化学发光法丁型肝炎病毒IgG抗体检测试剂性能评价

目的对抗丁型肝炎病毒(HDV)IgG试剂(化学发光法)的性能进行评价。方法用基于磁微粒化学发光免疫分析平台的抗-HDV IgG试剂、厦门万泰凯瑞抗-HDV IgG试剂(国产试剂A)、基于酶联免疫吸附法的北京万泰抗-HDV IgG试剂(国产试剂B)和基于荧光定量PCR检测平台的HDV RNA试剂分别对1909例乙型肝炎表面抗原(HBsAg)阳性样本进行检测,并结合检测的阴/阳性结果评价3种抗体试剂的特异度和正确率之间的差异;同时,参照美国临床和实验室标准化协会的EP5-A2文件,采用高、中和低3个浓度水平的阳性样本对抗-HDV IgG试剂进行精密度评价。用抗-HDV IgG试剂对545份HBsAg阳性且HDV IgG阴性样本和北京大学肝炎试剂研究中心的200份甲型肝炎病毒IgM抗体(HAV IgM)阳性样本、350份丙型肝炎病毒抗体(anti-HCV)阳性样本、200份健康人体检样本进行检测,以评价抗-HDV IgG试剂的特异性。最后,用抗-HDV IgG试剂与国产试剂A测试545例HBsAg阳性且抗-HDV IgG阴性样本和37例抗-HDV IgG阳性样本,对抗-HDV IgG试剂的符合率进行评价。结果4种试剂在对1909份HBsAg阳性样本的检测中,筛查到19份抗-HDV IgG真阳性样本;抗-HDV IgG试剂的正确率和特异度较好;抗-HDV IgG试剂对高、中和低3个水平样本检测的批内精密度CV值在1.57%~4.30%之间,批间精密度CV值在1.71%~4.67%之间,精密度良好;与国产试剂A进行比较,阴/阳性符合率一致。结论本研究中抗-HDV IgG试剂(化学发光法)对临床样本的检测具有较高特异度,表现出与商品化试剂一致的符合率,可用于HBsAg阳性样本中抗-HDV IgG的筛查。

4种丁型肝炎病毒IgG抗体检测试剂的评价

目的 评价国内外4种抗-HDV IgG检测试剂的灵敏度和特异度。方法 应用18例抗-HDV IgG真阳性和480例抗-HDV IgG真阴性血清盘,评价国内外4种抗-HDV IgG试剂的灵敏度和特异度;对18例抗-HDV IgG阳性样本进行巢式反转录聚合酶链反应(nested reverse transcription-polymerase chain reaction,nRT-PCR),其中17例HDV RNA阳性,对该17例的nRT-PCR扩增产物进行测序分析,并绘制系统发育树分析其基因型。结果 A、B、C和D抗-HDV IgG试剂的灵敏度分别为94.44%、66.67%、61.11%和55.56%;假阴性率分别为5.56%、33.33%、38.89%和44.44%;特异度均为100.00%;无假阳性。经Kappa检验,A、B、C和D抗-HDV IgG试剂的K值分别为0.970、0.794、0.752和0.707。本研究发现的18例抗-HDV IgG真阳性样本中,有17例HDV RNA阳性,测序分析其nRT-PCR扩增产物,结果显示其均为HDV-1型。结论 本研究中,抗-HDV IgG试剂A检测灵敏度最高,可作为HDV感染的检测试剂。

抗戊型肝炎病毒IgG抗体定量线性标准品的标定及初步应用

目的建立抗戊型肝炎病毒(Anti-HEV)IgG抗体的定量线性标准品,并进行初步应用。方法利用抗-HEV IgG和抗-HEV IgM ELISA检测试剂筛选出1份抗-HEV IgG阳性血清L9,经基因1型和4型的HEV ORF2C-端抗原及239抗原进行Western blot确认后,用WHO定量标准品,由3个实验室协作标定,利用量反应平行线法计算其抗-HEV IgG的含量。考察已标定的L9血清的稳定性,并用所标定的1.5倍系列稀释的血清对国内外6家抗-HEV IgG试剂的灵敏度进行检测。选择一灵敏度较高的试剂,在其线性范围内取L9的5个稀释度作为抗-HEV IgG抗体定量线性标准,对高、中、低浓度的3份临床血清重复检测5次,考察其重复性;对实验感染猴的系列血清中抗-HEV IgG含量进行定量检测,考核该定量线性标准品的应用效果;并对每次定量试验中的线性方程进行分析,确定相关系数r值和斜率k值的范围。结果经国内外试剂检测筛选出的阳性血清L9与基因1型和4型的HEV ORF2 C-端抗原及239抗原均有阳性反应。经协作标定,L9血清抗-HEV IgG含量为16.9U/ml。L9血清在-20℃下保存6、12、18个月,2～8℃保存24、48、96h后,定量结果均在95%置信区间内,且抗-HEV IgG含量均未明显下降。6家抗-HEVIgG检测试剂灵敏度差异较大,范围为0.03～5.00U/ml。确定L9血清从0.42U/ml开始的5个1.5倍系列稀释度,作为某一试剂抗-HEVIgG抗体定量线性标准品。利用该线性定量标准检测高、中、低浓度的3份临床血清,定量结果重复性较好;对实验感染猴系列血清进行定量检测,结果可有效地反映抗体水平变化趋势;94%的定量检测试验,r≥0.98,1.15≥k≥0.95。结论已建立了抗-HEVIgG抗体定量线性标准品,可用于疫苗免疫原性评价和流行病学调查。

比较不同中国株丁型肝炎病毒(HDV)重组抗原检测抗HDV抗体的差异

我国属于乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）感染高发区和丁型肝炎病毒（ＨＤＶ）感染低发区。为了弄清我国ＨＤＶ感染率低是否是由于我国存在不同血清型ＨＤＶ所致，我们在原核细胞上表达了我国ＨＤＶ基因１Ａ亚型株（河南株）和ＩＢ亚型株（四川株）抗原编码区基因，并应用这些基因重组丁肝抗原检测了四川、河南、内蒙三省（区）的２５２份ＨＢｓＡｇ阳性携带者血清，并与美国提供的重组丁肝抗原做了比较。结果证明，对以上三种抗原均阳性者８份，对河南与美国抗原双阳性者１份，对四川与美国抗原双阳性者１份，仅对美国抗原阳性者１份。河南和四川抗原的阳性检出率均为３６％（９／２５２），美国抗原的检出率为４．３７％，三种抗原之间的总符合率均为９９．２％，经统计处理均无显著差异。这证明我国分离的ＨＤＶ株虽然属于ＨＤＶ基因Ⅰ型的两个不同基因亚型，但它们的免疫原性无明显区别，可能属于同一个血清型。同时亦证明我们两次全国流行病学调查发现的抗ＨＤＶ阳性率低，不是由于所用美国提供的丁肝抗原引起的。

人源抗乙型肝炎病毒表面抗原基因工程IgG全抗体的表达、纯化及初步鉴定

目的对人源抗乙型肝炎病毒表面抗原的基因工程IgG全抗体进行表达、纯化及初步鉴定。方法用含Fc片段抗-HBsAg Fab抗体基因的载体pAC-HBs-Fc,与杆状病毒线性DNA共转染昆虫细胞sf9,产生重组抗-HBsAg的全抗体。以不同浓度的HBsAg包被酶标板孔,用间接ELISA法检测培养上清中抗体的表达及特异性;用蛋白G亲和层析柱进行抗体的纯化,并对纯化的抗体进行SDS-PAGE、Western blot和竞争性ELISA分析。结果上清中表达的重组IgG抗体仅与HBsAg呈阳性反应,特异性良好,纯化后其纯度达97.1%。经SDS-PAGE和Western blot分析可见,IgG抗体轻链和重链的相对分子质量分别约为27000和55000,为人源IgG抗体。CHO表达的HBsAg和血源性HBsAg能竞争性抑制该重组IgG抗体与E.coli表达的HBsAg反应,其抑制率分别为55.9%和81.9%。结论人源抗乙型肝炎病毒表面抗原的基因工程IgG全抗体可在杆状病毒载体表达系统中成功表达。

大连地区献血者丁型肝炎病毒抗体的筛查

目的 了解丁型肝炎病毒在大连地区无偿献血人群中的流行情况。方法 挑选本实验室HBV筛查反应性剩余血浆标本,其确证结果需符合以下4种情况:1)HBsAg+&HBV DNA+;2)HBsAg+&HBV DNA-;3)HBsAg-&HBV DNA+;4)NAT-yield可疑。同时随机选取抗-HBc+或抗-HBs+的筛查合格血浆标本。所有标本进行HDV IgG初筛,结果为反应性者采用另1种HDV IgG试剂复测并检测HDV IgM。HDV IgG双试剂反应性者确证为HDV IgG+。结果 在1 344份血液筛查不合格标本(HBsAg+&HBV DNA+507份,HBsAg+&HBV DNA-33份,HBsAg-&HBV DNA+477份,可疑标本327份)和766份筛查合格标本(抗-HBc+397份、单独抗-HBs+369份)中未检出HDV抗体阳性标本。结论 大连地区献血前初筛合格的献血者HDV感染率极低。但对于HBV高流行地区,仍旧不能够忽视OBI合并感染HDV可能给血液安全带来的风险。

用人工合成的丁型肝炎病毒抗原多肽检测丁肝病毒IgM抗体及其初步应用

用人工合成的丁型肝炎病毒抗原（ＨＤＶ－Ａｇ）肽建立了检测抗ＨＤＶ－ＩｇＭ抗体的ＥＬＩＳＡ方法，本法操作简便、快速，重复性好，特异性强，与抗ＨＡＶ－ＩｇＭ、抗Ｈｋ－ＩｇＭ、抗ＨＢｓ－ＩｇＭ、抗ＨＣＶ－ＩｇＩ、抗ＣＭＶ－ＩｇＭ、抗ＲＶ－ＩｇＭ、类风湿因子（ＲＦ）及抗核抗体（ＡＮＡ）阳性血清均不起反应，且可被２－巯基乙醇阻断而不起反应。经初步临床应用，３１例正常人血清抗ＨＤＶ－ＩｇＭ全部阴性，２８例慢活肝患者检出率为３２．１％（９／２８），１７例慢迁肝患者血清阳性率为１１．８％（２／１７）１８例肝癌和肝硬化病人血清阳性率为２２．２％（４／１８）这三组病人与正常对照者相比较均有显著性差异（Ｐ＜０．００１）。此外，抗ＨＤＶ－ＩｇＭ阳性血清的ＡＬＴ值均明显高于正常参考范围，提示在ＨＤＶ感染过程中，患者肝细胞进一步受损。实验结果证明，抗ＨＤＶ－ＩｇＭ是诊断ＨＤＶ感染的重要指标，对ＨＤＶ感染早期诊断具有重要价值。

丁型肝炎抗体阳性病毒感染患者血清中HGV RNA的检测及分析

为探讨我国部分肝炎患者人群中HGV的感染情况．本文用我室建立的HGV RNA RT—PCR方法检测丁型肝炎抗体标志物阳性患者血清20例，其中HGV RNA RT-PCR阳性率为15．0%，说明上述肝炎患者血清中存在庚型肝炎病毒的交叉重叠感染。

用人工合成肽检测丁型肝炎病毒IgM抗体及其初步临床应用

用人工合成肽检测丁型肝炎病毒ＩｇＭ抗体及其初步临床应用李保仝，赵波，杨毓华（南京军区总医院，全军医学检验中心微生物科）ＨＤＶ的感染为世界性分布，但呈地方流行性，我国各地区对ＨＤＶ的感染情况亦有不少报道。目前对ＨＤＶ感染的诊断方法已有了重要进展，但仍满...

丁型肝炎病毒抗原抗体系统的检测及其临床意义

丁型肝炎病毒(Hepatitis D virus,HDV)是一种嗜肝RNA缺损病毒,其复制和表达需要乙型肝炎病毒(HBV)或其它嗜肝病毒(如鸭乙型肝炎病毒,旱獭乙型肝炎病毒,土拨鼠乙型肝炎病毒)的辅助,它能引起自亚临床型至暴发型肝炎的各种临床类型的急、慢性肝病。

两种丁型肝炎病毒抗体检测试剂盒的对比分析

目的对国外丁型肝炎病毒(HDV)抗体检测试剂盒的性能进行研究和对比分析。方法对采集的1 000份血清样本分别用考核试剂、参比试剂和第三方试剂进行检测后使用统计学方法进行结果处理,并依据S/Co值来判断。结果 Kappa分析显示Kappa值为0.950(P<0.01)。特异性100%,敏感性97.73%,ROC曲线下面积0.986。结论该检测试剂盒的准确性比较高,与目前国内使用比较广泛的诊断试剂盒相比有较高的一致性,通过提高丁型肝炎的临床检出率,对疾病的预防、早期诊断及治疗起到一定的辅助作用。

丙型肝炎病毒IgG抗体阳性患者血清抗HCV IgM、ALT及HCV RNA的对比分析

目的:探讨丙型肝炎(H C V)IgG阳性患者的血清抗-H C V IgM、丙氨酸转移酶(A LT)水平与H C V R N A之间的关系。方法:通过第三代E IA试剂盒检测抗-H C V IgG、抗-H C V IgM,全自动生化分析仪检测丙型肝炎患者A LT水平,荧光定量逆转录聚合酶链反应(R T-PC R)方法检测H C V R N A,并进行比较。结果:在丙型肝炎IgG阳性患者中,抗-H C V IgM阳性率为8.3%,H C V R N A阳性率为41.7%。H C V R N A的检出在A LT异常情况下较正常明显高(P<0.05),但A LT水平与H C V R N A含量无线性相关性(r=0.346,P>0.05)。结论:抗-H C V IgM不能反映病毒复制,A LT异常情况下H C V R N A检出率高,但A LT水平与H C V R N A含量无线性相关性,H C V R N A仍是反映H C V复制的可靠指标。

丁型肝炎病毒抗体检测与分析

为探讨丁型肝炎病毒(HDV)和临床各型肝炎的相互联系及影响,对肝炎进一步分型、诊断、治疗,我们开展了丁型肝炎抗体(抗HDV—IgM、IgG)检测,并对结果进行了比较和分析。 1 对象与方法 1.1 对象:1995年以来我院传染科肝病住院患者,年龄14～69岁。依1990年全国肝炎会议制定的“病毒性肝炎诊断标准”。 1.2 方法:由河南医学科学研究所生产,酶免疫测定,按说明书操作。

山西省应县2013年学生麻疹病毒IgG抗体和乙型肝炎表面抗体水平调查分析

2012年12月应县疾病预防控制中心对本县部分幼儿园、小学、初中的学生采集血标本进行麻疹病毒IgG抗体[1]和乙型肝炎表面抗体（HBsAb）检测。1材料与方法1．1调查点的设置此次调查按照山西省麻疹病毒IgG抗体和HBsAb水平监测要求，调查点为幼儿园、小学、初中。

抗丁型肝炎病毒mAb的制备及其初步应用

目的 :以基因工程表达丁型肝炎病毒抗原蛋白 (HDAg)为抗原 ,建立分泌单克隆抗体 (mAb)的杂交瘤细胞系 ,并对其分泌的mAb进行鉴定。方法 :用Ni NTA技术纯化HDAg免疫BALB/c小鼠 ,取脾细胞及骨髓瘤细胞按常规方法融合、筛选、克隆化及腹水注射制备mAb。采用ELISA及免疫组化技术进行鉴定。结果 :筛选出 2株能稳定分泌特异性抗 HD的mAb杂交瘤细胞株 (HD1,HD2 ) ,经多次复苏传代仍能稳定分泌抗体 ,特异性强 ,效价高。应用于ELISA测定患者血清HDAg均呈特异性阳性反应。免疫组化检测肝组织显示 ,针对该mAb的抗原主要分布于细胞核或浆内。结论 :此两株丁肝杂交瘤细胞株分泌的抗体对丁肝抗原具有特异亲和性 。

入伍新兵人群甲型病毒性肝炎血清抗体水平监测

目的了解入伍新兵人群中甲型病毒性肝炎(甲肝)病毒IgG抗体的分布情况。方法采用回顾性血清流行病学调查方法,利用酶联免疫吸附试验技术,对近4年来自6个省市的325名入伍新兵血清进行了甲肝病毒IgG抗体检测,统计分析其阳性率。结果发现各年间入伍新兵血清甲肝病毒IgG抗体差别不显著,为31.87%～41.76%,平均37.85%;地区间差别较大,湖北省(49.21%)和河南省(40.00%)较高,山西省最低(26.67%);新兵入伍前学历和工作与否与其甲肝病毒IgG抗体阳性率差异无统计学意义。结论入伍新兵人群中甲肝病毒IgG抗体阳性率有地区差异,阳性率明显低于70%警戒线,应引起高度重视。

用反向被动血凝抑制试验进行乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体的位阻分析

本文报告获得28株分泌抗HBsAg单克隆抗体的杂交瘤细胞系,均为抗HBsAg“a”决定簇抗体。产生鼠IgM抗体的有一个细胞系;IgG1 18个系;IgG 2a 1个系;IgG 2b 6个系;IgG 3两个系。采用反向被动血凝抑制法测定了其中24种McAb的交互抑制现象。24种McAb可分为10个不同的抑制群。并对这种简单易行的位阻分析方法在实用中的价值做了讨论。