微泡造影剂结合超声介导一氧化氮合成酶基因转染血管平滑肌细胞

目的探讨微泡造影剂及超声辐照介导内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)基因转染体外培养大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)的可行性。方法实验分为A、B、C、D、E 5组,分别为空白对照组、单纯质粒浸泡组、质粒+微泡造影剂组、质粒+超声辐照组、质粒+超声辐照+造影剂组。用重组真核表达载体pcDNA3.1-eNOS经微泡造影剂及超声辐照介导转染体外培养的大鼠VSMCs,辐照条件为超声探头频率为10MHz,机械指数为1.9,辐照时间为10min,重组真核细胞表达载体pcDNA3.1-eNOS 5μg/mL。辐照48h后,采用RT-PCR、Western blot及免疫组化检测VSMCs内eNOSmRNA和蛋白的表达。结果 RT-PCR检测E组eNOS mRNA的表达最显著,积分吸光度(IA)比值为(91.11±3.41)%,B、C、D组也有少量表达,IA比值分别为(26.10±1.32)%、(31.42±2.43)%、(35.05±2.25)%,与E组相比均P<0.05。蛋白印迹分析eNOS蛋白表达,A组有极少量表达,B、C、D组也有少量表达,IA比值分别为(22.12±1.33)%、(25.42±2.41)%、(33.11±3.11)%,而E组表达最明显,IA比值为(84.22±9.22)%,与各组相比均P<0.05。结论超声辐照结合微泡造影剂能显著提高eNOS基因在VSMCs的转染效率,提高细胞内一氧化氮合成酶的表达。