人肝细胞中甲基硫代砷酸的表征及其代谢过程的推测

利用高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱(HPLC-ICP-MS)联用技术对染砷后Chang肝细胞中的砷代谢产物进行分析。借助合成标准,采用标准加入法,表征出肝细胞中一种未知砷代谢产物甲基硫代砷酸(MMTA)。定量分析显示,MMTA含量随染砷浓度升高呈上升趋势。采用质量平衡分析法对双氧水处理前后的染砷细胞样品进行研究。结果显示,除小分子砷代谢产物外,细胞中部分砷代谢产物以大分子形态存在,推测其为砷蛋白类物质。由于MMTA系首次在人体肝细胞中发现,本研究结合实验现象和相关文献推测该物质系细胞代谢产物,并且其代谢途径与二甲基硫代砷酸相似,是以细胞内与其对应的一甲基亚砷酸为代谢起点。

DMPS对砷中毒患者尿砷排泄量及其种类影响的研究

目的探讨口服驱砷剂2,3-二巯基-1-丙基磺酸钠(DMPS)对砷中毒患者尿砷排泄量及其种类的影响。方法用激发实验原理设计实验方案,盲法测定样品。高效液相色谱-氢化物发生-原子吸收光谱法(HPLC-HG-AAS)分离并测定尿中无机砷(iAs)、一甲基砷酸(MMA)和二甲基砷酸(DMA)3种形态砷的含量;尿液经消化后用氢化物发生-原子吸收光谱法(HG-AAS)测定尿中总砷。结果无论对照还是砷中毒患者,口服DMPS后尿中总砷、无机砷、MMA和DMA的排出量均显著增加(P<0.01)。服用DMPS后,2组尿中无机砷、MMA占尿总砷含量的百分比都较服药前明显增加(P<0.01),而DMA经尿的排出比例却明显下降(P<0.01)。DMPS促进经尿排泄有机砷类的能力在对照和砷中毒患者间差异无统计学意义(P>0.05),DMPS可使砷中毒患者比正常对照排出更多的无机砷(P<0.05)。结论 DMPS能够动员器官和组织中蓄积砷,增加经尿的排泄总量。所增加的尿砷排泄以无机砷和MMA为主。

液相色谱-原子荧光光谱法测定食用菌中的砷形态

经稀硝酸提取,采用配有氢气发生器装置的液相色谱-原子荧光光谱法(LC-AFS)测定食用菌中砷形态,在未开紫外消解的情况下,以Hamilton PRPX-100为色谱柱,磷酸氢二铵为流动相,梯度洗脱进行食用菌中的砷形态分析。亚砷酸根As(Ⅲ)、一甲基砷酸(MMA)、二甲基砷酸(DMA)、砷酸根As(Ⅴ)的检出限分别为0.2、0.2、0.1、0.25μg/L,在0~100μg/L范围内,线性相关系数均在0.999以上,三个浓度水平的加标回收率在80.2%~106%,不同浓度水平的RSD均小于5%。结果表明,所建方法操作简便,灵敏度高,准确性好,适用于食用菌中常见的四种砷形态的分析,尤其提高了无机砷测定的灵敏度,为食品安全提供有力支持。

基于高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法的大鼠口服纳米雄黄后体内砷形态分析

目的对大鼠口服雄黄与纳米雄黄后血清、肝、肾、脾中三价砷[As(III)]、五价砷[As(V)]、一甲基砷酸(MMA)、二甲基砷酸(DMA)4种砷形态进行定量分析,比较两组大鼠体内砷形态的差异。方法 SD大鼠分别ig给予800 mg/kg的雄黄与纳米雄黄,28 d后采集血清及各组织样本,经前处理后采用高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法(HPLC-ICP-MS)测定生物样本中砷形态含量并进行比较。结果 4种砷形态在大鼠血清和肾脏样本中均被检出,肝脏中检出了3种,脾脏中检出了2种;各砷形态在纳米雄黄组中的含量明显高于雄黄组。结论纳米化提高了雄黄的生物利用度,更多的砷被吸收进入体内并发生代谢转化,这可能导致纳米雄黄肝、肾等毒性增加。

高效液相色谱-氢化物发生-原子荧光光谱法测定尿中4种形态砷

目的建立高效液相色谱（HPLC）-氢化物发生（HG）-原子荧光光谱（AFS）联用测定人尿样中亚砷酸盐[As（Ⅲ）]、砷酸盐[As（V）]、一甲基砷酸（MMA）和二甲基砷酸（DMA）4种形态砷的方法。方法采用HPLC与HG—AFS联用法，经优化选择合适的色谱分离条件和HG—AFS的检测条件后，测定尿样中As（Ⅲ）、As（Ⅴ）、MMA和DMA。并采用本方法测定砷中毒患者排砷过程尿样中4种形态砷总和，与采用HG—AFS法测定的总砷水平进行比较。结果HPLC以浓度为30．0mmol／L磷酸二氢铵（pH值：6．0）为流动相（流速为1．2ml／min）；HG-AFS载流为体积分数为5．0％的盐酸，还原剂为质量分数为2．5％的硼氢化钾，灯主电流为75mA，负高压为330V，载气流量为600ml／min。本方法4种形态砷线性范围为5．00～100．00μg/L，相关系数为0．9987～0．9996，检出限为2．50～5．00μg/L，平均加标回收率为94．12％-106．10％，批间精密度实验的相对标准偏差为0．69％～5．67％；冻干人尿中砷形态成分标准物质中As（Ⅲ）、MMA和DMA测定结果中位数分别为11．24、62．51、14．47μg/L，均在标准值范围内；实际样品在4℃保存条件下，至少能够稳定7d。采用本方法测定砷中毒患者排砷过程中4种形态砷总和与采用HG—AFS法测定的总砷水平的相对偏差为-3．29％-0．35％。结论该方法前处理简便、快速，具有较好的准确度和精密度，可以对尿液样品中主要的4种形态砷进行准确的定量分析。

砷及其代谢产物对P21基因表达的影响

目的探讨砷及砷化物对人肺腺癌细胞系A549细胞、云南宣威肺腺癌细胞XWLC-05细胞、人乳腺癌细胞MDAMB-231细胞中的P21基因表达的影响。方法以亚砷酸钠、一甲基砷酸(MMA)、二甲基砷酸(DMA)处理A549细胞、XWLC-05细胞、MDA-MB-231细胞并以荧光定量聚合酶链式反应(qRTPCR)法检测P21mRNA的表达;以不同浓度的亚砷酸钠处理A549细胞、XWLC-05细胞、MDA-MB-231细胞并以qRTPCR法检测P21基因mRNA的表达。结果亚砷酸钠可诱导P21基因mRNA的表达,MMA、DMA不能诱导细胞中P21基因mRNA的表达;不同的亚砷酸浓度处理的细胞,可影响细胞中P21基因mRNA的表达。结论砷可影响细胞中P21基因的表达,并且与剂量存在一定的关系。

砷及其代谢产物对Foxo3 mRNA和Foxo3 circRNA基因表达的影响

目的探讨砷和一甲基砷酸(MMA)、二甲基砷酸(DMA)对A549细胞的Foxo3 mRNA和Foxo3 circRNA基因表达的影响。方法使用不同计量梯度NaAsO2、DMA、MMA处理A549细胞后用聚合酶链式反应(PCR)法检测Foxo3 mRNA和Foxo3 circRNA的表达。结果NaAsO2能够抑制Foxo3 mRNA和Foxo3 circRNA的表达,其表达量分别为0.499±0.047、0.470±0.045。DMA、MMA不能影响A549细胞中的Foxo3 mRNA和Foxo3 circRNA的表达,其中DMA处理组的Foxo3mRNA和Foxo3 circRNA的表达量为1.201±0.239、1.115±0.242;MMA处理组的Foxo3 mRNA和Foxo3 circRNA的表达量为1.220±0.182、1.165±0.170。Foxo3 mRNA和Foxo3 circRNA的表达水平在0(对照组)、10、20、30μmol/L的浓度范围内随着NaAsO2浓度的升高表达水平呈降低特征,和对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论砷可以抑制A549细胞中Foxo3 mRNA和Foxo3 circRNA的表达,存在剂量反应关系。而DMA、MMA不能影响A549细胞中的Foxo3 mRNA和Foxo3circRNA的表达。