International Journal of Infectious Diseases|丁型肝炎病毒在中国有无HIV-1感染的HBsAg阳性人群中的流行特点

丁型肝炎病毒(HDV)可加剧HBV感染进展,现有研究为全球范围内HDV患病率的变化提供了证据,但我国内地的相关数据很少。虽然HBV的流行率为7.18%,但HBsAg阳性个体的数量约为7 400万,阐明HDV在我国的流行病学十分重要。2023年12月,首都医科大学附属北京地坛医院张福杰教授团队的研究,阐明了HDV在我国有无HIV-1感染的HBsAg阳性人群中的传播特点,调查了HDV血清学和病毒学流行率、分子流行病学和高危因素,为临床策略和有效的HDV疫情防控提供关键数据。

洛那法尼对动物源丁型肝炎病毒作用的初步研究

研究洛那法尼(Lonafarnib,LNF)对动物源丁型肝炎病毒(Hepatitis D virus,HDV)的影响,将完善对动物源HDV的认识,为进一步探讨其潜在致病性和传播特点奠定基础。利用点突变的方法对人源HDV复制模型进行改造来模拟动物源HDV的关键结构特征,利用转染、抗生素筛选的方法构建模拟的动物源HDV复制细胞模型,蛋白质免疫印迹法和间接免疫荧光法检测人源HDV复制模型改造后的HDV复制与蛋白表达情况,实时荧光定量PCR检测LNF对动物源HDV复制的影响。结果表明,改造后的HDV复制模型仍能在体外高效复制,可用于模拟动物源HDV的关键特征。与未处理组相比,LNF处理人源HDV复制模型后导致了HDV RNA的积累,而LNF对改造后的HDV样病毒的复制水平无显著影响。通过上述研究发现人源HDV与动物源HDV在病毒的生命周期和药物的作用效果方面均存在较大差异。

慢性乙型肝炎患者中丁型肝炎病毒共感染的筛查与治疗研究进展

慢性乙型肝炎病毒(HBV)和丁型肝炎病毒(HDV)共感染对全球公共卫生构成重大威胁。HDV需要HBsAg蛋白质进入肝细胞,共感染通常是最严重的病毒性肝炎形式。共感染患者面临更高的肝硬化、肝功能失代偿和肝细胞癌风险,因此早期识别和诊断至关重要。HDV RNA阳性患者面临更高的肝相关并发症风险,且需要更复杂的治疗策略。提高HDV筛查覆盖率和接受度、制定综合治疗策略及加强政策制定者和公共卫生部门的参与,是应对HDV共感染的关键。本文探讨了HDV共感染的临床学意义、检测方法、治疗策略以及应对策略与政策建议,旨在为优化公共卫生政策提供科学依据。

大连地区献血者丁型肝炎病毒抗体的筛查

目的 了解丁型肝炎病毒在大连地区无偿献血人群中的流行情况。方法 挑选本实验室HBV筛查反应性剩余血浆标本,其确证结果需符合以下4种情况:1)HBsAg+&HBV DNA+;2)HBsAg+&HBV DNA-;3)HBsAg-&HBV DNA+;4)NAT-yield可疑。同时随机选取抗-HBc+或抗-HBs+的筛查合格血浆标本。所有标本进行HDV IgG初筛,结果为反应性者采用另1种HDV IgG试剂复测并检测HDV IgM。HDV IgG双试剂反应性者确证为HDV IgG+。结果 在1 344份血液筛查不合格标本(HBsAg+&HBV DNA+507份,HBsAg+&HBV DNA-33份,HBsAg-&HBV DNA+477份,可疑标本327份)和766份筛查合格标本(抗-HBc+397份、单独抗-HBs+369份)中未检出HDV抗体阳性标本。结论 大连地区献血前初筛合格的献血者HDV感染率极低。但对于HBV高流行地区,仍旧不能够忽视OBI合并感染HDV可能给血液安全带来的风险。

应用PCR快速制备乙型、丁型肝炎病毒诊断基因芯片探针

目的应用PCR技术扩增乙型、丁型肝炎病毒保守区域基因片段,并进行克隆、测序分析,制备联合诊断乙型、丁型肝炎病毒基因芯片探针。方法利用Oligo6.4软件分别针对乙型、丁型肝炎病毒基因保守区域设计PCR引物,纯化PCR扩增产物,扩增后的产物克隆至pMD18-T载体并进行快速鉴定,提取阳性克隆质粒进行测序分析及鉴定。结果获得多个乙型、丁型肝炎特异性基因片段。序列分析表明,所扩增的片段均属于乙型、丁型肝炎病毒特异基因。结论利用PCR扩增产物制备基因芯片探针是一种快速、简便的实用方法。

反义寡脱氧核苷酸抗丁型肝炎病毒的作用

在进行中国人ＨＤＶ核酶活性区ｃＤＮＡ克隆及序列分析，并构建含ＨＤＶ核酶质粒（ｐＨＤＶｒｚ２７７）的基础上，进行反义寡脱氧核苷酸抗ＨＤＶ作用的研究。设计合成了一条与核酶结构中起重要作用的７２１～７３５位核苷酸互补的１５聚反义寡脱氧核苷酸。用其中一条含Ｔ７启动子的一对引物，以ｐＨＤＶｒｚ２７７为模板扩增得到１３１ｂｐＨＤＶ核酶基因片段，再以此为模板用Ｔ７ＲＮＡ聚合酶进行体外转录，并在转录的同时加入反义寡脱氧核苷酸，观察其抑制核酶活性的作用。发现此条反义寡脱氧核苷酸能有效抑制转录的１１２ｎｔ核酶催化的自裂反应。动物实验亦初步观察到硫代反义寡脱氧核苷酸可阻断树 感染ＨＤＶ。本结果为反义寡脱氧核苷酸用于临床抗ＨＤＶ治疗奠定了一定基础。

中国河南株丁型肝炎病毒全基因组的cDNA克隆和序列分析

从我国河南－抗丁型肝炎病毒抗原（ａｎｔｉ－ＨＤＡｇ）及丁型肝炎病毒（ＨＤｖ）ＲＮＡ双阳性的ＨＢｓＡｇ携带者血清中提取ＲＮＡ，采用人工合成的引物进行逆转录和聚合酶链反应（ＰＣＲ），获得了贯穿ＨＤＶ全基因组的６个相互重叠的ｃＤＮＡ片段。经双脱氧末端终止法进行核苷酸序列分析，得到了长度为１６７４ｂｐ的我国人河南株ＨＤＶｃＤＮＡ全序列。计算机分析表明，该株与我国台湾株（ＨＤＶＩＡ型）、美国－１株（ＨＤＶＩＢ型）、日本－１株（ＨＤＶⅡ型）和秘鲁－１株（ＨＤＶⅢ型）的核苷酸同源性分别为的９４．３％、８６．８％、７５．４％和６６．３％，氨基酸序列的同源性分别为８９．７％、８５．１％、７１．９％和６４．６％，并在核苷酸和推导的ＨＤＡｇ氨基酸序列中分别发现了５个和２个集中保守的区域。这些区域均与ＨＤＶ的某些重要功能密切相关。

丁型肝炎病毒感染东方土拔鼠的实验研究

丁型肝炎病毒(HDV)原称Delta因子,是一种缺陷性RNA病毒。它的复制需依赖于乙型肝炎病毒(HBV)的辅助作用。由于HBV的体外细胞培养很难成功,故HDV的研究仅限于动物模型。Rizzetto等首先对黑猩猩进行HDV的实验感染并获成功。Summers等在东方土拨鼠(Marmota monax)中发现一种病毒,性质与HBV相似,称为土拨鼠肝炎病毒(Woodchuck Hepatitis Virus,WHV)。WHV可使土拨鼠患病毒性肝炎和肝细胞癌。Ponzetto等用慢性携带WHV的土拔鼠进行了HDV感染研究,发现WHV对HDV同样有辅助作用,故土拔鼠可作为研究人类肝炎和肝细胞癌的动物模型。目前,国内尚无HDV实验感染的报告。本文对HDV感染东方土拨鼠进行了实验研究,试图探讨土拔鼠丁型肝炎血清学及病理学改变,为提纯丁型肝炎病毒及其抗原提供实验材料。

中国丁型肝炎病毒四川株的抗原表达及其某些特征的研究

利用人工合成的丁型肝炎病毒(HDV)特异引物和PCR法,从本实验室克隆的含我国四川株HDV-cDNA抗原编码区的重组质粒(PGEM/HDC707和PGEM/HDC274)中,获得2个长度分别为653bp(位于1610-957)和220bp(位于1610-1390)的片段,经Klenow DNA聚合酶补平后,平端插入表达载体pBV220的P_RP_L.串连启动子下游的SmaⅠ位点,转化大肠杆菌DH5α。通过原位杂交和快提抗原,分别筛选到表达不同长度抗原的阳性克隆。由核苷酸推导,它们分别由214和74个氨基酸组成。SDS-PAGE和Western blot表明,大抗原的主要分子量为为29kD,另有24kD和17kD的小肽;小抗原是分子量为10kD的单一条带。RNA结合能力试验证明,大抗原具有结合RNA的特性,而小抗原没有这种特性。此外,大抗原还有结合Neo-RNA的活性,其结合机理及其与病毒复制的关系有待进一步研究。本研究证明,保留HDV抗原编码区近N端的57个氨基酸就具有抗原性。这种基因工程表达的丁肝病毒抗原具有很好的免疫原性,用它免疫豚鼠可产生抗HD抗体。中国株丁肝抗原的表达成功和抗体的制备对于发展我国丁肝诊断试剂,研究我国丁肝病毒特征均具有重要意义。

基因芯片技术检测丁型肝炎病毒的研究

目的制备检测丁型肝炎病毒(HDV) 基因芯片。方法针对HDV基因保守区域设计多对PCR引物。用芯片点样仪将PCR产物点到玻片上制成基因芯片。样品标记采用限制性显示技术,样品标记后进行杂交。结果运用PCR技术得到多个HDV特异性基因片段,序列分析表明,所扩增的片段均属于HDV特异基因。杂交结果显示,样品和HDV诊断基因芯片杂交的敏感性和特异性均佳。结论用基因芯片检测HDV具有敏感、高效、检测结果可靠的优点,有着较大的应用前景。

丁型肝炎病毒基因组核酶的反式剪切活性

目的观察丁型肝炎病毒2种基因组核酶(HDVgenomicribozyme,g.Rz)是否存在反式剪切活性。方法合成g.Rz74和g.Rz55的cDNA ,克隆入质粒pGEM 4Z ,体外转录获取核酶RNA ;同时从质粒pRz277B上转录出同源性底物RNA ,以α 32p UTP标志 ;再将核酶与底物按比例混合 ,在一定条件下观察是否出现剪切作用。结果启动反应30min后 ,可以观察到剪切产物 ,90min后剪切反应更加明显。结论 g.Rz74和g.Rz55均具有反式剪切活性。

中国人丁型肝炎病毒抗原编码区基因的cDNA克隆和序列分析

从我国四川一丁型肝炎病毒抗原(HDAg)、HDV RNA双阳性的HBsAg携带者血清中提取RNA,采用人工合成的引物进行4次逆转录和聚合酶链反应(PCR),获得了长度分别为707bp、414bp、876bp和274bp的4个HDV cDNA片段,并对其进行了克隆和序列分析。其抗原编码区核苷酸序列与美国(Makino)、意大利(Wang)、英国(Saldanha)和我国台湾株(Chao)等株比较同源性,分别为99.4％、92.1％、94.3％和91.4％,由它推导的氨基酸序列的同源性分别为99.1％、87.9％、88.2％和89.3％,并发现了4个集中保守的区域。

我国丁型肝炎病毒分子生物学和血清流行病学研究

本研究课题属国家“863”资助项目(863-102-14-3)获1995年卫生部科技成果二等奖。现将几年来我们研究的主要结果报告如下。丁型肝炎病毒是缺陷型单股负链RNA病毒。

比较不同中国株丁型肝炎病毒(HDV)重组抗原检测抗HDV抗体的差异

我国属于乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）感染高发区和丁型肝炎病毒（ＨＤＶ）感染低发区。为了弄清我国ＨＤＶ感染率低是否是由于我国存在不同血清型ＨＤＶ所致，我们在原核细胞上表达了我国ＨＤＶ基因１Ａ亚型株（河南株）和ＩＢ亚型株（四川株）抗原编码区基因，并应用这些基因重组丁肝抗原检测了四川、河南、内蒙三省（区）的２５２份ＨＢｓＡｇ阳性携带者血清，并与美国提供的重组丁肝抗原做了比较。结果证明，对以上三种抗原均阳性者８份，对河南与美国抗原双阳性者１份，对四川与美国抗原双阳性者１份，仅对美国抗原阳性者１份。河南和四川抗原的阳性检出率均为３６％（９／２５２），美国抗原的检出率为４．３７％，三种抗原之间的总符合率均为９９．２％，经统计处理均无显著差异。这证明我国分离的ＨＤＶ株虽然属于ＨＤＶ基因Ⅰ型的两个不同基因亚型，但它们的免疫原性无明显区别，可能属于同一个血清型。同时亦证明我们两次全国流行病学调查发现的抗ＨＤＶ阳性率低，不是由于所用美国提供的丁肝抗原引起的。

抗丁型肝炎病毒(HDV)抗体酶联免疫测定(ELISA)方法的建立与应用

利用大肠杆菌表达的丁型肝炎病毒抗原(HDAg)和从人血清中纯化的抗-HDV IgG,首次在我国建立了检测抗-HDV抗体的ELISA方法。用此法检测53份HBsAg阳性病人和HBsAg携带者血清,并以Abbott Anti-Delta-EIA试剂进行标化,结果完全相同。检测1份抗-HDV抗体阳性血清,其ELISA滴度为80000,高于Abbott EIA试剂检测的ELISA滴度10000。 用此法检测国内部份省市地区HBsAg阳性病人和携带者的血清标本1155份,阳性者同Abbott检测的一致,无假阳性。此法可用于HDV感染的临床诊断,流行病学调查和其它研究,为在我国开展HDV肝炎的研究提供了可靠方法。

中国不同临床型来源的丁型肝炎病毒(HDV)部份基因组序列的分析比较

从我国河南、内蒙、北京等地的ＨＤＶ健康携带者、慢性丁肝病人与重症肝炎病人中，筛选获得４份ＨＤＶ—ＲＮＡ阳性血清。经逆转录—聚合酶链反应（ＲＴ—ＰＣＲ）交叉扩增获得ＨＤＶ—ｃＤＮＡ片段（６５１—１６６０ｎｔ，按Ｍａｋｉｎｏｅｔａｌ定位），并克隆到ＰＧＥＭ—３ｚｆ（－）或ＰＧＥＭ－Ｔ载体上。经序列分析研究其基因结构特点，结果表明，同属基因Ⅰ型的４株中国丁型肝炎病毒，在基因序列上具有相似的保守区域，但与同亚型ＨＤＶ健康携带者相比，重症肝炎病人与慢性丁肝病人来源的ＨＤＶ毒株，在多个位点上发生了核苷酸的改变，由此推导的抗原编码区相应的氨基酸发生了替换。这些核苷酸与氨基酸的改变位点散在，但多集中于抗原编码区的羧基端。如慢性丁肝发生的６个氨基酸改变中，５个位于１６６—１８８位；重症肝炎发生的１２个氨基酸改变中，８个位于１７０—２１４位。有趣的是，在１７５位上发生了由脯氨酸向丝氨酸的共同替换。提示ＨＤＶ的感染致病可能与ＨＤＶ的基因结构相关。

不同长度丁型肝炎病毒核酶的体外自剪切活性及其意义

目的分析不同长度丁型肝炎病毒核酶的体外自剪切活性。方法用XbaⅠ,EcoRⅠ或BamHⅠ将含有HDV.Rz序列的pRz277正向质粒(pRz277A)和pRz277反向质粒(pRz277B)线性化,以α-^(32)p-UTP标志和T7噬菌体RNA聚合酶转录出不同长度的基因组核酶(g.Rz)和抗基因组(即复制中间体)核酶(ag.Rz),在一定条件下进行自剪切反应,然后作聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和放射自显影。结果 g.Rz24/100(自剪切位点5和3端分别含24nt和100nt,下同)、ag.Rz38/119在适当条件下绝大部分发生自剪切。g.Rz24/253和ag.Rz38/239也具有一定自剪切活性,但显著低于前两者,即使温度升至55℃或加入去离子甲酰胺也是如此。结论适宜长度的HDV.Rz在体外具有较高的自剪切活性。这些发现有助于我们下一步研究HDV.Rz的反式剪切作用。

乙型、丙型和丁型肝炎病毒与肝细胞癌岛关系

采用 ELISA 法检测了140例肝癌患者的 HBV—M 和抗—HCV(其中38例检测了 HDV—M),并分别与56例非肝病患者和164例肝炎患者比较。结果肝癌病人中有91.2％检出 HBV—M 阳性,32.1％检出抗—HCV 阳性,HDV—M 无阳性检出。在抗—HCV 阳性的肝癌病人中,HBV—M 阳性率达95.6％。经X(?)检验分析,在 HCC 中,HBV—M、抗—HCV 和 HDV—M 的总体率两两之间均有极显著性差异。提示 HBV 与 HCC 关系最密切。HCV 次之,而 HDV 关系不明显。HCV 主要与 HBV 以重叠感染方式存在,因而推测 HCV 单独致癌的可能性不太,主要是通过调节和协同 HBV 而起促癌作用。