内皮型一氧化氮合酶在运动预适应改善心肌缺血-再灌注损伤中的作用

背景:运动是防治各种心血管疾病并保护心脏免受缺血-再灌注损伤的有效策略,其作用机制有待深入研究。目的:观察有氧运动预适应对心肌缺血-再灌注损伤的影响,并探讨内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)激活(包括偶联和磷酸化)在其间的作用。方法:取80只成年Wistar大鼠,采用随机数字表法分为安静组(n=40)和运动组(n=40),运动组进行8周有氧运动,安静组在鼠笼内安静饲养。8周后进行3项实验:①实验1:末次训练后,检测大鼠心功能、心脏NO代谢物含量及心脏eNOS、磷酸化eNOS-S1177、eNOS二聚体、eNOS单体的蛋白表达量;②实验2:将大鼠分为安静对照组、运动对照组、安静+eNOS抑制剂组、运动+eNOS抑制剂组,均进行体外心肌缺血-再灌注损伤实验,安静+eNOS抑制剂组、运动+eNOS抑制剂组再灌注前10 min持续灌注eNOS抑制剂,再灌注3 h后检测心功能与心肌梗死面积;③实验3:将大鼠分为安静对照组、运动对照组、安静+eNOS偶联剂组和运动+eNOS偶联剂组,均进行体外心肌缺血-再灌注损伤实验,安静+eNOS偶联剂组和运动+eNOS偶联剂组再灌注前10 min持续灌注eNOS偶联剂,再灌注3 h后检测心肌梗死面积、心脏NO代谢物含量及心脏eNOS、磷酸化eNOS-S1177、eNOS二聚体、eNOS单体和3-硝基酪氨酸的蛋白表达量(其中,磷酸化eNOS-S1177/eNOS比值反映eNOS磷酸化/去磷酸化水平,eNOS二聚体/单体比值反映eNOS偶联/解偶联水平)。结果与结论:①实验1:与安静组比较,运动组大鼠心输出量、左心室射血分数升高(P<0.05),亚硝酸盐和S-亚硝基硫醇含量升高(P<0.05),磷酸化eNOS-S1177、eNOS蛋白表达和磷酸化eNOS-S1177/eNOS比值上调(P<0.05),eNOS二聚体蛋白表达和eNOS二聚体/单体比值升高(P<0.05);②实验2:与安静对照组比较,运动对照组左心室发展压升高(P<0.05),心肌梗死面积下降(P<0.05);与运动对照组比较,运动+eNOS抑制剂组左心室发展压降低(P<0.05),心肌梗死面积增加(P<0.05);③实验3:与安静对照组比较,运动对照组左心室发展压升高(P<0.05),心肌梗死面积下降(P<0.05),磷酸化eNOS-S1177/eNOS比值下降(P<0.05),eNOS二聚体/单体比值下降(P<0.05),S-亚硝基硫醇含量增加(P<0.05),3-硝基酪氨酸蛋白表达量下调(P<0.05);与运动对照组比较,运动+eNOS偶联剂组左心室发展压降低(P<0.05),心肌梗死面积增加(P<0.05),磷酸化eNOS-S1177/eNOS比值升高(P<0.05),eNOS二聚体/单体比值升高(P<0.05),3-硝基酪氨酸蛋白表达升高(P<0.05);④结果表明:有氧运动预适应可诱导心脏保护效应,其机制与心脏缺血-再灌注期间eNOS解偶联以及去磷酸化进而抑制NO过度产生并降低硝基-氧化应激有关。

川崎病急性期氧化磷脂和内皮一氧化氮合酶的变化及意义

目的探讨川崎病(Kawasaki disease,KD)急性期患儿的血清氧化磷脂(oxidized phospholipids,OxPLs)和内皮一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)水平的变化,分析血清OxPLs和eNOS水平与冠状动脉病变(coronary artery lesion,CAL)的相关性,并探讨其临床意义。方法前瞻性选择95例急性期KD患儿作为KD组,根据是否合并CAL分为CAL亚组和非冠状动脉病变(non-coronary artery lesion,NCAL)亚组;另外选取同期30例仅下呼吸道感染发热患儿作为发热组,30例健康体检儿童作为健康对照组。比较各组一般资料及血清OxPLs、eNOS等实验室指标的差异,分析血清OxPLs和eNOS的相关性。结果KD组OxPLs水平高于发热组及健康对照组(P<0.05),eNOS水平低于发热组及健康对照组(P<0.05)。KD患儿治疗后较治疗前血清OxPLs下降,血清eNOS上升(P<0.05)。CAL亚组血清OxPLs高于NCAL亚组(P<0.05),血清eNOS水平低于NCAL亚组(P<0.05)。KD组患儿OxPLs与eNOS水平呈负相关(rs=-0.353,P<0.05)。结论KD急性期血清OxPLs、eNOS参与了CAL发展,可成为预测KD患儿发生CAL的生物标志物。

槲芪方加减对肝癌化疗栓塞术后大鼠一氧化氮合酶、血管内皮生长因子、乏氧及免疫功能的影响

目的:研究槲芪方加减对肝癌化疗栓塞术后大鼠一氧化氮合酶(iNOS)、血管内皮生长因子(VEGF)、乏氧及免疫功能的影响。方法:50只大鼠中随机抽取12只作为健康组进行对照,37只大鼠建立肝癌模型。建模过程中意外死亡1只大鼠,剩余36只大鼠建模成功,随机分为模型组、肝动脉化疗栓塞术组以及联合组,每组12只。肝动脉化疗栓塞术组给予肝动脉化疗栓塞术(TACE)治疗;联合组在肝动脉化疗栓塞术组基础上给予模型大鼠27 ml/kg槲芪方灌胃,2次/d,共24周。运用全自动生化分析仪检测各组大鼠肝功能指标水平,流式细胞仪检测各组大鼠免疫功能指标水平,苏木精-伊红(HE)染色观察各组大鼠肝组织病理变化,原位末端标记法(TUNEL)检测各组大鼠肝癌细胞凋亡,免疫印迹检测各组大鼠VEGF、iNOS、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)蛋白表达。结果:与健康组比较,模型组丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)水平均升高(P<0.05),与模型组比较,肝动脉化疗栓塞术组ALT、AST、ALP水平均降低(P<0.05),肝动脉化疗栓塞术组ALT、AST、ALP水平均高于联合组(P<0.05)。与健康组比较,模型组CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)降低,CD8^(+)升高(P<0.05),模型组与联合组比较差异无统计学意义(P>0.05),与模型组及联合组比较,肝动脉化疗栓塞术组CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)降低,CD8^(+)升高(P<0.05)。与健康组比较,模型组细胞凋亡率升高(P<0.05),与模型组比较,肝动脉化疗栓塞术组细胞凋亡率降低(P<0.05),肝动脉化疗栓塞术组细胞凋亡率低于联合组(P<0.05)。与健康组比较,模型组VEGF、iNOS、HIF-1α表达均升高(P<0.05),与模型组比较,肝动脉化疗栓塞术组VEGF、iNOS、HIF-1α表达均升高(P<0.05),与肝动脉化疗栓塞术组比较,联合组VEGF、iNOS、HIF-1α表达均降低(P<0.05)。结论:槲芪方加减可提高肝癌TACE术后大鼠的免疫功能,通过抑制肝癌大鼠乏氧微环境中HIF-1α、iNOS及VEGF水平,改善乏氧微环境,促进肿瘤细胞凋亡。

神经元型一氧化氮合酶在脑功能性疾病中的研究进展

神经元型一氧化氮合酶(nNOS)是神经系统中一种新近被认识的关键调控酶,与多种脑功能性疾病密切相关,其自身活性的平衡在脑功能性疾病的发生发展过程中起到了重要作用。因此,外源性nNOS的干预治疗可以在一定程度上改善某些脑功能性疾病。未来的研究将基于新的化合物,深入研究nNOS选择性抑制剂,以期改善脑功能性疾病的治疗效果。本文重点综述了nNOS在神经系统中的作用及最新进展。

活脑康对急性脑梗死大鼠血浆一氧化氮合酶(NOS)和一氧化氮(NO)的影响

目的 :观察活脑康对急性脑梗死大鼠血浆一氧化氮合酶 (NOS)活力和一氧化氮 (NO)含量的影响 ,探讨其治疗作用机制。方法 :应用线栓法制备大鼠急性脑梗死模型 ,给予中药活脑康灌胃 10d后 ,测定血浆中NO含量和NOS的活力。结果 :中药治疗组血浆NO含量和NOS活力明显下降 ,与模型组相比差异显著 (P <0 .0 1)。结论 :中药活脑康可降低急性脑梗死大鼠血浆NO含量和NOS的活力 ,抑制缺血性脑损伤。

蒙族高血压患者内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因多态性研究

目的旨在探讨一氧化氮合酶(eNOS)基因(G894T、T786C)多态性与中国蒙古族高血压患者的相关性。方法采用聚合酶链反应和限制性酶切的片段长度多态分析方法检测蒙族高血压患者100例和健康人50例的一氧化氮合酶(eNOS)基因(G894T、T786C)多态性。结果一氧化氮合酶基因T894G(GT、TT)、T786C(CT、CC)基因型及T、C等位基因频率在高血压组显著高于对照组(P <0．05)。同时具有eNOS894TT、786CC和894TG、786TC基因型者高血压组比对照组多,差异有显著性(P<0．05)。结论一氧化氮合酶基因T894G、T786C基因多态性与蒙族高血压相关,但尚需在更大的人群中进一步验证。

低氧训练对大鼠骨骼肌一氧化氮合酶(NOS)系统的影响

目的:探讨不同低氧训练模式对机体骨骼肌一氧化氮合酶(NOS)系统影响的机制。方法:选用6周龄SD雄性大鼠120只,经3周适应性训练和力竭实验筛选出90只,随机分成9组:常氧安静对照组、持续低氧安静组、间歇低氧安静组、低住低练组、高住高练组、高住低练组、低住高练组、高住高练后复氧训练组和高住低练后复氧训练组。采用常压低氧仓以13.6%的氧浓度(相当于海拔3500m的氧浓度)进行低氧训练,根据血乳酸-速度曲线确定大鼠常氧训练的强度为35m/min,低氧训练的强度为30m/min。低氧训练持续时间为6周,每周训练5天。在第4周末进行运动能力测试,第5周末进行力竭测试,在第6周末的最后一次运动后休息48h后处死、取材。采用实时荧光定量PCR、免疫组化、Westernblot等技术测试大鼠骨骼肌一氧化氮合酶(NOS)系统变化,以进一步探讨低氧训练对骨骼肌一氧化氮合酶(NOS)系统的适应机制。结果:高住高练组和常氧安静对照组相比,骨骼肌nNOSmRNA表达升高234%,有非常显著性差异(P<0.01);高住高练组与低住低练组相比,骨骼肌nNOSmRNA表达有非常显著性升高(P<0.01);高住高练后复氧训练1周,大鼠骨骼肌nNOS mRNA表达有非常显著性降低(P<0.01),回到常氧安静对照组水平;高住高练组、高住低练组及低住高练组骨骼肌iNOS mRNA表达分别升高92%、79%和125%,都有显著性差异(P<0.05);高住高练和高住低练后复氧训练1周,大鼠骨骼肌iNOS mRNA表达都有显著性降低(P<0.05),基本回到常氧安静对照组水平甚至还略低。与低住低练组相比,高住高练组骨骼肌eNOS mRNA表达有显著性升高(P<0.05);高住高练后复氧训练1周,大鼠骨骼肌eNOS mRNA有非常显著性下降(P<0.01)。结论:三种低氧训练方式都有助于大鼠骨骼肌毛细血管舒张,但作用机制不同,高住低练主要通过iNOS系统来使血管舒张,而低住高练却是通过HO-1系统来达到血管舒张的目的,高住高练组两种方式都有,因此,其血管舒张的效果也是三种方式中最好的,但复氧训练后此功能迅速降低。各低氧训练组eNOS mRNA水平表达变化不大。

大鼠扣带皮质一氧化氮合酶(NOS)阳性神经元的分布和脑缺血后的变化

采用NADPH－d组织化学方法，观察了NOS阳性神经元在大鼠脑扣带皮质前部24区、32区、25区和后部23区、29区的分布，并夹闭双侧颈总动脉，造成脑缺血2h后，再观察各区NOS阳性神经元的变化。结果为扣带皮质前、后部的5个区均有NOS阳性神经元。其前部的24区NOS阳性神经元较多，后部的23区和29区次之，前部的32区和25区较少。夹闭双侧颈总动脉2h后，再观察的结果为扣带皮质前、后部NOS阳性神经元数量均明显增加（P＜0．01）。

15-HETE对肺动脉内皮细胞一氧化氮合酶苏氨酸495位点(eNOS Thr495)磷酸化的影响

目的:探讨15-羟化二十烷四烯酸(15-HETE)对肺动脉内皮细胞(pu lm anory artery endothelialcells,PAECs)一氧化氮合酶(endothelia n itric oxide synthase,eNOS)活性的影响。方法:通过测定大鼠离体肺动脉环张力,比较去血管内皮、eNOS抑制剂L-NAME对15-HETE收缩肺动脉的影响;通过免疫沉淀和免疫印迹方法测定牛PAECs经2×10-6mol/L 15-HETE作用后,eNOS Thr 495磷酸化情况;用免疫印迹方法测定15-HETE对牛PAECs eNOS总蛋白表达的影响;用G re iss法检测15-HETE及15-脂氧酶(15-LO)抑制剂CDC和NDGA对牛肺动脉内皮细胞一氧化氮(NO)产量的影响。结果:(1)除去肺动脉内皮后,15-HETE收缩血管作用明显增强(P<0.01)。(2)抑制剂L-NAME 10-4mol/L可使15-HETE收缩肺动脉的作用明显增强(P<0.05)。(3)牛PAECs经2×10-6mol/L 15-HETE作用后,eNOS Thr 495位点磷酸化水平增强(P<0.01)。(4)10-6mol/L 15-HETE可抑制亚硝酸盐(NO2-/NO3-)的产生(P<0.05),抑制内源性15-HETE可明显增加NO2-/NO3-的产量,和对照组相比10-5mol/L CDC组P<0.05,10-4mol/L NDGA组P<0.01。结论:肺动脉内皮细胞eNOS/NO通路参与抑制15-HETE收缩大鼠肺动脉,15-HETE抑制肺动脉内皮细胞eNOS活性,使NO产量(NO2-/NO3-)下降。

帕金森病大鼠模型神经元型一氧化氮合酶(nNOS)阳性神经元的实验研究

目的 观察研究帕金森病 (PD)大鼠模型纹状体神经元型一氧化氮合酶 (n NOS)阳性神经元 ,探讨一氧化氮 (NO)在 PD发病机制中所起作用。方法 应用立体定向技术建立 6 - OHDA毁损的大鼠 PD模型 ,通过多巴胺受体激动剂阿扑吗啡 (APO)测试大鼠旋转行为 ,免疫组化方法观察黑质酪氨酸羟化酶 (TH )阳性神经元和纹状体 n NOS阳性神经元的变化。结果 大鼠 6 - OHDA损毁侧黑质 TH阳性神经元数目较对侧明显减少 ,双侧纹状体 n NOS阳性神经元数目无显著差异。结论 6 - OHDA对 TH阳性神经元有损伤作用 ,而 NOS阳性神经元对其具有抵抗作用。 NO可能参与了

兔脑一氧化氮合酶(NOS)阳性神经元的形态、结构和分布

应用M ADPH-d酶组织化学技术,对兔脑一氧化氮合酶(NO S)阳性神经元的形态、结构和分布进行了研究。结果显示:①NO S阳性神经元呈蓝色,细胞核不着色,突起染色很清晰;神经元胞体大多呈多角形、梭形,还有一些呈圆形或卵圆形等。②NO S阳性神经元几乎分布于家兔的各个脑区,包括大脑皮质、小脑、丘脑下部、中脑和脑桥。小脑分布最集中,而延髓分布较少。以上结果表明,NO S阳性神经元及其催化产生的一氧化氮(NO)与中枢神经系统的诸多功能有关。

诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因表达的调控

一氧化氮（ＮＯ）自由基有多方面的生物学功能。随着研究的深入，发现ＮＯ能与超氧阴离子（Ｏ－２·）反应生成激发态亚硝酸（ＯＮＯＯＨ＊），它与靶分子能产生羟自由基（·ＯＨ）和二氧化氮（ＮＯ２）样反应，在体内原先认为的一些ＮＯ效应，现在知道主要是由于ＯＮＯＯ...

铅对大鼠齿状回神经元型一氧化氮合酶(nNOS)阳性神经元的影响

目的 通过研究铅对大鼠齿状回nNOS阳性神经元的影响 ,分析铅对学习记忆影响的机制。方法 Wistar大鼠采用饮水加 2 0 0 0 μg/ml醋酸铅 (PbAc)方法染毒 3个月后 ,用Y迷宫测试大鼠神经行为的改变 ;用原子吸收分光光度法测定血液中铅的含量 ,用免疫组化法检测齿状回中nNOS的阳性神经元数目。结果 染铅组大鼠学习记忆能力比对照组明显下降 ;染铅组大鼠血液铅含量较对照组的明显增高 ,差异有显著性 (P <0 0 5 ) ;染铅组大鼠齿状回nNOS阳性神经元数目比对照组明显减少 ,差异有显著性 (P <0 0 5 )。

大鼠隔区向缰核的一氧化氮合酶(NOS)阳性神经元的投射

刺激隔区产生的镇痛作用是经缰核而实现的。为了提供依据以解释其机制，采用辣根过氧化物酶（HRP）法与还原型辅酶Ⅱ黄递酶（NADPH-d）相结合方法，对大鼠隔区向缰核的NOS阳性神经元的投射进行了研究。结果表明，缰外侧核接受来自斜角带核垂直支（VDB）腹侧部、斜角带核水平支（HDB）及VDB背侧部的NOS阳性神经元的投射；缰内侧核接受少量来自VDB腹侧部NOS阳性神经元的投射。这种隔区与缰核之间的NOS阳性神经元联系可能是其具有针刺镇痛作用的重要形态学基础之一。

四逆汤对失血性休克家兔一氧化氮(NO)和一氧化氮合酶(NOS)的影响

目的:探讨中药四逆汤对失血性休克家兔一氧化氮的影响。方法:采用动物分组对照实验,测量不同状态下动物血浆一氧化氮和一氧化氮合酶(NOS)的变化。结果:与休克前比较,休克组的家兔血浆一氧化氮水平各时段均明显提高(P<0.01),而治疗组仅在治疗后30min家兔一氧化氮及NOS水平明显提高(P<0.01),其他时段与休克前比较,未见显著差异(P<0.01),且休克后1h、4h、8h休克组一氧化氮水平显著高于治疗组(P<0.01)。经药物治疗的失血性休克家兔血浆一氧化氮水平明显降低。

一氧化氮合酶（NOS）与心血管疾病

在人体内，一氧化氮合酶（NO synthetase，NOS）催化左旋精氨酸（L—Arg）生成一氧化氮（NO）。这一生化过程，称为左旋精氨酸、一氧化氮通路（L—arginine—NO Pathway）。NOS分为两型、三种，两型即原生型（也称结构型）NOS（constitutive NOS，cNOS）和诱生型NOS（inducible NOS，iNOS），

扬子鳄颈髓一氧化氮合酶(NOS)和乙酰胆碱酯酶(AChE)阳性神经元的分布

本实验分别应用还原型尼克酰胺嘌呤二核苷酸脱氢酶（ＮＡＤＰＨ－ｄ）和乙酰胆碱酯酶（ＡＣｈＥ）方法，对扬子鳄颈髓ＮＯＳ和ＡＣｈＥ阳性神经元的分布进行了研究。结果表明：颈髓前角、中央灰质均含有ＮＯＳ和ＡＣｈＥ阳性神经元，颈髓后角有较为丰富的ＮＯＳ和ＡＣｈＥ阳性纤维和终末以及显色淡的ＮＯＳ阳性神经元。

一氧化氮合酶(NOS)在喉鳞癌中的表达及意义

目的：检测喉鳞状细胞癌组织中一氧化氮合酶（nitricoxidesynthase，NOS）的表达，并分析其表达与喉鳞癌病理特性的关系。方法：应用免疫组织化学技术对42例喉鳞癌，15例喉乳头状瘤，5例声带息肉组织中的iNOS，eNOS表达情况进行对比。结果：喉鳞癌中iNOS的阳性表达率为83．3％（35／42），喉乳头状瘤阳性表达率为40．0％（6／15），二者比较有显著性差异（x2＝9．47，P＜0．05）；eNOS在喉鳞癌组阳性表达为52．4％（22／42），喉乳头状瘤组为6．7％（1／15），二者比较有显著性差异（x2＝9．59，P＜0．05）；iNOS和eNOS的表达与喉鳞癌的临床分期无显著相关性（P＞0．05）。iNOS在低分化癌表达率为86．7％（13／15），在高分化癌为75．0％（12／16），但iNOS强阳性表达在高分化型鳞癌中为12.6％（2／16），在低分化鳞癌中为53．3％（8／15），其差异显著；eNOS在低分化和高分化癌中的表达率分别为73．3％（11／15）和31．3％（5／16），其差异均有显著性（P＜0．05）。结论：NOS在喉鳞癌有较高的表达，可能为肿瘤细胞间的异常介质信号，与喉癌的发生和分化有关，肿瘤组织内有新生血管形成，其血流由一氧化氮（nitricoxide，ON）调节，明确其作用机理，将可能为喉癌的生物治疗提供理论依据。

一氧化氮与一氧化氮合酶(NO,NOS)在胎盘和脐带中的存在及其与妊娠的关系

本文概述了近年来有关一氧化氮（ＮＯ）及其合成酶（ＮＯｓｙｎｔｈａｓｅ，ＮＯＳ）在子宫、胎盘、脐带内的存在及与妊娠生理、病理关系的研究进展。用ＮＡＤＰＨｄ酶组化法和免疫组化法、分子生物学技术等方法发现，正常子宫内膜、肌层、血管、神经束、脐动脉、脐静脉、胎盘绒毛血管及合体滋养层细胞均可见ＮＯＳ的表达。认为这些组织内ＮＯＳ产生的ＮＯ对于保持妊娠期子宫静息状态、降低母体血管及胎盘循环的阻力、维持母体正常妊娠状态及胎儿生长发育有重要作用。ＮＯ的产物异常可导致先兆子痫、胎儿宫内生长迟缓等并发症的发生。对子宫、胎盘、脐带内ＮＯ、ＮＯＳ与妊娠关系的研究，将为生育控制和妊娠疾病的研究和治疗提供新的思路和手段。

脑干及下丘脑内一氧化氮合酶(NOS)阳性神经元向海马的投射

采用还原型尼克酰胺嘌呤二核苷酸脱氢酶（NADPH－d）与辣根过氧化物酶（HRP）相结合方法，追踪脑干及下丘脑内NOS阳性神经元向海马的投射。结果表明：中缝背核有较多的NOS阳性神经元投射到背海马；中缝背核、乳头体上核及蓝斑有NOS阳性神经元投射到腹海马。这些核团向海马发出投射纤维的NOS阳性神经元占其总投射量的1／3左右。