不同浓度一氧化碳释放分子-3对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

目的探讨不同浓度一氧化碳释放分子-3(CORM-3)对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化的影响。方法实验分A、B两部分,各部分均包括5组,A部分:矿化组,100、200、400μmol/L CORM-3组,对照组;B部分:矿化组,100、200、400μmol/L CORM-3-矿化组,对照组。采用Real-time PCR法和Western blotting法分别检测成骨相关基因Runx2和OPNmRNA与蛋白的表达,茜素红染色检测成骨能力。采用SPSS 19.0软件对数据进行统计学分析。结果 100、200μmol/L CORM-3可促进BMSCs增殖,差异有统计学意义(P=0.034,P<0.001);单纯CORM-3对BMSCs成骨分化无影响;BMSCs经200、400μmol/L CORM-3预处理后再行矿化诱导,7 d后大鼠BM SCs的Runx2和OPNmRNA表达增强,与矿化组比较差异有统计学意义(Runx2:P=0.005,P=0.006;OPN:P=0.010,P=0.028),其蛋白表达及21 d后的成骨能力较矿化组均明显增强,且200μmol/L CORM-3预处理的效果优于400μmol/L CORM-3。结论 CORM-3预处理可促进体外BMSCs成骨分化,200μmol/L为CORM-3用于实验的适宜浓度。

一氧化碳释放分子-2对小鼠急性肝功能衰竭保护作用的实验研究

目的探讨一氧化碳释放分子-2对小鼠急性肝功能衰竭(ALF)的保护作用及机制。方法雄性C57BL/6小鼠30只随机分为对照组、模型组和保护组,每组10只。通过一次性腹腔注射脂多糖/D-氨基半乳糖(LPS/D-GalN)构建小鼠ALF的动物模型,CORM-2于造模前30 min行尾静脉注射,造模后6 h分别留取血清、肝组织标本。生化分析仪检测血清中ALT、AST水平,HE观察肝脏病理改变,酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中TNF-α和IL-6的水平,反转录酶-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肝组织中TNF-α和IL-6 mRNA的表达。结果保护组小鼠血清ALT[(1274.60±157.24)U/L比(3499.00±136.19)U/L]和AST[(1151.50±244.58)U/L比(4079.50±481.11)U/L]水平均明显低于模型组(均t1=33.81,t2=17.16,P<0.05);与模型组比较,保护组肝组织炎性细胞浸润明显减少,肝细胞坏死程度明显减轻[(0.14±0.05)比(0.37±0.05),t=10.29,P<0.05];保护组小鼠血清和肝组织中TNF-α[(139.60±28.39)pg/mL比(447.34±128.17)pg/mL、(0.31±0.03)比(0.69±0.05)]和IL-6[(215.21±85.16)pg/mL比(1461.58±244.90)pg/mL、(0.33±0.03)比(0.72±0.05)]表达水平明显低于模型组(均t1=7.41,t2=20.61,t3=15.20,t4=21.15,P<0.05)。结论 CORM-2能够抑制小鼠ALF时的炎性反应,减轻肝脏病理损伤,其机制可能与抑制促炎细胞因子TNF-α和IL-6的释放有关。

一氧化碳释放分子3通过抑制肺泡上皮细胞凋亡减轻脂多糖诱导的新生鼠急性肺损伤

目的探讨一氧化碳释放分子3(CORM3)对脂多糖(LPS)诱导的新生鼠急性肺损伤(ALI)肺泡上皮细胞凋亡的影响。方法 32只新生SD大鼠均分为对照组、LPS组、CORM3组和失活CORM3(i CORM3)组;LPS组、CORM3组和i CORM3组采用LPS气管内滴注建立新生鼠ALI模型,分别腹腔注射生理盐水、CORM3和i CORM3;对照组不建立ALI模型,腹腔注射生理盐水。于建模后12 h取肺组织,苏木素-伊红染色观察肺组织病理改变,湿干(W/D)比值测定,肺泡灌洗液(BALF)细胞计数及蛋白含量测定。体外培养A549细胞,LPS诱导细胞凋亡。MTT检测细胞活性,Tunel染色观察组织、细胞凋亡变化。结果 1与对照组相比,LPS组肺组织形态结构明显紊乱,肺泡压缩,肺间质大量炎性细胞浸润;CORM3组肺组织形态结构基本正常,间质炎性细胞浸润少;i CORM3组见肺组织水肿及大量炎性细胞浸润。2与对照组相比,LPS组肺组织W/D比值、BALF细胞数及蛋白含量明显升高,肺泡上皮细胞凋亡率明显增多[(37.3±4.5)%vs(3.0±1.0)%];A549细胞活力下降,凋亡率明显升高[(29.6±4.1)%vs(3.6±1.0)%],差异均有统计学意义(P<0.05)。CORM3组肺组织W/D比值、BALF细胞数和蛋白含量较LPS组显著下降,肺泡上皮细胞凋亡率减少[(19.3±4.6)%];A549细胞活力回升,凋亡率[(15.3±4.5)%]明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。LPS组与i CORM3组间上述指标差异均无统计学意义。结论 CO通过抑制肺泡上皮细胞凋亡减轻新生鼠ALI。

一氧化碳释放分子对大鼠实验性牙周炎的影响

目的研究一氧化碳释放分子(CORM)对大鼠实验性牙周炎的影响。方法将42只健康雄性Wistar大鼠分为正常组(NL组)、牙周炎组(LO组)和一氧化碳干预组(CO组)。NL组不作任何处理;CO及LO组采用牙周丝线结扎法建立牙周炎实验模型;建模当天起CO组经腹腔注射CORM-2,每天10 mg·kg-1,连续10 d,LO组注射等体积生理盐水。分别于结扎3、7、10 d后自心脏抽取静脉血,用酶联免疫吸附测定法检测血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)的质量浓度。10 d后在体视显微镜下测量牙槽骨的吸收高度,并于光镜下观察牙周组织炎症细胞的浸润情况。结果丝线结扎10 d后,LO、CO组牙槽骨的吸收高度均明显大于NL组,而CO组明显小于LO组(P<0.05);LO、CO组炎症细胞浸润指数明显高于NL组,而CO组明显低于LO组(P<0.05)。在同一观察时期内,LO组TNF-α及IL-1β质量浓度均明显高于其他两组,而CO组虽高于NL组,但明显低于LO组(P<0.05)。结论 CORM-2能有效抑制大鼠实验性牙周炎的炎症细胞浸润和牙槽骨吸收。

外源性一氧化碳释放分子2对脓毒症大鼠肺炎症反应的抑制作用及分子机制

目的:观察外源性一氧化碳释放分子2(carbon monoxide-releasing molecules-2,CORM-2)干预对脓毒症大鼠肺部炎症反应的抑制作用并探讨其机制。方法:24只雄性SD大鼠随机分为假手术组、CLP组和CLP+CORM-2组。采用盲肠结扎穿孔(cecal ligation and puncture,CLP)法建立脓毒症模型,用CORM-2进行干预,苏木精-伊红(HE)染色观察肺组织病理变化;放射免疫法检测血浆中TNF-α和白细胞介素(IL-1β、IL-6)的变化;ELISA法检测肺组织细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的含量,蛋白质印迹法检测肺组织核因子-κB(NF-κB)蛋白的表达情况。结果:与假手术组相比,CLP模型组主要表现为肺组织微血管通透性增加,肺泡壁增厚,间质水肿,白细胞浸润,炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6的水平明显增加,ICAM-1含量明显增高,NF-κB表达水平明显增加(P均<0.01);CLP+CORM-2组肺间质轻度水肿,白细胞少量浸润,炎症因子的表达增加,ICAM-1含量增高,NF-κB表达水平增加(P均<0.05)。与CLP模型组比较,CLP+CORM-2组肺间质水肿程度减轻,白细胞浸润明显减少,炎症因子水平显著下降,ICAM-1含量下降,NF-κB表达水平明显下降(P均<0.05)。结论:CDRM-2可显著抑制脓毒症大鼠肺部炎症反应,其可能机制为CORM-2可有效地减弱NF-κB的表达。

外源性一氧化碳释放分子2对大鼠脊髓缺血再灌注损伤的保护作用研究

目的探讨外源性一氧化碳释放分子2(CORM2)对大鼠脊髓缺血再灌注损伤的保护作用与相关机制。方法将30只健康雄性Wistar大鼠分为实验组、对照组、空白组,每组各10只。实验组在造模前1h尾静脉注射外源性CORM2。实验组和对照组采用相同的方法造模。对照组造模后1h注射与实验组相同剂量的生理盐水。空白组仅完成开腹和关腹操作,并术后1h注射与实验组相同剂量的生理盐水。在术后不同时间进行神经行为学评分(Tarlov评分)、脊髓组织病理学检查和白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)检测。结果再灌注后不同时间点,实验组Tarlov评分均高于对照组,但实验组和对照组Tarlov评分均低于空白组(P<0.05)。缺血再灌注48h后,对照组脊髓组织标本可见损伤及坏死神经元,表现为细胞核固缩或溶解,细胞质中的尼氏体消失;空白组脊髓组织标本中可见正常神经元,表现为结构呈多角形,细胞质中可见尼氏体;实验组脊髓组织标本中的神经元坏死表现介于对照组和空白组之间。缺血再灌注48h,实验组与对照组IL-6、TNF-α表达水平均高于空白组,但实验组IL-6、TNF-α表达水平低于对照组(P<0.05)。结论外源性CORM2可抑制炎性因子的表达,对大鼠脊髓缺血再灌注损伤具有一定的保护作用。

一氧化碳对炎症环境下人牙龈成纤维细胞黏附分子表达影响的机制研究

目的研究一氧化碳对炎症环境下人牙龈成纤维细胞(HGF)黏附分子表达影响的分子机制。方法体外培养HGF,以50 ng.mL-1的TNF-α和10 ng.mL-1的IL-1β刺激加入或不加入500μmol.L-1一氧化碳释放分子-3(CORM-3)的HGF;分别在刺激10、20 min后收集部分细胞,用Western blot法检测丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)通路中细胞外调节蛋白激酶(ERK)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)和p38的磷酸化水平;在刺激4 h后用Western blot法检测核转录因子-κB(NF-κB)的核内表达;在部分实验中,HGF在TNF-α、IL-1β及CORM-3刺激前以鸟苷酸环化酶特异性抑制剂1H-[1,2,4]噁二唑[4,3-α]喹喔啉-1-酮(ODQ)预处理8 h,刺激24 h后用Western blot法检测细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的表达。结果在TNF-α和IL-1β刺激细胞10min后,MAPK通路中p38、ERK和JNK的磷酸化水平即有明显升高,CORM-3能够明显抑制p38的磷酸化,而对ERK和JNK的磷酸化水平无明显影响;4 h后,CORM-3可明显抑制NF-κB-p65的核内表达。ODQ不能改变CORM-3对TNF-α和IL-1β共同刺激下ICAM-1表达水平的影响,说明CORM-3的作用并非通过鸟苷酸环化酶系统实现。结论一氧化碳对炎症环境下HGF黏附分子表达的抑制作用可能是通过对NF-κB的活性抑制和对MAPK p38磷酸化水平的抑制作用来实现的。

月球氦-3资源的原位开采热释放行为研究

月球氦-3资源的原位利用不仅可以解决深空探测的能源供给问题,而且能够极大地减少深空探测的成本.选取钛铁矿作为月壤的代表矿物,建立了氦-3原子以空位和间隙两种缺陷赋存于钛铁矿中的分子动力学模型,阐述了不同温度下氦-3原子在钛铁矿中的扩散和释放行为.模拟计算结果表明:当氦-3在钛铁矿中扩散时,这些原子倾向于聚集成气泡.根据氦-3释放量随温度的增长率,整个加热释放的过程可以划分为两个阶段.月球氦-3资源原位开采的最优加热温度应在1000K以上,该温度下以不同形式赋存的氦-3均可以大量释放.

一氧化碳释放分子-2对复苏后心功能的影响

目的探讨一氧化碳释放分子-2（CORM-2）对大鼠复苏后心功能不全可能的保护机制。方法建立致颤法建立大鼠心肺复苏模型，健康雄性SD大鼠随机（随机数字法）分为模型（Control）组、CORM-2组、无活性CORM-2（iCORM-2）组和假手术（Sham）组，复苏成功后分别静脉注射等体积（1mL）0．2％DMSO溶液、50μmol／kgCORM-2、50μmol／kgiCORM-2及0．2％DMSO溶液。复苏后12h心脏彩超测量射血分数（EF）和心肌功能指数（MPI）评估心功能，Clark氧电极测定心肌线粒体呼吸，Western blot检测心肌胞浆及线粒体蛋白细胞色素c（cytc）及caspase-3表达。组间比较采用方差分析。结果与Control组比较，复苏后12hCORM-2组EF增高，MPI降低，线粒体Ⅲ态呼吸速率、呼吸控制率（RCR）增高，胞质caspase．3及胞质／线粒体cytc比例降低（P〈0．05）。iCORM-2组上述指标与Control组比较，组间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论CORM-2可能通过释放CO，抑制心肌线粒体途径细胞凋亡改善线粒体呼吸功能及复苏后心功能不全。

CORM-3通过调控巨噬细胞极化促进MC3T3-E1细胞成骨分化的研究

目的:研究一氧化碳释放分子-3(carbon monoxide releasing molecule-3,CORM-3)对巨噬细胞极化的调控作用,进一步探究CORM-3介导的巨噬细胞免疫环境对MC3T3-E1细胞增殖和成骨分化的影响。方法:体外培养RAW264.7细胞,筛选可用的CORM-3浓度。RT-qPCR检测iNOS、TGF-β、IL-10等M1/M2相关基因的表达。免疫荧光染色检测各组血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)蛋白的表达。流式细胞术检测24 h后各组M1/M2巨噬细胞的比例。收集24 h后的上清液制备条件培养基,应用CCK-8、碱性磷酸酶染色和茜素红染色及RT-qPCR等检测MC3T3-E1细胞的增殖和成骨活性。结果:RT-qPCR结果显示CORM-3促进了TGF-β和IL-10的表达,降低了iNOS的表达(P<0.05),免疫荧光实验结果显示CORM-3增加RAW264.7细胞HO-1的蛋白表达,在CORM-3调控巨噬细胞的环境下,RT-qPCR结果显示CORM-3提高了OCN、Runx2及Col-1等基因的表达(P<0.05),MC3T3-E1的增殖和成骨分化增强。结论:CORM-3可通过释放CO提高HO-1的蛋白水平,促进巨噬细胞RAW264.7细胞向M2表型极化,增强MC3T3-E1细胞的成骨分化能力。

一氧化碳释放分子-2对脓毒症大鼠心肌功能障碍的影响

目的探讨一氧化碳释放分子-2(CORM-2)对脓毒症大鼠心肌功能障碍的保护作用。方法将140只健康雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组(Sham组)、模型组、CORM-2预处理组、灭活型一氧化碳释放分子-2(iCORM-2)预处理组、二甲基亚砜(DMSO)对照组5组,每组28只。腹腔注射10 mg/kg脂多糖(LPS)建立大鼠脓毒症模型;Sham组腹腔注射等量生理盐水(NS)。CORM-2和iCORM-2预处理组分别于注射LPS前1 h腹腔注射8 mg/kg CORM-2或iCORM-2,DMSO对照组腹腔注射等量DMSO;Sham组和模型组不给予其他处理。各组分别抽取20只大鼠观察10 d存活率。剩余8只大鼠于制模后12 h行超声心动图检查,并计算左室射血分数(LVEF)和左室缩短分数(LVFS);取下腔静脉血,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清心肌肌钙蛋白I(cTnI)和脑钠肽(BNP)水平;之后处死大鼠取心肌组织,观察心肌病理形态学和超微结构改变。结果①生存情况:Sham组大鼠全部存活;与Sham组比较,模型组、CORM-2预处理组、iCORM-2预处理组和DMSO对照组大鼠10 d存活率均明显降低〔10%(2/20)、70%(14/20)、25%(5/20)、15%(3/20)比100%(20/20),均P<0.01〕;但CORM-2预处理组10 d存活率明显高于模型组、iCORM-2预处理组和DMSO对照组(均P<0.01)。②心功能:与Sham组比较,模型组、CORM-2预处理组、iCORM-2预处理组、DMSO对照组大鼠LVEF、LVFS均明显降低,且超声心动图提示左心室扩张明显,存在心肌功能障碍;但CORM-2预处理组大鼠LVEF、LVFS均明显高于模型组、iCORM-2预处理组和DMSO对照组〔LVEF:0.760±0.029比0.634±0.021、0.629±0.066、0.673±0.023;LVFS:(39.32±2.38)%比(29.75±1.52)%、(29.61±4.15)%、(32.43±1.66)%,均P<0.05〕,超声心动图提示CORM-2预处理后脓毒症大鼠左心室扩张程度明显减轻。③心肌损伤标志物:与Sham组比较,模型组、CORM-2和iCORM-2预处理组、DMSO对照组大鼠血清cTnI、BNP水平均明显升高;但CORM-2预处理组cTnI、BNP水平均较模型组、iCORM-2预处理组、DMSO对照组明显降低〔cTnI(ng/L):3283.54±803.50比6449.18±1105.10、5919.21±1068.27、6349.80±1153.08;BNP(ng/L):3456.62±905.85比6070.18±1287.62、5581.13±1161.17、5974.89±988.89,均P<0.05〕。④心肌组织病理学观察:模型组、iCORM-2预处理组、DMSO对照组光镜下显示大鼠心肌组织病理形态损伤严重,透射电镜下显示线粒体肿胀,部分出现空泡状改变;CORM-2预处理组心肌病理形态学及超微结构完整性明显优于脓毒症其余各组。结论CORM-2可改善脓毒症大鼠心肌功能障碍,提高大鼠存活率,尤其可保护脓毒症心肌线粒体完整。

外源性一氧化碳释放分子2体外干预内毒素／脂多糖致健康人血小板过度活化的研究

目的探讨外源性一氧化碳释放分子2（CORM-2）对LPS所致健康人外周血中血小板过度活化的作用及分子机制。方法采集1名健康成年人的静脉血，离心分离出富血小板血浆（PRP），分装于硅化后的试管，按随机数字表法分为正常对照组、LPS组、无活性CORM-2（iCORM-2）组、10μmol／LCORM-2组、50μmol／LCORM-2组，每组3管。正常对照组不进行任何处理；LPS组接受20mL10μg／mL的LPS刺激；iCORM-2组、10μmol／LCORM-2组、50μmol／LCORM-2组在接受上述LPS刺激的同时分别接受50μmol／LiCORM-2、10μmol／LCORM-2、50μmol／LCORM-2的干预，用量均为20mL。培养30min后玻瓶法检测血小板黏附率；免疫荧光法检测血小板侵袭至纤维蛋白原的数量；比浊法检测血小板聚集率；取PRP制备贫血小板血浆（PPP）及血小板，化学荧光素法检测PPP及血小板内ATP含量；流式细胞仪检测血小板膜糖蛋白（GP）Ibα和GPVI表达；蛋白质印迹法、免疫沉淀法分别检测血小板糖原合酶激酶3p（GSK-3β）及磷酸化GSK-3β表达。以上指标均重复测定3次。对数据行单因素方差分析、SNK检验。结果与正常对照组比较，LPS组、iCORM-2组PRP中血小板黏附率、侵袭至纤维蛋白原上的血小板数量、血小板聚集率、血小板GPIbα和GPVI表达量及PPP中ATP含量均明显增加，血小板内ATP含量均明显减少，P值均小于0．05。与LPS组比较，iCORM-2组上述各指标无明显变化（P值均大于0．05）；10μmol／LCORM-2组、50μmol／LCORM-2组血小板内ATP含量明显增加，其余上述各指标均明显减少，P值均小于0．05。正常对照组、LPS组、iCORM-2组、10μmol／LCORM-2组、50μmol／LCORM-2组PRP中血小板GSK-3β表达量分别为0．550．4-0．060、1．4374-0．214、1．2104-0．108、0．720±0．010、0．6704-0．010，磷酸化GSK-3β表达量分别为0．9504-0．070、1．6074-0．121、1．4204-0．040、1．1674-0．015、0．5134-0．122。LPS组、iCORM-2组PRP中血小板GSK-3β表达量及磷酸化GSK-3β表达量较正常对照组明显增加（P值均小于0．05），iCORM-2组PRP中血小板GSK-3β表达量及磷酸化GSK-3B表达量与LPS组相近（P值均大于0．05），10μmol／LCORM-2组、50μmol／LCORM-2组PRP中血小板GSK-3β表达量及磷酸化GSK-3β表达量较LPS组明显减少（P值均小于0．05）。结论LPS刺激可致健康人外周血中血小板异常活化，CORM-2的干预能够有效地抑制血小板的过度活化，其机制可能涉及GP介导的GSK-3β的磷酸化。

一氧化碳释放分子对重症急性胰腺炎肺损伤保护作用的实验研究

目的探讨一氧化碳释放分子（CORM-2）对大鼠重症急性胰腺炎（SAP）肺损伤的保护作用及机制。方法30只雄性Wistar大鼠随机分为3组（n=10）：sham组、SAP组、CORM2组。以3．5％牛磺胆酸钠逆行注射胰胆管的方法制作SAP模型。CORM-2组于SAP造模0．5h后经阴茎背动脉注射CORM-2（8mg／kg）。各组均于造模6h后取材，测定血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量；采用RT—PCR法检测肺组织细胞因子诱导的中性粒细胞趋化因子（CINC）及细胞间黏附分子-1（ICAM-1）mRNA的表达；同时检测肺组织髓过氧化物酶（MPO）活性、湿/于重比及对肺脏进行病理学评分。结果与SAP组相比，CORM-2组血清TNF—α水平、肺组织病理损伤程度、湿／干重比、MPO活性、CINC及ICAM-1 mRNA的表达均显著降低（P〈0．05）。结论应用CORM-2能够降低血清TNF—α水平、下调肺组织CINC及ICAM-1 mRNA的表达，进而有效地抑制肺组织中性粒细胞的大量浸润，从而对SAP肺损伤起到明显的保护作用。

一氧化碳释放分子-2对乳腺肿瘤大鼠肠屏障损伤的影响

目的观察一氧化碳释放分子-2(CORM-2)对乳腺肿瘤大鼠肠屏障损伤的影响。方法选取60只雌性SD大鼠为研究对象,采用随机数字表法分为假手术组、乳腺肿瘤组、CORM-2组、灭活型CORM-2(iCORM-2)组,各15只。CORM-2组和iCORM-2组均在制作乳腺肿瘤模型1 h前腹腔注射5 mg/kg干预药物。制作模型或术后24 h留取回肠组织,蛋白质印迹法(Western blot)检测回肠组织的咬合蛋白(Occludin)、紧密连接蛋白-1(ZO-1)、闭合蛋白(Claudin3)表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血D-乳酸、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、肠型脂肪酸结合蛋白(I-FABP)、二胺氧化酶(DAO)、髓过氧化物酶(MPO)水平,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测小肠黏膜Rho激酶-1 mRNA、ROCK-2 mRNA。分析CORM-2对乳腺肿瘤大鼠肠屏障损伤的影响,应用SPSS 22.0统计软件分析。结果乳腺肿瘤组、iCORM-2组大鼠的Occludin(0.07±0.01、0.13±0.02)、ZO-1(0.09±0.03、0.12±0.02)、Claudin3(0.21±0.03、0.24±0.06)蛋白表达均低于假手术组(0.35±0.04、0.49±0.05、0.64±0.07)和CORM-2组](0.33±0.03、0.23±0.04、0.42±0.05),CORM-2组的ZO-1、Claudin3蛋白表达水平低于假手术组,差异有统计学意义(t=2.389、2.186、2.801,P<0.05)。乳腺肿瘤组、iCORM-2组大鼠的血D-乳酸[(138.28±29.37)、(135.78±20.93)μg/L]、TNF-α[(354.32±23.39、314.43±21.17)ng/L]、I-FABP(585.63±119.34、548.37±132.38)水平均高于假手术组和CORM-2组(65.30±23.19、75.29±32.11),(65.48±10.92、103.28±19.92),(230.19±38.27、306.28±19.22),CORM-2组大鼠的血D-乳酸、TNF-α、I-FABP、MPO水平均高于假手术组,差异有统计学意义(t=2.549、2.495、2.858,P<0.05)。4组大鼠的血DAO水平比较差异无统计学意义(t=2.252,P>0.05)。乳腺肿瘤组、CORM-2、iCORM-2组大鼠小肠黏膜Rho激酶-1 mRNA(1.03±0.04、3.27±0.07、2.21±0.05)、ROCK-2 mRNA(0.78±0.08、2.24±0.12、2.17±0.17)均高于假手术组(2.85±0.08、2.36±0.08),CORM-2组大鼠的小肠黏膜Rho激酶-1 mRNA低于乳腺肿瘤组和iCORM-2组,差异有统计学意义(F=7.831、8.427、4.997,P<0.05)。乳腺肿瘤组、CORM-2、iCORM-2组大鼠的小肠黏膜ROCK-2 mRNA比较差异无统计学意义(F=1.605,P>0.05)。结论CORM-2可缓解乳腺肿瘤大鼠的肠屏障损伤,抑制炎性介质释放,增强肠上皮细胞间的紧密联系,增大肠黏膜通透性,保护肠屏障。

Caco-2细胞单层缺氧再复氧损伤的模型构建

目的构建Caco-2细胞单层缺糖、缺血清、缺氧,再复糖、复血清、复氧的损伤模型,探究一氧化碳释放分子3(CORM-3)对Caco-2细胞单层缺氧再复氧损伤模型的影响。方法首先,培养Caco-2细胞,于37℃、含5%CO_(2)、1%O_(2)与94%N_(2)的培养箱中缺氧,建立Caco-2细胞单层缺糖、缺血清、缺氧/复糖、复血清、复氧(H/R)模型。根据缺氧时间分4组,空白对照组(Control组)、H/R 1组(缺氧4 h、复氧4 h)、H/R 2组(缺氧8h、复氧4h)和H/R 3组(缺氧12 h、复氧4 h)。其次,溶解CORM-3药物粉末并制备无活性的CORM-3(iCORM-3),按药物浓度分6组,空白对照组(Control组)、缺氧、复氧损伤模型组(H/R组)、H/R+300μmol/L CORM-3(H/R+C1组)、H/R+400μmol/L CORM-3(H/R+C2组)、H/R+500μmol/L CORM-3(H/R+C3组)和H/R+500μmol/L iCORM-3(H/R+C4组)。主要采用Cell counting kit-8(CCK8)试剂盒检测细胞活力,倒置显微镜观察细胞形态变化,测定Caco-2细胞单层渗透性。结果随着缺氧时间的延长,可观察到Caco-2细胞间连接消失,细胞皱缩从培养瓶底脱落漂浮,细胞活力下降,细胞单层通透性增大。给予CORM-3药物干预处理后,相比于未干预损伤组Caco-2细胞均有不同程度的改善,细胞活力随着药物浓度的增加而上升。结论本研究成功构建Caco-2细胞单层缺氧再复氧的损伤模型,并发现CORM-3对Caco-2细胞单层H/R损伤模型可能有保护作用。

抑郁诱导过程中腹腔注射CORM-2大鼠的抑郁症状、海马神经元活性、脑组织炎性因子基因表达观察

目的目的观察抑郁诱导过程中,腹腔注射一氧化碳释放分子2(CORM-2)对诱导大鼠的抑郁症状、海马神经元活性及脑组织炎性因子白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、IL-8、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达变化的影响,并探讨其可能作用机制.方法SPF级健康雄性SD大鼠48只,随机分为CO干预组、生理盐水组、诱导组、正常组,每组12只.CO干预组、生理盐水组、诱导组大鼠每天选择禁食、45°笼倾斜、冰水游泳、束缚活动等慢性刺激中的1~2种,连续进行抑郁诱导21 d诱导.CO干预组、生理盐水组分别在诱导前1天腹腔注射CORM-2及生理盐水10 mg/kg,后每7天腹腔注射1次,至诱导第21天共注射3次.正常组大鼠饲养于正常标准条件下不作任何处理.分别于诱导前、诱导第21天观察各组大鼠一般情况(体质量、食量、饮水量),诱导第21天采用糖水偏好实验评估各组大鼠快感缺失程度,旷场实验观察大鼠行为能力.诱导第21天各组随机选取5只大鼠,处死后取脑组织海马组织,尼氏染色后观察海马组织CA1区神经元活性.诱导第21天时取各组剩余大鼠,处死后取脑组织(包含海马组织),实时荧光定量PCR法检测脑组织IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-αmRNA.结果与正常组比较,诱导组、生理盐水组和CO干预组大鼠体质量、食量和饮水量均降低(P均<0.05);与诱导组和生理盐水组比较,CO干预组大鼠体质量、食量和饮水量均增加P均<0.05).与正常组比较,诱导组、生理盐水组和CO干预组大鼠糖水偏好率、水平活动格数和垂直活动次数均降低(P均<0.05);与诱导组和生理盐水组比较,CO干预组大鼠糖水偏好率、水平活动格数和垂直活动次数均升高(P均<0.05);CO干预组、生理盐水组、诱导组及正常组大鼠海马组织CA1区神经元存活率分别为61.7%±9.0%、50.8%±9.3%、50.4%±8.2%、72.1%±12.1%,与正常组比较,诱导组、生理盐水组和CO干预组海马组织CA1区神经元存活率降低(P均<0.05),与诱导组、生理盐水组比较,CO干预组海马组织CA1区神经元存活率升高(P均<0.05).与正常组比较,诱导组、生理盐水组和CO干预组大鼠脑组织中IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-αmRNA相对表达量均升高(P均<0.05);与诱导组和生理盐水组比较,CO干预组大鼠脑组织中IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-αmRNA相对表达量均降低(P均<0.05).结果抑郁诱导过程中腹腔注射CORM-2诱导大鼠的抑郁症状改善,海马组织CA1区神经元活力更高,脑组织炎性因子表达降低.CORM-2可通过减少大鼠海马组织神经元损伤,降低脑组织IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-αmRNA表达等途径改善抑郁诱导大鼠的抑郁症状.

面两亲性分子改造的铂类脂质体的分泌性磷脂酶A2响应性和体外抗肿瘤活性

铂类脂质体在肿瘤部位的定点药物释放是其发挥疗效的关键,本研究以二棕榈酰磷脂酰胆碱和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2k两种磷脂为基础,构建带有面两亲性分子石胆酸(lithocholic acid,LCA)或3-酮石胆酸(3-keto lithocholic acid,kLCA)的新型脂质体(LCA-Lip,kLCA-Lip),测试其对肿瘤分泌性磷脂酶A(secretory phospholipase A,sPLA)的响应性。采用薄膜水化-挤出法制备脂质体,对所制备脂质体进行理化性质表征,通过酶刺激脂质体释放荧光素CF实验研究其酶响应性,并通过体外毒性实验研究其抑制肿瘤细胞增殖的活性。结果表明:所制备的面两亲分子改造的奥沙利铂脂质体平均粒径约为100 nm,且分散均匀(PDI <0.11),相比于不含面两亲性分子的脂质体(C-Lip),包封率和载药量没有显著性差异;与不加胎牛血清(FBS)的孵育条件相比,加入10%,50%的FBS没有显著性地增加奥沙利铂从脂质体的泄漏率。体外荧光素CF释放特性实验结果表明,相比C-Lip脂质体,LCA-Lip和kLCA-Lip脂质体对Colo205结肠癌细胞分泌的sPLA响应度更高,在酶的作用下LCA-Lip和kLCA-Lip在24 h释放约70%的荧光素CF,而C-Lip释放率仅约20%;体外抗肿瘤活性结果表明,奥沙利铂LCA-Lip和奥沙利铂kLCA-Lip对高表达sPLA的Colo205细胞增殖的抑制效果明显高于奥沙利铂C-Lip。本研究表明,LCA或者3-kLCA面两亲性分子可提高脂质体对肿瘤细胞分泌的sPLA的响应性,为未来开发可应用于临床,具有定点释药功能的铂类脂质体提供了新的思路。