不同温度对钉螺生殖腺一氧化氮合酶基因表达的影响

目的 研究不同温度下钉螺生殖腺一氧化氮合酶(NOS)mRNA表达的变化规律。方法 钉螺放入不同温度(0℃、15℃、25℃)的培养箱内饲养1个月。用总RNA抽提试剂盒抽提总RNA,参照哺乳动物NOS的保守序列,设计出钉螺NOS的简并引物。用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定各实验组钉螺生殖腺NOS mRNA的表达量。结果 各实验组均有特异性PCR产物条带出现,0℃组和25℃组的NOS mRNA表达量明显高于对照组(P<0.01),15℃组与对照组相比差异无显著性(P>0.05)。结论 本研究设计的引物是可行的,温度变化可影响钉螺生殖腺NOS mRNA的表达。

大鼠局灶性脑缺血后一氧化氮合酶基因表达的变化

目的:观察大鼠局灶性脑缺血后3种类型一氧化氮合酶(NOS)mRNA表达的变化。方法:大鼠随机分为正常对照组、缺血后2、6、12、24h组,以逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法分别检测缺血脑组织NOS基因表达的变化。结果:脑缺血后eNOS、nNOSmRNA表达增强,分别于2、6h达高峰;iNOSmRNA表达亦增高,但在缺血后12h达高峰。结论:大鼠脑缺血早期eNOS和nNOS占主要地位,缺血后期iNOS占主要地位。

组胺对肺动脉内皮细胞一氧化氮合酶基因表达的影响

本实验研究了组胺对原代培养的肺动脉内皮细胞一氧化氮合酶(nitric oxidCsynthase,NOS)基因表达的影响及分子机制。采用RT-PCR和免疫印迹技术分别检测mRNA和蛋白质的表达水平,用荧光素酶报告基因实验检测eNOS基因转录起始点上游长1.6-kb的启动子活性,用硝酸还原酶法检测NO的产量。结果发现,组胺增强eNOS表达,呈浓度和时间依赖性,10μmol/L组胺处理肺动脉内皮细胞24h可使eNOS mRNA和蛋白质的表达达到高峰,eNOS mRNA水平为正常对照组的160.8±12.2%(P<0.05),蛋白质水平为正常对照组的136.2±11.2%(P<0.05)。特异性CaMK Ⅱ抑制剂KN-93可抑制组胺的这一效应,表明组胺可通过激活CaMK Ⅱ增强肺动脉内皮细胞eNOS基因的表达。报告基因实验表明,10μmol/L组胺处理24h后肺动脉内皮细胞eNOS基因启动子的活性增强,为正常对照组的148.2±33.7%(P<0.05)。组胺可使肺动脉内皮细胞产生NO增加。这些结果表明组胺在转录水平增强肺动脉内皮细胞eNOS基因的表达,并使细胞产生NO增加,这可能是组胺调节肺血管张力的机制之一。CaMK Ⅱ可能是组胺增强肺动脉内皮细胞eNOS基因表达的途径之一。

脂泰胶囊对实验性动脉粥样硬化家兔内皮素及一氧化氮合酶基因表达的影响

为在基因水平上探讨痰瘀同治方药脂泰胶囊保护血管内皮、抗动脉粥样硬化形成和发展的机理，采用烟酰胺磷酸腺嘌呤二核苷酸—硫锌酰胺脱氢酶组织化学染色和原位杂交法观察了脂泰胶囊对高脂血症家兔主动脉壁一氧化氮合酶活性及其ｍＲＮＡ表达和内皮素ｍＲＮＡ表达的影响，采用阳性积分法处理数据。结果发现，脂泰胶囊组家兔胸主动脉一氧化氮合酶活性（１．３８±０．６３）明显高于高脂组（０．４０±０．２４）（Ｐ＜０．０１）；脂泰胶囊组家兔胸主动脉一氧化氮合酶ｍＲＮＡ表达（１．３８±０．４８）明显高于高脂组（１．００±０．００）（Ｐ＜０．０５）；脂泰胶囊组家兔胸主动脉内皮素ｍＲＮＡ表达（２．４３±０．５３）明显低于高脂组（３．３３±０．８２）（Ｐ＜０．０５）。此外，脂泰胶囊可以阻止斑块增厚，减少斑块内脂质坏死中心的形成。提示脂泰胶囊能明显升高高脂状态下主动脉血管壁的一氧化氮合酶活性及其ｍＲＮＡ表达，降低内皮素ｍＲＮＡ表达。脂泰胶囊抗动脉粥样硬化形成和发展的作用机制之一可能是通过调控一氧化氮合酶ｍＲＮＡ和内皮素ｍＲＮＡ的表达，从而达到维持一氧化氮合酶的正常活性及一氧化氮的正常水平来实现的。

精制血府胶囊对缺氧缺糖心肌细胞一氧化氮合酶基因表达的影响

应用血清药理学、反转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交等方法比较研究了精制血府胶囊、血府逐瘀胶囊、硫氮酮对缺氧缺糖培养心肌细胞一氧化氮合酶（ＮＯＳ）ｍＲＮＡ表达及乳酸脱氢酶（ＬＤＨ－Ｌ）、肌酸激酶（ＣＫ）、谷草转氨酶（ＧＯＴ）释放的影响。结果表明：三种药物均可显著提高缺氧缺糖心肌细胞ＮＯＳｍＲＮＡ的表达（Ｐ＜０．０１），且以精制血府胶囊最显著（Ｐ＜０．０１）。三种药物均可显著降低缺氧缺糖心肌细胞ＬＤＨ－Ｌ、ＣＫ、ＧＯＴ的释放（ｐ＜０．０１）。精制血府胶囊和硫氮 酮抑制ＬＤＨ－Ｌ的释放较血府逐瘀胶囊更为显著（Ｐ＜０．０１）。提示：三种药物均具有明显的心肌细胞保护作用，以精制血府胶囊和硫氮 酮为优，这种保护作用与其刺激心肌细胞生成一氧化氮（ＮＯ）有一定关系。

针刺对吗啡戒断大鼠脑组织一氧化氮合酶基因表达的影响

目的 :观察针刺对吗啡戒断大鼠脑组织神经元一氧化氮合酶基因 (nNOSmRNA)表达的影响 ,探讨针刺改善戒断症状的分子生物学机理。方法 :建立大鼠吗啡自然戒断模型 ,运用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)测定戒断大鼠脑组织nNOSmRNA的表达。观察戒断后 ,针刺“足三里”和一氧化氮合酶 (NOS)抑制剂L N 硝基精氨酸 (L NAME)对吗啡戒断大鼠戒断症状和脑组织nNOSmRNA表达的影响。结果 :戒断组nNOSmRNA表达增加 ,针刺组和L NAME组nNOSmRNA表达比戒断组减少。针刺组戒断积分比戒断组少 ,组间差异显著 (P <0 .0 1 )。结论 :针刺“足三里”穴具有抑制吗啡戒断大鼠脑组织nNOSmRNA表达的作用 ,提示这可能是针刺改善吗啡戒断症状的一个重要机制。

脊髓损伤后神经型一氧化氮合酶基因表达的变化

目的 :研究大鼠脊髓损伤后神经型一氧化氮合酶 (nNOS)mRNA表达的变化规律。方法 :参考Nystrom方法建立大鼠脊髓压迫伤模型 ,用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)法测定伤段脊髓组织nNOSmRNA的表达情况。结果 :正常脊髓组织内存在nNOSmRNA的表达 ,脊髓压迫伤后nNOSmRNA表达迅速逐渐增强 ,在伤后 6h达到高峰。结论 :nNOS存在于正常的脊髓组织内 ,脊髓损伤后nNOSmRNA表达迅速增强 ,提示nNOS参与了继发性脊髓损伤过程 ,并可能是一种损伤因素。

氯沙坦对糖尿病大鼠肾皮质血管紧张素Ⅱ2型受体及诱生型一氧化氮合酶基因表达的影响

目的研究氯沙坦对糖尿病大鼠肾组织血管紧张素系统与一氧化氮系统的影响及其二者之间的关系。方法SD大鼠随机分成3组:对照组、糖尿病组和氯沙坦(30 m.gkg-1.d-1×8周,ig)治疗组。应用RT-PCR技术检测大鼠肾皮质血管紧张素Ⅱ2型受体(AT2)、Ⅳ型胶原及诱生型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA表达。并同时检测大鼠肾皮质血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、NO含量及一氧化氮合酶(NOS)活性。结果糖尿病组大鼠尿蛋白排泄率、肾皮质AngII含量、Ⅳ型胶原mRNA及iNOS mRNA表达较对照组明显升高;糖尿病大鼠肾皮质NOS活性也较对照组明显增强;然而糖尿病大鼠肾皮质NO含量及AT2mRNA水平却较对照组大鼠明显降低;氯沙坦治疗能显著降低糖尿病大鼠尿蛋白排泄率及肾皮质Ⅳ型胶原mRNA表达;并能明显增加肾皮质AT2及iNOS mRNA表达及总NOS活性及NO含量。结论AT2的激活与氯沙坦的肾脏保护作用有关,并可能参与了对肾脏iNOS mRNA表达的上调。

铅对大鼠海马一氧化氮合酶基因表达的影响

目的 探讨铅对海马一氧化氮合酶 (nNOS)基因的mRNA和蛋白表达的影响。方法 1 2只大鼠饮用含 0 2 %醋酸铅 (PbAc)水 3个月后 ,作为铅染毒组进行实验。用ABC免疫组织化学和半定量逆转录 -聚合酶链式反应 (RT PCR)方法测定大鼠海马nNOS阳性神经元数量和nNOSmRNA含量的变化。结果 铅染毒组大鼠海马CA1 区、齿状回nNOS阳性神经元数目分别为 4 6 6 7± 9 0 4和 30 5 3± 7 0 8,较对照组的6 0 6 7± 1 3 4 8和 5 7 0 7± 1 1 1 4明显减少 ,差异有显著性 (P <0 0 5 ) ;铅染毒组大鼠海马CA3 区nNOS阳性神经元数目与对照组比较 ,差异无显著性 (P >0 0 5 ) ;铅染毒组大鼠海马nNOSmRNA含量 (0 0 71± 0 0 2 5 )比对照组 (0 4 5 4± 0 0 4 5 )显著减少 (P <0 0 1 )。结论 铅对大鼠海马各区nNOS阳性神经元数和mRNA表达降低 。

急性低氧时Wistar大鼠与高原鼠兔肺组织内皮型一氧化氮合酶基因表达的变化

目的探讨内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)在高原动物适应高原低氧环境中的作用。方法通过模拟4000m、6000m高原低氧,运用免疫组织化学技术,分别检测Wistar大鼠和高原鼠兔肺血管内皮和肺内气道上皮内皮型一氧化氮合酶蛋白表达水平的变化。结果无论是在肺血管内皮,还是肺内气道上皮,Wistar大鼠eNOS蛋白表达在模拟4000m与6000m高原低氧处理2h后,均显著升高,而高原鼠兔基本保持不变,但高原鼠兔气道上皮eNOS的基础表达水平显著高于Wistar大鼠。结论相比Wistar大鼠,高原鼠兔eNOS基因表达在模拟高原低氧时增加较少甚或无明显增加,eNOS是急性高原低氧耐受过程中的一个重要机制。

低氧诱导肺血管平滑肌细胞诱生型一氧化氮合酶基因表达

本研究采用原位杂交、免疫组织化学、酶组织化学染色方法从三个层次分别证明低氧诱导大鼠肺血管中膜平滑肌细胞一氧化氮合酶（ＮｉｔｒｉｃＯｘｉｄｅＳｙｎｔｈａｓｅ，ＮＯＳ）的基因和蛋白表达，并使中膜平滑肌细胞具有ＮＯＳ活性；离体培养的肺动脉平滑肌细胞实验也证明低氧使肺动脉平滑肌细胞ＮＯＳ活性增加，ＮＯ生成增多。提示诱生型ＮＯＳ基因可能是一种低氧诱导基因，低氧诱导ＮＯＳ表达可能是细胞感受低氧的一种重要机制。

实验性急性胰腺炎胰腺组织中一氧化氮合酶基因表达

目的 为探讨急性胰腺炎 (AP)发病机制与一氧化氮 (NO)的关系。方法 本文采用实验性急性胰腺炎的动物模型 ,对AP形成后不同时相的胰腺组织中一氧化氮合酶 (NOS)的基因表达进行了检测。同时检测了血清淀粉酶 ,红细胞超氧化物歧化酶 (SOD)和病理组织。结果 术后 2 4h已形成出血性、坏死型AP ,胰腺组织中iNOSmRNA在术后 4 8h达高峰 ,且增高的幅度较大。结论 在AP形成过程中 ,由于iNOS生成大量的NO ,可导致AP发生不可逆损害。因此 ,临床上可通过寻找特异性抑制i NOS试剂 。

脑动脉内皮细胞缺氧时内皮型一氧化氮合酶基因表达的变化及蛋白激酶C的作用

目的 :研究缺氧时脑动脉内皮细胞 (CAECs)内皮型一氧化氮合酶 (eNOS)基因表达的变化 ,并探讨可能的分子机制。方法 :分别采用RT -PCR和蛋白质免疫印迹技术检测原代培养的猪脑动脉内皮细胞缺氧 2、6、12、2 4、4 8h后eNOSmRNA和蛋白质表达的变化 ,并观察蛋白激酶C(PKC)抑制剂对缺氧 2 4h引起的eNOSmRNA和蛋白质变化的影响。加入转录抑制剂放线菌素D后观察缺氧 2 4h对eNOSmRNA稳定性的影响。结果 :缺氧 2h后脑动脉内皮细胞eNOSmRNA和蛋白质表达均增加 ,12h达到高峰 ,约分别为常氧组的 2 5倍和 2 0倍 ,缺氧 4 8h仍高于常氧组。缺氧对eNOSmRNA稳定性无明显影响。选择性PKC抑制剂BIMI(1μmol/L)、G 6 983(1μmol/L)均能降低缺氧2 4h所引起的eNOS基因表达的上调。结论 :脑动脉内皮细胞缺氧时可通过PKC信号途径上调eNOS基因的表达 ,并可能由此介导缺氧时脑血管的扩张反应 ,发挥其神经保护作用。

氧化修饰低密度脂蛋白对巨噬细胞一氧化氮合酶基因表达的影响

氧化修饰LDL (OX LDL)可抑制脂多糖 (LPS)诱导的巨噬细胞NO释放 ,而正常 (N LDL)和乙酰化LDL (AC LDL)则没有抑制作用 .OX LDL对NO释放的抑制作用随LDL修饰程度的升高而增强 ,且具有浓度和时间效应 .狭缝杂交结果显示OX LDL处理可使LPS诱导的巨噬细胞NOSmRNA含量下降 ,提示OX

内皮源性超极化因子对内皮一氧化氮合酶基因表达的调节

目的 以内皮细胞产生NO的关键酶———eNOS(内皮一氧化氮合酶 )为研究目标 ,探讨外源性内皮源性超极化因子EDHF(EETs)对内皮细胞合成NO的影响。方法 在原代培养 3～ 4代以内的牛主动脉内皮细胞中 ,分别加入不同浓度 (5 0～ 2 0 0nmol·L-1)的 8,9 EET、11,12 EET、14 ,15 EET ,作用 1h后用不同的方法收获细胞。用WesternBlot以及NorthernBlot方法检测EETs对eNOS基因表达的影响 ;同时通过检测L [3 H] 精氨酸转化为L [3 H] 瓜氨酸的量研究EETs对NOS活性的影响。结果 显示 8,9 EET、11,12 EET、14 ,15 EET均呈浓度依赖性地增加eNOS蛋白质的表达 ,并提高eNOSmRNA表达水平以及NOS酶活性。结论 外源性EDHF对eNOS基因表达是一种正反馈调节作用 ,从而能够促进内皮细胞NO的产生 。

脊髓损伤后两种结构型一氧化氮合酶基因表达的变化

目的 探讨大鼠脊髓损伤后两种结构型一氧化氮合酶（ cNOS） mRNA表达的变化。方法 以 Nystrom方法建立大鼠脊髓压迫伤模型，用逆转录聚合酶链反应（ RT－ PCR）法测定伤段脊髓组织神经型及诱导型 NOS（ nNOS， eNOS） mRNA的表达情况。结果 脊髓压迫伤后 nNOS mRNA及 eNOS mRNA表达均增强，伤后 6 h达到高峰， eNOS mRNA表达增强更明显。结论 脊髓损伤后结构型 NOS mRNA的表达主要在伤后早期增强，不同的结构型 NOS mRNA表达增强的程度不同。

脊髓损伤后诱导型一氧化氮合酶基因表达变化的实验研究

目的 探讨大鼠脊髓损伤后诱导型ＮＯＳ（ｉＮＯＳ）基因表达变化规律。方法参考Ｎｙｓｔｒｏｍ方法建立的大鼠脊髓压 迫伤模型，用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）法测定伤段脊髓组织ｉＮＯＳ ｍＲＮＡ的表达情况。结果正常脊髓组织内未 见ｉＮＯＳ ｍＲＮＡ表达，脊髓压迫伤后ｉＮＯＳ ｍＲＮＡ开始表达并逐渐增强，伤后２４ｈ达到高峰。结论ｉＮＯＳ未参与脊髓 组织正常生理调节，脊髓损伤后ｉＮＯＳ ｍＲＮＡ开始表达并逐渐增强，提示ｉＮＯＳ参与了继发性脊髓损伤过程。

复方丹参注射液对冠心病患者血管内皮功能及内皮素和一氧化氮合酶基因表达的影响

为探讨复方丹参注射液对冠心病患者血管内皮功能的影响及其作用机制 ,将 84例冠心病患者随机分为对照组、复方丹参注射液治疗组和维生素C治疗组 ,分别于治疗前、后用彩色多普勒检测血管内皮依赖性舒张功能 ,并采血检测内皮素 1和一氧化氮水平及内皮素 1和内皮型一氧化氮合酶mRNA表达。结果发现 ,治疗前 3组间血管内皮依赖性舒张功能、内皮素 1及一氧化氮水平及其mRNA表达比较差异无显著性 ,治疗后复方丹参注射液和维生素C两治疗组血管内皮依赖性舒张功能明显改善 (16 .7%± 5 .0 %和 13.8%± 5 .1%比 9.4 %± 4 .5 %和 9.7%± 4 .1% ,P <0 .0 5 ) ,高于对照组 (11.2 0 %± 3.90 % ,P <0 .0 5 ) ,前者又优于后者 (P <0 .0 5 ) ;复方丹参注射液治疗组内皮素 1水平及其mRNA表达下降 ,内皮型一氧化氮合酶水平及其mRNA表达升高 ,与对照组及治疗前比较差异有显著性 ;维生素C治疗组一氧化氮水平及内皮型一氧化氮合酶mRNA表达也升高 ,但低于复方丹参注射液治疗组 (P <0 .0 5 )。以上提示复方丹参注射液能改善冠心病患者血管内皮功能 ,其机制之一为调节内皮型一氧化氮合酶和内皮素

贫铀对大鼠睾丸诱导型一氧化氮合酶基因表达的影响

目的:通过研究贫铀(DU)颗粒气管灌注后大鼠睾丸诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因表达的变化,揭示DU对生殖系统的毒性作用机制。方法:W istar大鼠随机分为气管灌注生理盐水对照组和DU 1、3、5 mg组,每组5只。3个月后提取大鼠睾丸总RNA进行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)。凝胶成像分析系统扫描RT-PCR产物,用内参半定量法分析iNOSmRNA的变化。结果:对照组无iNOSmRNA表达,各染铀组扩增产物电泳条带吸光度A值明显高于对照组(P<0.05),其中3 mg组产物电泳条带A值最高,5 mg组A值明显低于1 mg组和3 mg组(P<0.05)。结论:DU颗粒气管灌注能使大鼠睾丸iNOSmRNA表达水平升高,DU剂量增高到一定程度则使iNOSmRNA表达水平降低,这种变化可能与DU化学毒性和辐射损伤的复合作用有关。

微小核糖核酸-24对内皮型一氧化氮合酶基因表达的调节及其对血管内皮细胞管腔形成的影响

目的:探讨微小核糖核酸(microRNA)-24(miR-24)对内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因表达调节的分子机制及其对血管内皮细胞增殖、迁移和管腔形成能力的影响。方法:构建miR-24及其反义序列的高表达质粒,分别转染人脐静脉内皮细胞(HUVECs),根据转染质粒将实验细胞分为:miR-24高表达组、miR-24干扰组和空白质粒对照组。用四甲基偶氮唑盐(MTT)检测HUVECs增殖能力,划痕和Transwell试验检测细胞的迁移能力,人工基底膜检测细胞的管腔形成能力;分别用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测eNOS和Sp1转录因子m RNA和蛋白表达水平。结果:(1)与空白质粒对照组比较,miR-24高表达组细胞增殖能力降低45.45%(0.36±0.04 vs 0.66±0.08,P<0.05);miR-24高表达组细胞迁移速度明显减缓,且迁移数目降低74.75%(30.25±3.78 vs 119.80±10.94,P<0.01),未能形成明显管腔样结构。(2)与空白质粒对照组比,miR-24高表达组eNOS m RNA降低46.2%(0.49±0.02vs 0.91±0.01,P<0.05),蛋白表达减少49.07%(0.55±0.05 vs 1.08±0.05,P<0.05);同时Sp1 m RNA降低44.9%(0.49±0.01 vs 0.89±0.02,P<0.05),其蛋白质表达量也相应减少54.90%(0.46±0.02 vs 1.02±0.04,P<0.05)。在miR-24抑制组中,上述指标较空白质粒对照组降低,但比miR-24高表达组显著升高,特别是小管形成数量、及管腔长度与空白质粒对照组相近。结论:miR-24显著抑制HUVECs的增殖、迁移和管腔形成的能力,并且与miR-24对eNOS的表达调控有关;miR-24明显抑制eNOS表达,Sp1的参与可能是这一调节过程的重要分子机制之一。