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检测三种烟草病毒的一步法多重RT-PCR 被引量:3
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作者 张俊棋 杨军 +4 位作者 宋纪真 罗朝鹏 王燃 李锋 周小龙 《烟草科技》 EI CAS 北大核心 2014年第2期81-85,共5页
一步法多重RT-PCR将反转录(Reverse transcription,RT)和聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)整合为一个步骤,能够在同一反应体系中同时扩增出多个目的片段。为使用一步法多重RT-PCR技术同时检测黄瓜花叶病毒(Cucumber mosai... 一步法多重RT-PCR将反转录(Reverse transcription,RT)和聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)整合为一个步骤,能够在同一反应体系中同时扩增出多个目的片段。为使用一步法多重RT-PCR技术同时检测黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)、烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)和马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY),根据3种病毒基因组序列相对保守区域设计了3对特异性引物,并对RT-PCR的反应体系和反应条件进行了优化。优化结果显示,最终的多重RT-PCR反应特异性较高,且3个片段的扩增效率基本一致。田间样品的检测结果表明,一步法多重RT-PCR方法能够准确而快速地同时检测出3种病毒,优于酶联免疫吸附法(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)。 展开更多
关键词 烟草 病毒检测 一步法多重rt—pcr
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一步法实时定量RT-PCR检测小反刍兽疫病毒方法的建立 被引量:37
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作者 包静月 李林 +3 位作者 王志亮 李金明 刘春菊 肖肖 《中国动物检疫》 CAS 北大核心 2007年第8期21-23,共3页
建立了检测小反刍兽疫病毒的快速、特异的基于Taqman的一步法实时定量RT-PCR方法。通过对GenBank已公布的小反刍兽疫病毒N基因序列进行序列比较分析,设计了一对特异性引物和一条Taqman探针。利用这对引物和探针对来自不同疫源地的小反... 建立了检测小反刍兽疫病毒的快速、特异的基于Taqman的一步法实时定量RT-PCR方法。通过对GenBank已公布的小反刍兽疫病毒N基因序列进行序列比较分析,设计了一对特异性引物和一条Taqman探针。利用这对引物和探针对来自不同疫源地的小反刍兽疫病毒RNA样本进行检测,都获得了特异性扩增,但是,不与牛瘟病毒、海豚麻疹病毒等其他种的麻疹病毒属病毒发生交叉反应。本方法具有高度灵敏性,最低可检测到810拷贝的RNA模板。在模板浓度为8.1×102到8.1×108拷贝范围内,都呈现良好的线性关系,而且无论是组内和或组间重复的变异系数都很低。 展开更多
关键词 小反刍兽疫病毒 一步法实时定量rt—pcr 检测
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Real-time RT-PCR检测西尼罗病毒一步法的建立 被引量:4
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作者 陈晓 曾志磊 +3 位作者 朱丹 彭丹 余建萍 谢鹏 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期1107-1110,共4页
目的建立针对西尼罗病毒E基因的一步法Real-time RT-PCR检测方法,用于西尼罗病毒感染样本的快速准确检测和定量。方法针对西尼罗病毒的保守基因E设计引物和探针,建立一步法Real-time RT-PCR反应方法并分析敏感性和特异性。结果本研究建... 目的建立针对西尼罗病毒E基因的一步法Real-time RT-PCR检测方法,用于西尼罗病毒感染样本的快速准确检测和定量。方法针对西尼罗病毒的保守基因E设计引物和探针,建立一步法Real-time RT-PCR反应方法并分析敏感性和特异性。结果本研究建立的一步法Real-time RT-PCR方法可以特异性检测出西尼罗病毒,不与日本脑炎病毒及其他病毒产生交叉反应。该方法的最低检出浓度为3.6×102copies/μl,标准曲线的线性范围为3.6×102~3.6×107copies/μl。结论本研究建立的一步法real-time RT-PCR方法敏感性和特异性较高,且不易出现污染引起的假阳性结果,适合用于西尼罗病毒感染样本的检测。 展开更多
关键词 西尼罗病毒 real—time rt—pcr 一步法 TAQMAN探针 快速检测
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一步法RT-PCR检测烟草环斑病毒试剂盒的研制与应用 被引量:4
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作者 张永江 李明福 +1 位作者 黄冲 相宁 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2006年第10期2072-2073,共2页
根据烟草环斑病毒基因组序列设计特异性引物,利用RT-PCR技术研制成一步法检测该病毒的试剂盒,并建立了操作程序。对试剂盒扩增到的预期产物进行测序验证,产物序列与目的序列间的同源性为97.8%,表明该试剂盒的准确性较高。试验结果还表明... 根据烟草环斑病毒基因组序列设计特异性引物,利用RT-PCR技术研制成一步法检测该病毒的试剂盒,并建立了操作程序。对试剂盒扩增到的预期产物进行测序验证,产物序列与目的序列间的同源性为97.8%,表明该试剂盒的准确性较高。试验结果还表明,该试剂盒在常温、4℃和-20℃下可分别保存2d、7d和60d;灵敏度是DAS-ELISA的100倍;质量控制试验结果一致,具有较高的重复性。 展开更多
关键词 一步法rt—pcr 烟草环斑病毒 检测 试剂盒
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一步法RT-PCR检测柑橘鳞皮病毒 被引量:3
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作者 吕婵娟 周常勇 +2 位作者 周彦 唐科志 李小松 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期113-114,共2页
柑橘鳞皮病是一种极具破坏性的柑橘病害,广泛分布于南美及地中海地区。我国目前缺乏对该病害的快速检测技术。以柑橘鳞皮病毒(CPV)的外壳蛋白基因(CPG)为靶标,初步建立了一步法RT-PCR快速检测体系,扩增产物与NCBI数据库中已知CPVCPG的... 柑橘鳞皮病是一种极具破坏性的柑橘病害,广泛分布于南美及地中海地区。我国目前缺乏对该病害的快速检测技术。以柑橘鳞皮病毒(CPV)的外壳蛋白基因(CPG)为靶标,初步建立了一步法RT-PCR快速检测体系,扩增产物与NCBI数据库中已知CPVCPG的核苷酸序列进行比对,2者序列间同源性超过99%。 展开更多
关键词 柑橘鳞皮病毒 一步法rt—pcr 检测
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双重一步法RT-PCR检测2种主要兰花病毒 被引量:6
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作者 柳爱春 赵芸 +1 位作者 刘超 张乐 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第27期12960-12961,13009,共3页
[目的]研究建兰花叶病毒(CymMV)和齿兰环斑病毒(ORSV)双重一步法RT-PCR检测方法,为病毒的早期快速诊断提供技术支持。[方法]根据2种病毒的外壳蛋白基因的保守序列分别设计两对特异性引物,并进行双重与单一RT-PCR对比试验。[结果]结果在... [目的]研究建兰花叶病毒(CymMV)和齿兰环斑病毒(ORSV)双重一步法RT-PCR检测方法,为病毒的早期快速诊断提供技术支持。[方法]根据2种病毒的外壳蛋白基因的保守序列分别设计两对特异性引物,并进行双重与单一RT-PCR对比试验。[结果]结果在健康蜘蛛兰被人工接种病毒后第10天和第21天用一步法RT-PCR方法分别获得CymMV和ORSV与预期相符的约764和946 bp扩增产物条带;且双重一步法RT-PCR产物经琼脂糖凝胶电泳后,出现两条与单一RT-PCR产物相对应的清晰条带,获得较理想的检出效果;扩增产物的核酸序列经BLAST分析,同源性均在85%以上,证实了检测结果的准确性。[结论]该方法具有更加灵敏、特异、快速和简便的特点,适合于两种主要兰花病毒的同时快速检测。 展开更多
关键词 建兰花叶病毒 齿兰环斑病毒 双重一步法rt—pcr
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猪繁殖与呼吸综合征和猪乙型脑炎双重一步法RT-PCR诊断试剂盒的研制 被引量:4
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作者 余波 谭诗文 +3 位作者 冉懋韬 徐景峨 史开志 杨丽娟 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期152-154,180,共4页
根据GenBank中的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF7 N基因、猪乙型脑炎病毒(JEV)NS1基因序列,设计了2对引物,通过反应条件的优化,成功研制了检测PRRSV和JEV的双重一步法RT-PCR诊断试剂盒,扩增产物分别为245、504 bp。敏感性、特异性结... 根据GenBank中的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF7 N基因、猪乙型脑炎病毒(JEV)NS1基因序列,设计了2对引物,通过反应条件的优化,成功研制了检测PRRSV和JEV的双重一步法RT-PCR诊断试剂盒,扩增产物分别为245、504 bp。敏感性、特异性结果显示,该RT-PCR诊断试剂盒对2种病毒的最低核酸检测量分别为PRRSV 0.2 ng/L、JEV 0.4 ng/L,而对猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒2型、猪细小病毒的扩增结果均为阴性。对52份疑似病猪样品的检测结果表明,该双重一步法RT-PCR诊断试剂盒检测结果与单一PCR检测结果完全符合。结果表明该双重一步法RT-PCR诊断试剂盒具有很好的特异性和敏感性,可用于临床猪繁殖与呼吸综合征和猪乙型脑炎的检测。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪乙型脑炎病毒 双重一步法rt—pcr
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禽流感病毒一步法RT-PCR检测方法的建立 被引量:2
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作者 包红梅 王秀荣 +3 位作者 刘丽玲 王昱 李一经 陈化兰 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期701-706,共6页
为了能快速准确地对禽流感进行病原学诊断,根据流感病毒的M基因序列,在保守区内用Olig04.0软件设计了1对引物,建立了一步法RT—PCR诊断方法,其目的片段大小为229bp。通过对不同稀释倍数的H5亚型禽流感病毒尿囊液和棉拭子浸出液进... 为了能快速准确地对禽流感进行病原学诊断,根据流感病毒的M基因序列,在保守区内用Olig04.0软件设计了1对引物,建立了一步法RT—PCR诊断方法,其目的片段大小为229bp。通过对不同稀释倍数的H5亚型禽流感病毒尿囊液和棉拭子浸出液进行检测,结果显示,病毒尿囊液的最低检出稀释度为1:10^4;阳性棉拭子的最低检出稀释度为1:2^3。用病毒分离法和一步法RT—PCR同时检测人工感染鸡不同脏器、口咽及泄殖腔棉拭子样品,二者符合率为100%,但前者的检测灵敏度比后者高10~100倍。用该方法检测H1~H15亚型禽流感病毒和鸡新城疫病毒等其他14种禽病病原,所有禽流感病毒均有229bp的目的条带出现,而其他14种禽病病原均无目的条带出现,表明该方法的特异性好。 展开更多
关键词 禽流感病毒 一步法rt—pcr 快速诊断
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小反刍兽疫、蓝舌病、羊痘一步法多重PCR检测方法的建立 被引量:3
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作者 宋爽 赵柏林 +6 位作者 曲萍 胡冬梅 孙雨 董浩 翟新验 宋晓晖 潘树德 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第7期182-184,共3页
小反刍兽疫是由小反刍兽疫病毒(Peste des petits ru minants,PPRV)引起的一种山羊、绵羊等小反刍动物发生的一种急性接触性传染性疾病,山羊较绵羊易感,具有高发病率和死亡率的特点。感染羊只临床表现为咳嗽、呼吸异常、口腔内坏... 小反刍兽疫是由小反刍兽疫病毒(Peste des petits ru minants,PPRV)引起的一种山羊、绵羊等小反刍动物发生的一种急性接触性传染性疾病,山羊较绵羊易感,具有高发病率和死亡率的特点。感染羊只临床表现为咳嗽、呼吸异常、口腔内坏死性病灶、水样腹泻等症状。蓝舌病是由呼肠孤病毒科环状病毒属蓝舌病病毒(Bluetongue virus,BTv)引起的反刍动物发生的一种虫媒传染病。 展开更多
关键词 蓝舌病病毒 小反刍兽疫 pcr检测方法 羊痘 一步法 小反刍动物 virus 多重
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加工番茄马铃薯Y病毒一步法RT-PCR检测及CP基因的克隆与序列分析 被引量:1
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作者 梁学超 向本春 +2 位作者 程朝玲 苏海娣 郑银英 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2013年第6期2340-2344,共5页
本文通过一步法RT-PCR技术,检测新疆加工番茄马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)感染率。结果表明,新疆加工番茄马铃薯Y病毒感染率为25%。选取10个样品利用RT-PCR技术,克隆CP基因,获得807 bp全长CP基因,编码268个氨基酸。CP基因序列比对... 本文通过一步法RT-PCR技术,检测新疆加工番茄马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)感染率。结果表明,新疆加工番茄马铃薯Y病毒感染率为25%。选取10个样品利用RT-PCR技术,克隆CP基因,获得807 bp全长CP基因,编码268个氨基酸。CP基因序列比对分析与系统进化树分析表明,侵染新疆加工番茄的马铃薯Y病毒属于PVYN:O株系。 展开更多
关键词 马铃薯Y病毒 加工番茄 一步法rt—pcr CP基因
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一步法和两步法RT-PCR对裸大麦β-actin基因的检测 被引量:1
11
作者 吴昆仑 邓晓青 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2012年第6期35-37,共3页
通过一步法RT-PCR和两步法RT-PCR扩增裸大麦内参基因β-actin,都得到500bp的目的片段。结果表明,一步法RT-PCR和两步法RT-PCR都能快速检测出目的基因,一步法比较简便、快速、污染少,但是有明显的引物二聚体形成,对后续的荧光定量试验不... 通过一步法RT-PCR和两步法RT-PCR扩增裸大麦内参基因β-actin,都得到500bp的目的片段。结果表明,一步法RT-PCR和两步法RT-PCR都能快速检测出目的基因,一步法比较简便、快速、污染少,但是有明显的引物二聚体形成,对后续的荧光定量试验不利;两步法灵敏度更高而且比较经济,目的条带单一,无引物二聚体,更适合裸大麦后续的分子克隆试验。 展开更多
关键词 裸大麦 内参基因 一步法rt—pcr 步法rt—pcr
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一步法RT-PCR快速检测口蹄疫O型病毒
12
作者 周向梅 赵德明 +2 位作者 孙艳明 杨建民 马李颖 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2007年第1期47-49,共3页
关键词 pcr快速检测 一步法扩增 病毒分离 口蹄疫 rt 血清学试验 pcr技术 O型
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一步法RT-PCR检测人狂犬病毒初探
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作者 孙来晶 王华林 +3 位作者 徐葛林 吴杰 胡志红 周亦武 《中国法医学杂志》 CSCD 2008年第6期400-402,共3页
目的探讨一步法逆转录聚合酶链反应(one-step reverse transcriptase-PCR或一步法RT-PCR)在人狂犬病检测中的应用。方法4例临床诊断狂犬病死亡患者的冰冻脑组织,用一步法RT-PCR检测病毒,狂犬病毒CVS株感染的鼠脑和急性胰腺炎死者的脑分... 目的探讨一步法逆转录聚合酶链反应(one-step reverse transcriptase-PCR或一步法RT-PCR)在人狂犬病检测中的应用。方法4例临床诊断狂犬病死亡患者的冰冻脑组织,用一步法RT-PCR检测病毒,狂犬病毒CVS株感染的鼠脑和急性胰腺炎死者的脑分别作为阳性和阴性对照。结果4例脑组织中提取的RNA,电泳后得到与狂犬病N基因长度一致的片断。结论一步法RT-PCR可用于人狂犬病毒的检测,在法医学鉴定中具有重要意义。 展开更多
关键词 法医物证学 人狂犬病 一步法rt—pcr 法医学鉴定
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一步法RT-PCR检测急性早幼粒细胞白血病PML-RARα融合基因
14
作者 孟文彤 刘霆 +1 位作者 吴俣 陈心传 《华西医学》 CAS 2005年第3期484-485,共2页
目的:建立一步法RT-PCR检测APL患者PML-RARα融合基因的实验方法。方法:用特异引物一步法RT-PCR检测PML-RARα融合基因,并作灵敏度试验。结果:本方法的灵敏度可达到1∶103水平。对25例APL患者检测PML-RARα融合基因,阳性率为100%,并可... 目的:建立一步法RT-PCR检测APL患者PML-RARα融合基因的实验方法。方法:用特异引物一步法RT-PCR检测PML-RARα融合基因,并作灵敏度试验。结果:本方法的灵敏度可达到1∶103水平。对25例APL患者检测PML-RARα融合基因,阳性率为100%,并可检测出PML-RARα融合基因各种融合方式。结论:一步法RT-PCR检测PML-RARα融合基因有很好的灵敏度和特异性,操作简便、快速,特别适用于临床检测。 展开更多
关键词 急性早幼粒细胞白血病 PML—RARα融合基因 聚合酶链反应 一步法rt—pcr
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禽流感H5、H7、H9亚型多重实时荧光RT-PCR检测方法的建立 被引量:28
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作者 秦智锋 吕建强 +8 位作者 肖性龙 钟安清 林镜中 黄运生 林庆燕 陈书琨 金显忠 林苗 刘胜利 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期131-136,共6页
为了对致病性强、危害性大的H5、H7、H9亚型禽流感病毒进行同时集成化快速检测,通过对GenBank已报道的禽流感病毒的HA基因进行序列分析比较,设计了H5、H7、H9 3个亚型的特异性引物和分别用3个荧光基团标记的Taqman MGB核酸探针。将各个... 为了对致病性强、危害性大的H5、H7、H9亚型禽流感病毒进行同时集成化快速检测,通过对GenBank已报道的禽流感病毒的HA基因进行序列分析比较,设计了H5、H7、H9 3个亚型的特异性引物和分别用3个荧光基团标记的Taqman MGB核酸探针。将各个亚型引物与探针优化组合,筛选出能够同时检测禽流感病毒H5、H7、H9 3个亚型、且对Ct值和扩增效率影响不大的3组引物和探针,建立了三重实时荧光RT-PCR方法。该方法特异性好,在我们检测的样品中,没有发现假阳性和假阴性现象。同时敏感性高,检测禽流感病毒H5、H7、H9亚型的敏感性分别达到1 0001、000、500个模板拷贝数;此外抗干扰能力强,对禽流感H5、H7、H9 3个亚型的不同模板浓度进行组合,仍可有效地同时检测3个病毒亚型。所建立的方法对保存的89个禽流感病毒样品进行检测,结果与经典检测方法(病毒分离鉴定、HA、HI)的符合率达100%。用上述建立的方法与鸡胚分离法同时对新鲜采集的4 000多份临床样品进行检测,两种方法的检测结果符合率为100%。 展开更多
关键词 禽流感 H5亚型 H7亚型 H9亚型 实时荧光rt pcr 多重实时检测
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百合三种病毒的多重RT-PCR检测 被引量:35
16
作者 徐榕雪 明军 +3 位作者 穆鼎 刘春 汤庚国 王晓武 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期443-448,共6页
根据基因库中黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)、百合斑驳病毒(Lily mottle virus,LMoV)、百合无症病毒(Lily symptomless virus,LSV)的外壳蛋白基因序列,设计了3对特异引物,通过对扩增条件进行优化,建立了同时检测CMV、LMoV和... 根据基因库中黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)、百合斑驳病毒(Lily mottle virus,LMoV)、百合无症病毒(Lily symptomless virus,LSV)的外壳蛋白基因序列,设计了3对特异引物,通过对扩增条件进行优化,建立了同时检测CMV、LMoV和LSV的多重RT-PCR检测方法。该方法可以从带有CMV、LMoV和LSV的样品中同时扩增出3条大小与试验设计相符的657bp(CMV)、428bp(LMoV)、171bp(LSV)的特异性多重RT-PCR扩增带。扩增产物测序表明,CMV、LMoV和LSV三种病毒与GenBank中登录的亚洲和荷兰多数分离物核苷酸同源性在90%以上,地域差异不明显,外壳蛋白序列高度保守。 展开更多
关键词 百合 多重rt—pcr 病毒检测 黄瓜花叶病毒 百合斑驳病毒 百合无症病毒
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应用含内参的多重实时荧光RT-PCR方法快速检测登革病毒和基孔肯雅病毒 被引量:8
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作者 郑夔 丁国允 +5 位作者 周惠琼 谢雪妹 李小波 师永霞 苏锦坤 黄吉城 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期242-247,共6页
目的建立一种登革病毒、基孔肯雅病毒并含人类基因内参检测的多重实时荧光RT-PCR方法,能在同一反应管内同时检测目前发现的所有来源的登革病毒或基孔肯雅病毒。方法针对登革病毒3′端非编码区和基孔肯雅病毒结构蛋白E2-6K-E1区以及人体... 目的建立一种登革病毒、基孔肯雅病毒并含人类基因内参检测的多重实时荧光RT-PCR方法,能在同一反应管内同时检测目前发现的所有来源的登革病毒或基孔肯雅病毒。方法针对登革病毒3′端非编码区和基孔肯雅病毒结构蛋白E2-6K-E1区以及人体各类组织细胞中均能稳定表达的RNAse P基因,设计了3套特异性引物和探针,建立了1套能同时检测登革病毒、基孔肯雅病毒及含有人类基因检测内参的多重实时荧光RT-PCR方法,对其灵敏性和特异性进行了验证,并对临床发热病人标本进行了应用评估。结果该方法对检测体外转录合成的登革病毒和基孔肯雅病毒RNA的灵敏性可达最低每个反应10~100拷贝,对检测登革1型病毒和基孔肯雅病毒的灵敏性分别可达最低每个反应0.1TCID50/mL和1TCID50/mL。用20株登革病毒、4株基孔肯雅病毒和日本脑炎病毒、西尼罗病毒、黄热病毒、盖塔病毒、辛德毕斯病毒各1株进行检测,方法的特异性均为100%。方法应用于189份发热病人血清标本检测,可准确地鉴定出其中登革病毒或基孔肯雅病毒核酸阳性的标本,且所有血清标本均能被内参引物和探针有效地扩增和杂交。结论本研究建立了一种高灵敏性、高特异性且含人类基因内参检测的登革病毒和基孔肯雅病毒多重实时荧光RT-PCR检测方法,可作为登革热或基孔肯雅热病人早期快速鉴别诊断的有效工具,也可用于蚊媒携带登革病毒或基孔肯雅病毒的高通量快速筛查。 展开更多
关键词 登革病毒 基孔肯雅病毒 内参 多重实时荧光rt—pcr
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利用多重RT-PCR技术检测草莓病毒的研究 被引量:9
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作者 杨洪一 张志宏 +1 位作者 李丽丽 赵敏 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期549-552,共4页
Coat protein gene of 12 isolates of Strawberry vein banding virus(SVBV) was studied by multiple sequence alignment and the primers located in conserved region were designed.The detection protocol for SVBV by reverse t... Coat protein gene of 12 isolates of Strawberry vein banding virus(SVBV) was studied by multiple sequence alignment and the primers located in conserved region were designed.The detection protocol for SVBV by reverse transcriptase polymerase chain reaction(RT-PCR) was developed.The primers of multiplex RT-PCR were selected by primer-primer interactions and the melting temperature.The annealing temperature,the concentration of PCR buffer,the extension temperature,the extension time and the concentration of pri-mers were optimized,respectively.A multiplex RT-PCR assay was made for simultaneous detecting Strawberry mottle virus(SMoV),Strawberry mild yellow edge virus(SMYEV) and SVBV.Both field-grown strawberries and microplants were detected effectively.It was the first report that multiplex RT-PCR was used to assay the efficacy of strawberry viruses elimination. 展开更多
关键词 草莓镶脉病毒 pcr技术 斑驳病毒 技术检测 virus rt 多重 混合侵染
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多重RT-PCR检测猪流感病毒及血清亚型 被引量:8
19
作者 刘惠莉 周宗清 +3 位作者 邢继兰 潘洁 杨秋峰 饶柏忠 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1262-1265,共4页
根据GenBank登录的猪流感病毒各血清亚型NP基因,H1、H3亚型HA基因,N1、N2亚型NA基因核苷酸序列,经DNAstar软件类比选择保守区设计引物,sPCR筛选出引物对,用于扩增猪流感病毒NP基因、血凝素H1/H3亚型、神经氨酸酶N1/N2亚型基因片段。根... 根据GenBank登录的猪流感病毒各血清亚型NP基因,H1、H3亚型HA基因,N1、N2亚型NA基因核苷酸序列,经DNAstar软件类比选择保守区设计引物,sPCR筛选出引物对,用于扩增猪流感病毒NP基因、血凝素H1/H3亚型、神经氨酸酶N1/N2亚型基因片段。根据NP、H1N1、H3N2亚型引物扩增片段大小和反应条件的差异,将各引物配比组合,形成引物组合,建立多重RT-PCR体系。经对不同亚型模板的扩增、检验,建立的2个多重RT-PCR体系可用于猪流感病毒及H1/H3血凝素亚型、N1/N2神经氨酸酶亚型的快速鉴别、诊断。特异性试验检测多重RT-PCR不能扩增其他猪病毒核酸,核酸的最低检测量达0.2ng。采集临床具有呼吸道症状的猪肺、鼻腔棉试子等85份,与鸡胚分离及血凝/血凝抑制试验比较,阴性样品检测符合率达100%。 展开更多
关键词 猪流感病毒 血凝素亚型 神经氨酸酶亚型 多重rt—pcr
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同时检测美洲型及欧洲型PRRSV的多重RT-PCR检测方法的建立及应用 被引量:12
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作者 施开创 莫胜兰 +3 位作者 张步娴 屈素洁 赵日浪 钟诚 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期810-814,共5页
为建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的快速鉴别检测方法,本研究针对PRRSV基因序列设计3对特异性引物,即第1对通用引物扩增美洲型和欧洲型病毒株ORF7基因(433 bp/398 bp)、第2对引物扩增美洲型经典病毒株和高致病性变异株(HP-PRRSV)Nsp... 为建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的快速鉴别检测方法,本研究针对PRRSV基因序列设计3对特异性引物,即第1对通用引物扩增美洲型和欧洲型病毒株ORF7基因(433 bp/398 bp)、第2对引物扩增美洲型经典病毒株和高致病性变异株(HP-PRRSV)Nsp2基因(338 bp/248 bp)、第3对引物扩增欧洲型病毒株ORF5基因(614 bp)。经过反应条件的优化,建立了能够同时检测并区分美洲型经典病毒株、HP-PRRSV株以及欧洲型病毒株的多重RT-PCR检测方法。该方法可以特异扩增3种病毒的基因,其重组质粒标准品的检出下限均为1.67×103拷贝;而与猪的其它重要病原均无交叉反应。应用该方法检测176份临床疑似病料样品,结果 PRRSV阳性45份,其中美洲型变异病毒株41份、经典病毒株4份,未检测到欧洲型病毒株。表明本研究建立的多重RT-PCR检测方法可以用于PRRSV的快速鉴别诊断和流行病学调查。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 美洲型病毒株 欧洲型病毒株 多重rt.pcr 检测方法
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