铅对发育期小鼠脑一氧化氮合酶1表达的影响

目的 探讨不同浓度铅对发育期小鼠脑中一氧化氮合酶 (NOS)表达的影响及其与小鼠学习记忆功能的关系。方法 分别于P1生后 1d ,P8,P15 ,P2 2 ,P30等 5个时间段取不同浓度染铅的幼鼠脑海马组织进行蛋白免疫印迹实验。结果 对照组小鼠脑中一氧化氮合酶 1从P1至P30逐渐降低 ,低浓度染铅 ( 0 5mmol/L)组个别时段NOS1升高 ,较高浓度染铅 ( 2 4～ 7 2mmol/L)组有较多时段升高 ,但更高浓度的染铅 ( 9 6～ 14 4mmol/L)组NOS1表达逐渐降低。结论 染铅小鼠脑NOS1表达与未染铅组比较有明显变化 。

一氧化氮合酶1、神经细胞PAS域蛋白4和外中心粒物质1基因型与偏执型精神分裂症表型的关联性

目的探讨一氧化氮合酶1(NOS1)、神经细胞PAS域蛋白4(NPAS4)和外中心粒物质1(PCM1)基因单核甘酸多态性(SNP)与精神分裂症的关联性。方法选择来自豫北地区在河南省精神病医院住院的偏执型精神分裂症患者516例(病例组)和同地区健康正常人516例(对照组),采用荧光定量聚合酶链反应对NOS1、NPAS4和PCM1基因的5个功能SNP位点进行基因分型,分析SNP与疾病的关联性。进一步分析阳性和阴性症状量表(PANSS)因子分与NOS1、NPAS4和PCM1基因多态性的关联。结果 NOS1(rs3782219、rs3782221)、NPAS4(rs7947391)及PCM1(rs445422、rs370429)5个SNP位点基因型和等位基因频率在病例组和对照组中的分布差异均无统计学意义(P>0.05)。病例组与对照组NOS1基因的2个SNP位点(rs3782219、rs3782221)组成3种单体型(A-A、G-A、G-G)及PCM1基因2个SNP位点(rs445422、rs370429)组成3种单体型(A-A、G-A、G-G)频率的差异均无统计学意义(P>0.50)。NOS1基因的rs3782219基因型与兴奋/敌对因子,rs3782221基因型与抑郁/焦虑因子、兴奋/敌对因子的差异有统计学意义(P<0.05);NPAS4基因的rs7947391与阳性因子分的差异有统计学意义(P<0.05);PCM1基因的rs445422与PANSS总分、阴性因子分、认知因子分的差异有统计学意义(P<0.05),rs370429与PANSS总分、阴性因子、认知因子分的差异有统计学意义(P<0.05)。结论 NOS1基因的rs3782219和rs3782221位点、NPAS4基因的rs7947391位点以及PCM1基因的rs445422和rs370429位点可能不是精神分裂症的易感位点,但这些基因SNP位点基因型可能参与了精神分裂症表型特征。

一氧化氮合酶1转接蛋白基因多态性与冠心病病人PCI术后需要再次血运重建的关系

目的探讨一氧化氮合酶1转接蛋白(NOS1AP)基因多态性与冠心病病人经皮冠状动脉介入(PCI)术后需要再次血运重建的关系。方法选取2018年6月—2019年6月太钢(集团)有限公司总医院行PCI术,术后12~18个月来院复查的200例冠心病病人,根据复查冠状动脉造影(CAG)时是否需要再次血运重建分为血运重建组(32例)和对照组(168例),收集两组病人临床资料、生化指标,并采用Sanger测序法检测病人NOS1AP基因位点(rs12742393、rs12084280、rs10918859)基因型和等位基因频率的分布,并采用Logistic回归分析各基因位点与冠状动脉再次血运重建的关系。结果血运重建组糖尿病史、血尿酸、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、空腹血糖、糖化血红蛋白、首次支架植入数量及冠状动脉多支病变占比大于对照组,总胆红素水平低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,血尿酸、空腹血糖、LDL-C、前次支架植入数量、多支病变、NOSIAP基因位点rs10918859多态性是冠状动脉再次血运重建的危险因素(P<0.05)。结论NOS1AP基因位点rs10918859多态性与冠心病病人PCI术后再次血运重建有关,提示其或可作为再次血运重建的预测因素。

卡托普利晚期预处理对人内皮细胞缺氧复氧损伤时内皮素1和一氧化氮合酶表达的影响

观察缺氧复氧损伤时内皮细胞表达内皮素、一氧化氮合酶和一氧化氮的变化 ,并探讨卡托普利晚期预处理对内皮细胞在缺氧复氧损伤时三者的影响及机制。选用体外培养的第 3代人脐静脉内皮细胞 ,设正常对照组、单纯缺氧组、缺氧复氧组、卡托普利预处理组、卡托普利 +缓激肽B2 受体阻断剂组、卡托普利 +蛋白激酶C阻断剂组和卡托普利 +核因子κB阻断剂组 ,然后提取总RNA ,运用半定量逆转录—聚合酶链反应检测内皮素、一氧化氮合酶的mRNA表达。并利用分光光度计检测总一氧化氮合酶和一氧化氮蛋白的表达。结果发现 ,内皮素的灰度值在单纯缺氧组、缺氧复氧组均升高 ,在卡托普利组降低 ,而在三种阻断剂组均升高 ;诱导型一氧化氮合酶和内皮型一氧化氮合酶灰度值的变化规律与内皮素相反 ,其中诱导型一氧化氮合酶的变化较为轻微。与对照组相比 ,单纯缺氧组和缺氧复氧组一氧化氮合酶和一氧化氮有不同程度的降低 (P <0 .0 1) ;与单纯缺氧组和缺氧复氧组相比 ,卡托普利组一氧化氮合酶和一氧化氮均明显升高 (P <0 .0 1) ;与卡托普利组相比 ,3种阻断剂均可使一氧化氮合酶和一氧化氮的表达下降 (P <0 .0 1) ,而与缺氧复氧组相比表达升高 (P <0 .0 1)。结果提示 ,缺氧复氧可以使内皮细胞表达的内皮素增加 ,一氧化氮合酶降低 ,

大鼠颈神经根受压后一氧化氮合酶Ⅰ型在脊髓及背根神经节中的变化

目的:通过观察大鼠颈神经受压后一氧化氮合酶(NOS)阳性神经元及神经末梢在背根神经节(DRG)及脊髓中的分布变化,探讨颈神经受压后致颈肩痛发生的可能机制。方法:选用12只Wistar大鼠,随机分为2组:实验组,选用直径1mm硅胶管,纵形切开,于接近背根神经节远端套入颈6脊神经根,以丝线在硅胶管外结扎;对照组,不作任何处理。4周后取双侧颈4～7背根神经节及相应节段脊髓,用免疫组化ABC法观察一氧化氮(NO)阳性神经元的形态特点,并应用图像分析,分析NOS1阳性神经元及神经末梢在颈部背根神经节及颈髓中的分布,比较两组NOS1阳性细胞数的平均面积和及平均光密度。结果:大鼠颈神经受压4周后,实验组背根神经节中NOS1阳性神经元明显增多,脊髓背角NOS1阳性神经元及神经末梢明显增多,细胞以中、小神经元为主,实验组阳性细胞数、阳性神经末梢的平均面积和及平均光密度始终多于对照组。结论:NO参与外周及中枢水平的痛觉调制,可能与大鼠颈神经受压致颈肩痛的产生有关。

内皮型一氧化氮合酶与心肌缺血再灌注损伤的关系研究进展

内皮型一氧化氮合酶(eNOS)参与心肌缺血再灌注损伤(MIRI)调控机制和信号通路,其不仅在内皮细胞中表达,也在心肌细胞、肥大细胞、肾上皮细胞、红细胞、白细胞和血小板中表达;eNOS既可以合成NO,扩张血管,也可以合成超氧化物,加剧氧化应激。在MIRI中抑制eNOS解偶联和增加其有益磷酸化,可保护血管内皮功能、抑制氧化应激、逆转凋亡和减轻炎症反应等;eNOS可通过磷脂酰肌醇3激酶/丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶/eNOS、沉默信息调节剂1/eNOS、腺苷单磷酸活化蛋白激酶/eNOS/一氧化氮等信号通路在MIRI中发挥重要作用。

双标cajal样间质细胞及一氧化氮合酶-1细胞在人膀胱组织的分布

目的探讨cajal样间质细胞(ICCs)及一氧化氮合酶-1(NOS-1)神经元细胞在人膀胱组织中的分布规律及意义。方法人膀胱全层组织冰冻切片,CD117免疫荧光结合NOS-1免疫荧光双重标记染色。结果激光共聚焦显微镜下观察CD117表达阳性的ICCs及NOS-1阳性神经元细胞广泛分布于人膀胱组织内,发现ICCs可表达NOS-1,总体上双重染色未发现两种细胞有明显的共表达,但可见NOS-1表达阳性神经元细胞的附近存在较多ICCs。结论人膀胱中的ICCs可能是膀胱自主节律性运动的起搏细胞,NOS-1阳性神经元细胞可能以ICCs作为靶点共同参与对膀胱舒缩活动的综控。

一氧化氮合酶-1接头蛋白基因多态性和阿尔茨海默病的关联研究

目的：探讨中国汉族人群一氧化氮合酶-1接头蛋白（NOS1AP）基因多态性与阿尔茨海默病（AD）的相关性。方法：采用Taq Man探针基因分型技术对300例AD患者（病例组）及716名正常对照者（正常对照组）进行NOS1AP基因多态性（rs1415263、rs4145621、rs12742393、rs348624）分型,应用SHEsisplus和SNPstats在线软件比较两组间的等位基因频率、基因型频率、单体型频率分布。结果：rs4145621、rs12742393和rs348624等位基因频率（χ^2=2.78,P=0.095;χ^2=2.489,P=0.115;χ^2=0.002,P=0.964）两组间分布差异无统计学意义;基因型频率在5种遗传模式下（经年龄、性别校正后P均〉0.05）两组间分布差异无统计学意义;单体型CC（rs4145621-rs12742393）正常对照组的频率低于病例组（0.011 vs 0.028;χ^2=6.103,P=0.013）,经性别、年龄校正后差异无统计学意义（P=0.52）,其余CA、TC、TA单体型在两组中分布差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：在中国汉族人群中,NOS1AP基因可能不是AD的易感基因。

神经元型一氧化氮合酶基因多态性与脑梗死的相关性

目的探讨神经元型一氧化氮合酶(NOS1)基因多态性与脑梗死发病的关系。方法以rs9658281和rs2682820位点为遗传标记,采用聚合酶链式反应(PCR)和限制性片断长度多态性(RFLP)技术检测605例脑梗死患者和313例对照组人群的基因型。结果Rs9658281位点G等位基因频率较对照组明显增高(χ2=3.906,P=0.048,OR=1.362,95%CI1.003～1.850),这种差异在女性明显(χ2=6.689,P=0.010,OR=1.913,95%CI1.170～3.167)。Rs9658281位点的GG基因型频率较对照组明显增高(χ2=5.322,P=0.021,OR=1.473,95%CI1.060～2.047),这种差异在女性明显(χ2=9.299,P=0.002,OR=2.315,95%CI1.349～3.972)。经过多因素回归分析调整了传统危险因素的影响后,两组间仍有显著性差异(P=0.023)。Rs2682820位点的基因型频率和等位基因频率在脑梗死组和对照组的分布无显著差异(P>0.05)。结论神经元型一氧化氮合酶(NOS1)基因rs9658281位点多态性与脑梗死的发病可能有关。

注意缺陷多动障碍儿童外周血NOS1、NO表达水平及临床意义

目的探究注意缺陷多动障碍(ADHD)患儿外周血一氧化氮合酶1(NOS1)、一氧化氮(NO)的表达水平及临床意义。方法选取2019年4月至2021年4月宝鸡市妇幼保健院和宝鸡市中医医院收治的93例ADHD患儿为研究组,并根据临床反应情况将其分为注意力缺陷为主型(PIT)34例(PIT组)、多动-冲动为主型(HIT)19例(HIT组)和混合型(CT)40例(CT组),另选取同期健康体检儿童122例作为对照组。收集所有受试儿童的一般资料,酶联免疫吸附法(ELISA)检测外周血NOS1、NO水平;采用Pearson相关性分析ADHD患儿外周血NOS1与NO的相关性;多因素Logistic回归分析ADHD发生的影响因素。结果研究组患儿的胎儿宫内窘迫、产程延长、儿童孤独、父母经常吵架比例明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);研究组患儿的外周血NOS1、NO水平分别为(40.23±6.54)μmol/L、(44.51±13.43)U/mL,明显高于对照组的(25.34±5.82)μmol/L、(32.87±10.34)U/mL,差异均有统计学意义(P<0.05);CT组患儿的外周血NOS1、NO水平分别为(44.19±7.03)μmol/L、(49.84±12.39)U/mL,HIT组患儿分别为(36.42±6.52)μmol/L、(42.31±12.04)U/mL,明显高于PIT组的(30.23±6.12)μmol/L、(35.48±10.96)U/mL,CT组患儿的外周血NOS1、NO水平又明显高于HIT组,差异均有统计学意义(P<0.05);经Pearson相关性分析结果显示,ADHD患儿外周血NOS1水平与NO水平呈正相关(r=0.399,P<0.05);经多因素Logistic回归分析结果显示,胎儿宫内窘迫、产程延长、儿童孤独、父母经常吵架、NOS1、NO是影响ADHD发生的危险因素(P<0.05)。结论ADHD患儿外周血NOS1、NO水平上调,两者均可能在ADHD发生发展过程中发挥作用,检测外周血NOS1、NO水平有利于临床预测发生ADHD的可能性。

急性心肌梗死患者外周血NO-PGC1α线粒体生物合成通路相关基因的表达及其临床意义

目的探讨急性心肌梗死(AMI)患者外周血一氧化氮-过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(NO-PGClα)线粒体生物合成通路相关基因的表达及其临床意义。方法选取2019年5月—2021年6月常州市第二人民医院收治的AMI患者103例为AMI组,另取同期该院健康体检者69例为对照组。收集两组基本资料,采用实时荧光定量聚合酶链反应测定外周血NO-PGC1α线粒体生物合成通路的相关基因NO-PGClα、精氨酸酶2(Arg2)、一氧化氮合酶1(NOS1)mRNA的表达。分析AMI组不同病情患者NO-PGClα、Arg2、NOS1 mRNA相对表达量,分析影响AMI发生的因素,分析NO-PGClα、Arg2、NOS1 mRNA相对表达量预测AMI发生的价值。结果重度狭窄组外周血NO-PGC1α、NOS1、Arg2 mRNA相对表达量高于中、轻度狭窄组(P<0.05),中度狭窄组NO-PGC1α、NOS1、Arg2 mRNA相对表达量高于轻度狭窄组(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,NO-PGC1αmRNA[OR=3.873(95%CI:1.594,9.412)]、NOS1 mRNA[OR=4.267(95%CI:1.756,10.371)]、Arg2 mRNA[OR=4.518(95%CI:1.859,10.979)]是影响AMI发生的独立因素(P<0.05)。ROC曲线结果表明,外周血NO-PGC1α、NOS1、Arg2 mRNA及3者联合预测AMI发生的敏感性分别为70.87%、71.84%、75.73%和70.87%,特异性分别为73.91%、72.46%、71.01%和91.30%,曲线下面积分别为0.764、0.742、0.759和0.908。结论外周血NO-PGC1α线粒体生物合成通路的相关基因NO-PGClα、Arg2、NOS1mRNA与AMI发生有关,3者联合预测AMI发生效能良好,且NO-PGClα、Arg2、NOS1 mRNA表达可能与AMI患者病情有关。

慢性复合应激对大鼠学习和记忆的影响

本文观察慢性复合应激对海马长时程增强(LTP)和一氧化氮合酶1(NOS1)表达变化的影响,并探讨了其在学习与记忆中的作用。将Wistar大鼠随机分为对照组和慢性复合应激组,每组各10只。应激组动物采用4种应激原无规律、交替性地进行长达6周的慢性复合应激试验。实验过程中测定动物血清皮质酮(CORT)水平,采用Morris水迷宫和Y迷宫测试大鼠学习和记忆成绩,记录海马齿状回LTP群体峰电位(PS)幅值的变化,同时观察海马CA1及齿状回区NOS1阳性神经元数目的变化。结果显示:(1)与对照组比较,慢性复合应激组动物在应激第4周和第6周时,血清皮质酮浓度的比值显著增高(P<0.05,P<0.01);(2)高频刺激(HFS)后各时间点的PS幅值增高更为明显(P<0.01);(3)Morris水迷宫和Y迷宫实验后慢性复合应激组动物的学习和记忆成绩优于对照组(P<0.05,P<0.01);(4)慢性复合应激组和对照组大鼠海马齿状回NOS1阳性神经元个数分别为8.80±3.91和5.44±1.14,两者间有统计学差异(P<0.05)。以上结果提示,慢性复合应激对大鼠的学习和记忆有一定的影响,可能与齿状回群体峰电位幅值增强和NOS1表达增强有关。

nNOS-NOS1AP复合体在瑞芬太尼诱发大鼠痛觉过敏中的作用

目的评价神经元型一氧化氮合酶(nNOS)-一氧化氮合酶1衔接蛋白(NOS1AP)复合体在瑞芬太尼诱发大鼠痛觉过敏中的作用。方法清洁级健康成年雄性SD大鼠40只,体质量240~260 g,2~3月龄,采用随机数字表法分为4组(n=10):对照组(C组)静脉输注生理盐水0.1 ml·kg^(-1)·min^(-1)60 min;瑞芬太尼组(R组)静脉输注瑞芬太尼1.0μg·kg^(-1)·min^(-1)60 min;nNOS-NOS1AP抑制剂ZLc002组(C+Z组)和瑞芬太尼+ZLc002组(R+Z组)每天腹腔注射ZLc00210 mg/kg,连续3 d,然后分别静脉输注生理盐水0.1 ml·kg^(-1)·min^(-1)或瑞芬太尼1.0μg·kg^(-1)·min^(-1)60 min。分别于静脉输注前24 h和输注结束后6、24、48 h(T0-3)时测定机械缩足反应阈(MWT)和热缩足潜伏期(TWL)。最后一次痛阈测定结束后处死大鼠,取L4-6脊髓组织,采用RT-PCR法检测脊髓nNOS、NOS1AP、G蛋白信号传导激活蛋白1(Dexras1)的mRNA表达;生物素转化法提取亚硝基化蛋白,Western blot法测定nNOS、NOS1AP、总体和亚硝基化Dexras1的表达;免疫共沉淀法检测nNOS-NOS1AP共表达;测定脊髓NO含量。结果与C组比较,R组T1-3时MWT降低,TWL缩短,脊髓nNOS、NOS1AP及其mRNA表达上调,nNOS-NOS1AP共表达和NO生成增加,亚硝基化Dexras1表达上调(P<0.05),C+Z组上述各指标差异无统计学意义(P>0.05);与R组比较,R+Z组T1-3时MWT升高,TWL延长,脊髓nNOS-NOS1AP共表达和NO生成减少,亚硝基化Dexras1表达下调(P<0.05),nNOS、NOS1AP及其mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05);4组间脊髓Dexras1及其mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论瑞芬太尼诱发大鼠痛觉过敏的机制可能与上调脊髓nNOS和NOS1AP的表达,促进二者相互作用,介导NO生成和Dexras1亚硝基化修饰有关。

NOS1AP基因rs348624多态性与中国汉族早发性精神分裂症的关联分析

目的:探讨中国汉族人群一氧化氮合酶1接头蛋白(NOS1AP)基因rs348624多态性与早发性精神分裂症的易感性及其首发年龄的关联性。方法:选取285例早发性精神分裂症患者为研究组和826名正常对照组,采用Taq Man法,检测NOS1AP基因rs348624位点多态性,并分析研究组危险等位基因的频率与首发年龄的关联性。结果:研究组与对照组rs348624等位基因和基因型频率分布比较差异有统计学意义[χ2=149.17,自由度(df)=1,P=0.00;χ2=137.25,自由度(df)=2,P=0.00];Kaplan-Meier分析显示,rs348624等位基因T的频率与早发性精神分裂症首发年龄显著相关(Kaplan-Meier log rank检验P=0.00)。结论:在中国汉族人群中NOS1AP基因与早发性精神分裂症存在关联,其rs348624多态性可能是导致早发性精神分裂症患者发病年龄提前的重要因素。

NOS1AP基因多态性与2型糖尿病发病风险关联分析

目的探讨一氧化氮合酶1转接蛋白（NOS1AP）基因多态性与中国淮海地区汉族人群2型糖尿病发病风险的关系。方法采用聚合酶链式反应一限制性片断长度多态性（PCR—RFLP）方法对200例2型糖尿病患者（病例组）和200例健康人群（对照组）进行NOS1AP基因多态性检测。结果病例组NOS1APrs12742393位点CC基因型和C等位基因频率均高于对照组（P〈0．05），C等位基因显著增加2型糖尿病的遗传风险性（OR=1．662，95％CI=1．089～2．535，P=0．018）。结论NOS1APrs12742393位点多态性可能与中国淮海地区汉族人群2型糖尿病的发病相关，C等位基因可能是2型糖尿病的遗传风险因子。

脑梗死人群NOS1基因多态性与脂代谢的相关性

目的探讨脑梗死患者神经元型一氧化氮合酶基因(NOS1)多态性与脂代谢的相关性。方法本研究共纳入605例脑梗死患者。以位于NOS1基因的rs9658281和rs2682820位点为遗传标记,采用聚合酶链式反应-限制性片断长度多态性(PCR-RFLP)技术检测NOS1基因的基因型。应用氧化酶法测定入组患者血浆甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c)的水平。结果脑梗死患者nNOS基因rs9658581的等位基因频率与TC呈显著性相关(χ2=4.583,P=0.032)。携带G等位基因个体的总胆固醇水平(TC)明显高于携带A等位基因的个体。结论脑梗死患者TC的水平与NOS1基因rs9658581多态性可能有关。

NOS1在宫颈癌干细胞中的表达及对化疗敏感性的影响

目的探讨一氧化氮合酶1(NOS1)在宫颈癌干细胞(CCSCs)中的表达水平,并分析NOS1对CCSCs顺铂(Cisplatin,DDP)化疗敏感性的影响及作用机制。方法qRT-PCR检测NOS1在宫颈癌细胞系HeLa、Siha、Caski及人正常宫颈上皮细胞系Hucec中的表达水平。选择高表达NOS1的宫颈癌细胞培养CCSCs。Western blot检测肿瘤干细胞(CSCs)中Nanog、SOX2、OCT4干性标志蛋白及NOS1的表达。MTS检测宫颈癌细胞和CCSCs对DDP的IC50值。对照siRNA和NOS1 siRNA(si-NOS1)转染CCSCs分为NC组和si-NOS1组,MTS检测两组CCSCs对DDP的IC50值。DDP处理NC组和si-NOS1组CCSCs后流式细胞仪实验检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中ABCG蛋白和凋亡相关蛋白的表达。结果qRT-PCR结果显示NOS1在宫颈癌细胞系中的表达高于在人正常宫颈上皮细胞系Hucec中的表达水平,在HeLa细胞中表达最高(P<0.05)。OCT4、Nanog、SOX2干细胞标志物NOS1在CSCs中表达上调(P<0.05)。MTS检测发现与HeLa细胞相比,CCSCs细胞对DDP的IC50值增加(P<0.05)。MTS检测发现与NC组相比,si-NOS1组CCSCs细胞对DDP的IC50值降低(P<0.05)。DDP处理CCSCs后,与NC组相比,si-NOS1组细胞凋亡率增加,细胞中ABCG2和Bcl-2表达降低,Bax蛋白表达增加(P<0.05)。结论NOS1在CCSCs中表达增加,NOS1可能通过上调ABCG2调控凋亡相关蛋白降低CCSCs对DDP的化疗敏感性。

NOS1基因多态性与腔隙性脑梗死相关性研究

目的探讨神经元型一氧化氮合酶基因(NOS1)多态性与腔隙性脑梗死发病的关系。方法本研究共纳入385例腔隙性脑梗死患者和313例对照组人群,以位于NOS1基因的rs9658281和rs2682820位点为遗传标记,采用聚合酶链式反应-限制性片断长度多态性(PCR-RFLP)技术检测NOS1基因的多态性。结果 Cocaphase分析表明腔隙性脑梗死组rs9658281位点G等位基因频率较对照组显著增高(χ2=4.135,P=0.042,OR=1.422,95%CI 1.013～1.997),这种差异在女性患者更加明显(χ2=9.522,P=0.002,OR=2.502,95%CI 1.398～4.479)。卡方检验表明腔隙性脑梗死组rs9658281位点的GG基因型频率较对照组显著增高(χ2=5.862,P=0.015,OR=1.579,95%CI 1.091～2.286),这种差异在女性更加明显(χ2=13.641,P<0.0001,OR=3.501,95%CI 1.800～6.810)。经过多因素回归分析调整了传统危险因素的影响后,两组间的差异仍有显著性(P=0.014)。腔隙性脑梗死组和对照组的rs2682820位点的基因型、等位基因频率差异无显著性(P>0.05)。结论 NOS1基因rs9658281位点G等位基因与腔隙性脑梗死的发病可能有关。

祖卡木颗粒对低氧性肺动脉高压的药效及机制研究

目的探究祖卡木颗粒对单纯低氧及低氧+Su5416诱导的低氧性肺动脉高压(HPH)小鼠的防治作用及其可能的作用机制。方法利用多种数据库及相关文献搜集祖卡木颗粒中10种单味药的活性成分,预测药物靶点并获得HPH相关靶点,进行网络构建及富集分析。通过单纯二周低氧及四周低氧+Su5416诱导建立HPH小鼠模型,观察小鼠右心室压力等主要药效学指标,Masson染色观察肺组织病理变化,Western blotting检测肺组织中Bcl-2-相关X蛋白质(Bcl-Associated X,Bax)、B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、磷脂酰肌醇3-激酶(Phosphoinositide 3-kinase,PI3K)、p-PI3K、内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxidase synthase,eNOS)、低氧诱导因子-1α亚基(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)蛋白表达水平。结果筛选得到祖卡木颗粒共167种活性成分,与HPH有179个交集靶点,涉及PIK3CA、HIF1等靶点。验证结果显示,祖卡木颗粒可以显著降低HPH小鼠的右心室压力,减轻右心室肥厚,下调小鼠肺组织中Bcl-2、HIF-1α蛋白的表达,上调Bax、PI3K、p-PI3K、eNOS蛋白的表达。结论祖卡木颗粒可能通过调节Bax/Bcl及PI3K-eNOS/HIF-1α信号通路对HPH起到防治作用。

内皮素刺激下人RPE细胞的自分泌调节

目的检测内皮素(endothelin-1,ET-1)刺激人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial,RPE)细胞后ET-1的自分泌。方法用体外培养的RPE细胞,经10-11mol.L-1、10-9mol.L-1、10-7mol.L-1ET-1作用后,用免疫组织化学和原位杂交检测RPE细胞ET-1的表达和一氧化氮合酶1(nitric oxide synthase1,NOS1)的表达,并用LeicaQ750图像分析仪定量分析表达量;用放射免疫测定检测细胞调理液中ET-1和6-酮-前列腺素F1α(6-Keto-PGF1α)含量。结果在未经ET-1作用的RPE中ET-1、ET-1 mRNA和NOS1仅见少量细胞微弱表达,3个浓度ET-1作用24h后,图像分析在不同浓度ET-1刺激后均检测出ET-1的表达增强,并有浓度依赖性(F=9.511,P<0.01),NOS1的表达也增强(F=16.113,P<0.01),两者有直线相关性(r=0.685,P<0.05)。在调理液的检测中,ET-1和6-Keto-PGF1α的含量均随着ET-1作用浓度的增加而增加,各作用浓度两者含量均有统计学差异(前者F=23.67,P<0.01;后者F=44.431,P<0.01);并且两者有直线相关性(r=0.85,P<0.01)。结论ET-1刺激RPE细胞表达并分泌ET-1,同时伴随的NOS1表达增加和6-Keto-PGF1α分泌增加可能是针对ET-1的负向调节作用。