统计学意义。MLH-1蛋白表达在HT-29细胞株表达(F=226.825,P=0.000)和Lo Vo细胞株表达(F=153.642,P=0.000)亦具有统计学意义。结论:结直肠癌细胞株HT-29和Lo Vo中MLH-1启动子甲基化可能是导致该基因表达下调甚至失活的主要原因。5'-氮杂-2'-脱氧胞苷能够较成功的逆转结直肠癌细胞株HT-29和Lo Vo中MLH-1基因的甲基化状态,并能恢复mRNA及蛋白重新表达。

TS-1分子筛的合成 Ⅰ.^(29)Si和~1H NMR研究正硅酸乙酯的水解

利用２９Ｓｉ和１ＨＮＭＲ方法研究了ＴＳ１分子筛合成过程中正硅酸乙酯（ＴＥＯＳ）的水解行为．１ＨＮＭＲ结果表明，ＴＥＯＳ在四丙基氢氧化铵（ＴＰＡＯＨ）溶液中的水解速度快于在四乙基氢氧化铵（ＴＥＡＯＨ）中的水解速度．ＴＥＯＳ水解后的２９ＳｉＮＭＲ谱显示，ＴＥＯＳ在ＴＰＡＯＨ中水解产生的聚合硅酸根物种的分布与在ＴＥＡＯＨ中的类似，都存在着单体、二聚、三聚及环聚等硅酸根物种的平衡，但ＴＥＯＳＴＥＡＯＨ体系中低聚硅酸根物种的浓度明显大于ＴＥＯＳＴＰＡＯＨ中的浓度．向水解后的样品中添加水，可促使多聚硅酸根物种转化为低聚物种．大量异丙醇的加入将导致单聚和二聚硅酸根物种的高聚．钛酸四丁酯加入到ＴＥＯＳＴＰＡＯＨ水解体系中得到的２９ＳｉＮＭＲ结果明显不同于ＴＥＯＳＴＥＡＯＨ水解体系．

分化抑制因子1对结肠癌HT-29细胞增殖的影响

目的检测分化抑制因子1(Id1)对结肠癌HT-29细胞VEGF表达的影响,探讨其在结肠癌增殖中的作用。方法 HT-29转染Id1表达质粒,RT-PCR方法和Western印迹法检测血管内皮生长因子(VEGF)mRNA和蛋白的表达,MTT法检测各组细胞增殖情况;合成Id-1干扰序列转染HT-29细胞后,RT-PCR及Western印迹检测HT-29细胞VEGF mRNA和蛋白的表达情况,采用MTT法检测各组细胞增殖情况。结果 Id1表达质粒空白组、对照组(空载体组)、过表达组VEGF/GAPDH mRNA分别为:0.002 99±0.000 687、0.003 49±0.001 34、0.031 3±0.006 05(P<0.01);VEGF/GAPDH蛋白分别为:0.132±0.035 1、0.131±0.053 0、0.245±0.032 6(P<0.01),MTT实验显示相对对照组,过表达组增殖明显快(P<0.01)。Id-1干扰空白组、对照组(空载体组)、抑表达组VEGF/GAPDH mRNA分别为:0.006 16±0.000 829、0.006 26±0.000 447、0.002 3±0.000 308(P<0.01);VEGF/GAPDH蛋白分别为:0.450±0.039 3、0.464±0.023 1、0.231±0.027 3(P<0.01)。MTT实验显示相对对照组,抑表达组增殖明显减慢(P<0.01)。Id1过表达能显著上调VEGF mRNA和蛋白表达,提高细胞的生长,Id1抑制后能显著下调VEGF mRNA和蛋白表达,减缓细胞的生长。结论在结肠癌HT-29细胞中Id1为VEGF的上游基因,Id1通过Id1↑→VEGF↑途径来影响结肠癌细胞增殖,在肿瘤血管生成中发挥重要作用。Id1有望成为结肠癌治疗的一个新靶点。

宁夏各免疫政策阶段1~29岁人群乙型肝炎血清学调查结果分析

目的分析1992~2019年宁夏各免疫政策阶段1~29岁人群乙型肝炎血清学流行病学调查情况。方法采用描述性流行病学方法对调查资料进行统计分析。结果1992年、2006年、2014年、2019年4次乙肝血清学流行病学调查乙肝表面抗原(HBsAg)总阳性检出率分别为11.7%、4.0%、1.1%、0.5%,标准化后HBsAg标化阳性率随免疫规划政策调整呈现下降趋势,乙肝表面抗体(HBsAb)总阳性检出率分别为25.3%、62.3%、64.1%、76.3%,呈上升趋势。4次调查年份性别间HBsAg及HBsAb阳性检出率均无统计学差异。乙肝疫苗接种率高的人群HBsAg阳性检出率低,HBsAb阳性检出率高。结论随宁夏免疫规划政策调整,乙肝疫苗接种率不断提高,乙肝保护性抗体水平显著提升,维持高水平乙肝疫苗接种率,保证乙肝免疫保护屏障持续有效。

pcDNA3.1/DLC-1重组质粒的构建及其在HT-29细胞中的表达

目的构建和表达DLC-1(deleted in liver cancer)基因重组质粒。方法用PCR法得到DLC-1基因片段,此基因片段带有XbaⅠ和BamHⅠ两个酶切位点,然后将此片段和真核表达载体pcDNA3.1连接,转化大肠杆菌DH5a,利用脂质体介导将pcDNA3.1/DLC-1重组质粒转染到结肠癌HT-29细胞中,再用RT-PCR法检测重组质粒的表达。结果重组质粒经XbaⅠ和BamHⅠ双酶切和测序与DLC-1基因序列一致;利用脂质体介导将pcDNA3.1/DLC-1重组质粒导入HT-29细胞,获得了DLC-1基因的表达。结论成功构建pcDNA3.1/DLC-1重组质粒并在HT-29细胞内表达。

人参皂苷Rg3对HT-29细胞株MMP-1表达和迁移能力的影响

目的:研究人参皂苷Rg3对结肠癌细胞株HT-29基质金属蛋白酶-1(MMP-1)表达和细胞迁移能力的影响。方法:体外培养HT-29细胞,分为人参皂苷Rg3高剂量组(100μg/mL)、中剂量组(50μg/mL)、低剂量组(25μg/mL)和空白对照组,培养HT-29细胞24、48、72h,RT-PCR法测MMP-1 mRNA表达。利用划痕实验观察Rg3对HT-29细胞迁移能力的影响。结果:24h高剂量组与对照组相比,有显著的统计学差异(P<0.01);48h低、中、高剂量组与对照组相比均有显著的统计学差异(P<0.05、P<0.01、P<0.01);72h低、中、高剂量组与对照组相比均有显著的统计学差异(P<0.01、P<0.01、P<0.01)。划痕实验中空白对照组过河时间为(47.33±2.49)h,低、中、高剂量组过河时间分别为(55.33±2.49)h(P<0.01)、(64.00±1.63)h(P<0.01)和(73.33±1.89)h(P<0.01)。结论:人参皂苷Rg3能抑制HT-29细胞MMP-1的表达和抑制HT-29细胞的迁移能力,并且随着药物浓度的增加及时间的延长,抑制作用增强。

灭活HIV-1颗粒对HT-29细胞增殖、凋亡和紧密连接的影响

目的通过研究灭活HIV-1IIIB颗粒对人结肠癌HT-29细胞的增殖、凋亡和紧密连接的影响,探讨HIV-1病毒子在"AIDS肠道病灶论"中的直接作用机制。方法将AT-2灭活的HIV-1IIIB颗粒加入到HT-29培养系统中,使p24抗原终质量浓度为1 ng/ml;WST-1法检测HT-29的增殖率;运用流式细胞术检测HT-29中Ki-67和Apo2.7的表达以及线粒体膜电势和线粒体质量的变化;运用流式细胞术检测HT-29紧密连接蛋白Occludin的表达。结果灭活HIV-1IIIB抑制HT-29增殖并抑制Ki-67表达;灭活HIV-1IIIB诱导HT-29凋亡并降低线粒体膜电势和线粒体质量;灭活HIV-1IIIB下调Occludin表达,提示其破坏细胞的紧密连接。结论 AT-2灭活HIV-1IIIB能够抑制HT-29增殖,诱导HT-29凋亡,并破坏HT-29紧密连接,提示在"AIDS肠道病灶论"中,导致肠黏膜屏障完整性受损的因素除了HIV-1引发的"旁观者效应"外,HIV-1病毒子本身可以对肠上皮细胞(intestinal epithelial cell,IEC)产生细胞毒作用;而肠黏膜通透性增加会引起肠菌转位,继而引发系统性免疫过度活化。

Id1对结肠癌HT-29细胞VEGF表达及增殖的影响

目的探讨分化抑制因子1(inhibitor of differentiation-1,Id1)对结肠癌HT-29细胞VEGF表达的影响及Id1在结肠癌细胞增殖中的作用。方法 HT-29转染Id1表达质粒及Id-1干扰序列后,采用RT-PCR方法和Western blot法检测VEGF mRNA和蛋白的表达,MTT法检测各组细胞增殖情况。结果 Id1过表达能显著上调VEGF mRNA和蛋白表达(P<0.01),促进细胞的生长(P<0.01);Id1抑制后能显著下调VEGF mRNA和蛋白表达(P<0.01),减缓细胞的生长(P<0.01)。结论在结肠癌HT-29细胞中Id1为VEGF的上游基因,Id1可通过正性调控VEGF影响结肠癌细胞增殖。

DNA甲基转移酶1基因沉默对HT-29细胞凋亡的影响

目的:观察DNA甲基转移酶1(DNMT1)基因沉默对结肠癌HT-29细胞凋亡的影响。方法:HT-29细胞分为3组:未处理组、对照siRNA组及DNMT1siRNA组,后2细胞转染对照siRNA和DNMT1siRNA,24h后,通过RT-PCR和Westernblot观察3组细胞DNMT1、Caspase-3/9、bcl-2及BaxmRNA和蛋白表达的变化,通过流式细胞术分析HT-29细胞凋亡,并测定Caspase-3/9的活性。结果:DNMT1siRNA组中DNMT1mRNA和蛋白的相对表达量为(0.273±0.016)和(1.127±0.019),低于未处理组[分别为(1.729±0.023)和(2.741±0.031)]和对照siRNA组[分别为(1.751±0.018)和(2.673±0.027)](F分别为5822.683和3656.560,P均<0.001)。DNMT1siRNA组细胞凋亡率为(22.65%±1.67%),高于未处理组(7.92%±1.29%)和对照siRNA组(8.13%±1.21%)(F=108.460,P<0.001)。DNMT1siRNA组细胞的Caspase-3/9活性[分别为(2671.83±57.63)和(2187.71±68.35)]高于未处理组[(196.47±16.73)和(511.35±34.90)]和对照siRNA组[(215.29±14.38)和(534.78±41.70)](F分别为4790.975和1089.891,P均<0.001)。与未处理组和对照组相比DNMT1siRNA组Bcl-2mR-NA和蛋白的表达降低,但Caspase-3/9和BaxmRNA和蛋白的表达升高(P<0.05)。结论:DNMT1的下调能诱导HT-29细胞凋亡,其可能的作用机制与caspase-3/9、bcl-2和bax表达的变化密切相关。

MRI动态增强成像联合血清PAI-1、CA27-29对乳腺癌的诊断价值

目的探究MRI动态增强成像(DEC-MRI)联合血清纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)、CA27-29对乳腺癌的诊断价值。方法选取2019年1月至2020年2月于本院乳腺外科就诊的乳腺癌患者90例作为研究对象,另选取年龄相当的同期来本院就诊的乳腺良性肿瘤患者50例作为良性组,所有患者均行DECMRI检查,酶联免疫吸附法(ELISA)检测受试者血清PAI-1、CA27-29水平,受试者工作特征曲线(ROC)分析血清PAI-1、CA27-29水平对乳腺癌的预测价值;Kappa检验分析DEC-MRI及血清PAI-1、CA27-29对乳腺癌诊断结果与病理诊断的一致性;比较DEC-MRI及血清PAI-1、CA27-29与乳腺癌临床病理特征的关系,并分析三者对乳腺癌的诊断价值。结果与良性组相比,乳腺癌组患者病灶DEC-MRI表现为与周围组织分界不清,边缘模糊,强化不均,血清PAI-1、CA27-29水平升高(P﹤0.05);乳腺良性肿瘤病灶表现为与周围组织分界清晰、边缘光滑,强化均匀。ROC分析显示,血清PAI-1、CA27-29预测乳腺癌的截断值分别为25.182 ng/mg、34.373 U/mL。DEC-MRI、血清PAI-1、CA27-29及联合检测诊断乳腺癌结果与病理诊断结果均有中等以上一致性(Kappa=0.799、0.587、0.487、0.835,P﹤0.05)。DEC-MRI及血清PAI-1、CA27-29与肿瘤直径、TNM分期、分类风险及淋巴结转移密切相关(P﹤0.05)。DEC-MRI联合血清PAI-1、CA27-29诊断敏感度显著高于单独诊断(P﹤0.05)。结论血清PAI-1、CA27-29水平升高可能与乳腺癌有关,DEC-MRI扫描联合血清PAI-1、CA27-29可提高乳腺癌诊断灵敏度和准确度,对乳腺癌具有较高预测价值。

渤海东部旅大29-1构造沙二段砂砾岩锆石定年及物源示踪

为示踪辽东凹陷LD29-1构造沙二段(Es_2)砂岩沉积,对LD29-1-1、LD29-1-1Sa及LD29-1-2等3口井的沙二段砂岩6个岩屑样品进行了碎屑锆石U-Pb定年和锆石阴极发光(CL)图像分析。结果表明:LD29-1-1井样品中白垩纪(K)锆石含量高达41.2%,具有108 Ma峰值年龄,锆石柱状晶形完整,并且棱角明显;而LD29-1-1Sa及LD29-1-2井样品的中元古代(Pt_2)锆石含量高达74%～75%,中生代(Mz)锆石含量少,具有～1.5 Ga和～1.8 Ga双峰值特征,锆石晶体明显小于LD29-1-1井沉积物,并且晶形不完整、边缘均被磨圆。因此,认为LD29-1-1井沙二段砂岩为近源沉积,母岩为长兴岛凸起斜坡带中生界碎屑岩,而LD29-1-1Sa及LD29-1-2井沙二段砂体为远源沉积,母岩以辽东半岛西部复州地区广泛分布的中、上元古界沉积岩为主,在搬运至斜坡带时才混入少量中生界碎屑岩。

miR-29通过调节抗凋亡蛋白Mcl-1表达参与胃癌细胞多药耐药的发生

目的研究miR-29在胃癌多药耐药细胞株[SGC7901/长春新碱(vincristine,VCR)及SGC7901/阿霉素(adriamycin,ADR)]及其亲本细胞(SGC7901)中的表达差异,探讨其在胃癌多药耐药发生中的作用及可能机制.方法 qRT-PCR检测miR-29在不同胃癌细胞系中的表达差异,通过细胞转染调控miR-29的表达水平,MTT法检测不同化疗药物对转染后胃癌细胞的IC50值变化;流式细胞术检测细胞凋亡及周期变化;并应用Western blot、双荧光素酶报告基因实验等方法探讨其可能机制.结果 SGC7901/VCR及SGC7901/ADR细胞中miR-29家族(miR-29a/b/c)相对表达量均显著低于其亲本细胞SGC7901(P<0.05);MTT实验表明,下调miR-29表达后SGC7901细胞对不同化疗药物的IC50值显著增高(P<0.05);而上调miR-29表达后SGC7901/VCR及SGC7901/ADR细胞对不同化疗药物的IC50值则显著降低(P<0.05);流式细胞术检测结果显示,miR-29表达变化可显著改变5-氟尿嘧啶诱导胃癌细胞的凋亡水平(P<0.05);Western blot、双荧光素酶报告基因实验等证实髓细胞白血病因子-1(myeloid cell leukemia-1,Mcl-1)是miR-29直接调控靶基因.结论 miR-29表达下调是人胃癌细胞多药耐药发生的机制之一,其可能与负性调控抗凋亡蛋白Mcl-1表达有关.

Glut1基因沉默对人结肠癌HT-29细胞株增殖、分化及凋亡的影响及机制研究

目的探究葡萄糖转运蛋白1(Glut 1)基因沉默对人结直肠癌HT-29细胞增殖、分化及凋亡的影响及机制。方法将Glut 1干扰序列(siRNA)转染至人结肠癌HT-29细胞作为shGlut 1组,非干扰序列转至HT-29细胞作为NC组,HT-29细胞作为Blank组,癌旁正常组织细胞作为Control组,应用qRT-PCR法和Western blot法检测各组细胞中Glut 1、TGF-β1、PI3K、AKT、PTEN、mTOR mRNA和相应蛋白的表达水平,并检测Bcl-2/Bax比值,p-PI3K、p-S 473-AKT、p-S 389-S6K1、p-T 70-4 EBP1、Cleaved Caspase-3、Cleaved-PARP蛋白的表达;MTT法检测各组细胞增殖能力变化,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡情况,克隆形成实验检测肿瘤细胞体外增殖成瘤能力。结果免疫荧光结果表明shGlut 1组转染效率较高,符合实验标准;与Control组比较,结肠癌组织中Glut 1、TGF-β1、PI3K、AKT、mTOR、Bcl-2 mRNA和蛋白的表达上调,而PTEN、Bax的mRNA和蛋白的表达下调,p-PI3K、p-S 473-AKT、p-S 389-S6K1和p-T 70-4 EBP1蛋白表达上调,Cleaved Caspase-3、Cleaved-PARP蛋白表达下调(P均<0.05);与Blank组和NC组比较,shGlut 1组Glut 1、TGF-β1、PI3K、AKT、mTORC 1、Bcl-2 mRNA和蛋白的表达下调,PTEN、Bax mRNA和蛋白的表达上调,p-PI3K、p-S 473-AKT、p-S 389-S6K1和p-T 70-4 EBP1表达下调,Cleaved Caspase-3、Cleaved-PARP蛋白的表达上调,增殖率下调,G0/G1期较多而S期较少,凋亡率上调,克隆形成细细胞生长较慢(P均<0.05)。结论Glut 1基因沉默能抑制结直肠癌细胞的增殖与分化,促进其凋亡,考虑为抑制TGF-β/PI3K-AKT-mTOR信号通路。

miR-29b通过靶向调节特异性蛋白1调控糖尿病性白内障晶状体上皮细胞间质转化的作用

目的探究miR-29b通过靶向调节特异性蛋白1(SP-1)调控糖尿病性白内障晶状体上皮细胞间质转化(EMT)的作用机制。方法体外培养人晶状体上皮细胞(HLE-B3),分为正常组、高糖组、阴性组、miR-29b mimics组和miR-29b mimics+SP-1组。除正常组细胞外,其余各组细胞于35.5 mmol·L^(-1)D-葡萄糖环境中培养。阴性组、miR-29b mimics组和miR-29b mimics+SP-1组分别共转染miRNA模拟物scramble和阴性siRNA序列、转染miR-29b模拟物、共转染miR-29b模拟物和SP-1基因序列。采用实时荧光定量PCR检测各组细胞miR-29b和SP-1 mRNA表达,采用Transwell法和细胞划痕实验检测各组细胞迁移活性。采用免疫荧光染色和Western blot检测和各组细胞钙黏蛋白(E-Cadherin、N-Cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、SP-1蛋白表达情况。根据生物信息学数据库和双荧光素酶报告基因验证miR-29b和SP-1基因的靶向关系。结果35.5 mmol·L^(-1)D-葡萄糖组处理HLE-B324 h,细胞中miR-29b mRNA相对表达量较正常组降低,SP-1 mRNA和蛋白相对表达量均升高(均为P<0.05)。与正常组相比,高糖组细胞Transwell小室迁移数量和划痕愈合率增加,E-Cadherin蛋白表达降低,N-Cadherin和Vimentin蛋白表达升高(均为P<0.05)。而与高糖组和阴性组相比,miR-29b mimics组细胞miR-29b mRNA相对表达量和E-Cadherin蛋白表达增加,SP-1、N-Cadherin和Vimentin蛋白表达降低,细胞Transwell小室迁移数量和划痕愈合率均减少(均为P<0.05)。miR-29b mimics+SP-1组较miR-29b mimics组细胞中E-Cadherin蛋白表达降低,N-Cadherin和Vimentin蛋白表达增加,细胞Transwell小室迁移数量和划痕愈合率增加(均为P<0.05)。经双荧光素酶报告基因验证,转染miR-29b mimics质粒可降低SP1-3’UTR-WT荧光素酶活性(P<0.05),但不降低SP1-3’UTR-MUT荧光素酶活性(P>0.05)。结论miR-29b在糖尿病性白内障体外细胞模型中表达下调。上调miR-29b表达可通过靶向SP-1基因参与抑制高糖诱导晶状体上皮细胞EMT的进程。

miR-29s通过下调大麻素受体1抑制ACEA促J774A.1细胞迁移的活性

目的研究miR-29a-3p、miR-29b-3p和miR-29c-3p是否可以影响J774A.1细胞中大麻素受体1(cannabinoid receptor type 1,CB1)的表达以及其迁移功能。方法 RT-q PCR法检测CB1 mRNA表达;Boyden chamber法检测J774A.1细胞迁移能力的变化。结果本研究证明了在J774A.1细胞里,CB1的激动剂ACEA(Arachidonyl-2'-chloroethylamide)可以上调CB1 mRNA的表达,而分别转染了miR-29a-3p、miR-29b-3p和miR-29c-3p的mimics后可以抑制这一过程;同时对J774A.1细胞转染miR-29a-3p、miR-29b-3p和miR-29c-3p的mimics可以阻碍ACEA诱导的J774A.1细胞的迁移。结论 miR-29s通过下调CB1的表达抑制了ACEA促J774A.1细胞迁移的活性。