中华鳖诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因的表达分析

一氧化氮(NO)参与生物体内多种重要的生理病理活动,可增强机体的免疫功能,而诱导型一氧化氮合酶(iNOS)是一氧化氮合成过程中的关键限速酶。为了探明iNOS在中华鳖(Pelodiscus sinensis)先天免疫中的作用,研究了iNOS基因在中华鳖组织的分布及外源刺激物对其基因和蛋白表达的影响。荧光定量PCR结果显示,iNOS基因在中华鳖的心脏、肝脏、肾脏、脾脏、肌肉、小肠和大肠中均有表达,其中在大肠中表达量最高,其次是小肠、肾脏和脾脏。在受脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)刺激后,肝、脾、肾、肌肉和小肠iNOS mRNA的表达显著升高。免疫组化实验结果显示LPS刺激后12 h、24 h iNOS蛋白在小肠、脾脏表达水平显著高于生理盐水对照组。研究结果表明iNOS可能参与了中华鳖的机体免疫反应。

内皮型一氧化氮合酶在运动预适应改善心肌缺血-再灌注损伤中的作用

背景:运动是防治各种心血管疾病并保护心脏免受缺血-再灌注损伤的有效策略,其作用机制有待深入研究。目的:观察有氧运动预适应对心肌缺血-再灌注损伤的影响,并探讨内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)激活(包括偶联和磷酸化)在其间的作用。方法:取80只成年Wistar大鼠,采用随机数字表法分为安静组(n=40)和运动组(n=40),运动组进行8周有氧运动,安静组在鼠笼内安静饲养。8周后进行3项实验:①实验1:末次训练后,检测大鼠心功能、心脏NO代谢物含量及心脏eNOS、磷酸化eNOS-S1177、eNOS二聚体、eNOS单体的蛋白表达量;②实验2:将大鼠分为安静对照组、运动对照组、安静+eNOS抑制剂组、运动+eNOS抑制剂组,均进行体外心肌缺血-再灌注损伤实验,安静+eNOS抑制剂组、运动+eNOS抑制剂组再灌注前10 min持续灌注eNOS抑制剂,再灌注3 h后检测心功能与心肌梗死面积;③实验3:将大鼠分为安静对照组、运动对照组、安静+eNOS偶联剂组和运动+eNOS偶联剂组,均进行体外心肌缺血-再灌注损伤实验,安静+eNOS偶联剂组和运动+eNOS偶联剂组再灌注前10 min持续灌注eNOS偶联剂,再灌注3 h后检测心肌梗死面积、心脏NO代谢物含量及心脏eNOS、磷酸化eNOS-S1177、eNOS二聚体、eNOS单体和3-硝基酪氨酸的蛋白表达量(其中,磷酸化eNOS-S1177/eNOS比值反映eNOS磷酸化/去磷酸化水平,eNOS二聚体/单体比值反映eNOS偶联/解偶联水平)。结果与结论:①实验1:与安静组比较,运动组大鼠心输出量、左心室射血分数升高(P<0.05),亚硝酸盐和S-亚硝基硫醇含量升高(P<0.05),磷酸化eNOS-S1177、eNOS蛋白表达和磷酸化eNOS-S1177/eNOS比值上调(P<0.05),eNOS二聚体蛋白表达和eNOS二聚体/单体比值升高(P<0.05);②实验2:与安静对照组比较,运动对照组左心室发展压升高(P<0.05),心肌梗死面积下降(P<0.05);与运动对照组比较,运动+eNOS抑制剂组左心室发展压降低(P<0.05),心肌梗死面积增加(P<0.05);③实验3:与安静对照组比较,运动对照组左心室发展压升高(P<0.05),心肌梗死面积下降(P<0.05),磷酸化eNOS-S1177/eNOS比值下降(P<0.05),eNOS二聚体/单体比值下降(P<0.05),S-亚硝基硫醇含量增加(P<0.05),3-硝基酪氨酸蛋白表达量下调(P<0.05);与运动对照组比较,运动+eNOS偶联剂组左心室发展压降低(P<0.05),心肌梗死面积增加(P<0.05),磷酸化eNOS-S1177/eNOS比值升高(P<0.05),eNOS二聚体/单体比值升高(P<0.05),3-硝基酪氨酸蛋白表达升高(P<0.05);④结果表明:有氧运动预适应可诱导心脏保护效应,其机制与心脏缺血-再灌注期间eNOS解偶联以及去磷酸化进而抑制NO过度产生并降低硝基-氧化应激有关。

解脲脲原体脂质相关膜蛋白通过激活核因子κB调控诱导性一氧化氮合酶在小鼠巨噬细胞中的表达

为探讨解脲脲原体(Uu)的脂质相关膜蛋白(LAMPs)诱导小鼠巨噬细胞表达诱导性一氧化氮合酶(iNOS)的分子机制,从解脲脲原体提取的脂质相关膜蛋白,刺激小鼠巨噬细胞,以RT_PCR、Western blot等方法分析iNOS的表达及NO的产生;用细胞免疫化学、间接免疫荧光及Western blot等方法检测核因子κB(NF_κB)的激活,另外检测了NF_κB的特异性抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)和蛋白酶抑制剂放线菌酮(CHX)对iNOS的表达及NF_κB激活的影响。结果表明,解脲脲原体的LAMPs通过激活NF_κB诱导小鼠巨噬细胞表达iNOS的mRNA和蛋白,且能以时间和剂量依赖方式刺激小鼠巨噬细胞产生NO,NF_κB的抑制剂PDTC或蛋白酶抑制剂放线菌酮(CHX),可抑制NF_κB的激活及iNOS的表达。由于解脲脲原体的脂质相关膜蛋白通过激活NF_κB诱导小鼠巨噬细胞表达iNOS和产生NO,因而可能是一个重要的致病因素。

针刺对小鼠腹腔巨噬细胞的热休克蛋白、诱导性一氧化氮合酶及其基因表达的效应

目的研究针刺对小鼠腹腔巨噬细胞的热休克蛋白（ＨＳＰ）、诱导性一氧化氮合酶（ｉＮＯＳ）及其ｍＲ－ＮＡ表达的效应。方法将２４只昆明小鼠腹腔注射无菌石蜡油后，随机分为３组：电针（ＥＡ）组、对照１（Ｃ１）组和对照２（Ｃ２）组。将３组收集的腹腔巨噬细胞制备成玻片和硝酸纤维素膜（ＮＣＭ）两种标本，应用原位杂交、免疫细胞化学、细胞化学及斑点印迹技术检测ＨＳＰ７０、ｉＮＯＳ及ｉＮＯＳｍＲＮＡ。结果ＨＳＰ７０定位于巨噬细胞的胞质和胞核；ｉＮＯＳｍＲＮＡ及ｉＮＯＳ均定位于巨噬细胞的胞质；３组的ｉＮＯＳｍＲＮＡ、ｉＮＯＳ、ＨＳＰ７０的斑点印迹的扫描数值均为ＥＡ组＞Ｃ２组＞Ｃ１组（Ｐ＜０．０１）。结论电针可显著提高小鼠腹腔巨噬细胞的ＨＳＰ７０、ｉＮＯＳ及ｉＮＯＳｍＲ－ＮＡ表达。

诱导性一氧化氮合酶的表达与胃癌肿瘤血管形成及预后的关系

目的 探讨诱导性一氧化氮合酶 (iNOS)在胃癌组织中的表达及其与胃癌肿瘤血管形成及预后的关系。方法 应用免疫组化方法检测 4 6例人胃癌组织中iNOS、血管内皮生长因子 (VEGF)的表达情况 ;测量肿瘤微血管密度(MVD)。结果 胃癌组织中iNOS阳性表达率为 5 8.70 % ,而正常胃组织不表达。Ⅳ期胃癌患者的iNOS阳性表达率高于I～Ⅲ期 ;37例伴有淋巴结转移者iNOS阳性表达率高于无淋巴结转移者 ;iNOS阳性 2 7例胃癌组织的MVD(5 9.88± 18.0 2 )明显高于阴性组 (49.6 4± 12 .0 6 ,P <0 .0 5 ) ;VEGF阳性者的MVD(5 5 .5 9± 19.39)明显高于阴性者(45 .4 3± 18.2 1,P <0 .0 5 )。iNOS和VEGF表达阳性的患者的 5年存活率明显低于iNOS和VEGF表达阴性的患者。结论 iNOS表达与肿瘤血管形成密切相关 ,与胃癌的病情进展、淋巴结转移和预后呈正相关。

诱导性一氧化氮合酶在幽门螺杆菌与胃癌关系中的研究进展

自从幽门螺杆菌（helicobacter pylori，HP）发现以来，HP导致慢性胃炎、消化性溃疡、萎缩性胃炎、肠上皮化生、不典型增生、胃癌的关系已经得到大家的公认．其在导致胃黏膜炎症和胃癌的机制方面也有相关报道。诱导性一氧化氮合酶（iNOS）是重要的炎症因子．其所产生的NO在胃癌发生发展中起着重要的作用。本文将从国内外最新的研究中对iNOS在HP与胃癌的关系方面作一综述。

汉族人群诱导性一氧化氮合酶T-786C、G894T基因多态性与脓毒症易感性的关系

目的探索汉族人群内皮型一氧化氮合酶(eNOS)T-786C、G894T基因多态性中对脓毒症存在易感的高风险等位基因或基因型。方法2007年4月-2009年5月,在北京9家教学医院ICU随机收集脓毒症患者117例,并招募健康志愿者100名作为对照,应用PCR-SSCP及PCR-RLFP方法检测eNOST-786C、G894T的等位基因和基因型。结果脓毒症患者与健康人群之间eNOST-786C及G894T各等位基因或基因型的发生频率无显著差异(P>0.05)。但脓毒症患者中TC基因型的出现频率(30.8%)与健康人群(24.0%)相比有增加趋势(P=0.086);等位基因C携带者的比例(18.8%)高于健康人群(12.0%),但未达到统计学差异(P=0.052)。117例脓毒症患者中发现4例CC纯合子基因型个体,占3.4%;健康对照组中未发现CC纯合子基因型个体。结合既往文献结果进行分析发现,eNOS T-786C和G894T各基因型的出现频率存在种族差异,与白种人比较,亚洲黄种人eNOS T-786C基因型TC、CC以及G894T基因型GT、TT的出现频率均显著降低(P=0.000)。结论eNOS T-786C等位基因C或基因型TC的携带人群对脓毒症可能存在易感趋势,而G894T基因多态性与脓毒症易感性无密切关系。

诱导性一氧化氮合酶的临床意义

近年来,人们在对一氧化氮（NO）的生物学作用的研究中发现,NO及其限速酶--一氧化氮合酶（NOS）尤其是诱生型一氧化氮合酶（iNOS）在众多疾病的发生发展过程中有着重要的临床意义.

诱导性一氧化氮合酶在动脉硬化中的作用

动脉硬化是心脑血管疾病的基础,严重危害人类健康的脑血栓,脑出血以及冠心病的发生都和动脉硬化有着密切的联系。近年来随着对动脉硬化发生机制的研究,诱导性一氧化氮合酶越来越受到关注,其和动脉硬化发生的关系已不容忽视。本文就诱导性一氧化氮合酶和动脉硬化的关系作简要介绍。

诱导性一氧化氮合酶抑制药对感染性休克犬生化影响的观察

目的：研究诱导性一氧化氮合酶抑制药氨基胍（ＡＧ）对感染性休克犬生化的影响。方法：杂种犬在２ ｈ 输注内毒素（ＬＰＳ， １ ｍ ｇ／ｋｇ），在血压下降至基础值６０％ ２ ｈ 后随机分为ＬＰＳ（组Ⅰ）组，ＬＰＳ＋ Ｌ－ＮＡＭＥ（组Ⅱ）组和ＬＰＳ＋ ＡＧ（组Ⅲ）组，分别给予生理盐水，Ｌ－ＮＡＭＥ（３０ ｍ ｇ／ｋｇ）和ＡＧ（２０ ｍ ｇ／ｋｇ）。分别监测血中ＮＯ、血乳酸、丙氨酸转氨酶（ＬＡＴ）、门冬氨酸转氨酶、尿素氮和血糖。观察到给予治疗后４ ｈ。结果：平均动脉压下降２ ｈ 后，３ 组的血ＮＯ、乳酸、尿素氮、门冬氨酸转氨酶和丙氨酸转氨酶明显增加，血糖明显减少。给予治疗后，组Ⅱ乳酸、尿素氮、门冬氨酸转氨酶和丙氨酸转氨酶均明显高于其它两组（ Ｐ＜ ０．０５）；血糖在各时间段均明显减少。组Ⅲ乳酸、尿素氮、丙氨酸转氨酶明显低于其它两组（Ｐ＜ ０．０５）；血糖明显增高（ Ｐ＜ ０．０５）。

氧化应激与诱导性一氧化氮合酶在糖尿病性阴茎勃起功能障碍中的作用

目的:探讨氧化应激与诱导性一氧化氮合酶(iNOS)在糖尿病性阳茎勃起功能障碍(ED)中的可能作用。方法:注射链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型,分别在注射8周和12周后观察阴茎勃起次数、取大鼠阴茎和血浆,测定血清丙二醛(MDA)水平、总抗氧化能力(T-AOC)、一氧化氮合酶(NOS)和iNOS活力以及用免疫组织化学ABC方法检测阴茎iNOS的表达。结果:糖尿病大鼠的阴茎勃起次数明显低于对照组,并随病程延长降低;糖尿病大鼠血清MDA、iNOS水平明显高于对照组;糖尿病大鼠T-AOC水平明显低于对照组;与对照组比较,糖尿病组阴茎内iNOS阳性细胞数和平均光密度值随病程延长而升高。结论:糖尿病性阴茎勃起功能障碍与氧化应激水平、血清iNOS活性以及阴茎iNOS的表达升高相关。

一氧化氮、诱导性一氧化氮合酶在实验性大鼠腹主动脉瘤中的作用

目的 :探讨一氧化氮 (NO)和诱导性一氧化氮合酶 (iNOS)在实验性大鼠腹主动脉瘤形成中的作用和机制。方法 :建立大鼠腹主动脉瘤灌注模型 ,对照组予以生理盐水腹主动脉灌注 ,余下予以猪胰弹性蛋白酶灌注制作腹主动脉瘤模型 ,并分为实验组 (术后腹腔注射生理盐水 )、药物组 (术后腹腔注射氨基胍 ) ,观察各组大鼠血清NO、腹主动脉瘤壁组织学和基质金属蛋白酶 9(MMP 9)、iNOS的变化。结果 :生理盐水灌注组大鼠术前术后血清NO无明显变化 ,iNOS、MMP 9表达弱阳性或阴性 ,动脉壁炎性细胞浸润轻、弹性蛋白降解少 ;实验组血清NO显著升高 ,iNOS及MMP 9表达强阳性 ,炎性细胞浸润重、弹性蛋白几乎完全降解 ;应用氨基胍后iNOS变化不明显 ,而NO显著降低 ,MMP 9表达显著减弱 ,炎性细胞浸润和弹性蛋白降解明显减轻。结论 :iNOS、MMP 9的表达和血清NO水平在实验组均显著升高。iNOS及其合成的NO能促进腹主动脉壁炎性细胞的浸润、中膜基质的降解和MMPs的表达 。

肿瘤坏死因子-α、诱导性一氧化氮合酶在扑热息痛肝损害中的表达

目的:探讨炎症反应在扑热息痛(acetaminoph-en,AAP)肝损害中的作用.方法:应用AAP建立SD大鼠肝损害模型;分别于给药后3、6、12、24h处死大鼠,AAP组和对照组分别测定ALT水平,HE染色观察肝脏病理变化,放射免役分析法测定血清TNF-α水平,免疫组织化学和Westernblot方法检测肝组织中TNF-α、iNOS蛋白的表达.结果:AAP组和对照组相比:血清ALT(nKat/L)进行性升高(3、6、12、24h的值分别为:1166.90±151.03vs586.78±89.35,2153.84±254.55vs573.45±75.18,4220.84±928.52vs750.15±81.68,13202.64±1392.78vs780.16±161.37,均P<0.01);肝脏病理损伤进行性加剧,24h达高峰;给药后24h血清TNF-α(g/L)水平显著升高(5.69±0.46vs2.64±0.27,P<0.01),且与血清ALT水平呈显著的正相关(r=0.773,P<0.01);免疫组织化学方法测定肝组织TNF-α、iNOS表达明显增强,分别于6、12h达高峰;Westernblot方法检测肝组织TNF-α、iNOS蛋白的表达显著高于对照组(P<0.01),分别于3、6h达高峰,24h时仍高于正常水平.结论:炎症反应在AAP肝损伤发生、发展的过程中发挥着关键的作用.

敲除诱导性一氧化氮合成酶治疗骨骼肌缺血再灌注损伤的实验研究

目的 研究敲除诱导性一氧化氮合成酶治疗骨骼肌缺血再灌注损伤的机制和作用。方法本实验采用敲除一氧化氮合成酶的小鼠 (治疗组 )及正常小鼠 (对照组 )各 2 1只 ,造成去神经游离提睾肌皮瓣完全缺血 3小时 ,在荧光显微镜下 ,活体动态观察该肌肉在恢复血液灌注前后 90分钟过程中平均微动脉管径的一系列变化 ,测量灌注前后肌肉的血恢复率 ,重量比率 ,并观察其病理变化。结果 (1)在灌注后 10和 90分钟 ,对照组小鼠肌肉的再灌注率分别为 (38 7± 18) %和 (6 3 8± 5 0 3) % ;而治疗组已达 (92 9± 17 2 ) %和 (10 8 7± 2 5 0 ) % (P <0 0 0 1)。 (2 )再灌注 10分钟时 ,对照组的平均微动脉管径始终维持在未缺血时的 5 1 5 %至 5 7 5 %之间 ,90分钟后分别达到 (71 6± 10 9) % (10～ 2 0um) ,(71 2± 15 1) % (2 1～ 4 0um) ,(6 3 4± 11 2 ) % (41～ 70um)。而治疗组再灌注 10分钟时的平均微动脉的管径即为缺血前的 72 % ,90分钟以后 ,分别达到 (91 8± 7 8) % (10～ 2 0um) ,(88 2± 7 6 ) % (2 1～ 4 0um ) ,(85 4± 6 6 ) % (41～ 70um) (P <0 0 0 1)。 (3)缺血 3小时再灌注 90分钟后 ,左、右两侧提睾肌的重量比 ,对照组为 (173 3± 4 4 5 ) % ,而治疗组为 (116 2± 7 7) % (P <0 0 1)。

诱导性一氧化氮合酶及其调节机制

一氧化氮是由L 精氨酸在一氧化氮合酶的催化下产生的 ,其产生过程需要四氢生物蝶呤、血红素、钙调蛋白和黄素等多种协同因子的参与 ,尤其是钙调蛋白起到了一氧化氮合酶开关的作用。对一氧化氮合成过程的调节一般发生在底物水平、一氧化氮合酶的转录水平以及转录后水平 ,其调节剂以及调节途径十分复杂。而在一氧化氮合酶活性的衡量标准方面 ,目前尚存有争议。

非洛地平对自发性高血压大鼠一氧化氮及诱导性一氧化氮合酶的影响

目的 观察非洛地平 (Felodipine)对自发性高血压大鼠一氧化氮 (NO)及诱导性一氧化氮合酶 (iNOS)的影响。方法 取自发性高血压大鼠 2 2只 ,随机分为生理盐水组、Felodipine正常剂量组及其低剂量组 ,每天灌胃一次 ,连续 15天 ,末次给药后摘眼球取血以及取动物脏器 ,分别测定血清NO和iNOS的含量。结果 灌胃 15天后 ,Felodipine正常剂量组的NO含量为 (12 7± 7 5 ) μmol/L ,与生理盐水组 (10 2 3± 4 6 ) μmol/L相比 ,差异有明显显著性 (P <0 0 1) ;Felodipine低剂量组NO含量为 (119± 8 3) μmol/L ,与生理盐水组相比 ,差异有显著性 (P <0 0 5 ) ,Felodipine正常剂量组的组织iNOS活性降低 ,为 1 17± 0 2 3,与生理盐水组 (2 2 5± 0 94 )相比 ,差异显著 (P <0 0 5 ) ,与Felodipine低剂量组 (1 76± 0 5 7)相比 ,差异亦显著 (P <0 0 5 )。结论 Felodipine组可有效地在降低血压的同时 ,提高血清NO的含量 ,并且对抗血压增高所造成的iNOS的活性增强 (或二者互为因果 )。

创伤性脑损伤后人脑组织中诱导性一氧化氮合酶蛋白水平的研究

目的:探讨创伤性脑损伤(Traumatic Brain Injury,TBI)后诱导型一氧化氮合酶(induced nitric oxide syn-thase,iNOS)在人脑组织中的表达变化及意义。方法:把38例脑损伤患者以及对照组患者分为7组(包括对照组,伤后0￣6h组、6￣12h组、12￣24h组、24￣48h组、48￣72h组,72h以上组)。用尼氏法染色观察脑损伤后神经细胞病理变化过程,免疫组织化学染色方法观察iNOS阳性细胞的表达变化。结果:尼氏法染色发现损伤区神经细胞减少;免疫组化检测发现伤后不同时相iNOS阳性细胞表达增加,伤后12￣24h达到高峰。结论:脑损伤后神经元的数量减少,损伤区及周围皮质出现iNOS阳性神经元,iNOS阳性细胞的表达与伤后时程有关。

喜树碱对结肠癌细胞SW480诱导性一氧化氮合酶合成的影响

目的:研究喜树碱对结肠癌细胞SW480诱导性一氧化氮合酶(iNOS)合成的影响,以探讨喜树碱抗肿瘤的新的可能的机制。方法:培养结肠癌SW480细胞系,用脂多糖和IL-1β诱导诱导性一氧化氮合酶的产生。用不同浓度的喜树碱作用于SW480细胞系,MTT法检测细胞毒作用,Griess法检测NO生成量,RT-PCR法检测iNOS mRNA的表达,Western blot检测iNOS蛋白质的表达。结果:喜树碱能减少SW480细胞NO的生成量,并且呈时间和剂量相关性。SW480细胞经0.032μg/ml、0.125μg/ml的喜树碱处理24小时后,iNOS mRNA转录量和iNOS蛋白表达量减少,并呈剂量相关性。结论:喜树碱能特异性地减少结肠癌SW480细胞NO的生成量、降低iNOS mRNA和蛋白质的表达,这可能是喜树碱抗肿瘤的一个新的作用机制。