匹莫齐特对脂多糖诱导RAW264.7细胞诱导型一氧化氮合成酶表达的调控及其作用机制

目的运用脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞株,探究匹莫齐特(Pimozide)对一氧化氮和诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)合成的影响和作用机制。方法用含10%胎牛血清、100 U·mL^(-1)的青链霉素DMEM培养液将RAW264.7细胞稀释为每孔2×105个接种于24孔板中进行培养,分为空白对照组(仅含DMEM培养液+RAW264.7细胞)、Pimozide组(仅含RAW264.7细胞和10μmol·L^(-1)Pimozide培养液)、LPS诱导(LPS 1 mg·L^(-1))组(LPS+RAW264.7细胞)、药物处理组[含细胞和不同浓度药物,包括Pimozide低(LPS+2.5μmol·L^(-1))、中(LPS+5μmol·L^(-1))、高(LPS+10μmol·L^(-1))组]。各组培养上清液中一氧化氮水平测定采用Griess法进行检测。采用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)法和免疫蛋白印迹法分别检测iNOS mRNA表达水平和iNOS和磷酸化的信号传导及转录激活因子通路-5的蛋白表达相对水平。结果用含10%胎牛血清、100 U·mL^(-1)的青链霉素DMEM培养液培养RAW264.7细胞24 h后,各组培养上清液一氧化氮表达水平差异有统计学意义(F=25.69,P<0.05);Pimozide低(LPS+2.5μmol·L^(-1))、中(LPS+5μmol·L^(-1))、高(LPS+10μmol·L^(-1))组一氧化氮释放的抑制率差异有统计学意义(F=132.49,P<0.05)。各组iNOS mRNA和蛋白水平表达差异有统计学意义(F=118.59和23.37,P<0.05),同时发现各组磷酸化的信号传导及转录激活因子通路-5/信号传导及转录激活因子通路-5比值差异有统计学意义(F=12.07,P<0.05)。结论Pimozide可抑制RAW264.7细胞中iNOS表达和一氧化氮的生成,其作用机制可能与抑制磷酸化的信号传导及转录激活因子通路-5的生成相关。

一氧化氮合成酶（NOS）基因表达的半定量检测及其运用

本工作参照Ｍａｒｔｉｎ（１９９３）定量ＲＴ－ＰＣＲ方法，建立了一种灵敏、简捷、特异的定量ＮＯＳｍＲＮＡ测定方法；证明了ＮＯＳｍＲＮＡ不仅存在于脑组织，亦广泛分布于心、肾、肺和肝组织中，其中以脑组织含量最高，肾、心次之。除内皮细胞以外，平滑肌细胞中亦有ＮＯＳ基因的表达；此外，本工作还观察到，自发性高血压大鼠的脑、肾、肝和平滑肌细胞中ＮＯＳｍＲＮＡ水平下降，提示ＮＯＳ基因表达受抑，可能与高血压的病因密切相关。

一氧化氮合成酶（NOS）活性的测定及其应用

本文介绍一种一氧化氮合成酶活性测定的改良方法。用这一方法测定了大鼠９种组织以及血清和血浆中一氧化氮合成酶的活性，并比较了正常与高血压大鼠小脑、大脑、肝脏和肾脏中一氧化氮合成酶活性的变化。

微波辐射对睾丸间质细胞一氧化氮合成酶(NOS)的影响

目的 :探讨微波作为一种非电离辐射波 ,对睾丸间质细胞 NOS活性的影响 ,以进一步深入研究微波对睾丸的损伤效应。方法 :利用 NADPH-d黄递酶组织化学方法显示睾丸间质细胞 NOS活性变化。结果 :2 1天频率为 2 .45 GHz,功率密度为 2 m W/ cm2 和 5 m W/ cm2 的连续微波辐射实验组与假辐照组相比 ,N OS阳性睾丸间质细胞的数量无明显变化 ,仅着色稍变淡 ;而以上剂量 42天微波辐射后 ,两微波实验组的睾丸间质细胞 NOS阳性睾丸间质细胞在明显减少的同时 ,染色也变淡。结论 :睾丸间质细胞 NOS活性与微波辐射强度密切相关。提示 NO机制可能是微波对生精过程影响的机制之一。

一氧化氮合成酶（NOS）基因表达的半定量检测及其应用

参照Ｍａｒｔｉｎ（１９９３）定量ＲＴ－ＰＣＲ方法，建立一种灵敏、简捷、特异的半定量ＮＯＳｍＲＮＡ测定方法；证明了ＮＯＳｍＲＮＡ不仅存在于脑组织，亦广泛分布于心、肾、肺和肝组织中，其中以脑组织含量最高，肾、心次之，除内皮细胞以外平滑肌细胞中亦有ＮＯＳ基因的表达；此外，本工作还观察到自发性高血压大鼠的脑、肾、肝和平滑肌细胞中ＮＯＳｍＲＮＡ水平下降，表示ＮＯＳ基因表达受抑，可能与高血压的病因密切相关。

人一氧化氮合成酶（NOS）cDNA的克隆

人一氧化氮合成酶（ＮＯＳ）ｃＤＮＡ的克隆北京医科大学心血管基础研究所周洪，赵新荣，王瑜，张晨晖，汤健上海市肿瘤研究所分子生物学研究室徐国威ＮＯ是近年来发现的一种血管和神经的信使分子（１）。它也可由血管内皮细胞释放，具有舒张血管、降低血压、抑制血管平滑...

一氧化氮合成酶(NOS)研究方法及其在植物中的应用

一氧化氮(NO)在动植物生命活动中具有重要作用。近年来,其合成途径已成为研究焦点。文章综述了近10年来一氧化氮合成酶(NOS)研究方法及其在植物中的应用,包括生物化学方法、免疫学方法和分子生物学方法,并对其研究前景进行展望。

Ce(NO_3)_3对大鼠内脏组织和大脑一氧化氮及合成酶的影响

本文研究了硝酸铈对大白鼠内脏组织、大脑及骨骼肌中一氧化氮、一氧化氮合成酶的影响。结果显示 ,腹腔注射高浓度的稀土后 ,大鼠肝脏、心脏、肾脏、骨骼肌中一氧化氮、一氧化氮合成酶的水平明显增加 ,注射低浓度的稀土后 ,肝脏、肾脏内一氧化氮的量显著增加。提示稀土能够广泛影响机体一氧化氮、一氧化氮合酶的水平 ,一氧化氮有可能参与了稀土的中毒过程。

RBM10,Caspase-9和内皮一氧化氮合成酶(eNOS)在早中期胚胎蜕膜组织的表达

目的:研究RBM10,caspase-9和eNOS在早中期胚胎蜕膜组织中的表达及意义。方法:通过培育孕鼠获得6.5~9.5 d胚胎蜕膜组织,制作组织蜡块切片。采用免疫组化技术检测RBM10、caspase-9和eNOS在早中期蜕膜组织中的表达,应用ImageProPlus图像处理软件分析图像。结果:(1)RBM10表达于蜕膜细胞核,合体滋养层细胞核及子宫腺上皮细胞核,caspase-9表达于蜕膜腺上皮细胞质及部分基质细胞胞质。(2)Caspase-9在孕鼠8.5 d的蜕膜组织中表达高于6.5 d、9.5 d(P<0.05);RBM10在孕鼠8.5 d的子宫蜕膜中表达高于6.5 d,且在8.5 d时达高峰后下降,9.5 d时的表达低于8.5 d(P<0.05);eNOS在孕鼠蜕膜化的6.5 d、8.5 d和9.5 d呈弱阳性表达,且8.5 d时的表达水平高于9.5 d(P<0.05)。结论:caspase-9、RBM10和eNOS可能参与了子宫早中期蜕膜化过程及胚胎组织的生长与分化调控。

一氧化氮合成酶（NOS）cDNA探针的制备

ＮＯ是近年来发现的一种血管和神经的信使分子。具有自由基的性质和广泛的生理和病理作用。ＮＯ是由Ｌ－精氮酸和分子氧在ＮＯＳ的催化下生成的。ＮＯＳ是限速因素。

中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)血细胞中一氧化氮合成酶的鉴定及其在白斑综合症病毒感染过程中的变化

诱导型一氧化氮合成酶 (iNOS)在生物机体免疫 ,特别在无脊椎动物免疫中的作用近来得到了广泛的关注 ,由其催化产生的一氧化氮 (NO)除具有已知的神经传导、松弛平滑肌等功能外 ,还具有抗菌、抗病毒、抗寄生虫等作用。作者通过硝基四氮唑蓝 (NBT)法和血细胞形态观察等方法 ,对中国明对虾 (Fenneropenaeuschinensis)血细胞中存在的诱导型一氧化氮合成酶进行了初步鉴定。在此基础上 ,通过亚硝酸盐法和L 瓜氨酸法对比 ,研究了感染白斑综合症病毒 (WSSV)后中国明对虾血细胞中一氧化氮合成酶的变化情况。结果显示 ,中国明对虾在感染WSSV后 ,iNOS活性在 1 2h内有上升趋势 ,实验 36h后酶活性显著下降 ,至 60h后酶活性降至对照组的一半左右。同时 ,被脂多糖 (LPS)诱导的一氧化氮合成酶活性与对照相比也有显著下降。与此对应的是 ,核酸探针斑点杂交法检测病毒的结果显示 :实验 36h后在对虾体内能够检测到白斑综合症病毒。对照组中国明对虾血细胞的iNOS在实验过程中基本保持稳定。这说明WSSV在感染中国明对虾初期可以诱导血细胞产生iNOS ,但随着WSSV在中国明对虾体内的大量增殖及其对血细胞的破坏 ,使得iNOS活性显著降低 ,对虾也趋于死亡。因此 。

一氧化氮和内皮型一氧化氮合成酶与血管迷走性晕厥发病的关系

目的探讨一氧化氮和内皮型一氧化氮合成酶与儿童血管迷走性晕厥发病的关系。方法血管迷走性晕厥患儿14例(A组),其他原因引起晕厥患儿10例(B组),健康志愿者20例(C组)。于倾斜试验(HUT)前和倾斜不同时间测定A组与B组患儿的血浆一氧化氮(NO)水平,同时对3组儿童进行内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)基因G894T多态性检测。结果①A组患儿出现阳性反应时血浆NO水平较平卧时显著升高(76.7±9.6vs 90.0±11.4μmol/L,P<0.05);②A组患儿在症状好转后血浆NO水平较试验前显著降低(82.7±9.2 vs61.5±6.9μmol/L,P<0.01);③B组患儿倾斜时血浆NO水平较平卧时差异无显著性;④A,B两组患儿的血压、心率变化与NO水平无显著相关性;⑤A组患儿eNOS基因G894T突变型基因频率显著高于B组与C组(42.9%vs10%,P<0.05)。结论倾斜体位时血浆NO水平异常升高可能参与了血浆血管迷走性晕厥的发病机制,而其升高水平可能与eNOS基因G894T多态性表达有关。[中国当代儿科杂志,2008,10(4):478-480]

镉胁迫对凡纳滨对虾血清中一氧化氮合成酶和超氧化物歧化酶活性的影响

研究了不同浓度Cd2+(0.05、0.5和5mg.L-1)对凡纳滨对虾Litopeneaus vannamei血清中的总一氧化氮合成酶(NOS)、诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)和超氧化物歧化酶(SOD)活性的影响。结果表明,镉胁迫促使总NOS活力升高依剂量而异,中(0.5mg.L-1)、低(0.05mg.L-1)剂量组凡纳滨对虾血清中总NOS活力在24—48h显著高于对照组,而高剂量组(5mg.L-1)在12—48h血清中总NOS活力与对照组相比无显著差别;iNOS活力变化趋势与总NOS活力相似,但中、低剂量组之间iNOS活性无显著差异。镉胁迫促使凡纳滨对虾血清中SOD活力短暂升高,但高剂量在24—48h对SOD活力呈明显的抑制效应。

对虾血细胞中一氧化氮合成酶鉴定与分析方法研究

通过硝基蓝四唑(NBT)还原法和血细胞形态法两种一氧化氮合成酶的鉴定方法,以日本对虾(Penaeusjaponicus)作为研究对象,对日本对虾血细胞中的一氧化氮合成酶进行初步鉴定,并优化硝基蓝四唑(NBT)还原法测定对虾血细胞中一氧化氮合成酶的实验条件。结果显示,当L-精氨酸浓度为2.5mmol/L,脂多糖(LPS)质量浓度为100μg/mL,Ca2+浓度为2.5mmol/L时,NBT法测定一氧化氮合成酶活力的结果最佳。同时,还建立了两种针对一氧化氮合成酶活力的分析方法—L-瓜氨酸分析法和亚硝酸盐分析法,并对其测定条件进行了优化。结果表明,对虾血细胞在4℃下与L-精氨酸和LPS孵育8h后测定的结果最为理想。利用这4种方法能够有效地鉴定和分析对虾血细胞中的一氧化氮合成酶,这为深入了解一氧化氮合成酶在对虾先天性免疫中的地位及其在对虾抗病力中的作用提供了理论依据。

一氧化氮、一氧化氮合成酶及血小板参数与脑梗死面积的相关性研究

目的探讨脑梗死患者发病过程中一氧化氮(NO)、一氧化氮合成酶(NOS)及血小板(PLT)、血小板分布宽度(PDW)、平均血小板体积(MPV)的意义及与梗死面积的相关性。方法检测53例脑梗死患者和40例健康对照者血清中NO、NOS、PLT、PDW、MPV的含量。结果脑梗死急性期MPV、NOS显著增高(P<0.05);PDW、NO显著增高(P<0.01);PLT显著减低(P<0.01)。NO、NOS分别与PDW、MPV之间呈显著正相关,与PLT呈负相关。结论PDW、MPV、NO、NOS的变化值随梗死面积的增加而增加,PLT则随梗死面积增加而减少。

体内抑制一氧化氮合成酶对小鼠卵母细胞成熟和排卵的影响

实验研究了一氧化氮合成酶抑制剂 L - NAME对昆明白小鼠卵母细胞成熟和排卵的影响。初情期前的昆明白小鼠注射 PMSG促进发情 ,注射 h CG促进排卵 ,并在注射 h CG前后各 3h注射 L- NAME。注射h CG后 18h颈椎脱臼处死小鼠 ,取输卵管冲卵。统计排卵数及卵母细胞的减数分裂情况发现 ,注射 L- NAME后排卵数明显减少 ,卵母细胞减数分裂恢复异常 ,大部分排出的卵母细胞处于 MI期 ;PB1的排出率降低 ,形态异常或退化死亡的卵母细胞数增加。结果直接证明 :在体内 ,NO可促进小鼠卵母细胞的减数分裂的恢复 ;NO对于小鼠排卵具有重要的促进作用 ;NO对小鼠卵母细胞质的成熟有重要影响 ;抑制 NO合成后 。

亚低温对急性创伤性脑水肿大鼠一氧化氮及其合成酶变化的影响

目的：探讨亚低温疗法对急性创伤性脑水肿后一氧化氮及其合成酶变化的影响机制。方法：建立大鼠创伤性脑水肿模型，测定伤后不同时间点常温下及亚低温后颈内静脉血一氧化氮、脑组织一氧化氮合成酶和脑含水量。结果：致伤后３０分钟大鼠即出现脑水肿，伤后８小时达高峰（从伤前７７．６３％±０．２１％升至７９．８３％±０．４１％）；一氧化氮具有同步效应〔从伤前（２．４４±０．１２）μｍｏｌ／Ｌ升至（７．８３±０．２７）μｍｏｌ／Ｌ〕；一氧化氮合成酶伤后３０分钟达高峰〔从伤前（３８．８９±４１．３０）μｍｏｌ·ｍｉｎ－１·ｇ－１升至（１０６．５８±５２．４６）μｍｏｌ·ｍｎ－１·ｇ－１〕，以后逐渐下降，伤后８小时〔（５８．２９±１９．４２）μｍｏｌ·ｍｉｎ－１·ｇ－１〕仍高于假手术组。而亚低温（３２～３３℃）能明显减轻脑水肿，减少一氧化氮含量及一氧化氮合成酶的表达〔伤后８小时分别为７９．５６％±０．２７％，（６．８４±０．３７）μｍｏｌ／Ｌ，（５１．０２±２４．５１）μｍｏｌ·ｍｉｎ－１·ｇ－１〕。结论：一氧化氮在创伤性脑水肿发生发展中起作用，而亚低温可能抑制一氧化氮合成酶的表达，减少一氧化氮含量，对创伤性脑水肿有一定保护作用。

氟对大鼠脑组织中一氧化氮合成酶活性的影响

目的为研究氟对神经系统的作用机理。方法利用化学发光分析技术测定大鼠脑组织中的一氧化氮合成酶的活性。结果氟暴露大鼠脑组织中ＮＯＳ活性明显高于对照组，直接在ＮＯＳ反应液中加入氟化钠，ＮＯＳ活性亦增加，而且这种增强作用能被一氧化氮合成酶的抑制剂Ｌ－硝基精氨酸所阻断。结论无论在体内还是体外，氟能使一氧化氮合成酶的活性增高。

丹参对兔缺血再灌注肾组织一氧化氮及其合成酶的影响

目的探讨丹参保护兔缺血再灌注肾损伤的内皮机制。方法以兔肾缺血再灌注为模型 ,采用自动生化分析技术 ,检测不同实验条件下肾组织一氧化氮合成酶 (NOS)总活性及一氧化氮(NO) ,并用Elasa法测定尿视黄醇结合蛋白 (RBP)及尿微量白蛋白 (Alb) ,试图分析NOS总活性、NO与肾功能之间的相互关系。结果 (1)正常肾髓质较皮质能产生更多的NO。 (2 )缺血肾组织NOS总活性显著下降 ,NO显著增高。 (3)再灌注后 ,肾组织NOS总活性显著升高 ,而NO显著下降 ,肾功能明显受损。 (4 )肾缺血注射丹参后再灌注 ,肾组织NOS总活性进一步升高 ,而NO变化不明显 ,尿RBP及Alb下降至正常水平。结论 (1)生理情况下 ,肾髓质较皮质能产生更多的NO ,这对肾髓质血流分布及其功能的调节可能具有重要作用。 (2 )缺血再灌注后 ,肾组织NOS活性升高与肾功能受损密切相关。(3)丹参对缺血再灌注所致的肾小管及肾小球损伤均有明显的保护作用。 (4 )丹参对缺血再灌注肾组织中的NO具有抑制作用。