用生物信息学方法克隆大鼠核不均一核蛋白A2/B1基因

采用外显子预测、序列匹配、序列拼接等生物信息学方法电子克隆了一个在大鼠心肌缺血预适应中表达上调的表达序列标签所代表的核不均一核蛋白A2/B1基因,用逆转录聚合酶链反应证实了该基因的开放阅读框。它的开放阅读框为1026 bp,由10个外显子构成,推测编码341个氨基酸。它的编码区与人和小鼠的核不均一核蛋白A2/B1基因分别有92％和95％的一致性,蛋白质序列的一致性几乎为100％。这些结果表明核不均一核蛋白A2/B1基因在不同物种间高度保守,它在大鼠心肌缺血预适应中表达上调,可能在缺血预适应的内源性保护机制中发挥了重要的作用。

核内不均一核糖核蛋白A_2/B_1在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

目的 探讨核内不均一核糖核蛋白A2 /B1(hnRNPA2 /B1)在非小细胞肺癌 (NSCLC)中的表达特征及其临床意义。方法 应用免疫组织化学S P法检测hnRNPA2 /B1在 5 8例NSCLC及癌旁组织、支气管切缘和 3 0例肺良性病变肺组织中的表达 ,并分析该蛋白表达与肺癌临床病理特征的关系。结果 NSCLC组织中hnRNPA2 /B1阳性表达率 ( 63 .79% )显著高于癌旁肺组织 ( 4 3 .10 % )和肺良性病变肺组织 ( 2 0 .0 0 % )(P =0 .0 0 0 ) ,癌旁肺组织中hnRNPA2 /B1阳性率亦显著高于肺良性病变肺组织 (P <0 .0 5 )。肺癌患者支气管切缘上皮增生组织阳性表达率 ( 4 0 .0 0 % )显著高于正常支气管上皮 ( 15 .15 % ) (P =0 .0 3 2 )。低分化肺癌hnRNPA2 /B1阳性表达率 ( 78.13 % )显著高于中 -高分化肺癌 ( 4 6.15 % ) (P <0 .0 5 ) ,伴有淋巴结转移肺癌阳性表达率 ( 75 .0 0 % )显著高于无淋巴结转移肺癌 ( 5 0 .0 0 % ) (P <0 .0 5 ) ,Ⅲ +Ⅳ期肺癌阳性表达率 ( 78.5 7% )显著高于Ⅰ +Ⅱ期 ( 5 0 .0 0 % ) (P <0 .0 5 ) ,T3 +T4肺癌阳性表达率 ( 77.42 % )显著高于T1+T2 ( 4 8.15 % ) (P<0 .0 5 )。不同组织学类型肺癌组织中hnRNPA2 /B1表达水平无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论 hnRNPA2 /B1的异常表达在肺癌的发生、发展和转移中?

异质性胞核核糖核蛋白A2/B1 hnRNP A2/B1基因克隆及其在滑膜组织中的表达

目的获得hnRNPA2/B1cDNA序列,研究其在滑膜组织中的表达水平,探讨它在类风湿滑膜炎中可能的致病作用。方法从人外周血单个核细胞中提取总RNA进行逆转录反应,经PCR扩增目的片段,将其克隆于PUC-T1质粒上,并经酶切电泳、DNA测序鉴定分析。采用免疫组化和原位杂交方法,分别利用单克隆抗体和特异的cDNA探针,检测滑膜组织中hnRNPA2/B1的含量及表达水平。结果从人外周血单个核细胞总RNA中扩增得到目的片段,并经测序证实该片段为hnRNPA2/B1的编码序列。免疫组化和原位杂交显示hnRNPA2/B1在类风湿关节炎(RA)滑膜中的表达水平整体上较骨关节炎(OA)和正常对照滑膜组高(P<0.05)。结论成功克隆hnRNPA2/B1cDNA;初步证明hnRNPA2/B1水平在RA关节局部增高,推测它可能参与了类风湿滑膜炎的发病。

脑心肌炎病毒内部核蛋白体进入位点介导白介素-12基因在B16F1细胞中的表达

目的 研究脑心肌炎病毒的内部核蛋白体进入位点连接的鼠白介素 12 (mIL 12 )的 p4 0和p35双亚基基因在同一启动子的调控下能否得以有效地表达并形成异二聚体 p70。 方法 采用脂质体法将表达经脑心肌炎病毒的内部核蛋白体进入位点连接的p4 0和 p35的质粒mIL - 12 /AD1 1转染B16F1细胞 ,连续 3d收集并换细胞培养液 ,并检测其中的mIL 12 (p70 )量。结果 ELISA结果显示 ,mIL12 (p70 )的表达量随着时间推移逐步下降 ,由第 1天的 15 .5ng/ml逐步下降到第 3天的 9.3ng/ml。表明mIL 12 p4 0和p35双亚基基因得到有效的表达并加工形成了异二聚体p70。结论 脑心肌炎病毒的内部核蛋白体进入位点连接的双基因p4 0和 p35在同一启动子的调控下得以同时表达。

核内不均一核糖核蛋白A2/B1在子宫内膜异位症组织中的表达

目的:研究核内不均一核糖核蛋白A2/B1(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A2/B1,hnRNP A2/B1)在正常子宫内膜、子宫内膜异位症(EMs)患者在位内膜、患者异位内膜间的表达差异。方法:用免疫组织化学法和Western blot分析,研究3例增生中晚期正常子宫内膜、3例增生中晚期EMs患者的在位内膜和异位内膜中,hnRNP A2/B1蛋白的表达差异。结果:hnRNP A2/B1主要表达于间质和腺上皮细胞的细胞核内,且EMs患者在位内膜和异位内膜中的表达强度,均低于正常内膜中的表达(P<0.05);而患者在位内膜和异位内膜中的表达,无明显差异(P>0.05)。结论:hnRNP A2/B1可能参与EMs的发生和发展。

核内不均一核糖核蛋白A2/B1及p53蛋白诊断肺癌的价值

目的探讨检测支气管肺泡灌洗液(BALF)脱落细胞中核内不均一核糖核蛋白(hnRNP)A2/B1和血细胞中p53蛋白在肺癌诊断中的价值。方法收集经病理确诊的肺癌患者30例BALF,以30例肺部良性疾病患者BALF为对照组,采用流式细胞术(FCM),检测两组患者BALF脱落细胞中hnRNPA2/B1表达率及血中p53蛋白表达率。结果肺癌组hnRNPA2/B1为(74.04±22.34)%显著高于肺部良性疾病组(28.03±9.01)%(P<0.01);hnRNPA2/B1水平与非小细胞肺癌临床TNM分期无关(P>0.05)。肺癌组p53蛋白水平为(2.16±1.88)%显著高于肺部良性疾病组(0.93±0.51)%(P<0.01);hnRNPA2/B1和p53蛋白诊断肺癌的敏感性分别为86.7%、70.0%,特异性为96.7%、83.3%;联合检测hnRN-PA2/B1和p53的敏感性为93.3%,特异性为100%。结论hnRNPA2/B1和血细胞中p53蛋白水平对肺癌有辅助诊断价值,尤其对早期肺癌的诊断有重要意义,两种指标联合检测可提高诊断敏感性。

痰中检测核不均一核糖核蛋白A2/B1早期诊断肺癌的意义

目的:探讨检测痰中核不均一核糖核蛋白A2/B1(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A2/B1,hnRNP A2/B1)在肺癌早期诊断中的意义。方法:收集63例疑诊肺癌患者的痰标本,分别采用痰涂片、痰细胞块切片细胞学检查(镜检找到癌细胞即诊断为肺癌)及痰细胞块切片免疫组织化学检测hnRNP A2/B1(表达阳性即诊断为肺癌)进行诊断,比较2种诊断方法的结果。结果:痰涂片及痰细胞块切片细胞学检查诊断肺癌的敏感度为31.8%,特异度为100%。痰细胞块检测hnRNP A2/B1诊断肺癌的敏感度为80%,特异度为68.4%。检测痰hnRNP A2/B1的敏感度显著高于痰细胞学检查(P<0.01)。结论:痰细胞块结合免疫组织化学法检测hnRNP A2/B1有助于发现早期肺癌。

检测核不均一核糖核蛋白A2/B1在胸水细胞学鉴别诊断中的意义

目的:观察核不均一核糖核蛋白A2/B1(hnRNPA2/B1)在胸水转移性肺腺癌细胞和间皮细胞中的表达,评价其用于两者鉴别诊断的价值。方法:采用细胞块技术对100例胸水进行免疫组织化学检测,观察hnRNPA2/B1在肺腺癌细胞和间皮细胞中的表达。结果:hnRNPA2/B1标记肺腺癌细胞的敏感度为100%,特异度为70%。结论:检测hnRNPA2/B1对鉴别胸水肺腺癌细胞和间皮细胞很有帮助。

B细胞淋巴瘤/白血病-2基因、CD10和细胞周期蛋白D1在B细胞性非霍奇金淋巴瘤组织中的表达及意义

目的探讨B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(Bcl-2)、CD10和细胞周期蛋白D1(cyclin D1)在B细胞性非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)组织中的表达及临床意义。方法选择2017年6月至2019年8月新乡医学院第一附属医院收治的78例B-NHL患者(B-NHL组)和50例淋巴组织反应性增生患者(对照组)为研究对象。取B-NHL组患者肿瘤组织和对照组患者反应性增生淋巴组织,采用免疫组织化学染色法检测Bcl-2、CD10及cyclin D1表达,比较2组患者Bcl-2、CD10及cyclin D1表达情况;收集B-NHL患者临床病历资料,分析Bcl-2、CD10和cyclin D1水平与B-NHL临床病理特征的关系;对B-NHL患者随访1 a,统计患者病死情况,采用单因素分析和logistic回归分析影响预后的因素。结果 B-NHL组患者Bcl-2、CD10及cyclin D1阳性表达率分别为78.21%(61/78)、38.46%(30/78)、87.18%(68/78),对照组患者Bcl-2、CD10及cyclin D1阳性表达率分别为36.00%(18/50)、100.00%(50/50)、0.00%(0/50);B-NHL组患者Bcl-2、cyclin D1阳性表达率显著高于对照组(χ^(2)=22.971、92.992,P<0.01),CD10阳性表达率显著低于对照组(χ^(2)=49.231,P<0.01)。B-NHL患者的年龄、性别、肿瘤直径、肿瘤位置、临床分期与Bcl-2、CD10及cyclin D1阳性表达无关(P>0.05);B-NHL患者的病理类型与CD10、cyclin D1阳性表达相关(P<0.05),与Bcl-2阳性表达无关(P>0.05)。B-NHL组患者病死20例(25.64%),生存58例(74.36%);肿瘤临床分期、病理类型、Bcl-2、CD10及cyclin D1表达与B-NHL患者病死相关(P<0.05),年龄、性别、肿瘤直径、肿瘤位置与B-NHL患者病死无关(P>0.05)。Logistic回归分析结果显示,临床分期Ⅲ~Ⅳ期、病理类型为弥漫大B细胞淋巴瘤、Bcl-2阳性表达、cyclin D1阳性表达及CD10阴性表达是影响B-NHL患者死亡的独立危险因素(P<0.01)。结论 Bcl-2、CD10及cyclin D1在B-NHL组织中异常表达,其可能参与了B-NHL的发生、发展;CD10、cyclin D1检测可鉴别诊断不同病理类型的B-NHL,且可作为评估B-NHL患者预后的参考指标。

不均一核糖核蛋白A2/B1与肺癌

不均一核糖蛋白(hnRNP)A2/B1是一种RNA结合蛋白 ,在某些肿瘤组织如肺癌、乳腺癌中的表达增加 ,可能与癌症的发生相关。全文就hnRNPA2/B1的生物学特性,与肺癌关系 ,hnRNPA2/B1与微卫星不稳定性及端粒关系的研究进展作一综述。

核内不均一核蛋白A2/B1在肺癌诊断上的进展

目前研充揭示核内不均一核蛋白(hnRNP)A2/B1参与肺癌的发生,而且越来越多的证据表明它有可能成为啼癌早期诊断的标志物。本文就hnRNP A2/B1的生物学特点, 与肺癌发生的相关性和肺癌早期诊断应用方面的进展进行综述。

不均一性核糖核蛋白A2/B1与肺癌的研究进展

不均一性核糖核蛋白A2 /B1(hnRNPA2 /B1)是一种RNA结合蛋白,调控mRNA前体的加工、剪接、成熟。hnRNPA2 /B1的过表达可能与细胞增生、肿瘤生成有关。其可作为肺癌早期诊断的分子标记物。本文对该蛋白在肺癌早期诊断中的作用及研究进展作一综述。

hnRNP A2/B1基因的蛋白表达初步探讨

目的:克隆hnRNPA2/B1基因并构建全长cDNA的原核表达载体,在大肠杆菌中进行表达。方法:以RT-PCR法从人平滑肌肌细胞总RNA中克隆hnRNPA2/B1cDNA,连接至pGEX-4T-1载体,构建重组表达质粒,转化感受态E.coliBL21进行诱导表达。结果:克隆hnRNPA2/B1基因全长cDNA序列,经DNA测序证明与GenBank一致。进而构建重组表达载体PCEX-A2/B1,在E.coli中表达出相对分子量约63kD的融合蛋白,免疫分析证实为hnRNPA2/B1蛋白。结论:成功克隆hnRNPA2/B1基因,在E.coli获得融合表达,为进一步研究其功能及应用提供基础。

蛋白酪氨酸磷酸酶-1B基因多态性与2型糖尿病的相关性研究

目的 探讨蛋白酪氨酸磷酸酶 1B(proteintyrosinephosphastase 1B ,PTP 1B)基因 387位编码子Pro Leu多态性与 2型糖尿病 (T2DM )的关系。方法 采用多聚酶联反应 限制性片段长度多态性 (PCR RFLP)的方法对湖北地区 1 30例 2型糖尿病患者及 1 38例正常对照者PTP 1B基因 387位编码子酶切位点进行研究。结果 2型糖尿病患者和正常对照者PTP 1B基因均以PP基因型为主 ,其频率分别为 0 .94和 0 .96 ;P等位基因频率分别为 0 .97和 0 .98,差异无统计学意义 (P >0 .0 5)。 2型糖尿病患者中PTP 1B基因P387L变异与体重指数 (BMI)有关 ,但与空腹血糖、空腹胰岛素、总胆固醇、甘油三酯等临床变量不相关。结论 未发现PTP 1B基因 387位Pro Leu多态性与中国人

蛋白酪氨酸磷脂酶-1B基因Pro387Leu变异与2型糖尿病的相关性研究

目的 探讨广州地区汉族人中蛋白酪氨酸磷脂酶 1B(PTP 1B)基因Pro387Leu变异与2型糖尿病 (T2DM)的相关性。 方法 随机选取无亲缘关系的广州地区汉族人 5 6 7例 ,其中T2DM患者 32 9例 ,正常对照 2 38例 ,应用聚合酶链反应 限制性片段长度多态性 (PCR RFLP)进行Pro387Leu变异的检测。 结果 正常对照组PTP 1BLeu 387携带者及Leu 387等位基因频率分别是 0 8%、0 4 % ,T2DM组相应为 0 6 %、0 3% ,两组比较差异无统计学意义 (P >0 0 5 )。 结论 PTP 1B基因Pro387Leu变异与汉族人T2DM的发生不相关。

痰液异质性核核糖核蛋白A2/B1与端粒酶逆转录酶检测在肺癌诊断中的探讨

肺癌是世界范围内致死率最高的癌症,而肺癌的预后与诊断时的临床分期密切相关,因此"早期发现、早期诊断、早期治疗"是降低肺癌病死率的重要措施。肺癌高危人群痰脱落细胞中有异质性核核糖核蛋白A2/B1与端粒酶逆转录酶活性的高表达,通过联合检测是否可发现处于早期和可治疗阶段的肿瘤,从而潜在降低肺癌的病死率,因此痰液异质性核核糖核蛋白A2/B1和端粒酶逆转录酶的联合检测是对肺癌早期诊断的一个有益探索。

急性脑梗死患者CYP2C19、MTHFR、SLCO1B1和APOE基因检测结果分析

目的探讨急性脑梗死患者CYP2C19、MTHFR、SLCO1B1和APOE基因多态性分布,为个体化药物治疗提供理论依据。方法选取2020-2022年该院收治的急性脑梗死患者400例作为研究对象,采用PCR-荧光探针方法对急性脑梗死患者CYP2C19、MTHFR、SLCO1B1和APOE基因多态性进行检测,分析基因多态性分布的情况。结果在急性脑梗死患者中,CYP2C19基因表型中EM型占比为44.25%,PM型占比为9.75%;MTHFR基因C677T位点突变型(CT型+TT型)占比为78.50%,CC型占比为21.50%;SLCO1B1基因型中的78.75%为Ⅰ类野生表型,1.50%为Ⅲ类纯合突变型;APOE基因表型中E2型和E3型占比为84.25%,E4型占比为15.75%。结论对400例急性脑梗死患者CYP2C19、MTHFR、SLCO1B1和APOE基因多态性的分布进行了分析,对指导急性脑梗死患者人群个体化用药提供数据支持,对实现安全用药具有重要意义。

1-苯基2-硫脲对Tg(abcb4:eGFP)斑马鱼肿瘤多重耐药相关基因表达的影响

目的探讨去色素药物1-苯基2-硫脲(PTU)对Tg(abcb4:eGFP)斑马鱼肿瘤多重耐药相关基因abcb4及其标记基因egfp表达的影响及可能机制。方法选取受精后24 h(24 hpf)Tg(abcb4:eGFP)斑马鱼胚胎做药物暴露实验,分为Control、PTU以及PTU+RES 3个组;持续用药96 h,通过荧光显微镜拍照检测各组斑马鱼胃肠道荧光强度;RT-qPCR检测abcb4、egfp及pxr基因mRNA,Western Blot检测abcb4、egfp蛋白(Abcb4、eGFP)的表达,罗丹明B积累实验检测不同组Abcb4功能。结果与Control组相比,PTU组Tg(abcb4:eGFP)斑马鱼荧光表达增强(P<0.01),PTU+RES组荧光变化不明显(P>0.05);PTU组abcb4、egfp及pxr基因mRNA表达均增加(P<0.005),PTU+RES组pxr基因mRNA表达增加(P<0.005),abcb4、egfp基因mRNA表达无明显变化(P>0.05);PTU组abcb4、egfp蛋白表达均增加(P<0.005),PTU+RES组无明显变化(P>0.05);PTU组Abcb4功能增强(P<0.01),PTU+RES组无明显变化(P>0.05)。结论PTU可诱导Tg(abcb4:eGFP)斑马鱼abcb4和egfp表达增加,核因子pxr可能参与PTU对abcb4和egfp的诱导调节过程,在应用PTU去色素处理的Tg(abcb4:eGFP)斑马鱼进行药物筛选时需注意PTU对abcb4和egfp表达的影响。

FcER1B、ADRB2基因多态性对咳嗽变异性哮喘患儿血清白细胞介素-6、呼出气一氧化氮水平的影响

目的探讨FcER1B、ADRB2基因多态性对咳嗽变异性哮喘患儿血清白细胞介素-6(IL-6)、呼出气一氧化氮(FeNO)水平的影响。方法选取2020年7月至2022年12月南宁市第一人民医院收治的咳嗽变异性哮喘婴幼儿60例为观察组,另选取同时期在南宁市第一人民医院进行健康体检的90名正常婴幼儿为对照组。采用质谱单核苷酸多态性技术对两组的FcER1B、ADRB2基因进行分析,检测婴幼儿血清IL-6和FeNO水平。结果两组FcER1B、ADRB2基因位点的分布符合Hardy-Weinberg平衡定律。观察组与对照组FcER1B基因rs569108位点、ADRB2基因rs1042713位点的基因型与等位基因比较,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组血清IL-6、FeNO水平均高于对照组(P<0.05)。FcER1B基因rs569108位点TT基因型、ADRB2基因rs1042713位点AA基因型的患儿血清IL-6、FeNO均升高(P<0.05)。结论FcER1B基因rs569108位点TT基因型、ADRB2基因rs1042713位点AA基因型的咳嗽变异性哮喘婴幼儿血清IL-6、FeNO显著升高,可为患儿的精准治疗和个体化预防提供指导依据。