丹参对重症急性胰腺炎大鼠诱导型一氧化氮合成酶mRNA的表达与器官损伤的影响

目的探讨重症急性胰腺炎(SAP)大鼠诱导型一氧化氮合成酶(i NOS)mRNA的表达与器官损伤的关系和丹参对其影响。方法Wistar大鼠随机分为3组,模型组和丹参组均以5%牛磺胆酸钠经胰管内逆行注射复制SAP模型,丹参组则在制模后立即肌肉注射丹参注射液(每天2ml/kg),每6h1次,共给药4次;对照组仅行假手术,模型组和对照组同期给予等体积生理盐水。各组大鼠在术后24h测定血淀粉酶(AMY)、一氧化氮(NO)和腹水量,用原位杂交法和图像分析检测胰、肺、肾i NOS mRNA的表达强度,并观察其病理变化。结果血浆中AMY、NO和腹水量,模型组显著高于丹参组及对照组(P<0.05或P<0.01)。i NOS mRNA在胰、肺、肾中的表达模型组、丹参组均增高,模型组显著高于丹参组(P<0.01)。胰、肺、肾病理改变丹参组较模型组减轻。结论SAP时胰、肺、肾组织的i NOS mRNA高表达导致NO过度生成并参与胰腺及胰外器官损伤。丹参早期治疗能抑制胰、肺、肾组织的i NOS mRNA的过度表达,对胰腺、肺及肾起保护作用。

保存期内红细胞内皮型一氧化氮合成酶mRNA表达的变化

本研究鉴定红细胞中有无内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)mRNA,探讨在4℃保存条件下红细胞中的eNOS mRNA随保存时间变化的规律。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和基因测序方法检测库存红细胞中有无eNOS mRNA的表达,采用实时荧光定量-聚合酶链反应(real time PCR)检测库存红细胞中eNOS mRNA的表达随时间变化的规律。结果表明:红细胞中eNOS mRNA检测结果呈阳性;保存1周的红细胞中eNOS mRNA含量为新鲜红细胞的0.868±0.119,保存2周为0.379±0.289,3周为0.108±0.134,4周为0.141±0.141,5周为0.125±0.12。结论:在红细胞中检测到eNOS mRNA;随着保存时间延长红细胞中eNOS mRNA含量逐渐下降,保存3周后eNOS mRNA表达量维持在一个低浓度水平。

黄芪多糖对肉仔鸡血清免疫细胞因子含量及小肠诱导型一氧化氮合成酶mRNA表达的影响

本试验旨在研究黄芪多糖(APS)对肉仔鸡血清免疫细胞因子含量及小肠诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)mRNA表达的影响。试验选择1日龄健康艾维茵肉仔鸡300只,随机分为5个组,每组6个重复,每个重复10只鸡。对照组饲喂基础饲粮,试验组分别在基础饲粮中添加0.1%、0.5%、1.0%和2.0%的APS。试验期42 d。结果表明:1)饲粮中添加APS可提高肉仔鸡的平均体重和平均日增重,降低料重比,其中以1.0%APS组效果最佳。2)饲粮中添加APS可提高肉仔鸡血清白细胞介素-1、白细胞介素-2和肿瘤坏死因子-α含量,42日龄血清白细胞介素-1和肿瘤坏死因子-α含量呈显著二次曲线增加(P<0.05),二者分别以1.0%和0.5%APS组最高。3)饲粮中添加APS可提高肉仔鸡血清一氧化氮含量,增加iNOS活性,促进小肠iNOS mRNA的表达,42日龄时小肠iNOS mRNA的表达呈显著二次曲线增加(P<0.05),其中以1.0%APS组效果最佳。由此可见,APS对肉仔鸡免疫功能的调节作用可能与iNOS mRNA的表达和活性以及免疫细胞因子的分泌有关。

一氧化氮合成酶mRNA在中枢和外周组织中的表达和分布

应用反转录－聚合酶链式反应（ＲｅｖｅｒｓｅＴｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ一ＰｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ，ＲＴ一ＰＣＲ）方法，亚克隆出大鼠小脑和肾脏ＮＯＳｃＤＮＡ，并以此为探针，通过Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ分析和定量ＰＣＲ方法，测定大鼠中枢和外周一些组织中ＮＯＳｍＲＮＡ的含量，证明ＮＯＳｍＲＮＡ广泛存在于中枢和外周组织中，在中枢以小脑含量为最高，在外周组织中以肾脏含量为最高；定量ＰＣＲ方法测定ＮＯＳｍＲＮＡ较Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ分析更为灵敏。

艾蒿水提物对肉仔鸡血清细胞因子含量及小肠诱导型一氧化氮合成酶mRNA表达量的影响

本试验旨在研究饲粮中添加不同水平的艾蒿水提物对肉仔鸡血清细胞因子含量及小肠诱导型一氧化氮合成酶(i NOS)mRNA表达量的影响。选取192只健康的1日龄爱拔益加(AA)肉仔鸡,随机分为4个组,每组6个重复,每个重复8只鸡。对照组饲喂基础饲粮,试验组分别饲喂在基础饲粮中添加500、1 000、2 000 mg/kg艾蒿水提物的试验饲粮。试验期42 d。结果表明:1)与对照组相比,21日龄时,2 000 mg/kg添加组的血清白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-2(IL-2)和白细胞介素-4(IL-4)的含量显著升高(P<0.05),500 mg/kg添加组的血清IL-4含量和1 000 mg/kg添加组的血清IL-2含量极显著升高(P<0.01);42日龄时,500 mg/kg添加组的血清IL-2含量显著升高(P<0.05)。2)与对照组相比,21日龄时,500 mg/kg添加组的血清一氧化氮(NO)含量和i NOS活性及十二指肠、空肠和回肠的i NOS mRNA表达量差异不显著(P>0.05),1 000 mg/kg添加组的血清NO含量和回肠i NOS mRNA表达量显著升高(P<0.05),2 000 mg/kg添加组的回肠i NOS mRNA表达量极显著升高(P<0.01);42日龄时,500、1 000和2 000 mg/kg添加组血清NO含量和i NOS活性及空肠i NOS mRNA表达量显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01)。由此可见,饲粮中添加艾蒿水提物可以促进肉仔鸡免疫细胞因子的分泌和NO的生成,且与i NOS mRNA的表达增强有关。

慢性缺氧影响肺脏内皮素和一氧化氮合成酶mRNA的表达

以逆转录多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测了慢性缺氧大鼠肺组织内内皮素－１（ＥＴ－１）ｍＲＮＡ．内皮素受体－Ａ（ＥＴＲ－Ａ）ｍＲＮＡ和一氧化氮合成酶（ＮＯＳ）ｍＲＮＡ的表达水平。结果显示：缺氧１，２．３周时，肺内ＥＴ－１ｍＲＮＡ分别较正常对照上升６３．８％，１０５．５％和４０．９％（Ｐ均＜０．０５）。ＥＴＲ－ＡｍＲＮＡ分别上升５０．６％．５７．４％和５６．３％（Ｐ均＜０．０５），而ＮＯＳｍＮＲＡＲ则分别较正常对照下降３４．２％．４９．６％和３３．５％（Ｐ均＜０．０５）。提示缺氧时肺内ＥＴ水平上升和ＮＯ减少与缺氧刺激肺内ＥＴ－１ｍＲＮＡ表达增加和ＮＯＳｍＲＮＡ表达减少有关。

丹参对大鼠缺血再灌注肾组织一氧化氮合成酶mRNA表达的影响

目的 :探讨丹参对肾缺血再灌注损伤保护效应的分子机制。 方法 :以大鼠缺血再灌注肾损伤为模型 ,采用组织细胞原位杂交及图像分析技术 ,检测cNOS(eNOS和nNOS)及iNOSmRNA在缺血再灌注肾组织中的表达 ,并测定肾组织NOS总活性及血肌酐 (Cr)。 结果 :① 3种NOS在正常肾组织中均有表达 ,其中eNOS表达最丰富 ,cNOS/iNOS比值为 2 2 9。②缺血时 ,肾组织NOS总活性显著下降 ,3种NOSmRNA在皮质、髓质及小球中的表达均下调 ,以eNOS最显著 ,cNOS/iNOS比值呈下降(2 0 1)趋势。③再灌注后 ,3种NOSmRNA的表达明显上调 ,以iNOSmRNA最明显 ,cNOS/iNOS比值降至 1 77。④肾缺血注射丹参后再灌注 ,iNOSmRNA表达明显下调 ,而nNOSmRNA则显著上调 ,cNOS/iNOS比值处于正常范围 (2 14) ,Cr含量下降至正常水平。 结论 :①皮质肾小管上皮中iNOS活性升高与再灌注后肾功能进一步受损密切相关。②缺血再灌注肾损伤中 ,丹参抑制iNOSmRNA和促进cNOSmRNA的表达是其介导肾保护效应的重要分子机制。③cNOS/iNOS比值的恒定对肾血流量和肾小球滤过率 (GFR)

大鼠缺血再灌注肾组织一氧化氮合成酶mRNA表达的研究

目的探讨大鼠缺血再灌注肾组织一氧化氮合成酶 (NOS)mRNA表达的特点 ,分析缺血再灌注肾损伤的分子机制。方法建立大鼠肾缺血再灌注模型 ,采用组织细胞原位杂交及图像分析技术对不同实验条件下各型NOS(eNOS、nNOS及iNOS)mRNA表达的定位及含量进行检测 ,并对肾组织NOS总活性及血肌酐 (Cr)值进行生化测定。结果 (1)正常情况下 ,eNOS、nNOS及iNOS在正常肾组织中均有表达 ,cNOS/iNOS比值为 2 2 9;eNOS和nNOS主要分布于肾小球及血管内皮 ;iNOS仅分布于皮质远、近曲小管上皮。 (2 )缺血时 ,肾组织NOS总活性显著下降。三种NOSmRNA在皮、髓质及小球中的表达均下调 ,以eNOS最明显 ,cNOS/iNOS比值降为 2 0 1。 (3)再灌注后 ,三种NOSmRNA的表达明显上调 ,以iNOSmRNA最明显 ,cNOS/iNOS比值降为 1 77;eNOS及nNOS上调部位仅限于肾皮、髓质血管 ,而小球及小管中则表现为下调 ,尤以nNOSmRNA在小球中的下调最明显。结论 (1)缺血再灌注后 ,皮质肾小管上皮中iNOSmRNA的高表达是导致肾缺血再灌注损伤的重要分子机制。 (2 )cNOS/iN OS比值与缺血再灌注过程中肾功能的变化密切相关 ,该比值的恒定对肾血流量和肾小球滤过率(GFR)

大鼠肺和脑组织中一氧化氮合成酶mRNA表达的研究

以Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交法观察了３种一氧化氮合成酶（ＮＯＳ）即脑ＮＯＳ（ｂＮＯＳ）、内皮ＮＯＳ（ｅＮＯＳ）和巨噬细胞ＮＯＳ（ｍａｃＮＯＳ）在大鼠肺和脑组织中ｍＲＮＡ的表达情况。结果显示：肺组织存有ｅＮＯＳ和ｍａｃＮＯＳｍＲＮＡ表达，其ｍＲＮＡ杂交带分子大小分别为４．８ｋｂ和４．５ｋｂ；脑组织只有ｂＮＯＳｍＲＮＡ表达，其杂交带分子大小为１０．５ｋｂ。提示３种ＮＯＳ基因结构各异，且其在大鼠肺和脑组织中的分布和表达亦不相同。

大鼠海人藻酸致痫时海马内一氧化氮合成酶mRNA含量的时程变化

观察海马内一氧化氮合成酶 ｍＲＮＡ（ＮＯＳ ｍＲＮＡ）在海人藻酸（ｋａｉｎｉｃ ａｃｉｄ， ＫＡ）致病时的时程变化。用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹法分别观察用药前及致痫后１，４，６，１２，２４ ｈ海马内ＮＯＳ ｍＲＮＡ的含量变化。结果：致痫后１ｈ，ＮＯＳ ｍＲＮＡ即显著增加，并在以后癫痫连续发作的２４ｈ中一直维持这种高含量。结论：ＫＡ致病可能与海马ＮＯＳ ｍＲＮＡ含量变化相关。

青霉素诱导的癫痫大鼠脑组织一氧化氮合成酶mRNA表达的初步研究

目的:了解一氧化氮合成酶(nitric oxide synthase,NOS)在癫痫发病机制中的作用;方法:用Northern斑点杂交法观察正常大鼠和青霉素(Penicillin,PEN)诱导的癫痫大鼠脑组织中一氧化氮合成酶(brain nitric oxidesynthase,bNOS)信使核糖核酸(mRNA)的表达情况;结果:正常大鼠脑组织bNOS的mRNA转录水平较高,PEN致痫大鼠mRNA转录明显降低;结论:PEN可能通过抑制脑组织bNOS基因表达而在癫痫的发病中起作用。

一氧化氮合成酶mRNA在正常大鼠肾组织中表达的研究

目的探讨正常大鼠肾组织一氧化氮合成酶mRNA(NOSmRNA)表达的特点。方法采用组织细胞原位杂交及图像分析技术 ,对正常大鼠肾组织中eNOS、nNOS及iNOSmRNA表达的定位及含量进行了检测 ,同时测定肾组织NOS总活性。结果eNOS、nNOS及iNOS在正常肾组织中均有表达 ;eNOS和nNOS主要分布于肾小球及血管内皮 ,其中eNOS表达最丰富 ,髓质明显多于皮质 ;iNOS含量较低 ,且仅分布于皮质远、近曲小管上皮。结论生理情况下 ,肾组织cNOS的表达量主要决定于eNOS的表达 ,其高表达对维持肾脏正常功能具有重要作用。

脑型和诱导型一氧化氮合成酶mRNA在大鼠体内表达的差异

本研究用逆转录/聚合酶链式反应（RT/PCR）技术检测脑型和诱导型一氧化氮合成酶（NOS）mRNA在Sprague—Dawley大鼠大脑皮质、垂体、小脑、心脏、肺脏、肝脏、脾脏、小肠、肾脏和肾上腺的表达。结果发现，脑型NOSmRNA表达于小脑、心脏和肾上腺组织；而诱导型NOSmRNA表达于中枢神经系统以外的所有受检组织。本文初步探讨了各组织NOSMRNA表达阳性的生理意义。

匹莫齐特对脂多糖诱导RAW264.7细胞诱导型一氧化氮合成酶表达的调控及其作用机制

目的运用脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞株,探究匹莫齐特(Pimozide)对一氧化氮和诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)合成的影响和作用机制。方法用含10%胎牛血清、100 U·mL^(-1)的青链霉素DMEM培养液将RAW264.7细胞稀释为每孔2×105个接种于24孔板中进行培养,分为空白对照组(仅含DMEM培养液+RAW264.7细胞)、Pimozide组(仅含RAW264.7细胞和10μmol·L^(-1)Pimozide培养液)、LPS诱导(LPS 1 mg·L^(-1))组(LPS+RAW264.7细胞)、药物处理组[含细胞和不同浓度药物,包括Pimozide低(LPS+2.5μmol·L^(-1))、中(LPS+5μmol·L^(-1))、高(LPS+10μmol·L^(-1))组]。各组培养上清液中一氧化氮水平测定采用Griess法进行检测。采用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)法和免疫蛋白印迹法分别检测iNOS mRNA表达水平和iNOS和磷酸化的信号传导及转录激活因子通路-5的蛋白表达相对水平。结果用含10%胎牛血清、100 U·mL^(-1)的青链霉素DMEM培养液培养RAW264.7细胞24 h后,各组培养上清液一氧化氮表达水平差异有统计学意义(F=25.69,P<0.05);Pimozide低(LPS+2.5μmol·L^(-1))、中(LPS+5μmol·L^(-1))、高(LPS+10μmol·L^(-1))组一氧化氮释放的抑制率差异有统计学意义(F=132.49,P<0.05)。各组iNOS mRNA和蛋白水平表达差异有统计学意义(F=118.59和23.37,P<0.05),同时发现各组磷酸化的信号传导及转录激活因子通路-5/信号传导及转录激活因子通路-5比值差异有统计学意义(F=12.07,P<0.05)。结论Pimozide可抑制RAW264.7细胞中iNOS表达和一氧化氮的生成,其作用机制可能与抑制磷酸化的信号传导及转录激活因子通路-5的生成相关。

慢性缺氧对大鼠肺动脉和右心室内皮素与一氧化氮合成酶mRNA表达的影响

为了解慢性缺氧时肺动脉和右心室内皮素与一氧化氮合成酶（ＮＯＳ）ｍＲＮＡ表达的变化，作者应用逆转录多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术检测了缺氧大鼠肺动脉和右心室内皮素１（ＥＴ－１）、内皮素受体Ａ（ＥＴＲ－Ａ）及ＮＯＳｍＲＮＡ的表达水平。结果显示（１）缺氧１周后肺动脉ＥＴ－１由正常对照的７９２８７±９０２６（单位为闪烁计数／ｍｉｎ，下同）增加到１０３５２６±１１９２３（Ｐ＜０．０５）；２周后降至８０６４０±７８４３（Ｐ＞０．０５）；３周后上升到１００１９８±１３７１２（Ｐ＜０．０５）。肺动脉ＥＴＲ－Ａ于缺氧１周和２周时变化不明显，３周后由对照的３２５６３±７２６４上升到５０６２７±８２２３（Ｐ＜０．００１）。ＮＯＳ于缺氧１、２、３周时分别为２８１３７±４５１７，２８４３３±４６６７，２９８４０±４４２８，均低于正常对照（３９９１７±７６９２）。（２）缺氧２周后，右心室ＥＴ－１ｍＲＮＡ变化不明显，而ＥＴＲ－Ａ较对照（２８５３３±３３７９）明显增加（４０２４５±６５４０）（Ｐ＜０．０５）；缺氧３周后ＥＴ－１及ＥＴＲ－Ａ均明显升高。ＮＯＳ在缺氧２周和３周后均无明显变化。提示缺氧可刺激／或抑制肺动脉及右心室内ＥＴ－１及Ｎ?

一氧化氮合成酶mRNA在中枢和外周组织中的表达和分布

应用反转录一聚合酶链式反应 (reversetranscription poly merasechainreaction ,RT PCR)方法 ,亚克隆出大鼠小脑和肾脏NOScDNA ,并以此为探针 ,通过Northernblotting分析和定量PCR方法 ,测定了大鼠中枢和外周一些组织中NOSmRNA的含量 ,证明NOSmRNA广泛存在于中枢和外周组织中 ,在中枢以小脑含量为最高 ,在外周组织中以肾脏含量为最高 ;

慢性阻塞性肺疾病患者肺内一氧化氮合成酶及其mRNA的变化

以酶组织化学、分子杂交及放免法观察了慢性阻塞性肺疾病（ＣＯＰＤ）患者和对照者肺组织中一氧化氮合成酶（ＮＯＳ）的分布、ｍＲＮＡ表达及活性。结果表明：ＮＯＳ广泛分布于对照组支气管、肺泡管和部分肺泡囊上皮细胞及肺血管内皮；ＣＯＰＤ组支气管上皮细胞及肺小动脉内皮ＮＯＳ活性较对照组低，但在肺间质和肺血管周围出现ＮＯＳ阳性细胞增多；斑点和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交显示ＣＯＰＤ组肺组织ＮＯS基因ｍＲＮＡ水平较对照组明显低；ＣＯＰＤ组肺组织和肺小动脉环磷酸鸟苷含量均较对照组明显降低（Ｐ＜０．０１）。提示一氧化氮在肺脏中发挥重要生理作用及在ＣＯＰＤ发病中可能具有重要意义。

一氧化氮合成酶mRNA转录强度对妊高征的影响

采用窄线杂交的方法测定妊高征患者及正常晚孕妇女子宫及胎盘组织中ｉＮＯＳ－ｍＲＮＡ的转录强度；并用Ｇｒｅｉｓｓ方法测定子宫及胎盘中ＮＯ－２／ＮＯ－３、ｃＧＭＰ含量。结果：妊高征患者子宫及胎盘组织中ｉＮＯＳ－ｍＲＮＡ的转录强度明显降低（Ｐ＜０．０５）；ＮＯ－２／ＮＯ－３及ｃＧＭＰ含量亦显著下降（Ｐ＜０．０１）；两种组织中ＮＯ－２／ＮＯ－３含量与ｃＧＭＰ含量呈正相关（Ｐ＜０．００１）。结论：内源性舒血管因子ＮＯ合成的减少，可能是妊高征发病过程中的一个重要环节；妊高征时组织中ｉＮＯＳ－ｍＲＮＡ转录水平下调，ｉＮＯＳ生成减少，是ＮＯ合成减少的重要原因之一。

一氧化氮合成酶（NOS）基因表达的半定量检测及其运用

本工作参照Ｍａｒｔｉｎ（１９９３）定量ＲＴ－ＰＣＲ方法，建立了一种灵敏、简捷、特异的定量ＮＯＳｍＲＮＡ测定方法；证明了ＮＯＳｍＲＮＡ不仅存在于脑组织，亦广泛分布于心、肾、肺和肝组织中，其中以脑组织含量最高，肾、心次之。除内皮细胞以外，平滑肌细胞中亦有ＮＯＳ基因的表达；此外，本工作还观察到，自发性高血压大鼠的脑、肾、肝和平滑肌细胞中ＮＯＳｍＲＮＡ水平下降，提示ＮＯＳ基因表达受抑，可能与高血压的病因密切相关。