反义寡核苷酸体外抗丁型肝炎病毒的初步研究

以质粒（ｓＳＶＬＤ３）为模板，通过聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增得到一条１３９ｂｐ的片段，它含有丁型肝炎病毒（ＨＤＶ）基因组ＲＮＡ中核酶（ｒｉｂｏｚｙｍｅ）区的ｃＤＮＡ，该核酶具有自身裂解功能，将上述片段插入到ｐＧＥＭ－３Ｚ中，经筛选、鉴定，得到一重组质粒（ｐＨＤＶ１０８），经测序发现有２个碱基变异，以该质粒为模板，通过Ｔ７ＲＮＡ聚合酶，转录出核酶的前体，并观察到其自身裂解产物，自裂率达７１％。针对核酶两个重要的单链区，设计并合成二条反义寡核背酸（ＡＳＯＮ），当在转录反应中同时加入ＡＳＯＮ后，核酶的自裂率下降均较明显，当ＡＳＯＮ浓度为１６ｕｍｏ１／Ｌ时，核酶自裂抑制率均在７０％以上。提示，ＡＳＯＮ可与核酶两个重要的单链区结合，从而抑制核酶的自裂活性。