一种构建载体的新方法:一步式混合胶回收连接法

以构建原核表达载体重组质粒G4FPAGB1为例,介绍了一种新的载体构建方法。棉铃虫单核衣壳核多角体病毒G4毒株基因组上的Ha–FP–A片段用Hin dⅢ和Eco RⅤ双酶切,Ha–FP–B片段用XhoⅠ和Bam HⅠ双酶切,绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)基因片段用Eco RⅤ和XhoⅠ双酶切,载体质粒p Bluescript SK(+)用Hin dⅢ和Bam HⅠ双酶切。酶切产物经电泳检测后,将所有含目的片段的胶块切下,放在同一个离心管中进行DNA回收,得到的混合DNA产物直接加入连接酶进行连接、转化。结果表明,3个目的片段均成功连接到载体质粒上。本方法可高效、简单地构建包含多个目的片段的重组质粒。