Cajal间质细胞与一氧化氮在吗啡诱导慢传输运动小鼠结肠中的改变

目的:通过对慢传输型便秘动物模型的观察,探讨产生慢波和传导电兴奋的胃肠道起搏细胞Cajal间质细胞及抑制性神经递质一氧化氮在慢传输型便秘发病机制中的作用。方法:实验于2004-01/02在南京医科大学实验动物中心进行。选取清洁级ICR小鼠20只,雌雄各半,体质量22～25g,随机分为实验组与对照组各10只,实验组小鼠皮下给予盐酸吗啡(10mg/mL)2.5mg/kg,对照组注射等量生理盐水,共45d。分别记录两组小鼠日平均粪便质量及观察粪便性状。45d后,分别将实验组和对照组小鼠禁食24h,活性炭悬液推进试验,计算墨汁推进距离占肠道全长的百分比(肠道推进率=墨汁推进距离/肠道全长×100%)。分别取每只小鼠近端和远端结肠组织各1块,常规固定、包埋、切片。免疫组织化学标记结肠组织Cajal间质细胞与一氧化氮合酶,细胞质染色呈棕色者判定为阳性细胞。日平均粪便质量及活性碳悬液推进试验比较实验组与对照组小鼠肠道传输功能;计算机图像分析系统分析两组小鼠结肠组织中Cajal间质细胞及一氧化氮合酶阳性面积的变化。结果:实验动物全部进入结果分析。①两组小鼠日平均粪便质量没有显著差异,但实验组小鼠粪便性状较对照组干硬(Bristol分级1～2级,4～5级)。②实验组小鼠肠道推进率明显低于对照组[(49.7±13.6)%,(66.9±13.1)%,t=2.88,P<0.05]。③实验组与对照组的小鼠结肠组织均有神经型一氧化氮合酶的表达,而内皮型一氧化氮合酶与诱生型一氧化氮合酶没有表达;实验组较对照组近端结肠c-kity阳性细胞面积和一氧化氮合酶面积均明显减少[(1.27±0.34),(4.28±0.38)×104μm2;(1.25±0.23);(2.38±0.22)×104μm2;t=18.67,11.23,P<0.05],而两组远端结肠无明显差异。结论:吗啡诱导的结肠慢传输运动小鼠模型肠道推进率、近端结肠Cajal细胞数量、一氧化氮合酶较对照组均明显减少,提示近端结肠Cajal间质细胞与一氧化氮的变化可能是结肠慢传输运动的原因之一。

一氧化氮介导干扰素-α对大鼠心肌的负性肌力作用

目的:研究干扰素-α(IFN-α)对大鼠离体心脏及其乳头肌的影响和可能机制。方法:采用离体Langendorff灌流心脏和离体右心室乳头肌模型,观察IFN-α对左心室发展压、左心室内压最大上升和下降速率、左心室舒张末压、心率、冠脉流量和乳头肌平均最大收缩力的影响。结果:在离体Langendorff灌流心脏上,IFN-α(10 U/m l、100 U/m l、1 000 U/m l、10 000 U/m l)浓度依赖性的抑制左心室发展压、左心室内压最大上升和下降速率,抬高左心室舒张末压,高浓度IFN-α增加冠脉流量,但对心率无明显影响。在离体右心室乳头肌模型上,IFN-α浓度依赖性的抑制离体右心室乳头肌的发展张力。一氧化氮合酶抑制剂左旋硝基精氨酸甲酯(L-NAM E,1-0 4m o l/L)预处理后,可阻断IFN-α在离体灌流心脏和离体右心室乳头肌上的负性肌力作用。同时,IFN-α(1 000 U/m l)预处理10 m in可以引起右心室乳头肌对β-肾上腺素受体激动剂异丙肾上腺素(ISO,1-0 9m o l/L^1-0 6m o l/L)浓度曲线的反应性降低,合用L-NAM E(1-0 4m o l/L)预处理后,可削弱IFN-α的作用。结论:IFN-α对大鼠离体心肌具有负性肌力作用,并且能降低乳头肌对β-肾上腺素受体激动剂ISO的反应性,以上作用可能部分是由一氧化氮介导的。

一氧化氮在大鼠严重创伤时早期对肠道的保护作用

目的:探讨一氧化氮(NO)在严重创伤时早期对肠道的保护作用。方法:用机械人为造成创伤,随机分为三组:创伤组、创伤后立即舌下静注L-arg组、创伤后立即舌下静注L-NAM E组,分别测定伤后1、6、8 h各组肠组织中MDA、SOD、NO及肠组织病理评分。结果:MDA随NO的升高而降低,SOD随NO的升高而升高,肠组织的病理变化与NO的含量相一致。结论:NO在严重创伤早期对肠道有保护作用。

内皮型一氧化氮合酶基因第4内含子中27碱基对重复序列多态性与糖尿病视网膜病变的相关性研究

目的观察内皮型一氧化氮合酶（eNOS）基因第4内含子中27碱基对（bp）重复序列（VNTR）的插入／缺失（a／b）多态性与糖尿病视网膜病变（DR）之间的相关性。方法321例确诊为2型糖尿病且病程在10年以上的患者为病例组，146名健康体检者为正常对照组。所有受检者均为中国汉族。病例组患者根据间接检眼镜及荧光素眼底血管造影检查结果分为DR组和无DR组（NDR组），分别为154、167例。采用聚合酶链式反应（PCR）结合8％聚丙烯酰胺凝胶电泳分离技术检测eNOS基因第4内含子中27bpVNTR多态性，比较各组问b、a等位基因频率与b／b、a／a、b／a基因型频率，分析其与疾病的相关性。结果eNOS基因第4内含子中27bpVNTRb等位基因频率在DR组显著高于NDR组（X^2=4．745，P=0．029；OR=1．685，95％CI=1．050～3．905）和正常对照组（X^2=6．958，P=0．008；OR=1．891，95％CI=1．172～4．437）；b／b基因型频率在DR组显著高于NDR组（X^2=4．8ll，P=0．028；OR=1．790，95％CI=1．060～4．645）和正常对照组（X^2=5．203，P=0．023；OR=1．859，95％CI=1．087～4．952）。结论中国汉族2型糖尿病患者eNOs基因第4内含子b等位基因及b／b基因型与DR发生密切相关。

一氧化氮合酶基因多态性与糖尿病视网膜病变相关性研究

目的 观察中国汉族人群中血管内皮原生型一氧化氮合酶（ecNOS）基因的多态性与糖尿病视网膜病变（DR）之间的相关性.方法 166例临床确诊为非胰岛素依赖型糖尿病患者为病例组,选取无糖尿病、高血压、肾病,年龄40岁以上,个体间无血缘关系的85例白内障、骨折患者和健康体检者为正常对照组.病例组患者根据有无视网膜病变和荧光素眼底血管造影检查结果分为无DR组、非增生期DR组（BDR组）和增生期DR组（PDR组）.病例组和正常对照组受检者均为汉族.抽取外周静脉血,提取DNA.采用聚合酶链反应（PCR）检测ecNOS基因第四内含子中27个碱基对（bp）重复的多态性.结果 PCR产物测序结果经检索GeneBank,扩增序列与GeneBank中ecNOS基因相应区域的序列相一致,显示在汉族人群中同样存在27个bp的重复序列,等位基因b重复5次,等位基因a重复4次.PCR检测结果显示,在正常对照组和无DR组、BDR组、PDR组中均存在2种等位基因和3种基因型.正常对照组中基因型bb、ab、aa分别为80.0%、16.5%、3.5%、无DR组分别为77.2%、13.9%、8.9%、BDR组分别为80.5%、17.1%,2.4%,PDR组分别为78.3%、13%、8.7% 正常对照组、无DR组、BDR组、PDR组两两比较,等位基因频率（χ~2=1.841）和基因型频率（χ~2=3.847）均无统计学意义（P〉0.5）.Logistic回归分析结果也显示DR与ecNOS基因重复多态性无关.结论 中国汉族人群ecNOS基因第四内含子存在27个bp重复的多态性,但可能与非胰岛素依赖型糖尿病患者视网膜病变无关.