一氧化碳释放分子-2对小鼠急性肝功能衰竭保护作用的实验研究

目的探讨一氧化碳释放分子-2对小鼠急性肝功能衰竭(ALF)的保护作用及机制。方法雄性C57BL/6小鼠30只随机分为对照组、模型组和保护组,每组10只。通过一次性腹腔注射脂多糖/D-氨基半乳糖(LPS/D-GalN)构建小鼠ALF的动物模型,CORM-2于造模前30 min行尾静脉注射,造模后6 h分别留取血清、肝组织标本。生化分析仪检测血清中ALT、AST水平,HE观察肝脏病理改变,酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中TNF-α和IL-6的水平,反转录酶-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肝组织中TNF-α和IL-6 mRNA的表达。结果保护组小鼠血清ALT[(1274.60±157.24)U/L比(3499.00±136.19)U/L]和AST[(1151.50±244.58)U/L比(4079.50±481.11)U/L]水平均明显低于模型组(均t1=33.81,t2=17.16,P<0.05);与模型组比较,保护组肝组织炎性细胞浸润明显减少,肝细胞坏死程度明显减轻[(0.14±0.05)比(0.37±0.05),t=10.29,P<0.05];保护组小鼠血清和肝组织中TNF-α[(139.60±28.39)pg/mL比(447.34±128.17)pg/mL、(0.31±0.03)比(0.69±0.05)]和IL-6[(215.21±85.16)pg/mL比(1461.58±244.90)pg/mL、(0.33±0.03)比(0.72±0.05)]表达水平明显低于模型组(均t1=7.41,t2=20.61,t3=15.20,t4=21.15,P<0.05)。结论 CORM-2能够抑制小鼠ALF时的炎性反应,减轻肝脏病理损伤,其机制可能与抑制促炎细胞因子TNF-α和IL-6的释放有关。

外源性一氧化碳释放分子2对脓毒症大鼠肺炎症反应的抑制作用及分子机制

目的:观察外源性一氧化碳释放分子2(carbon monoxide-releasing molecules-2,CORM-2)干预对脓毒症大鼠肺部炎症反应的抑制作用并探讨其机制。方法:24只雄性SD大鼠随机分为假手术组、CLP组和CLP+CORM-2组。采用盲肠结扎穿孔(cecal ligation and puncture,CLP)法建立脓毒症模型,用CORM-2进行干预,苏木精-伊红(HE)染色观察肺组织病理变化;放射免疫法检测血浆中TNF-α和白细胞介素(IL-1β、IL-6)的变化;ELISA法检测肺组织细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的含量,蛋白质印迹法检测肺组织核因子-κB(NF-κB)蛋白的表达情况。结果:与假手术组相比,CLP模型组主要表现为肺组织微血管通透性增加,肺泡壁增厚,间质水肿,白细胞浸润,炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6的水平明显增加,ICAM-1含量明显增高,NF-κB表达水平明显增加(P均<0.01);CLP+CORM-2组肺间质轻度水肿,白细胞少量浸润,炎症因子的表达增加,ICAM-1含量增高,NF-κB表达水平增加(P均<0.05)。与CLP模型组比较,CLP+CORM-2组肺间质水肿程度减轻,白细胞浸润明显减少,炎症因子水平显著下降,ICAM-1含量下降,NF-κB表达水平明显下降(P均<0.05)。结论:CDRM-2可显著抑制脓毒症大鼠肺部炎症反应,其可能机制为CORM-2可有效地减弱NF-κB的表达。

外源性一氧化碳释放分子2对大鼠脊髓缺血再灌注损伤的保护作用研究

目的探讨外源性一氧化碳释放分子2(CORM2)对大鼠脊髓缺血再灌注损伤的保护作用与相关机制。方法将30只健康雄性Wistar大鼠分为实验组、对照组、空白组,每组各10只。实验组在造模前1h尾静脉注射外源性CORM2。实验组和对照组采用相同的方法造模。对照组造模后1h注射与实验组相同剂量的生理盐水。空白组仅完成开腹和关腹操作,并术后1h注射与实验组相同剂量的生理盐水。在术后不同时间进行神经行为学评分(Tarlov评分)、脊髓组织病理学检查和白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)检测。结果再灌注后不同时间点,实验组Tarlov评分均高于对照组,但实验组和对照组Tarlov评分均低于空白组(P<0.05)。缺血再灌注48h后,对照组脊髓组织标本可见损伤及坏死神经元,表现为细胞核固缩或溶解,细胞质中的尼氏体消失;空白组脊髓组织标本中可见正常神经元,表现为结构呈多角形,细胞质中可见尼氏体;实验组脊髓组织标本中的神经元坏死表现介于对照组和空白组之间。缺血再灌注48h,实验组与对照组IL-6、TNF-α表达水平均高于空白组,但实验组IL-6、TNF-α表达水平低于对照组(P<0.05)。结论外源性CORM2可抑制炎性因子的表达,对大鼠脊髓缺血再灌注损伤具有一定的保护作用。

一氧化碳释放分子对大鼠实验性牙周炎的影响

目的研究一氧化碳释放分子(CORM)对大鼠实验性牙周炎的影响。方法将42只健康雄性Wistar大鼠分为正常组(NL组)、牙周炎组(LO组)和一氧化碳干预组(CO组)。NL组不作任何处理;CO及LO组采用牙周丝线结扎法建立牙周炎实验模型;建模当天起CO组经腹腔注射CORM-2,每天10 mg·kg-1,连续10 d,LO组注射等体积生理盐水。分别于结扎3、7、10 d后自心脏抽取静脉血,用酶联免疫吸附测定法检测血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)的质量浓度。10 d后在体视显微镜下测量牙槽骨的吸收高度,并于光镜下观察牙周组织炎症细胞的浸润情况。结果丝线结扎10 d后,LO、CO组牙槽骨的吸收高度均明显大于NL组,而CO组明显小于LO组(P<0.05);LO、CO组炎症细胞浸润指数明显高于NL组,而CO组明显低于LO组(P<0.05)。在同一观察时期内,LO组TNF-α及IL-1β质量浓度均明显高于其他两组,而CO组虽高于NL组,但明显低于LO组(P<0.05)。结论 CORM-2能有效抑制大鼠实验性牙周炎的炎症细胞浸润和牙槽骨吸收。

一氧化碳对炎症环境下人牙龈成纤维细胞黏附分子表达影响的机制研究

目的研究一氧化碳对炎症环境下人牙龈成纤维细胞(HGF)黏附分子表达影响的分子机制。方法体外培养HGF,以50 ng.mL-1的TNF-α和10 ng.mL-1的IL-1β刺激加入或不加入500μmol.L-1一氧化碳释放分子-3(CORM-3)的HGF;分别在刺激10、20 min后收集部分细胞,用Western blot法检测丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)通路中细胞外调节蛋白激酶(ERK)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)和p38的磷酸化水平;在刺激4 h后用Western blot法检测核转录因子-κB(NF-κB)的核内表达;在部分实验中,HGF在TNF-α、IL-1β及CORM-3刺激前以鸟苷酸环化酶特异性抑制剂1H-[1,2,4]噁二唑[4,3-α]喹喔啉-1-酮(ODQ)预处理8 h,刺激24 h后用Western blot法检测细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的表达。结果在TNF-α和IL-1β刺激细胞10min后,MAPK通路中p38、ERK和JNK的磷酸化水平即有明显升高,CORM-3能够明显抑制p38的磷酸化,而对ERK和JNK的磷酸化水平无明显影响;4 h后,CORM-3可明显抑制NF-κB-p65的核内表达。ODQ不能改变CORM-3对TNF-α和IL-1β共同刺激下ICAM-1表达水平的影响,说明CORM-3的作用并非通过鸟苷酸环化酶系统实现。结论一氧化碳对炎症环境下HGF黏附分子表达的抑制作用可能是通过对NF-κB的活性抑制和对MAPK p38磷酸化水平的抑制作用来实现的。

胰岛素释放试验和胰岛素样生长因子-Ⅰ检测在2型糖尿病诊断和治疗中的应用

目的:探讨胰岛素释放试验(IRT)及胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)水平检测在2型糖尿病(T2DM)诊断和治疗中的价值,阐明两者之间的关系。方法:选择T2DM患者138例,依据空腹胰岛素水平分为T2DMA类(空腹胰岛素值低于正常,餐后释放反应低、峰时延迟)59例,T2DM B类(空腹胰岛素值正常或高于正常值,餐后释放反应高、峰时延迟)79例,另选43例健康体检者作为健康对照组。检测患者服药(口服25%葡萄糖溶液300 mL)后不同时间血糖、胰岛素及空腹IGF-Ⅰ水平。结果:T2DM A类患者空腹胰岛素水平低,服药后与同时间对照组比较胰岛素水平降低(P<0.05),服药后胰岛素峰值也较低(P<0.05),高峰值后延30～60 min,180 min仍保持较高值(P<0.05),其IGF-Ⅰ低于对照组和T2DM B类患者(P<0.05);T2DM B类患者空腹胰岛素值高于正常对照组,服药后高峰出现较晚,后延60～120 min,峰值与对照组接近(P>0.05),180 min时仍保持较高值,其IGF-Ⅰ高于对照组和T2DM A类患者(P<0.05)。结论:IRT及IGF-Ⅰ能较好地反映人体内降糖途径的功能状况,两者结合分析对于T2DM的诊断和治疗有重要的应用价值。

血清sST2、Caspase-3、HSP70与ACMP患者病情和迟发性脑病的关系

目的探讨血清可溶性致癌抑制因子2(sST2)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、热休克蛋白70(HSP70)与急性一氧化碳中毒(ACMP)患者病情和迟发性脑病(DEACMP)的关系。方法选取2020年10月至2022年1月盘锦市中心医院收治的110例ACMP患者作为ACMP组,根据一氧化碳中毒程度分为轻度组、中度组、重度组;另选取同期52例体检健康志愿者作为对照组。随访6个月后,根据ACMP患者是否发生DEACMP分为DEACMP组和非DEACMP组。收集ACMP患者临床资料,采用酶联免疫吸附试验检测血清sST2、Caspase-3、HSP70水平。采用多因素Logistic回归分析ACMP患者发生DEACMP的影响因素,应用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清sST2、Caspase-3、HSP70对ACMP患者发生DEACMP的诊断效能。结果ACMP组血清sST2、Caspase-3、HSP70水平均高于对照组(P<0.05)。重度组血清sST2、Caspase-3、HSP70水平高于中度组、轻度组(P<0.05),中度组血清sST2、Caspase-3、HSP70水平高于轻度组(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,年龄增加、高血压、意识障碍时间>48 h、血CO暴露时间延长、血碳氧血红蛋白(COHb)饱和度升高及血清sST2、Caspase-3、HSP70水平升高是ACMP患者发生DEACMP的独立危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析显示,血清sST2、Caspase-3、HSP70联合检测诊断ACMP患者发生DEACMP的AUC为0.913,大于sST2、Caspase-3、HSP70单项检测诊断ACMP患者发生DEACMP的AUC(分别为0.783、0.788、0.785),差异有统计学意义(P<0.05)。结论ACMP患者血清sST2、Caspase-3、HSP70水平升高,与中毒程度和DEACMP发生有关,血清sST2、Caspase-3、HSP70水平联合检测诊断ACMP患者发生DEACMP的价值较高。

抑郁诱导过程中腹腔注射CORM-2大鼠的抑郁症状、海马神经元活性、脑组织炎性因子基因表达观察

目的目的观察抑郁诱导过程中,腹腔注射一氧化碳释放分子2(CORM-2)对诱导大鼠的抑郁症状、海马神经元活性及脑组织炎性因子白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、IL-8、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达变化的影响,并探讨其可能作用机制.方法SPF级健康雄性SD大鼠48只,随机分为CO干预组、生理盐水组、诱导组、正常组,每组12只.CO干预组、生理盐水组、诱导组大鼠每天选择禁食、45°笼倾斜、冰水游泳、束缚活动等慢性刺激中的1~2种,连续进行抑郁诱导21 d诱导.CO干预组、生理盐水组分别在诱导前1天腹腔注射CORM-2及生理盐水10 mg/kg,后每7天腹腔注射1次,至诱导第21天共注射3次.正常组大鼠饲养于正常标准条件下不作任何处理.分别于诱导前、诱导第21天观察各组大鼠一般情况(体质量、食量、饮水量),诱导第21天采用糖水偏好实验评估各组大鼠快感缺失程度,旷场实验观察大鼠行为能力.诱导第21天各组随机选取5只大鼠,处死后取脑组织海马组织,尼氏染色后观察海马组织CA1区神经元活性.诱导第21天时取各组剩余大鼠,处死后取脑组织(包含海马组织),实时荧光定量PCR法检测脑组织IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-αmRNA.结果与正常组比较,诱导组、生理盐水组和CO干预组大鼠体质量、食量和饮水量均降低(P均<0.05);与诱导组和生理盐水组比较,CO干预组大鼠体质量、食量和饮水量均增加P均<0.05).与正常组比较,诱导组、生理盐水组和CO干预组大鼠糖水偏好率、水平活动格数和垂直活动次数均降低(P均<0.05);与诱导组和生理盐水组比较,CO干预组大鼠糖水偏好率、水平活动格数和垂直活动次数均升高(P均<0.05);CO干预组、生理盐水组、诱导组及正常组大鼠海马组织CA1区神经元存活率分别为61.7%±9.0%、50.8%±9.3%、50.4%±8.2%、72.1%±12.1%,与正常组比较,诱导组、生理盐水组和CO干预组海马组织CA1区神经元存活率降低(P均<0.05),与诱导组、生理盐水组比较,CO干预组海马组织CA1区神经元存活率升高(P均<0.05).与正常组比较,诱导组、生理盐水组和CO干预组大鼠脑组织中IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-αmRNA相对表达量均升高(P均<0.05);与诱导组和生理盐水组比较,CO干预组大鼠脑组织中IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-αmRNA相对表达量均降低(P均<0.05).结果抑郁诱导过程中腹腔注射CORM-2诱导大鼠的抑郁症状改善,海马组织CA1区神经元活力更高,脑组织炎性因子表达降低.CORM-2可通过减少大鼠海马组织神经元损伤,降低脑组织IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-αmRNA表达等途径改善抑郁诱导大鼠的抑郁症状.

外源性抑炎因子GHRP-2对脓毒性AKI的干预作用

目的研究外源性抑炎因子生长激素释放多肽-2(GHRP-2)对脓毒性急性肾损伤(AKI)的干预作用。方法选取SD大鼠80只,以牛磺胆酸钠胰胆管注射法建立重症急性胰腺炎(SAP)大鼠为脓毒症模型,将大鼠随机分为2组各40只,分别为对照组和干预组。对照组腹腔内注射生理盐水,干预组腹腔内注射GHRP-2。观察两组大鼠血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)以及肾组织丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)水平变化。结果给药后0 h两组大鼠血清Cr、BUN水平及肾组织MDA、SOD水平差异均无统计学意义(P>0.05);给药后6、12及24 h干预组大鼠血清Cr、BUN水平明显低于对照组(P<0.05),肾组织MDA水平低于对照组(P<0.05),肾组织SOD水平高于对照组(P<0.05)。结论 GHRP-2对脓毒性AKI大鼠可降低血清Cr、BUN水平,增强肾组织SOD活性,降低肾组织MDA水平,对肾脏具有保护作用。

一氧化碳释放分子-2对复苏后心功能的影响

目的探讨一氧化碳释放分子-2（CORM-2）对大鼠复苏后心功能不全可能的保护机制。方法建立致颤法建立大鼠心肺复苏模型，健康雄性SD大鼠随机（随机数字法）分为模型（Control）组、CORM-2组、无活性CORM-2（iCORM-2）组和假手术（Sham）组，复苏成功后分别静脉注射等体积（1mL）0．2％DMSO溶液、50μmol／kgCORM-2、50μmol／kgiCORM-2及0．2％DMSO溶液。复苏后12h心脏彩超测量射血分数（EF）和心肌功能指数（MPI）评估心功能，Clark氧电极测定心肌线粒体呼吸，Western blot检测心肌胞浆及线粒体蛋白细胞色素c（cytc）及caspase-3表达。组间比较采用方差分析。结果与Control组比较，复苏后12hCORM-2组EF增高，MPI降低，线粒体Ⅲ态呼吸速率、呼吸控制率（RCR）增高，胞质caspase．3及胞质／线粒体cytc比例降低（P〈0．05）。iCORM-2组上述指标与Control组比较，组间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论CORM-2可能通过释放CO，抑制心肌线粒体途径细胞凋亡改善线粒体呼吸功能及复苏后心功能不全。

一氧化碳释放分子-2对脓毒症大鼠心肌功能障碍的影响

目的探讨一氧化碳释放分子-2(CORM-2)对脓毒症大鼠心肌功能障碍的保护作用。方法将140只健康雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组(Sham组)、模型组、CORM-2预处理组、灭活型一氧化碳释放分子-2(iCORM-2)预处理组、二甲基亚砜(DMSO)对照组5组,每组28只。腹腔注射10 mg/kg脂多糖(LPS)建立大鼠脓毒症模型;Sham组腹腔注射等量生理盐水(NS)。CORM-2和iCORM-2预处理组分别于注射LPS前1 h腹腔注射8 mg/kg CORM-2或iCORM-2,DMSO对照组腹腔注射等量DMSO;Sham组和模型组不给予其他处理。各组分别抽取20只大鼠观察10 d存活率。剩余8只大鼠于制模后12 h行超声心动图检查,并计算左室射血分数(LVEF)和左室缩短分数(LVFS);取下腔静脉血,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清心肌肌钙蛋白I(cTnI)和脑钠肽(BNP)水平;之后处死大鼠取心肌组织,观察心肌病理形态学和超微结构改变。结果①生存情况:Sham组大鼠全部存活;与Sham组比较,模型组、CORM-2预处理组、iCORM-2预处理组和DMSO对照组大鼠10 d存活率均明显降低〔10%(2/20)、70%(14/20)、25%(5/20)、15%(3/20)比100%(20/20),均P<0.01〕;但CORM-2预处理组10 d存活率明显高于模型组、iCORM-2预处理组和DMSO对照组(均P<0.01)。②心功能:与Sham组比较,模型组、CORM-2预处理组、iCORM-2预处理组、DMSO对照组大鼠LVEF、LVFS均明显降低,且超声心动图提示左心室扩张明显,存在心肌功能障碍;但CORM-2预处理组大鼠LVEF、LVFS均明显高于模型组、iCORM-2预处理组和DMSO对照组〔LVEF:0.760±0.029比0.634±0.021、0.629±0.066、0.673±0.023;LVFS:(39.32±2.38)%比(29.75±1.52)%、(29.61±4.15)%、(32.43±1.66)%,均P<0.05〕,超声心动图提示CORM-2预处理后脓毒症大鼠左心室扩张程度明显减轻。③心肌损伤标志物:与Sham组比较,模型组、CORM-2和iCORM-2预处理组、DMSO对照组大鼠血清cTnI、BNP水平均明显升高;但CORM-2预处理组cTnI、BNP水平均较模型组、iCORM-2预处理组、DMSO对照组明显降低〔cTnI(ng/L):3283.54±803.50比6449.18±1105.10、5919.21±1068.27、6349.80±1153.08;BNP(ng/L):3456.62±905.85比6070.18±1287.62、5581.13±1161.17、5974.89±988.89,均P<0.05〕。④心肌组织病理学观察:模型组、iCORM-2预处理组、DMSO对照组光镜下显示大鼠心肌组织病理形态损伤严重,透射电镜下显示线粒体肿胀,部分出现空泡状改变;CORM-2预处理组心肌病理形态学及超微结构完整性明显优于脓毒症其余各组。结论CORM-2可改善脓毒症大鼠心肌功能障碍,提高大鼠存活率,尤其可保护脓毒症心肌线粒体完整。

筋脉通胶囊通过增强背根神经节Nrf2和HO-1的表达改善糖尿病大鼠的周围神经痛

目的观察中药筋脉通胶囊对链尿佐菌素(STZ)诱导的糖尿病(DM)大鼠背根神经节(DRG)的核因子E2相关因子2(Nrf2)和血红素加氧酶-1(HO-1)的表达以及血浆一氧化碳(CO)含量的影响。方法腹腔内注射STZ诱导建立DM大鼠模型,随机分为模型组、筋脉通小、中和大剂量组及硫辛酸组,并设对照组。成模后每天1次灌胃给药,持续12周。电子Von Frey仪检测机械痛阈值,免疫组化法及Rt-PCR检测DRG的Nrf2和HO-1蛋白及mRNA表达,并检测血浆一氧化碳血红蛋白(COHb)含量。结果与对照组相比,糖尿病大鼠的机械痛阈值、血浆COHb含量以及DRG的Nrf2和HO-1蛋白及mRNA表达水平均明显下降(P<0.01);各治疗组的上述指标均显著回升(P<0.01或P<0.05)。在提高DRG的HO-1蛋白表达上,筋脉通中剂量组疗效显著优于硫辛酸组(P<0.05)。结论筋脉通胶囊可通过增强DRG的Nrf2、HO-1和CO表达来改善糖尿病大鼠的周围神经痛。

外源性一氧化碳释放分子2对脓毒症时Janus激酶/信号转导和转录激活子通路活化的抑制作用

目的 了解外源性一氧化碳释放分子2（CORM2）对脓毒症时Janus激酶/信号转导和转录激活子（JAK/STAT）信号通路活化的抑制作用.方法 将RAW264.7细胞分为正常对照组、LPS（10 μg/mL LPS,浓度下同）组、LPS＋无活性CORM-2组、LPS＋小剂量CORM-2（50 μmol/LCORM-2）组、LPS＋大剂量CORM-2（100μmol/L CORM-2）组,ELISA法检测细胞上清液中TNF-α的水平及蛋白质印迹法检测JAK1、JAK3分子磷酸化水平.另将35只雄性BALB/c小鼠按随机数字表法分为正常对照组、盲肠结扎和穿孔术（CLP）组、CLP＋无活性CORM-2（8.0 mg/Kg）组和CLP＋CORM-2（8.0 mg/kg）组.CLP＋CORM-2组除伤后使用CORM-2外,其他处理同CLP组.于伤后24 h按上述方法检测小鼠血浆TNF-α、IL-1β的表达水平以及肝组织JAK1、JAK3分子磷酸化水平.对数据行t检验.结果 与正常对照组[（1.9±0.3）pg/mL]比较,LPS组细胞的TNF-α水平明显升高[（8.2±2.7）pg/mL,t=2.844,P〈0.01],磷酸化JAK1、JAK3蛋白水平也升高;2种剂量LPS＋CORM-2组细胞的TNF-α,水平分别为（5.7±1.4）、（3.2±0.9）pg/mL,较LPS组明显下降（t值分别为2.104、2.363,P值均小于0.05）,JAK1、JAK3分子的磷酸化水平呈浓度依赖性下降.与正常对照组比较,CLP组血浆TNF-α、IL-1β水平明显升高（t值分别为2.916、2.796,P值均小于0.01）,小鼠肝组织JAK1、JAK3分子的磷酸化水平亦明显升高.CLP＋CORM-2组TNF-α、IL-1β血浆水平显著降低（t值分别为2.115、2.398,P值均小于0.05）,肝组织JAK1、JAK3蛋白的磷酸化得到有效抑制.结论 CORM-2能明显抑制JAK分子磷酸化,继而抑制JAK/STAT信号通路的活化,减少下游相关细胞因子的表达,有效防止严重感染时炎症反应的级联反应.

不同浓度一氧化碳释放分子-3对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

目的探讨不同浓度一氧化碳释放分子-3(CORM-3)对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化的影响。方法实验分A、B两部分,各部分均包括5组,A部分:矿化组,100、200、400μmol/L CORM-3组,对照组;B部分:矿化组,100、200、400μmol/L CORM-3-矿化组,对照组。采用Real-time PCR法和Western blotting法分别检测成骨相关基因Runx2和OPNmRNA与蛋白的表达,茜素红染色检测成骨能力。采用SPSS 19.0软件对数据进行统计学分析。结果 100、200μmol/L CORM-3可促进BMSCs增殖,差异有统计学意义(P=0.034,P<0.001);单纯CORM-3对BMSCs成骨分化无影响;BMSCs经200、400μmol/L CORM-3预处理后再行矿化诱导,7 d后大鼠BM SCs的Runx2和OPNmRNA表达增强,与矿化组比较差异有统计学意义(Runx2:P=0.005,P=0.006;OPN:P=0.010,P=0.028),其蛋白表达及21 d后的成骨能力较矿化组均明显增强,且200μmol/L CORM-3预处理的效果优于400μmol/L CORM-3。结论 CORM-3预处理可促进体外BMSCs成骨分化,200μmol/L为CORM-3用于实验的适宜浓度。

CORM-2对LPS诱导的血小板造血系细胞特异性蛋白-1磷酸化调节的研究

目的:探讨脓毒症一氧化碳释放分子2(CORM-2)对脂多糖(LPS)诱导的造血系细胞特异性蛋白-1(HS1)磷酸化调节方法。方法:收集健康人血小板,使用LPS体外刺激血小板,同时加入CORM-2观察血小板黏附、聚集、释放功能的变化,并同时检测磷酸化HS1(p-HS1)蛋白水平的改变。结果:显示CORM-2对血小板的黏附、聚集和释放功能具有抑制作用,且差异具有统计意义(P<0.05),CORM-2对HS1磷酸化有较强的抑制作用。结论:CORM-2与血小板功能以及血小板HS1的活化密切相关,且有望成为脓毒症治疗的靶点。

一氧化碳释放分子-2对乳腺肿瘤大鼠肠屏障损伤的影响

目的观察一氧化碳释放分子-2(CORM-2)对乳腺肿瘤大鼠肠屏障损伤的影响。方法选取60只雌性SD大鼠为研究对象,采用随机数字表法分为假手术组、乳腺肿瘤组、CORM-2组、灭活型CORM-2(iCORM-2)组,各15只。CORM-2组和iCORM-2组均在制作乳腺肿瘤模型1 h前腹腔注射5 mg/kg干预药物。制作模型或术后24 h留取回肠组织,蛋白质印迹法(Western blot)检测回肠组织的咬合蛋白(Occludin)、紧密连接蛋白-1(ZO-1)、闭合蛋白(Claudin3)表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血D-乳酸、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、肠型脂肪酸结合蛋白(I-FABP)、二胺氧化酶(DAO)、髓过氧化物酶(MPO)水平,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测小肠黏膜Rho激酶-1 mRNA、ROCK-2 mRNA。分析CORM-2对乳腺肿瘤大鼠肠屏障损伤的影响,应用SPSS 22.0统计软件分析。结果乳腺肿瘤组、iCORM-2组大鼠的Occludin(0.07±0.01、0.13±0.02)、ZO-1(0.09±0.03、0.12±0.02)、Claudin3(0.21±0.03、0.24±0.06)蛋白表达均低于假手术组(0.35±0.04、0.49±0.05、0.64±0.07)和CORM-2组](0.33±0.03、0.23±0.04、0.42±0.05),CORM-2组的ZO-1、Claudin3蛋白表达水平低于假手术组,差异有统计学意义(t=2.389、2.186、2.801,P<0.05)。乳腺肿瘤组、iCORM-2组大鼠的血D-乳酸[(138.28±29.37)、(135.78±20.93)μg/L]、TNF-α[(354.32±23.39、314.43±21.17)ng/L]、I-FABP(585.63±119.34、548.37±132.38)水平均高于假手术组和CORM-2组(65.30±23.19、75.29±32.11),(65.48±10.92、103.28±19.92),(230.19±38.27、306.28±19.22),CORM-2组大鼠的血D-乳酸、TNF-α、I-FABP、MPO水平均高于假手术组,差异有统计学意义(t=2.549、2.495、2.858,P<0.05)。4组大鼠的血DAO水平比较差异无统计学意义(t=2.252,P>0.05)。乳腺肿瘤组、CORM-2、iCORM-2组大鼠小肠黏膜Rho激酶-1 mRNA(1.03±0.04、3.27±0.07、2.21±0.05)、ROCK-2 mRNA(0.78±0.08、2.24±0.12、2.17±0.17)均高于假手术组(2.85±0.08、2.36±0.08),CORM-2组大鼠的小肠黏膜Rho激酶-1 mRNA低于乳腺肿瘤组和iCORM-2组,差异有统计学意义(F=7.831、8.427、4.997,P<0.05)。乳腺肿瘤组、CORM-2、iCORM-2组大鼠的小肠黏膜ROCK-2 mRNA比较差异无统计学意义(F=1.605,P>0.05)。结论CORM-2可缓解乳腺肿瘤大鼠的肠屏障损伤,抑制炎性介质释放,增强肠上皮细胞间的紧密联系,增大肠黏膜通透性,保护肠屏障。

早发型重度子痫前期患者胎盘组织M-CSF、CRH和HO-2表达的研究

目的研究早发型重度子痫前期患者胎盘组织中巨噬细胞集落刺激因子（MCSF）、促肾上腺皮质激素释放激素（CRH）、血红素氧化酶-2（HO-2）的表达,探讨它们在早发型重度子痫前期发病机制中的作用。方法整群选择选自2013年9月—2014年8月在郑州大学第三附属医院住院的孕妇73例,年龄22~37岁,孕周32~37周。早发型重度子痫前期患者25例,晚发型重度子痫前期患者23例,正常妊娠对照组25例进行实验对照研究,应用免疫组化方法研究M-CSF、CRH、HO-2的表达情况。结果 1三期组孕妇之间年龄、终止妊娠孕周比较,差异均无统计学意义（P〉0.05）（见表1）。2与正常妊娠组比较,早发型及晚发型重度子痫前期组M-CSF表达水平均明显升高;早发型组M-CSF表达水平明显高于晚发型组。3与正常妊娠组比较,早发型及晚发型组CRH表达水平均明显升高;早发型组CRH表达水平明显高于晚发型组。4与正常妊娠组比较,早发型及晚发型组HO-2表达水平均明显降低;早发型组HO-2表达水平低于晚发型组,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论胎盘中MCSF、CRH的表达增加和HO-2表达降低可能与早发型重度子痫前期的发病有关。

解郁1号对抑郁症患者血清CRF、IL-2水平的影响

目的探讨中药解郁1号对抑郁症患者血清促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)、白细胞介素-2(IL-2)水平的影响。方法将200例抑郁症患者按照随机数字表法随机分为中药组和西药组,中药组服用中药解郁1号,600 g/d,连续服用6周;西药组口服氟西汀,20 mg/d,连续服用6周。采用放射免疫法检测两组患者服药前后血清CRF、IL-2水平并进行比较分析。结果治疗前两组血清CRF、IL-2水平相比,差异无统计学意义(P>0.05)。经6周治疗后,两组血清CRF水平呈下降趋势,IL-2水平呈升高趋势,与治疗前比较,差异均有统计学意义(P<0.01);中药组血清CRF水平低于西药组,差异有统计学意义(P<0.01);两组血清IL-2差异无统计学意义(P>0.05)。结论解郁1号抗抑郁作用机制可能与下调血清CRF、上调血清IL-2水平有关。

依达拉奉对急性一氧化碳中毒大鼠脑组织超微结构及抗氧化因子表达的影响

目的 观察急性一氧化碳（CO）中毒后大鼠脑组织超微结构及血红素加氧酶-1（HO-1）和核转录因子红细胞2相关因子-2（NRF-2）表达的变化,探讨依达拉奉对中毒后脑损伤的神经保护作用.方法 按文献建立急性CO中毒的动物模型,用透视电镜观察CO中毒后大鼠脑组织超微结构变化,TUNEL染色法检测大鼠脑组织细胞凋亡.免疫组化和免疫荧光双标法检测依达拉奉给药前后大鼠脑组织HO-1和NRF-2的表达变化.结果 CO中毒可引起大鼠脑组织超微结构改变,主要表现为：细胞核内染色质凝聚固缩,细胞质溶解,胞浆内细胞器溶解消失.依达拉奉能明显改善CO中毒后大鼠脑组织超微结构损伤.CO中毒可诱发神经细胞凋亡.随着中毒时间的延长,CO中毒组大鼠脑组织凋亡细胞逐渐增多,但皮质区和纹状体区凋亡细胞数比较差异无统计学意义（P＞0.05）.依达拉奉给药后大鼠脑组织凋亡细胞明显减少,A值也相对降低.HO-1和NRF-2蛋白在正常大鼠脑组织中可见少量表达.CO中毒后两者的表达水平逐渐增加,在皮质区的表达略高于纹状体区,依达拉奉给药后这2种蛋白的表达水平发生变化.结论 依达拉奉可改善中毒后脑组织超微结构损伤,通过抑制神经细胞凋亡,上调HO-1/NRF-2表达,进而对急性CO中毒后脑损伤发挥重要的神经保护作用.

一氧化碳释放分子对重症急性胰腺炎肺损伤保护作用的实验研究

目的探讨一氧化碳释放分子（CORM-2）对大鼠重症急性胰腺炎（SAP）肺损伤的保护作用及机制。方法30只雄性Wistar大鼠随机分为3组（n=10）：sham组、SAP组、CORM2组。以3．5％牛磺胆酸钠逆行注射胰胆管的方法制作SAP模型。CORM-2组于SAP造模0．5h后经阴茎背动脉注射CORM-2（8mg／kg）。各组均于造模6h后取材，测定血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量；采用RT—PCR法检测肺组织细胞因子诱导的中性粒细胞趋化因子（CINC）及细胞间黏附分子-1（ICAM-1）mRNA的表达；同时检测肺组织髓过氧化物酶（MPO）活性、湿/于重比及对肺脏进行病理学评分。结果与SAP组相比，CORM-2组血清TNF—α水平、肺组织病理损伤程度、湿／干重比、MPO活性、CINC及ICAM-1 mRNA的表达均显著降低（P〈0．05）。结论应用CORM-2能够降低血清TNF—α水平、下调肺组织CINC及ICAM-1 mRNA的表达，进而有效地抑制肺组织中性粒细胞的大量浸润，从而对SAP肺损伤起到明显的保护作用。