伴有胃肠动力障碍的重症急性胰腺炎大鼠结肠肠肌间神经丛一氧化氮合成酶神经元的变化

目的观察伴有胃肠动力障碍的重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)大鼠结肠肠神经系统(enteric nervous system,ENS)肌间神经丛一氧化氮合成酶(nitric oxide synthase,NOS)神经元的变化,以探讨SAP胃肠动力障碍的神经机制。方法20只SD大鼠随机均分为假手术组和SAP组,逆行胰胆管穿刺逆行注射5%牛磺胆酸钠制作SAP模型。检测腹部X线、小肠推进比,胰腺病理评分。制作肌间神经丛全层标本,应用双重免疫荧光染色法观察NOS神经元的形态及占总神经元的百分比。结果与假手术组相比,SAP组大鼠肠管明显扩张,SAP组小肠推进比显著降低(P<0.01),胰腺病理评分明显增高(P<0.01),NOS神经元胞体大而染色深,结间束NOS神经纤维粗大,NOS神经元比例为(40.74±5.15)%明显高于假手术组(P<0.01)。结论结肠肌间丛NOS神经元表达增多可能是大鼠SAP胃肠动力障碍神经机制之一。

豚鼠胆囊壁内一氧化氮合成酶神经元的组织化学观察

使用NADPH—黄递酶组化染色法发现,豚鼠胆囊壁内NADPH—黄递酶阳性神经元多数位于神经节内,少数位于节间束中.神经节内一般有2～3个阳性神经元,偶尔多达10个.在胆囊壁内其总数平均值为213个.从胆囊底部到颈部,神经元数量有增加趋势.节内少数阳性神经元的长突起不伸人节间束,它们或直接投射到相邻神经节的阴性神经元,或终止于血管壁上.

豚鼠食管壁内一氧化氮合成酶神经元的组织化学观察

近年研究证明，ＮＡＤＰＨ－黄递酶组化法可选择性地显示ＮＯ合成酶神经元。我们应用此法观察了豚鼠食管，结果表明：食管各段壁内肌间神经丛神经网格的形态基本一致。神经节形态差异较大，长宽带状和细长条索状的较多见，偶见“Ｖ”字形的。阳性神经元约占肌间神经丛中神经细胞总数的６６％～７６％。一些节间束中也含有较多、较小的阴性神经元。在粘膜下层未见神经节和阳性神经元。

匹莫齐特对脂多糖诱导RAW264.7细胞诱导型一氧化氮合成酶表达的调控及其作用机制

目的运用脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞株,探究匹莫齐特(Pimozide)对一氧化氮和诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)合成的影响和作用机制。方法用含10%胎牛血清、100 U·mL^(-1)的青链霉素DMEM培养液将RAW264.7细胞稀释为每孔2×105个接种于24孔板中进行培养,分为空白对照组(仅含DMEM培养液+RAW264.7细胞)、Pimozide组(仅含RAW264.7细胞和10μmol·L^(-1)Pimozide培养液)、LPS诱导(LPS 1 mg·L^(-1))组(LPS+RAW264.7细胞)、药物处理组[含细胞和不同浓度药物,包括Pimozide低(LPS+2.5μmol·L^(-1))、中(LPS+5μmol·L^(-1))、高(LPS+10μmol·L^(-1))组]。各组培养上清液中一氧化氮水平测定采用Griess法进行检测。采用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)法和免疫蛋白印迹法分别检测iNOS mRNA表达水平和iNOS和磷酸化的信号传导及转录激活因子通路-5的蛋白表达相对水平。结果用含10%胎牛血清、100 U·mL^(-1)的青链霉素DMEM培养液培养RAW264.7细胞24 h后,各组培养上清液一氧化氮表达水平差异有统计学意义(F=25.69,P<0.05);Pimozide低(LPS+2.5μmol·L^(-1))、中(LPS+5μmol·L^(-1))、高(LPS+10μmol·L^(-1))组一氧化氮释放的抑制率差异有统计学意义(F=132.49,P<0.05)。各组iNOS mRNA和蛋白水平表达差异有统计学意义(F=118.59和23.37,P<0.05),同时发现各组磷酸化的信号传导及转录激活因子通路-5/信号传导及转录激活因子通路-5比值差异有统计学意义(F=12.07,P<0.05)。结论Pimozide可抑制RAW264.7细胞中iNOS表达和一氧化氮的生成,其作用机制可能与抑制磷酸化的信号传导及转录激活因子通路-5的生成相关。

一氧化氮合成酶阳性神经元在大鼠前脑的分布

用NADPH—d组织化学方法观察一氧化氮合成酶阳性神经元在大鼠前脑结构的分布和形态,结果显示在大脑皮质、纹状体、嗅球、杏仁核、基底前脑和下丘脑有较多一氧化氮合成酶神经元分布,这些神经元大多显示了Golgi样染色外观,它们尚不能与任何已知的神经递质类型神经元单一相对应.皮质、嗅球、纹状体和Calleja氏岛分别含有中等密度和密集的一氧化氮合成酶阳性纤维,一氧化氮合成酶阳性纤维较细,带有小的或中等大小的膨体,相互编织成疏密不等的纤维网.

海洛因慢性依赖大鼠神经元一氧化氮合成酶变化

目的 研究海洛因药物滥用致脑神经细胞一氧化氮合成酶(ncNOS)表达的变化及法医学鉴定意义。方法 采用ncNOS免疫组织化学SP法、ncNOS mRNA原位分子杂交及图像分析技术,观察大鼠海洛因慢性依赖和自然戒断大脑皮质、中脑导水管周围灰质和中脑腹侧被盖区神经细胞ncNOS的变化和ncNOSmRNA的表达。结果 实验组神经细胞ncNOS含量和ncNOS mRNA表达比对照组明显增加,阳性细胞数明显增多;自然戒断组较慢性依赖组改变更加明显(P<0.05)。结论 ncNOS在海洛因慢性依赖和戒断中起重要作用,脑神经细胞ncNOS免疫组织化学变化可作为海洛因药物滥用法医学鉴定的形态学依据。

一氧化氮合成酶阳性神经元在大鼠脑干的分布及其衰老变化

目的:研究一氧化氮合成酶阳性神经元在大鼠脑干的分布和衰老变化.材料和方法:实验用青年(2～3月),中年(15～18月)和老年(26～30月)三组SD大鼠,采用NADPH黄递酶组织化学技术及计算机图像分析.结果:一氧化氮合成酶阳性神经元主要分布于中脑和脑桥上部,延髓分布极少.上丘浅灰质层、中脑导水管周围灰质的背外侧部、中缝背核、被盖背外侧核和桥脚被盖核内的阳性细胞最密集.比较了以上五个核团内阳性神经元的数量和平均横截面积的年龄性变化,发现中年组青年组相比阳性神经元的数量和平均横截面积没有显著性变化(P>0.05).老年组同青年组相比较,各核团阳性神经元的数量有不同程度的减少(P<0.05),减少率分别为:58.5%、36.8%26.5%、25.4%和22.2%,并且阳性神经元平均横截面积也显著性减少(P<0.05).结论:结果提示一氧化氮可能与脑干功能的调节有关,并且在衰老过程中一氧化氮合成酶阳性神经元数量和形态的变化可能影响一氧化氮在脑干的调节作用.

大鼠脑干一氧化氮合成酶阳性神经元的分布及发育

目的和方法;实验用依赖还原型辅酶Ⅱ的黄递酶酶组织化学方法,研究了一氧化氮合成酶阳性神经元在大鼠脑干的分布及发育.结果:一氧化氮合成酶阳性神经元在各日龄大鼠的分布上没有明显差别.一氧化氮合成酶阳性神经元主要集中在上丘浅灰质层、中脑水管周围灰质背外侧部、中缝背核、被盖背外侧核、中缝大核、三叉神经脊束核等部位.结论:比较各日龄大鼠一氧化氮合成酶阳性神经元发现,随着日龄增加,上述各核团内阳性细胞数量增加且染色加深,细胞突起逐渐增多加长.提示一氧化氮同神经元的发育密切相关.

一氧化氮合成酶阳性神经元在猫下丘脑的分布

采用ＮＡＤＰＨ－ｄ组织化学方法观察一氧化氮合成酶阳性神经元在猫下丘脑的分布。结果显示：一氧化氮合成酶阳性神经元广泛分布于猫下丘脑的室旁核、视交叉上核，背内侧核，穹窿周核，下丘脑前区及下丘脑外侧区等区域。其中两处与大鼠有明显的差异：一是猫视交叉上核内一氧化氮合成酶阳性，而大鼠视交叉上核内则为阴性；二是大鼠视上核内一氧化氮合成酶呈强阳性反应，而猫视上核内一氧化氮合成酶阳性神经元仅隐约可见。

一氧化氮合成酶阳性神经元在大鼠下丘脑的分布及其衰老性变化

实验用青年（2～3个月）、中年（15～18个月）和老年（26～30个月）三组Spe－ho大鼠，采用NADPH—D酶组织化学技术及计算机图像分析，研究了一氧化氮合成酶（NOS）阳性神经元在大鼠下丘脑的分布及其衰老性变化。结果发现NOS阳性神经元分布于室旁核、视上核、下丘脑外侧区、官窿周核及乳头体核；在正中隆起外侧带发现一些小阳性神经元；第三脑室室管膜上皮层内也含有阳性神经元。我们主要比较了阳性神经元相对密集的室旁核、视上核、下丘脑外侧区内阳性神经元的数量和平均截面积随年龄的变化。同青年组相比，中年组大鼠阳性神经元的数量和平均截面积没有显著性变化；但老年组大鼠阳性神经元的数量有不同程度的减少，减少率分别为室旁核15．95％．视上核15．16％，下丘脑外侧区21．26％（P＜0．05）；阳性神经元的平均截面积在室旁核、视上校增大（P＜0．05），而在下丘脑外侧区则减小（P＜0．05）。在老隼组大鼠下丘脑内，阳性神经元变稀疏，细胞形态发生了变化，有些细胞明显皱缩，细胞突起变细且扭曲等。结果提示NO可能参与了下丘脑激素的调节，在衰老过程中NOS神经元数量和形态的变化可能影响了NO的调节作用。

大鼠脑挫伤后神经元一氧化氮合成酶表达的研究

为观察脑挫伤后NOS1的表达及其与损伤时程的关系 ,采用自制自由落体撞击法致大鼠右顶叶局灶性脑挫伤模型 ,于不同时间段处死大鼠后 ,进行NOS1的免疫组织化学及原位杂交法研究 ,结果发现NOS1及其mRNA表达水平与伤后经过时间有一定相关性 ,即随着伤后经过时间的延长 ,NOS1及其mRNA表达逐渐增加 ,并能较好地鉴别脑挫伤之死前伤和死后伤 ,可作为推断脑挫伤经过时间的参考指标之一。

KA致癎大鼠海马神经元凋亡和一氧化氮合成酶关系的研究

目的:探讨红藻氨酸(kainic acid,KA)诱导的癫癎大鼠海马神经元凋亡和一氧化氮合成酶在不同部位和致癎后不同时间的变化情况。方法:50只SD大鼠随机分为对照组、KA组,KA组再按癫癎发作后1d、1周、2周、3周和4周不同时点分为5个亚组。注射KA后,观察大鼠癫癎发作后的行为学变化,采用原位细胞凋亡检测法观察海马神经元凋亡情况;采用免疫组化的方法观察3种不同一氧化氮合成酶(iNOS、nNOS和eNOS)的表达。结果:KA注射后,大鼠出现严重的惊厥,癫癎发作后1d、1周即有大量的凋亡细胞出现在海马齿状回、CA1,CA2和CA3区,2、3周时下降,第4周出现另一个高峰,凋亡在齿状回和CA3区最明显。癫癎发作后早期即有大量的eNOS,iNOS和nNOS出现,另一方面,nNOS在齿状回表现为低表达,eNOS阳性细胞在齿状回、CA1、CA2区的表达也与凋亡的出现基本同步,而在CA3区却表现为癫癎发作后1d和1周出现少,在2周后才随时间的推移有逐渐增加,结论:凋亡参与KA致大鼠癫癎发作后神经元死亡过程,eNOS,iNOS和nNOS与癫癎发作后早期的神经原凋亡相关,iNOS与齿状回癫癎后迟发的神经原凋亡可能有关;nNOS与CA2和CA3区的癫癎后迟发的神经原凋亡可能有关;eNOS对KA致大鼠癫癎发作后CA3区神经元凋亡可能有神经保护作用。

大鼠脑片体外缺血状态纹状体中一氧化氮合成酶阳性神经元的时相变化及意义

无糖无氧人工脑脊液模拟脑缺血状态，用还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶反应观察大鼠离体脑片纹状体中一氧化氮合成酶阳性神经元的时相变化及神经损伤。结果显示：在缺血损伤严重的纹状体，一氧化氮合成酶阳性神经元缺血早期明显增多并深染，１ｈ后显著减少，提示纹状体的一氧化氮合成酶阳性神经元本身存在有限的抗损伤能力。

缺血大鼠脑片纹状体一氧化氮合成酶阳性神经元的变化

目的：观察大鼠离体脑片纹状体-氧化氨合成酶阳性神经元的变化及神经损伤。方法：利用还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷脱脱氢酶反应，用无糖无氧人工脑脊液模拟脑缺血状态。结果：在脑缺血损伤严重的纹状体-氧化氮合成酶阳性神经元数目先增后降。结论：一氧化氨在缺血所致的神经损伤中起重要作用。

神经节苷脂GM．1对脑缺血再灌注大鼠诱导型．氧化氮合成酶的影响

目的:研究单唾液酸四已糖神经节苷脂(GM-1)对脑缺血再灌注后诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)的影响并探讨其可能机制。方法:采用线栓法制作大鼠大脑中动脉闭塞模型,缺血2h再灌注22h。将雄性SD大鼠随机分成假手术组,模型对照组和GM-1处理组(15、30、60mg/kg3个给药剂量组)。通过红四氮唑(TTC)染色和图像分析计算各组脑梗死体积,采用生物化学法测量各组伤侧脑中NO含量和iNOS活性。结果:与模型对照组相比,GM-1中、高剂量处理组脑梗死体积缩小,iNOS活性和NO量下降,低剂量组变化不明显。结论:脑缺血后iNOS升高与脑损伤关系密切,而GM-1可以对抗iNOS和NO上升,并减轻脑缺血损伤。

脊髓损伤后大鼠阴茎组织中神经型一氧化氮合成酶的变化

目的:观察SD大鼠脊髓损伤(SCI)后阴茎组织中神经型一氧化氮合成酶(nNOS)的变化。方法:12只雄性SD大鼠分为SCI组与对照组。采用改良的重物坠落法(Allen法)制作大鼠T9-T10脊髓节段不完全损伤模型。伤后7天行阴茎勃起功能检测和nNOS免疫组化,观察脊髓损伤后阴茎勃起潜伏期、勃起次数以及阴茎组织中nNOS神经纤维的变化。结果:SCI组大鼠阴茎勃起潜伏期明显缩短,阴茎勃起次数明显减少(P<0.05);对照组和SCI组大鼠阴茎中nNOS阳性神经纤维数目分别为90.42±3.66、10.13±1.78;平均光密度分别为0.18±0.01、0.11±0.01;积分光密度分别为2.37±0.08、1.08±0.13。与对照组相比较,SCI组大鼠阴茎内nNOS阳性纤维的数量及光密度明显降低,差异具有显著性意义(P<0.05)。结论:SD大鼠脊髓损伤后阴茎内nNOS表达减弱,导致勃起功能障碍。

神经营养素3对大鼠急性脊髓损伤后血中一氧化氮合成酶的影响

[目的]探讨NT3(神经营养素3)对脊髓损伤保护作用的机制。[方法]105只SD大鼠随机分为3组:对照组(生理盐水组),实验组(NT3组)和假手术组,每组35只,各分为7个时相点,每个时相点5只大鼠。采用Allen’s法以30gcm力致伤大鼠T8脊髓,经蛛网膜下腔导管分别于术后0、4、8、12、24h、3、7d各注入NT3溶液200ng与生理盐水组和假手术组对照,于术后4、8、12、24h、3、7、14d自右心室取血用比色法测定血清中的一氧化氮合成酶活性。[结果]大鼠脊髓损伤后一氧化氮合成酶(NOS)升高,术后12h达高峰,实验组NOS水平及升幅明显低于对照组。[结论]NT3能有效抑制NOS在脊髓损伤后的活性,从而减少了NO的生成,这可能是促进大鼠脊髓损伤后运动功能恢复的作用机制之一。

溴氰菊酯对大鼠中枢神经系统一氧化氮合成酶活性的影响

本研究在发现溴氰菊酯（ＤＭ）可使突触前膜谷氨酸释放增加的基础上，探讨了ＤＭ对大鼠中枢神经系统不同部位的一氧化氮合成酶（ＮＯＳ）活性的影响。利用不同性质阻断剂，对影响ＮＯＳ活性的可能机理进行了研究。结果发现，ＤＭ可引起大脑皮层、海马及小脑部位的ＮＯＳ活性显著增加。Ｌ－硝基精氨酸是ＮＯＳ的竞争性抑制剂，它可抑制由ＤＭ所致ＮＯＳ活性的升高。尼莫地平是一种电压依赖性钙通道阻断剂，它也可以有效的抑制ＤＭ所致ＮＯＳ活性的增加。认为ＤＭ导致神经毒性的机理可能是通过谷氨酸过量释放，诱导ＮＯＳ活性的升高，造成神经元的损伤。

半滑舌鳎脑组织中神经型一氧化氮合成酶免疫组织化学定位研究

为探明神经型一氧化氮合成酶在半滑舌鳎脑组织中的分布情况,利用免疫组织化学SP法以及NADPH-d组织化学染色法对脑组织中神经型一氧化氮合成酶进行定位研究。免疫组织化学试验结果表明,大脑中的神经型一氧化氮合成酶位于神经元胞浆内,阳性神经元多呈梭形、三角形、圆形等多种形状。反应呈阳性的神经纤维,相互交织呈网状,分布在大脑皮质浅层。小脑中反应呈阳性的神经元分布在皮质的颗粒层中,分子层内有许多呈阳性的神经纤维和浦肯野细胞。NADPH-d组织化学染色试验结果显示,大脑中有许多蓝色的神经元,小脑中神经元、神经纤维、浦肯野细胞呈蓝色。利用蛋白免疫印迹技术对脑组织中神经型一氧化氮合成酶进行分析,结果显示分子量分别为118ku和80ku的两条蛋白条带。研究表明,在半滑舌鳎脑组织中存在大量的神经型一氧化氮合成酶,由此推测,神经型一氧化氮合成酶在鱼类神经系统的信息传导和生理活动中起着重要调节作用。