真菌一氧化氮还原酶细胞色素P-450nor 2 cDNA序列的测定

真菌一氧化氮还原酶细胞色素Ｐ４５０ｎｏｒ２ｃＤＮＡ序列的测定刘德立（华中师范大学生命科学学院武汉４３００７０）ＨｉｒｏｆｕｍｉＳＨＯＵＮ（筑波大学应用生物化学系日本）在真菌的反硝化作用中，一种细胞色素Ｐ４５０起着一氧化氮还原酶的作用，被称为细胞色...

活性污泥中一氧化氮还原酶的提取和测定优化

通过正交实验,研究了超声破碎法和低温高压破碎法提取一氧化氮还原酶(nitric oxide reductase,nor)的活性,分析了超声强度和次数,破碎压力和次数,裂解液的添加量等因素对于胞内可溶性蛋白和核酸(DNA)的释放与提取nor活性的影响.根据活性污泥中酶的催化特性以及其他实验条件,完善了nor催化活性的测定方法.结果表明超声法提取nor的参数应设定为,超声次数为100次,超声强度为500W,裂解液的添加量为0.1mL.低温高压破碎法提取nor的参数应设定为破碎次数为4次,破碎压力为50MPa,裂解液的添加量为0.1mL.低温高压破碎法下的胞内可溶性蛋白和DNA的释放量与nor的最大催化活性要高于超声破碎法.此外,在nor催化活性的测定方法中,nor活性测定终点时间应为15min.

铜绿假单胞菌一氧化氮还原酶编码基因norD的生物学功能研究

一氧化氮还原酶(Nitric oxide reductase,NOR)是反硝化过程中一个非常重要的催化酶,本文通过同源重组的方法敲除铜绿假单胞菌中norD基因,并研究该基因敲除后菌株ΔnorD在好氧条件下的表型变化。研究结果表明,与野生菌株和回补菌株相比,ΔnorD对BIT的抗性增强。同时在BIT作用下,ΔnorD泳动能力减弱、绿脓菌素的合成能力降低,但norD基因不是BIT唯一的作用位点。上述结果明确了好氧条件下norD基因的部分功能,为更好的利用反硝化过程奠定基础。

计算机辅助蛋白质分子理性设计:从肌红蛋白到一氧化氮还原酶

计算机辅助蛋白质分子理性设计在解决化学及生物学重要问题中被证实十分有效。在NOR本身三维结构未知的情况下通过计算机分子模拟,使用肌红蛋白(Mb)作为蛋白质分子模型,设计了结构功能型一氧化氮还原酶(NOR),所设计的NOR蛋白质模型——FeBMb一年后被天然NOR的晶体结构所证实。本文综述了设计FeBMb,I107E FeBMb以及FeBMb(-His)的研究过程及其设计合理性,评述了通过使用计算机分子模拟,获得Mb处于双组氨酸配位的非天然状态的原子层次结构信息,而这些信息很难通过实验方法来获得。计算机辅助蛋白质分子理性设计的广泛应用将会为生物体系提供更深刻的内涵。

细胞色素P45055B1的直接电化学及对一氧化氮的电催化检测

采用戊二醛(GA)交联法将细胞色素P45055B1(CYP55B1)固定在热解石墨电极(PGE)表面,牛血清白蛋白(BSA)封闭多余活性位点,构建了一种新型一氧化氮(NO)生物传感器.并考察了电化学生物传感器的选择性与稳定性.结果表明:CYP55B1实现了直接电子传递,氧化还原峰电位位于-0.355 V和-0.385 V,CYP55B1对NO具有电催化活性,其催化还原峰位于-0.85 V.NO的检测线性范围为14.4~108μmol·L^-1,检测限为10.47μmol·L^-1,且该生物传感器具有良好的稳定性及选择性.

氦氖激光与紫外线B辐射对小麦幼苗根氮代谢相关酶的影响

为研究He-Ne激光辐照对小麦幼苗根氮代谢相关酶受UV-B辐射损伤后的修复作用,分别采用5mW.mm-2 He-Ne激光辐照、10.08kJ.m2.d1的UV-B辐射及二者组合对临优2018号小麦幼苗进行处理,3d后测定各处理组小麦幼苗根一氧化氮合成酶含量和硝酸还原酶活性的变化。分析结果显示:He-Ne激光辐照可使UV-B辐射后小麦幼苗根一氧化氮合成酶(NOS)含量增加4.7%,硝酸还原酶活力升高1.01倍,显著改善了增强UV-B辐射后硝酸还原酶(NR)活性降低的程度。表明一定剂量的He-Ne激光辐照可部分修复增强UV-B对小麦幼苗根氮代谢水平的辐射损伤。

铜绿假单胞菌norB基因的克隆及表达

为使norB基因得到有效表达,利用分子生物学技术将铜绿假单胞菌B136-33的norB基因克隆至表达载体pET-28a上。首先,根据GenBank公布的norB基因序列及表达载体pET-28a上的多克隆位点进行引物(含EcoRⅠ和HindⅢ酶切位点)设计;然后以B136-33基因组为模板,扩增目的片段norB;产物经双酶切克隆至pET-28a后,化学转化至克隆菌DH5α,得到含有重组质粒的转化子DH5α-pET-28a-norB;再经双酶切和测序鉴定正确后,将重组质粒pET-28a-norB转化至表达菌BL21;最后,用SDS-PAGE鉴定norB基因表达产物的分子量。结果表明,norB能在BL21中得到正确有效的表达。

NADPH结构类似物对FMN电子传递性质影响的研究

研究了NADPH结构类似物稳定黄素单核苷酸(FMN)功能域屏蔽状态的作用机理.以野生型一氧化氮合成酶还原酶(nNOSr)、突变体nNOSrF1395S、突变体nNOSrR1400E为对象,研究了NADPH结构类似物:2'-AMP、2',5'-ADP、硫代-NADP+、3-乙酰吡啶-NADP+对FMN域的屏蔽和去屏蔽两种状态的影响,证实了烟碱基团对电子传递过程的影响.