一氧化氮合酶3基因rs2070744位点的单核苷酸多态性与不明原因复发性流产的相关性研究

目的 探讨一氧化氮合酶3(NOS3)基因rs2070744位点的单核苷酸多态性(SNP)与不明原因复发性流产(URSA)的相关性。方法 选取2019年1月至2020年8月甘肃省妇幼保健院复发性流产门诊诊治的150例不明原因复发性流产患者作为研究对象,设为病例组。选取同期进行体检的150例健康女性设为对照组。采用SNaPshot多重SNP分型技术检测两组NOS3基因rs2070744位点的SNP分布情况。研究组间基因型分布差异,分析NOS3基因rs2070744基因多态性和RSA的相关性。结果 两组文化程度、职业及工作性质比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。在共显性遗传模型中,与T/T基因型相比,携带C/T基因型女性发生URSA的风险降低0.53倍(OR=0.53,95%CI:0.292~0.946)。等位基因模式中,与T等位基因相比,携带C等位基因的孕妇罹患复发性流产的风险降低0.46倍(OR=0.46,95%CI:0.269~0.790)。在显性遗传模型中,与T/T基因型相比,携带C/T-C/C基因型女性发生URSA的风险降低0.47倍(OR=0.47,95%CI:0.265~0.844)。rs2070744位点SNP与环境间交互作用均无统计学意义(P>0.05)。结论 NOS3基因rs2070744基因多态性可能与URSA的患病风险相关,但仍需要在大样本量的病例对照研究和不同人群中进一步验证。

延边地区朝鲜族和汉族小学生不同代谢指标与一氧化氮合酶3基因单核苷酸多态性的关系

[目的]分析延边地区朝鲜族和汉族小学生不同代谢指标与一氧化氮合酶3(NOS3)基因单核苷酸多态性(SNPs)的关系.[方法]选择2011年8月—2013年8月间吉林省延边朝鲜族自治州3所小学校的1 206名小学生(朝鲜族706名,汉族500名)作为调查对象,测量体质量指数(BMI)、腰围(WC)、收缩压(SBP)和舒张压(DBP)值;检测空腹血清三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、血糖(FBG)、胰岛素(FIns)值和NOS3基因rs3918227位点的基因型.[结果]朝鲜族小学生NOS3基因SNP rs3918227位点CC,CA及AA型的频率分别为93.5%,6.2%和0.3%,汉族小学生分别为84.4%,15.6%和0.0%,朝鲜族和汉族小学生的基因型分布频率间差异有统计学意义(P<0.001);朝鲜族小学生C,A等位基因频率分别为96.6%和3.4%,汉族小学生分别为84.4%和15.6%,朝鲜族和汉族小学生的等位基因频率分布间差异有统计学意义(P<0.001).NOS3基因SNP rs3918227位点不同基因型朝鲜族小学生WC,SBP,DBP和HOMA-IR分布特征间均存在显著差异(P<0.05),汉族小学生BMI和FBG分布特征间均存在显著差异(P<0.01).[结论]延边地区朝鲜族和汉族小学生NOS3基因rs3918227位点具有SNPs,且2个民族频率分布间存在差异;朝鲜族和汉族小学生多种代谢指标与NOS3基因rs3918227位点基因型和等位基因的关联程度有所不同.

内皮型一氧化氮合酶3基因多态性与晚发性阿尔茨海默病的关联

目的 探讨中国人群中内皮一氧化氮合酶 3(NOS3)基因第 7外显子G/T(氨基酸序列为Glu2 98Asp)多态性与晚发性AD的相关性。 方法 应用聚合酶链反应 限制性片段长度多态性(PCR RFLP)方法 ,在 6 8例散发性AD患者 (≥ 6 5岁 )和 15 8例对照人群中观察NOS3基因和载脂蛋白 (apoE)基因多态性分布 ,经OddRatio比值分析和显著性检验。 结果 (1)NOS3基因各等位基因、基因型频率两组间比较差异无显著性 ;(2 )AD与apoE基因ε4等位基因及ε4携带者均呈正相关 ;(3)按有无apoEε4等位基因对晚发性AD患者分型 ,结果表明apoEε4携带者和非apoEε4携带者两组间GG基因型频率差异无显著性 ,但NOS3基因和apoE基因之间可能存在拮抗作用 ;(4 )按年龄分层分析GG基因型频率分布 ,分析结果显示NOS3基因是高龄AD组 (≥ 80岁 )的一个危险因子。 结论 南宁市汉族人群中NOS3基因G/T多态性与高龄组晚发性AD有关。

一氧化氮合酶3基因多态性与复发性早期自然流产的关系

目的 探讨一氧化氮合酶3（nitric oxide synthase3，NOS3）基因第4内含子27bp数目可变串联重复序列（variable number of tandem repeat，VNTR）多态性和第7外显子894（G／T）多态性与复发性早期自然流产（recurrent early spontaneous abortion，RESA）的相关性。方法选取140例RESA患者和140名健康妇女，应用聚合酶链反应．琼脂糖凝胶电泳法检测NOS3基因第4内含子VNTR多态性，聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析技术检测第7外显子894（G／T）多态性。结果RESA组aa＋ba基因型频率和a等位基因频率与正常对照组相比差异有统计学意义（χ^2=4．51，P〈0．05；χ^2=4．29，P〈0．05）。与bb基因型相比，携带a等位基因的妇女与RESA显著相关（OR为1．8，95％CI：1．04～3．24）。RESA组TT＋GT基因型频率和T等位基因频率与正常对照组相比差异无统计学意义（χ^2=1．16，P〉0．05；χ^2=1．12，P〉0．05）。与GG基因型相比，携带T等位基因的妇女与RESA无相关。结论 NOS3基因第4内含子27bp数目可变的串联重复序列多态性与复发性自然流产密切相关，NOS3基因第7外显子894G／T多态性与RESA无明显相关性，a等位基因是RESA重要的遗传易感基因。

急性低氧时Wistar大鼠与高原鼠兔肺组织内皮型一氧化氮合酶基因表达的变化

目的探讨内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)在高原动物适应高原低氧环境中的作用。方法通过模拟4000m、6000m高原低氧,运用免疫组织化学技术,分别检测Wistar大鼠和高原鼠兔肺血管内皮和肺内气道上皮内皮型一氧化氮合酶蛋白表达水平的变化。结果无论是在肺血管内皮,还是肺内气道上皮,Wistar大鼠eNOS蛋白表达在模拟4000m与6000m高原低氧处理2h后,均显著升高,而高原鼠兔基本保持不变,但高原鼠兔气道上皮eNOS的基础表达水平显著高于Wistar大鼠。结论相比Wistar大鼠,高原鼠兔eNOS基因表达在模拟高原低氧时增加较少甚或无明显增加,eNOS是急性高原低氧耐受过程中的一个重要机制。

NOS3、IL-1β基因多态性与不明原因复发性流产相关性的研究进展

不明原因复发性流产(URSA)是妇产科中最常见的妊娠并发症之一,给患者身心和家庭造成严重的负面影响,是育龄期女性生殖健康的一大威胁。其病因及发病机制不清,尚无有效的防治措施,是当前生殖健康领域的一大难点。有研究表明一氧化氮合酶3(NOS3)、白介素-1β(IL-1β)基因的相关功能区单核苷酸多态性(SNP)与URSA疾病相关,但文献结果并不一致。本文就NOS3、IL-1β基因多态性与URSA相关性的研究进展进行综述。

2型糖尿病病人NOS3基因多态性与冠心病发病风险的倾向性评分匹配分析

目的:分析2型糖尿病(T2DM)病人内皮型一氧化氮合酶3(NOS3)基因多态性与冠心病发病风险的分析。方法:纳入2019年12月—2021年12月于我院就诊的302例T2DM病人为研究对象,根据是否合并冠心病分为单纯T2DM组(224例)和合并冠心病组(78例)。收集病人临床资料、实验室指标、影像学资料,采用聚合酶链式反应(PCR)技术检测NOS3 G894T、NOS 3T786C多态性,对年龄、性别、吸烟史、体质指数、冠心病家族史、基础疾病、降糖方案进行倾向性评分匹配后采用Logistic回归分析T2DM病人NOS3基因多态性与冠心病发病风险的关系。结果:两组经倾向性评分匹配后有56例配对成功,匹配后一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05);两组载脂蛋白AⅠ(ApoAⅠ)、同型半胱氨酸(Hcy)、左室射血分数(LVEF)、NOS3 G894T、NOS3 T786C多态性比较,差异有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归分析显示,ApoAⅠ(OR=620.821)、Hcy(OR=1.823)、NOS3 G894T中TT型(OR=5.157)、NOS3 T786C中CC型(OR=5.342)是糖尿病合并冠心病的危险因素(P<0.05)。结论:T2DM病人NOS 3G894T、NOS3 T786C多态性与冠心病发病风险相关,临床可针对性相关指标进一步干预。

NOS3基因多态性与脑卒中合并高血压关系的研究

目的探讨NOS3基因多态性与脑卒中合并高血压发病的关系。方法以rs3918181位点为遗传标记,采用聚合酶链反应(PCR)和限制性片断长度多态性(RFLP)检测613例脑卒中患者和323例对照人群NOS3基因的多态性。结果脑卒中组和对照组的rs3918181位点等位基因、基因型频率无显著差异;以是否合并高血压对病例组人群进行分群后,cocaphase分析表明合并高血压的脑卒中组rs3918181位点的A等位基因频率较单纯脑卒中组明显增高(P=0.034)。合并高血压的脑卒中组AA+AG基因型的频率明显高于单纯脑卒中组(P=0.041)。结论NOS3基因与脑卒中的发病无关,而可能与高血压的发生相关。

STAT3/iNOS通路在慢性阻塞性肺疾病伴气道重塑中的作用

目的探讨信号传导子及转录活化因子3(STAT3)/诱导型一氧化氮合酶(iNOS)通路在慢性阻塞性肺疾病(COPD)伴气道重塑中的作用。方法(1)采用气管滴注脂多糖加烟熏法构建COPD大鼠模型,并将其分为模型组、STAT3抑制剂组、阳性对照组,每组10只,另取正常大鼠10只作为对照组。建模结束后,给予STAT3抑制剂组大鼠尾静脉注射STAT3特异性抑制剂Stattic,阳性对照组大鼠灌胃醋酸地塞米松溶液,对照组和模型组灌胃生理盐水,均干预28 d。干预结束后,在光学显微镜下计数大鼠肺泡灌洗液中白细胞数量及其他分类细胞比例;采用HE染色法观察大鼠肺组织病理学变化;采用Image J软件测定大鼠支气管管壁面积及支气管平滑肌厚度;采用ELISA检测大鼠肺组织中分泌型IgA(SIgA)、分泌成分(SC)、转化生长因子β1(TGF-β1)和血管内皮生长因子(VEGF)含量;采用Western blot检测大鼠肺组织中STAT3磷酸化水平和iNOS蛋白表达水平。(2)将大鼠支气管上皮细胞分为正常组、模型组、si-NC组、si-STAT3组,si-NC组细胞转染载体质粒si-NC,si-STAT3组细胞转染载体质粒si-STAT3,模型组和正常组细胞不给予干预。转染24h后,使用含3.0%香烟烟雾提取物的DMEM培养模型组、si-NC组和si-STAT3组细胞,使用DMEM培养正常组细胞。培养48 h后采用实时荧光定量PCR检测各组细胞的白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、STAT3、iNOS mRNA表达水平。结果(1)对照组大鼠肺组织结构正常,气道上皮结构完整,无明显炎性细胞浸润。与对照组相比,模型组大鼠肺组织出现大量炎性细胞浸润,肺泡结构紊乱,上皮组织脱落,肺泡腔不规则扩张,肺泡灌洗液中白细胞计数及淋巴细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞比例增加,支气管壁面积及支气管平滑肌厚度增加,肺组织中SIgA、SC、TGF-β1、VEGF含量及STAT3磷酸化水平、iNOS蛋白表达水平均升高,而肺泡灌洗液中单核巨噬细胞比例降低(均P<0.05)。STAT3抑制剂组与阳性对照组大鼠的上述指标较模型组均改善(均P<0.05),但两组上述指标差异均无统计学意义(均P>0.05)。(2)与正常组相比,模型组和si-NC组细胞的IL-1β、TNF-α、STAT3、iNOS mRNA表达水平均升高(均P<0.05);与模型组和si-NC组相比,si-STAT3组细胞的IL-1β、TNF-α、STAT3、iNOS mRNA表达水平均降低(均P<0.05)。结论在香烟烟雾诱导的COPD伴气道重塑中STAT3/iNOS通路处于激活状态,抑制该通路的激活可减轻肺组织和支气管上皮细胞的炎症反应,改善气道重塑。

肉苁蓉抗运动性疲劳机制的实验研究

目的观察肉苁蓉对负重游泳小鼠肝脏乳酸脱氢酶同工酶、糖原及一氧化氮合酶3(NOS3)的影响,探讨其抗运动性疲劳的作用机制。方法将昆明种小鼠随机分为正常对照组、运动对照组和肉苁蓉实验组。正常对照组和运动对照组每只每日灌胃生理盐水0.2 mL,肉苁蓉实验组每只每日灌胃肉苁蓉水煎液0.2 mL(3 g/kg),共15 d;末次给药1 h后,运动对照组和肉苁蓉实验组小鼠尾部负重5%游泳90 min,10 h后连同正常对照组小鼠处死取肝脏,一部分用中性甲醛固定制备石蜡切片,一部分制成肝细胞匀浆检测乳酸脱氢酶活性;常规HE染色观察肝脏组织结构,糖原染色法显示肝脏糖原,S-P免疫组织化学染色法检测小鼠肝脏NOS3的表达。结果运动对照组与正常对照组比较,乳酸脱氢酶活性高(P<0.05),肝脏结构损伤严重,糖原含量减少,NOS3表达下降(P<0.05);肉苁蓉实验组与运动对照组比较,乳酸脱氢酶活性降低,主要是乳酸脱氢酶5(LDH5)下降,肝小叶结构较清晰,糖原丰富,NOS3表达上调(P<0.05)。结论肉苁蓉可降低LDH5活性,上调NOS3的表达,促进肝糖原合成,发挥肝脏保护和促进体能恢复作用。

血清KLF2、NOS3水平对大动脉粥样硬化型急性脑梗死患者的诊断及病情评估价值

[目的]探讨锌指样转录因子2(KLF2)、内皮型一氧化氮合酶3(NOS3)水平在大动脉粥样硬化(LAA)型急性脑梗死(ACI)患者诊断及病情评估中的价值。[方法]将150例LAA型ACI患者根据病情分为轻度组(n=36)、中度组(n=48)和重度组(n=66),另选取同期门诊健康体检者设为对照组(n=150)。比较各组血清KLF2、NOS3水平;ROC曲线分别分析血清KLF2、NOS3水平对LAA型ACI的诊断价值和对发生重度LAA型ACI的预测价值。[结果]LAA型ACI组患者血清KLF2、NOS3水平显著低于对照组(P<0.05)。轻、中、重度组LAA型ACI患者血清KLF2、NOS3水平依次显著降低(P<0.05)。血清KLF2、NOS3二者联合诊断LAA型ACI的AUC为0.858,灵敏度为73.33%,特异度为86.00%,优于KLF2、NOS3各自单独诊断(Z联合检测-KLF2=3.796,Z联合检测-NOS3=4.689,均P<0.001)。血清KLF2、NOS3二者联合预测发生重度LAA型ACI的AUC为0.878,灵敏度为77.27%,特异度为90.48%,优于KLF2、NOS3各自单独预测(Z联合检测-KLF2=2.401,P=0.016;Z联合检测-NOS3=3.070,P=0.002)。[结论]LAA型ACI患者血清KLF2、NOS3水平显著降低,且与病情严重程度显著负相关,二者联合应用对LAA型ACI诊断和病情预测具有较高的评估效能。

和血明目片改善老年性黄斑变性的机制

目的:探讨和血明目片通过调节STAT3-iNOS信号通路改善老年性黄斑变性的机制。方法:选取老年性黄斑病变患者100例,分为治疗组53例及对照组47例,其中治疗组服用和血明目片,对照组服用维生素C、E。治疗3个月后,检测并比较两组治疗前后的矫正视力及STAT3-iNOS mRNA的表达。结果:治疗组较对照组STAT3、iNOS mRNA表达降低、视力值升高(P<0.05)。结论:和血明目片可通过促进STAT3-iNOS信号通路的表达改善老年患者黄斑变性带来的视力影响。

氯沙坦对心力衰竭患者外周血内皮祖细胞的影响及对PI3K/Akt/eNOS通路的干预研究

目的探讨氯沙坦对心力衰竭(HF)患者外周血内皮祖细胞(EPC)的影响及对磷脂酰肌醇-3激酶/丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶/内皮型一氧化氮合酶(PI3K/Akt/e NOS)通路的干预。方法选取2016年1月至2016年10月我院收治的HF患者随机分为对照组和治疗组,每组各43例。对照组予以常规抗HF治疗,治疗组在此基础上口服氯沙坦一日50 mg。入院及治疗8周后,测定患者左室射血分数(LVEF)、血浆脑钠肽(BNP)水平及EPC数目。体外培养HF患者EPC,观察比较空白组、氯沙坦组和PI3K抑制剂组EPC细胞增殖、凋亡和迁移情况,以及EPC的Akt和eNOS的表达情况。结果与治疗前比较,治疗后两组LVEF升高,BNP水平降低,EPC数目增加(P<0.05);且治疗组改善效果优于对照组,组间差异具有统计学意义(P<0.05)。与空白组和PI3K抑制剂组比较,氯沙坦组各时间点OD570值升高,细胞凋亡率降低,迁移距离增加,差异有统计学意义(P<0.05);氯沙坦组Akt和eNOS表达量明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论氯沙坦能明显改善心衰患者LVEF、BNP水平和EPC数量,促进EPC细胞增殖和迁移,减少EPC细胞凋亡,其主要机制可能与上调PI3K/Akt/eNOS通路中Akt和e NOS表达有关。

NOS3多态性与我国新生儿缺氧缺血性脑病的关系研究

目的探讨一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)3基因多态性与我国新生儿缺氧缺血性脑病(hypoxic-ischemic encephalopathy,HIE)易感性的关系。方法2015年1月—2018年1月本院收治的足月产HIE新生儿120例为研究对象(HIE组),以240例健康足月产新生儿为对照(对照组)。用全血基因组DNA快速提取试剂盒提取外周血白细胞中DNA。用Haploview软件的Tagger程序挑选7个单倍型标签单核苷酸多态性(rs3918186、rs3918188、rs1800783、rs1808593、rs3918227、rs1799983、rs1800779),进行基因扩增。随后直接送样测序,用SHEsis软件分析NOS3基因7个位点的单核苷酸多态性。结果所有个体的基因型分布均符合Hardy-Weinberg遗传平衡。NOS3基因rs3918186、rs3918188、rs1800783、rs3918227、rs1799983和rs1800779位点与HIE易感性无关(P>0.05)。与对照组比较,HIE组rs1808593位点TG频率较低,而GG频率较高(P<0.05)。NOS3基因rs3918186、rs3918188、rs1800783、rs1808593、rs3918227、rs1799983和rs1800779位点等位基因分布均与HIE易感性无关(P>0.05)。rs1800783-rs1800779TG单倍型与HIE易感性有关(P<0.05)。结论NOS3基因多态性与我国新生儿HIE有关,未来需要进一步分析NOS3基因多态性与HIE治疗效果及预后的关系。

基于网络药理学和质量源于设计理念的栀子豉汤提取工艺研究

目的 采用网络药理学方法探讨栀子豉汤治疗失眠的作用机制;基于质量源于设计(quality by design,QbD)理念,构建并验证栀子豉汤提取工艺的设计空间。方法 通过TCMSP、PharmMapper、Drugbank、GeneCards、TherapeuticTarget Database、OMIM等数据库获取栀子豉汤的成分和对应靶点;利用STRING、DAVID数据库和分子对接技术对栀子豉汤治疗失眠的潜在靶点进行分析。以栀子豉汤提取物中的栀子苷、京尼平龙胆双糖苷、大豆苷元、染料木素的提取率及干膏得率作为关键质量属性(critical quality attributes,CQAs),Plackett-Burman设计筛选关键工艺参数(critical process parameters,CPPs),Box-Behnken实验对CPPs进行优化,并构建栀子豉汤提取工艺的设计空间。结果 栀子豉汤的主要活性成分栀子苷、京尼平龙胆双糖苷、大豆苷元、染料木素等,通过作用于白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、雌激素受体1(estrogen receptor 1,ESR1)、一氧化氮合酶3(nitric oxide synthase 3,NOS3)等核心靶点,参与调节神经活性配体-受体相互作用(neuroactive ligand-receptor interaction)、γ-氨基丁酸能突触(GABAergic synapse)、TNF因子信号通路(TNF signaling pathway)等信号通路发挥治疗失眠的作用。栀子豉汤提取工艺的设计空间范围为溶剂用量8~11倍、提取时间为30~84 min,提取次数为1~2次。结论 栀子豉汤可能通过多成分-多靶点-多通路治疗失眠。基于QbD理念建立的栀子豉汤提取工艺设计空间,稳健可靠,可为其制剂的工艺开发提供参考。

邢氏夏枯草汤对慢性间歇性低氧高血压大鼠血管内皮损伤的保护作用及其机制

目的:采用慢性间歇性低氧(CIH)方法,探讨邢氏夏枯草汤对高血压大鼠血管内皮损伤的保护作用及其机制。方法:50只SD大鼠,分为正常对照组、模型对照组、夏枯草汤4.1、8.2 g/kg组、卡托普利0.11 g/kg组。从造模第一天开始给药干预,连续给药21 d。在造模及给药第21 d下午17 h,测定各组大鼠尾动脉血压。试验结束后,取胸主动脉,进行离体血管环试验;应用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血浆内皮素-1(ET-1)含量,硝酸还原酶法测定血清一氧化氮(NO)含量;苏木精-伊红(HE)染色观察主动脉组织病理形态改变;蛋白免疫印迹(Western blot)技术检测主动脉组织磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)以及ET-1蛋白表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组大鼠尾动脉收缩压和血浆ET-1含量显著升高(P<0.01),血清NO含量显著降低(P<0.01),离体主动脉血管环对ACh诱导的内皮依赖性舒张反应显著降低(P<0.01);HE染色显示主动脉内膜不光滑,细胞核小深染,萎缩;主动脉组织PI3K、AKT以及ET-1蛋白表达显著上调,eNOS蛋白表达显著下调(P<0.01);与模型对照组比较,夏枯草汤4.1、8.2 g/kg组可显著降低尾动脉收缩压和血浆ET-1含量(P<0.01),明显升高血清NO含量(P<0.05或P<0.01),离体主动脉血管环被ACh刺激后舒张反应明显升高(P<0.05或P<0.01);HE染色显示主动脉内膜表面较光滑,细胞核基本正常;主动脉组织PI3K、AKT以及ET-1蛋白表达显著下调,eNOS蛋白表达上调(P<0.01)。结论:邢氏夏枯草汤可有效降低CIH诱发的大鼠高血压,保护血管内皮损伤,其作用机制可能与调控PI3K/AKT/eNOS信号通路,调节ET-1/NO分泌有关。