镁硅玉人工髋关节假体周围骨溶解与诱导型一氧化氮合酶、过氧亚硝基阴离子的关系

[目的]观察诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和过氧亚硝基阴离子(ONOO-)在假体周围各区的表达和分布变化,各区iNOS和ONOO-表达与骨溶解程度之间的关系。[方法]临床选取6例镁硅玉人工全髋关节翻修术,手术中按Delee-Charnley髋臼分区法和Gruen股骨分区法,取出松动假体周围各区的假体-骨间界膜,免疫组化法检测iNOS和ONOO-体内生成标志物硝基酪氨酸(NT)的表达,同时以术前X线片,区分假体周围非骨溶解区和骨溶解区。分析并比较iNOS和NT在各个分区中的阳性表达,与骨溶解程度的关系。[结果]髋臼侧Ⅲ区的iNOS阳性细胞率高于Ⅰ、Ⅱ区,股骨侧1、2、6、7区染色阳性细胞率高于3、4、5区(P<0·05);髋臼侧Ⅲ区的NT阳性细胞率明显高于Ⅰ、Ⅱ区,股骨侧阳性细胞率由高到低依次为1、7区,2区,6、4、3、5区(P<0·05);骨溶解区界膜组的iNOS和NT阳性细胞率均明显高于非溶骨区界膜组和OA滑膜组(P<0·01)。[结论]假体周围iNOS和ONOO-的表达具有一定规律性,并与骨溶解程度密切相关。iNOS和ONOO-的异常表达可能是磨损颗粒造成界面骨重建受阻和骨溶解的关键环节之一。

氧化铝陶瓷和高分子聚乙烯磨损颗粒刺激诱导型一氧化氮合酶和过氧亚硝基阴离子生成的实验研究

目的研究和比较氧化铝陶瓷和高分子聚乙烯磨损颗粒在动物体内诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和过氧亚硝基阴离子(ONOO-)表达的变化,探讨其在人工假体无菌性松动病理过程的意义。方法昆明小鼠72只,随机均分为3组,构建小鼠air-pouch动物模型。实验组分别注射氧化铝陶瓷颗粒悬液3 m l(A组)和高分子聚乙烯颗粒悬液3m l(B组),对照组注射磷酸盐缓冲盐水3 m。l分别于注射后第3、7、14 d后各处死8只,取出air-pouch囊壁组织。光镜下观察囊壁组织病理变化,细胞计数反映炎性细胞浸润和增殖程度,免疫组化染色法观察iNOS及ONOO-体内生成标志物硝基酪氨酸(NT)的表达与分布。结果光镜下实验组(A组和B组)可见大量巨噬细胞浸润和增殖,均存在iNOS、NT染色阳性细胞,而对照组未见明显组织细胞反应,仅见极少数染色呈阳性的细胞;与对照组相比,实验组细胞计数和iNOS、NT阳性细胞率差异均有显著性(P<0.01);各时间点细胞计数B组均高于A组(P<0.05);第14天时,B组iNOS、NT阳性细胞率明显高于A组(P<0.01);各时间点iNOS的表达与NT的表达呈正相关(r=0.623,P<0.05)。结论两种磨损颗粒均能诱导iNOS、ONOO-的表达,并且高分子聚乙烯颗粒高于氧化铝陶瓷磨损颗粒;过量的内源性NO和ONOO-可能与假体周围无菌性松动有关。

S-亚硝基-N-乙酰-DL-青霉胺对巨噬细胞诱导型一氧化氮合酶的影响

目的观察S-亚硝基-N-乙酰-DL-青霉胺(SNAP)对RAW 264.7诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响,探讨NO在动脉粥样硬化(炎症)过程中的作用。方法以RAW 264.7巨噬细胞为研究对象,分为空白对照组、SNAP组,采用不同浓度(30、100、300、400、500μmol/L)的SNAP对巨噬细胞进行干预24 h,应用RT-PCR法检测RAW 264.7巨噬细胞iNOS mRNA的表达,采用Western blotting技术检测iNOS蛋白的表达。结果与空白对照组比较,不同浓度SNAP(30、100、300、400、500μmol/L)组iNOS mRNA的表达比空白对照组均明显降低(P﹤0.05),不同浓度SNAP(30、100、300μmol/L)组iNOS蛋白表达明显低于空白对照组(P﹤0.05)。结论 NO可以抑制巨噬细胞自身iNOS mRNA基因转录,降低iNOS的合成而发挥负反馈作用。

一氧化氮和超氧阴离子在糖尿病小鼠创面愈合过程中的作用

目的了解在糖尿病小鼠模型的新鲜手术创面愈合过程中一氧化氮与超氧阴离子作用的分子机制。方法(1)建立链脲霉素(streptozotocin,STZ)诱导的Ⅰ型糖尿病小鼠创面模型;(2)检测糖尿病及正常对照组小鼠创伤前及创伤术后内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)蛋白表达水平及一氧化氮(nitric oxide,NO)水平;(3)采用选择性抑制剂,研究NAD(P)H氧化酶、黄嘌呤氧化酶和eNOS在糖尿病皮肤组织超氧阴离子(superoxide,O2-)产生机制中的地位。结果(1)链脲霉素可成功诱导小鼠形成稳定Ⅰ型糖尿病创面模型;(2)术后第5天正常对照组eNOS蛋白表达和NO水平显著升高(P<0.01),糖尿病组eNOS蛋白表达和NO水平则显著下降(P<0.05);(3)糖尿病小鼠皮肤组织O2-水平明显上升,NAD(P)H氧化酶抑制剂夹竹桃麻素(APO)和白屈菜赤碱(CHE)可明显抑制糖尿病皮肤组织O2-生成。结论糖尿病创面愈合与皮肤组织中eNOS、NO和O2-水平变化关系密切,而NAD(P)H氧化酶途径是调节糖尿病皮肤组织O2-生成的主要途径。

检测细胞中一氧化氮和过氧亚硝基阴离子的荧光探针

本文阐述了近年来用于检测一氧化氮自由基和过氧亚硝基阴离子的荧光探针,分析了各种探针的优缺点,对以后设计新型的荧光探针有指导作用。

糖尿病大鼠骨质疏松与过氧亚硝基阴离子关系的免疫组化研究

目的:探讨过氧亚硝基阴离子(ONOO-)与糖尿病(DM)骨质疏松(OP)的关系。方法:用链脲佐菌素 (STZ)诱导糖尿病大鼠模型12周后,进行骨密度(BMD)检查、观察股骨胫骨形态学改变,应用免疫组化法检测骨中 和高糖溶液培养成骨细胞(OB)中的诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、ONOO-水平的变化。结果:高糖溶液培养OB中的 iNOS和ONOO-升高;DM大鼠骨中的iNOS和ONOO-升高、BMD降低、骨形态学呈退行性改变。结论:骨中iNOS、 ONOO-增加可能是糖尿病OP的发病机制之一。

过氧亚硝基阴离子的细胞代谢及病理损伤作用

过氧亚硝基阴离子（ＯＮＯＯ－）是ＮＯ和Ｏ２－·结合或进一步反应生成的。新近研究发现ＯＮＯＯ－是ＮＯ产生病理损伤作用的主要环节。ＯＮＯＯ－可使酶氧化失活，可导致脂质过氧化，与核酸作用引起ＤＮＡ裂解，作用于线粒体使能量生成障碍。ＯＮＯＯ－是某些疾病情况下导致细胞损伤、能量耗竭和细胞死亡的重要因素。有关ＯＮＯＯ－生成和代谢及其病理损伤作用的研究，已引起广泛关注。

过氧亚硝基阴离子对气道上皮细胞的损伤作用

目的 :探讨过氧亚硝基阴离子 (ONOO-)对气道上皮细胞的损伤作用。方法 :在培养的大鼠气道上皮(RTE)细胞观察外源性给予ONOO-对RTE细胞线粒体呼吸、8-羟基脱氧鸟苷 (8-OHdG)水平、乳酸脱氢酶 (LDH)释放及凋亡细胞百分率的影响。结果 :ONOO-(0 2 5 - 1mmol/L)呈剂量依赖方式抑制RTE细胞线粒体呼吸功能、增高LDH释放率。并呈剂量依赖性引起 8-OHdG水平升高。不同浓度 (0 2 5mmol/L、0 5mmol/L及 1mmol/L)ONOO-均以时间依赖方式引起RTE细胞凋亡。结论 :ONOO-可引起培养的RTE细胞发生凋亡和坏死。低浓度的ONOO-损伤RTE细胞以凋亡为主 ;高浓度的ONOO-可能主要引起RTE细胞发生坏死。

过氧亚硝基阴离子的研究进展

过氧亚硝基阴离子 (peroxynitriteanion ,ONOO- )是一氧化氮 (NO)和氧自由基 (O- ·2 )结合生成的。它可能是NO产生病理损伤作用的重要环节。它在休克、缺血 再灌注损伤、败血症、胰岛素依赖性糖尿病、动脉硬化及感染炎症等疾病中的作用已愈来愈受到重视。加强对ONOO- 生成途径和NO、O- ·2 与ONOO- 的相互作用的基础研究 ,以及ONOO- 的病理生理作用的研究 ,特别是开展针对抗ONOO- 损伤作用和有效清除体内ONOO- 的新药研制 ,不仅有助于揭示NO的细胞毒作用的分子机制 ,还有助于为治疗某些临床危征提供启示性思路。

过氧亚硝基阴离子在肝纤维化形成中的作用

目的:探讨过氧亚硝基阴离子(ONOO-)在肝纤维化形成过程中所起的作用。方法:采用复合因素 建立肝纤维化(HF)动物模型的同时,用一氧化氮合酶抑制剂L-NNA(20mg·kg-1·d-1)给大鼠灌胃(HF+NNA),于实 验4周末测定血浆脂多糖(LPS)、NO2-／NO3-含量;采用免疫组化的方法检测肝组织硝基酪氨酸(NT)的表达;用VG 染色观察肝组织纤维化程度。结果:在HF+NNA组血浆NO水平明显低于HF组(P<0．01),HF组NT表达最强,纤 维化程度最严重。结论:ONOO-能促进肝纤维化的发展。

线粒体一氧化氮合酶研究现状

线粒体一氧化氮合酶(mtNOS)催化产生一氧化氮(NO),后者与线粒体呼吸链中的复合物Ⅳ(细胞色素C氧化酶)可逆性地结合,调节跨膜电位(ΔΨ),还可与超氧阴离子反应生成超氧亚硝酸阴离子(ONOO-),引起多种损伤。目前,已经在大鼠和小鼠的肝、胸腺、骨骼肌、心、脑等多个组织器官发现mtNOS。该文就mtNOS的发现、类型以及作用作一综述。

四氢生物蝶呤代谢紊乱导致一氧化氮合酶解耦联的分子机制

一氧化氮合酶(NOS)合成的一氧化氮(NO)是调节血管舒张功能的重要因子。四氢生物蝶呤(BH4)是NOS的重要辅助因子。BH4在体内的稳定性由从头合成、补救合成、氧化消耗及再循环所决定。当BH4/NOS的比例失调,可导致NOS催化L-精氨酸的作用解耦联,NOS催化产物由NO变为超氧阴离子(O2-)。O2-能与NO反应生成氧化性很强的氧亚硝基(ONOO-),ONOO-能迅速氧化BH4,加剧NOS的解耦联。NOS解耦联是高血压病、糖尿病、动脉粥样硬化等疾病中内皮细胞功能障碍的重要原因,因而通过纠正NOS解耦联可有效改善内皮细胞功能,有望为保护血管内皮功能提供有效途径。

氨氯地平对高胆固醇大鼠心肌缺血再灌注时一氧化氮合酶的影响

目的 :探讨高胆固醇血症大鼠心肌缺血 再灌注损伤时氨氯地平对内皮型一氧化氮合酶 (eNOS)和诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)在冠脉血管内皮表达的影响。方法 :雄性Wistar大鼠分 4组 :单纯高胆固醇血症组 ;氨氯地平组 ;氨氯地平 +N 甲基亚硝基左旋精氨酸甲酯组 ;氨氯地平 +假手术组。大鼠经高胆固醇喂养 6周后 ,开胸结扎左冠状动脉 ,缺血30min后 ,行再灌注 2 0min、2h。分别用免疫组织化学ABC法检测冠脉血管内皮eNOS和iNOS的表达水平。结果 :缺血前 ,氨氯地平可显著降低冠脉血管内皮iNOS表达 (P <0 .0 1)。缺血 30min ,高胆固醇血症组eNOS、iNOS表达明显减少 (P <0 .0 1) ,氨氯地平组eNOS表达上调 (P <0 .0 1) ,iNOS下调 ;再灌注 2 0min时 ,高胆固醇血症组冠脉血管内皮表达iNOS增多 ,氨氯地平组eNOS、iNOS表达明显下调 ;再灌注 2h时 ,氨氯地平组NO水平及eNOS、iNOS表达较高胆固醇血症组轻度降低。各时相点L NAME均可部分阻断氨氯地平对eNOS、iNOS的效应。结论 :在高胆固醇血症时、缺血期及再灌注早期 ,氨氯地平可调节eNOS、iNOS表达 ,减少心肌缺血 再灌注损伤。

过氧亚硝基-鲁米诺化学发光体系的改进

建立了一个测定过氧亚硝基阴离子 (ONOO-)化学发光的改进体系 ,测试了某些抗氧化剂清除ONOO-的作用 ,其体系的组成和启动发光的程序如下 :向pH 10 5碳酸缓冲液配的 0 0 1mol/L浓度NaN3 溶液通O330s ,取其 80 0 μl原位注入含有 10 0 μl水配样品和 10 0 μl的 0 0 0 1mol/L鲁米诺溶液中 ,启动化学发光(chemiluminescence ,CL) ,立即测定每 6秒的脉冲数 (CP6S) ,连续测定 10～ 30次 .根据实际需要 ,选其某一次的CL强度作为评判指标 ,对比抗氧化剂的活性 .该发光体系灵敏、简便、且较稳定 ,最低可检测限为 8 74μmol/L的ONOO-量 ,线性范围为 8 74～ 74 0 4μmol/L .批内变异系数 3 35 % (n =10 ) ,批间变异系数 5 5 2 % (n =10 ) .测得维生素C (Vit.C )、茶多酚 (EGCG)、原花菁素、硫脲皆有抑制CL ,即清除ONOO-的作用 .

一氧化氮间接作用机制的研究进展

NO本身并无直接的毒性作用 ,相反 ,它在体内常发挥生理或保护作用。而“NO的毒性作用” ,主要是由于大量诱生的NO与体内同时大量产生的O- 2 等活性氧类反应 ,生成ONOO- 或N2 O3 等一系列物质 ,由二者分别介导氧化损伤或亚硝基化损伤 ,因而是NO的间接作用。而NO的间接作用到底是通过ONOO- 还是N2 O3 途径来介导 ,取决于NO与O- 2 的局部相对浓度。若NO与O- 2 的局部浓度几乎相等 ,则生成ONOO- ,由ONOO- 来介导 ;而若NO的浓度高出O- 2 浓度较多 ,则主要生成N2 O3 ,由N2 O3

一氧化氮与肠屏障功能

肠屏障功能是肠道的一个重要特征,可以保护宿主不受外来抗原的干扰和入侵,它由一系列特异性和非特异性防御机制组成,包括肠管的蠕动、消化液的分泌、肠上皮细胞间的紧密连接以及肠道免疫系统。在烧伤、创伤、失血性休克、放疗、化疗、严重感染等情况下,会相继出现肠屏障破坏、细菌移位,严重者会发生多器官功能障碍。一氧化氮作为一种细胞的小分子物质,在各种生理病理中具有重要作用。近来研究发现,其毒性代谢产物过氧亚硝基阴离子(ONOO-)参与肠黏膜损伤。作者就一氧化氮与ONOO-在肠屏障功能的保护和损伤方面作一综述。

一氧化氮对培养乳鼠心肌细胞低氧复氧损伤的影响

目的 :研究 NO对乳鼠心肌细胞低氧 /复氧 (A/R)损伤的影响。方法 :建立心肌细胞 A/R损伤模型 ,随机分为6组 :A组 ,正常对照组 ;B组 ,单纯低氧 /复氧 (A/R低氧 2 h,复氧 1h) ;C组 ,低氧预处理 ,低氧 2 0 m in后复氧 2 0min,然后 A/R;D、E、F组为 NO预处理组 ,加入 S-亚硝基 -已酰青酶胺 (SNAP)分别使其终浓度为 0 .5、1、2 mm ol/L,预处理 4 0 min后 A/R。于复氧后测定各组培养液中肌酸激酶 (CK)、蛋白漏出量的变化及细胞内丙二醛 (MDA)含量和细胞存活率。结果 :单纯低氧 /复氧组和 2 m mol/L SNAP组 CK、蛋白漏出量、MDA水平显著升高 (P<0 .0 1vs正常组 ) ,细胞存活率显著降低 (P<0 .0 1vs正常组 )。0 .5和 1mmol/L SNAP预处理组和低氧预处理组上述变化明显减轻 (P<0 .0 1vs低氧复氧组 )。结论 :NO预处理对乳鼠心肌细胞 A/R损伤具有保护作用 ,并具有浓度依赖性。

褪黑素对过氧亚硝基反应体系的调控

目的 :通过检测MT对ONOO-、NO、O·-2 的影响 ,探讨MT对过氧亚硝基反应体系的调控作用。方法 :采用多种化学发光体系在体外检测。结果 :MT对ONOO-有很好的清除效应 (IC50 =15 μg/ml) ,对O·-2 有较好的清除作用 (IC50 =2 30 μg/ml) ,但对NO无清除作用 ;结论 :MT可能通过对过氧亚硝基反应体系的调控 。