微泡造影剂结合超声介导一氧化氮合成酶基因转染防治移植静脉再狭窄

目的探讨微泡造影剂及超声辐照介导内皮型一氧化氮合成酶（eNOS）基因转染防治移植静脉血管桥再狭窄的可行性。方法重组真核表达载体pcDNA3．1-eNOS经微泡造影剂及超声辐照介导体外转染大鼠颈外静脉，再将静脉段间置植入颈总动脉，建立SD大鼠颈外静脉-颈总动脉移植模型。于术后4周取移植静脉标本分别进行苏木素-伊红（HE）染色，免疫组织化学染色及Westernblot法分析，观察eNOS基因在静脉桥中的功能表达和静脉桥新生内膜的增生。结果Westernblot法分析表明微泡造影剂及超声辐照介导eNOS基因转染组的移植血管桥内eNOS表达最明显；增殖细胞核抗原（PCNA）检测阳性率为（21．04±3．51）％，细胞凋亡指数为（12．11±1．23）％，新生内膜厚度（25．0±3．5）μm，内膜／中膜比值为0．43，均明显低于其他组（P〈0．05）。结论微泡造影剂及超声辐照介导eNOS基因转染可以有效抑制移植静脉桥新生内膜的增生。

人内皮型一氧化氮合成酶基因转染抑制人血管平滑肌细胞增殖及其机制

目的探讨人内皮型一氧化氮合成酶基因（heNOS）转染抑制人血管平滑肌细胞（HVSMCs）增殖的机制。方法以AdCMV—heNOS病毒感染复数分别为50、150、250、300、450MOI，转染HVSMCs，放射免疫法检测转染HVSMCs中的环一磷酸鸟苷（cGMP）的表达变化；Westernblot检测血管平滑肌细胞中p21、p27蛋白的变化，流式细胞术分析对细胞周期分布及凋亡的影响。结果（1）转染120h，A57f1值分别为1．410±0．081、1．357±0.150、1．303±0．311、0．995±0．248、0．731±0．101，其中感染复数300MOI明显稳定抑制血管平滑肌细胞的增殖。（2）转染72h，未转染组、Ad．LacZ转染组、Ad—heNOS转染组cGMP的含量分别为（7．91±0．39）、（8．36±0．34）、（12．89±2．06）μmol／L，差异有统计学意义（P〈0．01）。（3）转染48h，Westernblot检测转染组p27、p21表达明显上调，而未转染组虽也有p21、p27的表达，但两组差异有统计学意义（P〈0．05）。（4）无血清转染48h后血清刺激24h，未转染组、Ad—LacZ转染组、Ad—heNOS转染组G0／G1期分别为（64．23±1．58）％、（64．96±1．36）％、（76．03±2．27）％，差异有统计学意义（P〈0．01）。（5）转染3d，第1天，未转染组、Ad．LacZ转染组、Ad—heNOS转染组细胞凋亡率分别为（4．70±0．56）％、（5．53±0．74）％、（8．53±1．06）％，差异无统计学意义（P〉0．05）。第3天，细胞凋亡率分别为（5．40±0．62）％、（8．30±0．80）％、（9．30±0．90）％，差异无统计学意义（P〉0．05）。结论heNOS基因转染HVSMCs抑制细胞增殖，通过p21、p27上调导致细胞周期的阻滞，无诱导细胞凋亡。

内皮型一氧化氮合酶基因G894T位点多态性与妊娠期高血压疾病患者脂代谢的相关性

目的 探讨内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)基因G894T位点多态性与妊娠期高血压疾病(HDCP)患者脂代谢的相关性。方法 选择邢台市第三医院2016年1月~2020年1月收治的528例HDCP患者为研究对象,并以同期128例正常妊娠者作为对照组。采集所有研究对象清晨空腹外周静脉血,并检测血脂指标、胱抑素(CysC)及尿酸等生化指标水平。根据血脂水平分为血脂正常组和异常组,血脂异常组包括4个亚组[高三酰甘油(TG)血症组(TG≥1.70 mmol/L)、低高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)血症组(HDL-C<1.04 mmol/L)、高总胆固醇(TC)血症组(TC≥5.18 mmol/L)、混合型高脂血症组(TG≥1.70 mmol/L、TC≥5.18 mmol/L)]。另采用聚合酶链反应-限制性内切酶长度片段多态性(PCR-RFLP)方法对eNOS基因G894T位点进行基因分型分析,分为TT、GT、GG基因型。比较不同血脂水平者的基因多态性分布情况,并采用Logistic回归分析方法探讨血脂异常影响因素以及eNOS基因G894T位点多态性与血脂异常之间的关系。结果 研究组和对照组中GG、GT、TT eNOS基因G894T位点基因型的期望值和观测值均符合Hardy-Weinberg平衡定律(χ^(2)=0.651,P=0.722;χ^(2)=1.845,P=0.398),且研究组GG型基因频率和G等位基因频率高于对照组,TT型基因频率和T等位基因频率低于对照组(P<0.05);血脂异常组患者身体质量指数(BMI)、尿微量白蛋白与肌酐比值(UACR)、同型半胱氨酸(Hcy)、尿酸以及C-反应蛋白(CRP)水平相较于血脂正常组显著升高,但其降压药服用率更低(P<0.05)。血脂异常组eNOS基因(G894T)基因的GG基因频率和G等位基因高于血脂正常组,TT基因频率和T等位基因低于血脂正常组(P<0.001)。低HDL-C血症组、高TG血症组以及混合型高脂血症组患者的BMI均高于血脂正常组(P<0.05);混合型高脂血症组患者Hcy水平高于血脂正常组(P<0.05)。低HDL-C血症组和混合型高脂血症组的TT基因频率和T等位基因明显低于血脂正常组,GG基因频率和和G等位基因频率高于血脂正常组(P<0.05)。Logistic回归分析表明,基因型TT属于HDCP血脂水平异常的一种保护因素,基因型GG、高BMI、高Hcy水平属于血脂异常的独立危险因素。结论 妊娠期高血压疾病患者的eNOS基因G894T位点多态性与血脂异常之间相关性显著,其中基因型TT属于保护因素,基因型GG/GT属于独立危险因素;同时BMI、Hcy也会对血脂异常产生影响。

iNOS基因和VEGF基因在氟致甲状腺肿大鼠甲状腺组织中的表达

为探讨氟致甲状腺肿大的分子机理,选用4周龄SD大鼠饮用不同浓度的NaF水溶液,复制了氟中毒致大鼠甲状腺肿模型,光镜下观察了甲状腺的形态结构变化,并用RT-PCR技术检测了甲状腺组织中iNOS mRNA和VEGF mRNA的表达情况。结果,氟中毒大鼠甲状腺微血管明显扩张、增生,表现为明显的结节性甲状腺肿;与正常对照组大鼠相比,氟中毒组大鼠甲状腺组织中iNOS mRNA和VEGF mRNA的表达水平显著升高(P<0.05)。结果表明,长期摄入过量氟导致甲状腺发生结节性肿大的机理之一是,氟可刺激甲状腺中iNOS基因和VEGF基因的过量表达,进而造成甲状腺组织内微血管增生。

NOS1AP基因非编码区位点多态性与精神分裂症的关联研究

目的·明确一氧化氮合成酶1接头蛋白(nitric oxide synthase 1 adaptor protein,NOS1AP)基因与中国汉族人群精神分裂症患者的相关性,并对NOS1AP基因阳性多态性位点变异引起的RNA和蛋白质的二级结构改变进行预测。方法·选择2012年10月至2015年12月期间上海交通大学医学院附属精神卫生中心收治的333例早发性精神分裂症(early onset schizophrenia,EOS)患者和491例非早发性精神分裂症(non-early onset schizophrenia,non-EOS)患者,通过招募方式在上海交通大学医学院附属精神卫生中心的职工和复旦大学附属中山医院青浦分院体检中心的受检人群中筛选901名健康对照(health control,HC),用TaqMan探针检测3组人群NOS1AP基因rs12742393、rs4145621和rs1415263位点多态性。使用SHEsis在线软件进行各位点Hardy-Weinberg(H-W)平衡检验,分析等位基因和基因型频率的分布。通过SNPstats在线网站进行最优遗传模型的分析。利用RNAfold软件和DNAstar软件对阳性多态性位点变异引起的RNA和蛋白质的二级结构改变进行预测。结果·3个多态性位点基因型频率在各组中均符合H-W遗传平衡(P>0.05)。经Bonferroni校正后,EOS组与HC组相比,NOS1AP基因rs12742393位点等位基因和基因型频率分布差异均具有统计学意义(P=0.012,P=0.039)。遗传模型分析发现rs12742393位点最优基因型分布符合显性遗传模式(P=0.004)。软件预测发现,rs12742393位点A等位基因变异成C等位基因后,NOS1AP基因编码RNA和蛋白质的二级结构发生重要改变,导致空间稳定性下降。结论·NOS1AP基因非编码区rs12742393位点对EOS易感性存在重要影响。

新疆多民族族健康人群eNOS基因G894T多态性分析

目的:研究新疆哈萨克族、土尔扈特蒙古族、汉族、维吾尔族健康人群内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)基因G894T多态性分布。方法:采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)的方法,分别对新疆哈萨克族、维吾尔族、土尔扈特蒙古族、汉族健康人群作eNOS基因G894T多态性检测,分类计数进行统计学处理。结果:新疆哈萨克族、维吾尔族、土尔扈特蒙古族、汉族健康人群eNOS基因GG、GT、TT基因型频率(P>0.005)及G、T等位基因频率(P>0.005)。结论:eNOS基因G894T多态性分布种族之间没有显著性差异,种族内等位基因型频率分布男女间差异无显著性(P>0.05)。

两个基因多态性并存与糖尿病肾病的相关性研究

目的:探讨醛糖还原酶(AR)基因启动子区C-106T和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因第7外显子894G→T多态性并存与2型糖尿病肾病(DN)的相关性。方法:运用聚合酶链反应限制性片段长度多态性技术(PCR-RFLP),检测202例AR基因启动子区C-106T多态位点和eNOS基因第7外显子894G→T多态位点的等位基因和基因型。结果:①eNOS基因第7外显子894G→T多态位点的T等位基因、TG基因型频率和AR基因启动子区C-106T多态位点的T等位基因、CT基因型频率在早期DN组均明显高于非DN组和正常对照组(P<0.05)。②将上述基因多态性联合分析发现,早期DN组的TGCT基因型频率显著高于非DN组和正常对照组(P<0.005)。结论:对于2型糖尿病(DM)患者:①eNOS基因第7外显子894G→T多态位点的T等位基因及TG基因型可能是DN的易感等位基因及易感基因型。②AR基因启动子区C-106T多态位点的T等位基因及CT基因型可能是DN的易感等位基因及易感基因型。③联合分析发现,同时携带TGCT基因型的2型DM患者,DN的发病风险更高。

Nitric Oxide:from a mysterious labile factor to the molecule of the Nobel Prize Recent progress in nitric oxide research

NO is now known to be an important messenger molecule in biology.It regulates a variety of functions within cells and tissues including vasodilation, neurotransmission and immunological process. This review will focus on the nitric oxide synthase gene family and recent progress on molecular genetic analysis of NOS1, NOS2 and N0S3 genes.